CC BY
53
на жидкостном хроматографе подтвердил сходство сахароснижающего сбора и экстракта по качественному содержанию флавоноидов. На хроматограмме этилацетатной фракции обеих лекарственных форм обнаружено 10 пиков с соответствующими временами удерживания. Один из них идентифицирован как рутин. Хроматограммы бутанольных фракций сбора и экстракта совпадали, в них установлено наличие 3 веществ с соответствующими значениями
Таким образом, качественный анализ показал присутствие в сборе и экстракте флавоноидов, фенолов, органических кислот, моносахаров и полисахаридов. Из флавоноидов идентифицированы рутин, кверцетин, кемпферол. Подтверждено наличие арбутина. Установлено присутствие яблочной, аскорбиновой, янтарной и бензойной кислот. В углеводном составе присутствуют глюкоза, фруктоза, галактоза.
Количественное содержание экстрактивных и некоторых действующих веществ в сборе, в настое, полученном из сбора, и в жидком экстракте представлено в табл. 2.
Статистическая обработка данных показала значимые различия между выходом экстрактивных веществ и БАВ в настой и экстракт. Как оказалось, преимущество жидкого экстракта перед настоем определяется не только удобством применения и точностью дозирования, но и лучшим выходом веществ из сбора в извлечение, а соответственно бо-
лее полным истощением сырья. Полученные данные позволили предварительно определить соотношение терапевтических доз настоя и жидкого экстракта.
Таким образом, результаты качественного и количественного анализа комплекса БАВ сбора, настоя и жидкого экстракта подтверждают предположение о возможности создания новой лекарственной формы (жидкого экстракта) на основе прописи сахароснижающего сбора.
В настоящее время проводится работа по оптимизации процесса получения жидкого экстракта.
Литература
1. Государственный реестр лекарственных средств. М.: Минздрав РФ, 2002. Т. 1. 1300 с.
2. Государственная Фармакопея СССР. 11-е изд. М.: Медицина, 1987. Вып. 1. 333 с.
3. Кит С.М., Турчин И.С., Кит B.C. и др. // Врачебное дело. 1987. №7. С. 7-10.
4. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / Под ред. В .Л. Багировой, В.А. Северце-ва. СПб.: СпецЛит, 2001. 223 с.
5. Степанова Т.А. Фармакогностическое изучение викарных видов лекарственных растений Дальнего Востока: Дис. ... д-ра фарм. наук. Хабаровск, 1997. 700 с.
6. Сунцов, Ю.И., Кудрякова C.B., Болотская Л.Л. // Сахарный диабет. 2002. № 1. С. 28-31.
□ □□
УДК 615.851 : 616.831
Ф.Ю. Белозерцев, C.B. Юнцев, Ю.А. Белозерцев
АНАЛИЗ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ АНТАГОНИСТОВ КАЛЬЦИЯ
Читинская государственная медицинская академия г. Чита
Исходы черепно-мозговой травмы и инсульта в основном зависят от вторично возникающих явлений ишемии, гипоксии и судорог [1, 3, 7]. Повреждение мозга в результате действия этих факторов в основном протекает по гипоксически-ишемическому типу, а ключевым фактором запуска некротической и программированной гибели нейронов является неуправляемое накопление в клетках содержания ионов кальция [5, 7, 8, И, 12]. С целью лекарственной коррекции вторичных повреждений мозга (ВПМ), запускаемых кальциевым каскадом, предложены различные
антагонисты кальция. Однако в фармакоклиничес-ких исследованиях не получено однозначных позитивных результатов от применения антагонистов кальция, что может быть связано с их влиянием на различные пути повышения уровня кальция в нейронах и клетках сосудов мозга [2, б, 9, 14].
Цель работы заключалась в анализе особенностей нейропротективных свойств препаратов, которые различно влияют на транспорт кальция через клеточные мембраны клеток мозга в условиях черепно-мозговой травмы.
Методы исследования
Экспериментальная часть работы выполнена на 65 крысах линии Вистар массой 140-160 г и 170 мышах линии СБА массой 20-30 г в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" (Приложение к Приказу МЗ СССР от 12.08.1977 г. № 755). Первую группу составили интактные животные. Вторая группа включала животных, которым наносили контактную черепно-мозговую травму (контроль). Опытные группы состояли из животных, которым наносили травму мозга и вводили лекарственные средства.
Травматическое повреждение головного мозга в эксперименте проводилось с использованием модифицированной методики Аллена [2] под нембута-ловым наркозом (50 мг/кг, в/б). Для определения антиишемической активности препаратов использовали декапитационную модель полной ишемии головного мозга [10, 13]. С этой целью после декапитации на уровне 1 шейного позвонка определяли продолжительность и частоту агонального дыхания (гаспинга). Антигипоксическую активность препаратов определяли по продолжительности резервного времени у мышей в условиях термокамеры [4]. Электрошоковые судороги воспроизводили у крыс в соответствии с международным стандартом путем электрораздражения через глазничные электроды. У животных регистрировали продолжительность тонической экстензии (в сек) и определяли защитный индекс (отношение числа животных, у которых не возникали электрошоковые судороги, к общему числу крыс, подвергнутых электрораздражению).
