CC BY
8
Анализ наномолекулярных маркеров у детей с почечной патологией
Асташонок А.Н.1, Сукало А.В.2, Козыро И.А.2, Маховская Т.А.2, Полещук Н.Н.1
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии, Минск, Беларусь 2Белорусский государственный медицинский университет, Минск
Astashonok A.1, Sukalo A.2, Kozyro I.2, Machovskaya T2, Poleshchuk N.1
'The Republican Research and Practical Center for Epidemiology and Microbiology, Minsk, Belarus
2Belarusian State Medical University, Minsk
Immunobiochemical analysis of nanomolecular biomarkers
in children with kidney disorders
Резюме. Представлены результаты исследований по анализу экспрессии маркеров апоптоза, антифосфолипидного синдрома (sAPO-'/FAS, аннексин V (АнУ)) и эндотелиальной дисфункции (молекулы межклеточной адгезии - sICAM-', sVCAM-') в сыворотках крови, полученных от 52 детей (от 3 до '7 лет) с неиммунными (подгруппа I, n='3), иммунными (подгруппа II, n=25) нефропатиями, а также заболеваниями мочевыводящих путей (группа сравнения, n='4). ВI подгруппе (n='3, '00%) выявлены вариации в концентрации фактора sAPO-'/FAS (от 0,046до 0,24 нг/мл) при норме 0,023+0,002 нг/мл. Уровень АнУ у этих детей соответствовал значениям нормы. При этом у детей из подгруппы II концентрация sAPO-'/FAS значительно превышала (от 0,2 до 0,24 нг/мл) показатели нормы. У 6 пациентов (24%) из этой подгруппы количественные значения АнУ также превышали показатели нормы в ','-',2 раза (7,5-8,49 нг/мл), а у ' пациента (4%) - в 3,' раза (2',06 нг/мл). В группе сравнения концентрация этих биомаркеров соответствовала референсным значениям. По биомаркерам эндотелиальной дисфункции установлено, что у '0 детей (40%) подгруппы II отмечались вариации в экспрессии sVCAM-' (от 0 до ',2 нг/мл) при норме 0,7-0