У животных с черепно-мозговой травмой изучена нейропротективная активность неспецифического антагониста ионов кальция магния сульфата (40-80 мг/кг), блокатора кальциевых каналов Ь-типа мембран гладкомышечных клеток сосудов нимото-па (2,5-5 мг/кг), блокатора кальциевых каналов
Таблица 1
Влияние антагонистов ионов кальция на устойчивость мышей к ишемии после черепно-мозговой травмы (10 сут)
Группа животных и препарат Доза, мг/кг Атональное дыхание (гаспинг)
время,сек частота дыхания
Интактная (п=23) (интактные мыши) - 13,6±0,87 9,1±0,45
Контрольная (п=10) (мыши с ЧМТ) - 15,2*1,6 11,6*0,25
Опытная 1 (п=16) (мыши с ЧМТ + магния сульфат) 40 80 17,8±1,5 22,7±0,9* 13,2*1,4 12,5*1,1
Опытная 2 (п=16) (мыши с ЧМТ + нимотоп) 2,5 5 16,7+1,1 17,9±1,5 12,9±1,5 15,7*1,3*
Опытная 3(п=8) (мыши с ЧМТ + этосуксимид) 100 24,8±3,4" 12,4±1,4
Опытная 4 (п=16) (мыши с ЧМТ + депакин) 60 100 22,6*1,6* 33,4*3,6" 16*1,1** 13,4±1,2
Примечания. Значимость различий интактная группа — контрольная группа и контрольная группа (10 сут) — опытная группа: * - р<0,05, ** - р<0,01.
Резюме
Проведено изучение нейропротекторного эффекта антагонистов кальция у животных с черепно-мозговой травмой. Выявлено, что в посттравматический период наибольшей антиишемической активностью обладает депакин и этосуксимид, антигипоксической - депакин, противосудорожной — магния сульфат и депакин. Показано, что ингибирование кальциевых Т-каналов нейронов имеет значение для лекарственной профилактики вторичных травматических повреждений мозга.
F.Yu. Belozertsev, S.V. Yuncev, Yu.A. Belozertsev
ANALISES NEUROPROTECTIC PROPERTIES OF ANTAGONISTS CALCIUM
Chita State Medical Academy, Chita Summary
Study of neuroprotectic properties of antagonists calcium was carried on model of craniocerebral trauma. It is obvious, that high antiischemic activity possesses depakin and ethosuximidum, high antihipoxic action — depakin, high antiseizuric effect — depakin and magne-sii sulfas. It was demonstrated, that inhibit the neuronal calcium channels T-tape were revealed of importance in the pharmacological treatment of secondary traumatic brain injury.
Т-типа мембран нейронов этосуксимида (50-100 мг/ кг) и блокатора кальциевых каналов Т-типа мембран нейронов с дополнительными свойствами депа-кина (60-100 мг/кг). Препараты вводили в течение 9 сут, начиная со 2 дня.
Статистическая обработка данных проведена с использованием пакета программ Microsoft Office 2000. Соответствие полученных данных гаусовско-му распределению определяли по критерию Фишера. Оценку достоверности различий (контроль-опыт) проводили по критерию (t) Стьюдента и непараметрическому критерию (U) Манна-Уитни.
Результаты исследования и обсуждение
Проведенные исследования показали, что к 10 сут посттравматического периода наблюдается восстановление устойчивости головного мозга к факторам ВПМ: ишемии, гипоксии, судорогам (табл. 1, 2, 3).
Сравнение антиишемической активности препаратов показало, что по сравнению с контролем курсовое введение нимотопа увеличивает на 10 сут посттравматического периода продолжительность гаспинга на 10-18%, а магния сульфата — на 17-49%, этосуксимида — на 63% и депакина — на 49-120%. При этом нимотоп и депакин учащают атональное дыхание, что указывает на улучшение функционального состояния нейронов дыхательного центра мозга (табл. 1).
Очевидно, в посттравматический период неспецифический антагонист ионов кальция магния сульфат и блокаторы кальциевых каналов мембран нейронов Т-типа этосуксимид и депакин умеренно повышают активность механизмов, ответственных за устойчивость головного мозга к ишемии.
Таблица 2
Влияние антагонистов ионов кальция на продолжительность резервного времени у мышей в условиях черепно-мозговой травмы
Группа животных и препарат Доза, мг/кг Резервное время, мин
Интактная (п=22) (интактные мыши) - 23,3±1,8
Контрольная (11=12) (мыши с ЧМТ) - 22,9±0,7
Опытная 1 (п=16) (мыши с ЧМТ + магния сульфат) 40 80 19,3±1,1 21,9±1,7
Опытная 2 (п=8) (мыши с ЧМТ + нимотоп) 5 17,4±2,1*
Опытная 3(п=8) (мыши с ЧМТ +этосуксимид) 100 23,8±1,7
Опытная 4(п=16) (мыши с ЧМТ + депакин) 60 100 24,5±2,1 32,9±1,9*
Примечания. Значимость различий интактная группа — контрольная группа и контрольная группа (10 сут) — опытная группа: * - р<0,05, " - р<0,01.
Таблица 3
Влияние антагонистов ионов кальция на течение электрошоковых судорог у крыс с черепно-мозговой травмой
Группа животных и препарат Доза, мг/кг Длительность тонической экстензии, сек Защитный индекс
Интактная (п=15) (интактные крысы) - 15,5±0,8 0/15
Контрольная (п=10) (крысы с ЧМТ) - 13,9±1,3 0/10
Опытная 1 (п=10) (крысы с ЧМТ + магния сульфат) 80 9,6±0,3* 5/10*
Опытная 2 (п=10) (крысы с ЧМТ + нимотоп) 5 12,8±0,Э 0/10
Опытная 3(п=10) (крысы с ЧМТ + этосуксимид) 100 13,1±1,5 0/10
Опытная 4(п=10) (крысы с ЧМТ + депакин) 100 2,0±0,3" 7/10*
Примечания. Значимость различий интактная группа — контрольная группа и контрольная группа 2 — опытная группа: * - р<0,05, ** - р<0,01.
Изучение влияние антагонистов ионов кальция на устойчивость животных к гипоксии с гиперкап-нией выявило, что 9-дневное введение депакина в дозе 100 мг/кг увеличивает на 43,7% продолжительность резервного времени у животных, помещенных в термокамеру. Вместе с тем, курсовое назначение нимотопа в дозе 5 мг/кг/сут снижает устойчивость травмированных животных к гипоксии. Остальные препараты достоверно не изменяют устойчивости мозга к гипоксии (табл. 2).
Исследование действия препаратов на течение электрошоковых судорог в посттравматическом периоде (10 день) выявило достоверное уменьшение продолжительности тонической экстензии на фоне действия депакина и магния сульфата. Защитный индекс этих препаратов составил 50-70% по сравнению с контрольными наблюдениями. В отличие от этого нимотоп и этосуксимид не изменяют течения электрошоковых судорог у травмированных крыс -¿Хтабл. 3).
Полученные данные позволяют высказать предположение, что блокирование кальциевых каналов Ь-типа миоцитов сосудов нимотопом [6] не приво-
дит к повышению устойчивости мозга к действию основных факторов ВПМ (ишемия, гипоксия и судороги). Наши данные совпадают с клиническими наблюдениями, которые свидетельствуют о низкой эффективности нимотопа в острый период травмы мозга [9, 14]. Вместе с тем, нельзя исключить важной роли в развитии повышенной устойчивости к ишемии блокирования кальциевых каналов Т-типа мембран нейронов, т.к. этосуксимид и депакин, обладающие блокирующим действием на кальциевый ток через эти каналы [1], увеличивают продолжительность гаспинга на модели полной ишемии головного мозга. Нормализация содержания ионов кальция в клетках головного мозга на фоне действия депакина и магния сульфата [1,2] может иметь определенное значение для снижения судорожной готовности мозга и вероятности появления эпизодов судорог в посттравматический период.
Выводы
1. Блокаторы кальциевых каналов Т-типа этосуксимид и депакин оказывают выраженное антиишеми-ческое действие в условиях черепно-мозговой травмы.
2. Депакин увеличивает резервное время в условиях гипоксии с гиперкапнией и предупреждает возникновение электросудорог у животных с черепно-мозговой травмой.
Литература
1. Аванцини Д. // Эпилепсия: медико-социальные аспекты, диагностика и лечение: Сб. М., 2004. С. 16-22.
2. Белозерцев Ф.Ю., Белозерцев Ю.А. Значение саногенетических механизмов в нейропротектор-ной терапии травмы мозга. Чита: Изд-во ЧГТУ, 2004. 106 с.
3. Качков И.А., Амчеславский В.Г., Филимонов Б.А. // Consilium medicum. 1999. Т. 1. №2. С. 85-90.
4. Ковалев Г.В. Ноотропные средства. Волгоград, 1990. 355 с.
5. Одинак М.М., Холин A.B., Литвиненко И.В. // Журн. неврол. и психиат. 2001. Т. 101. №11. С. 64-68.
6. Сидоренко Б.С., Преображенский Д.Б. // Кардиология. 1997. №3. С. 96-99.
7. Скворцова В.И. // Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция: Мат. III науч. конф. М., 2002. С. 111.
8. Ходоров Б.И. // Биол. мембраны. 2000. Т. 17. №2. С. 117-127.
9. Faden A.I. // JAMA. 1996. Vol. 276. С. 569-570.
10. Costal D., Torres J.E. // Biol. Neonate. 2000. Vol. 179, №22. C. 122-131.
11. Keyser J.De, Suiter G., Luiten P.O. // Trend. Neurosci. 1999. Vol. 22. №12. P.535-540.
12. Kristian Т., Siesjo B.K. // Life Sciences. 1996. Vol. 59, №5-6. P. 357-367.
13. Lowry O.H., Passoneau J.V., Hasselberger F.X. et al. // J. Biol. Chem. 1964. Vol. 239. P. 18-30.
14. Lutsep H.L., Clare W.M. / Drugs Res. Dev. 1994. Vol. 17, № 6. P. 251-255.
□ □□
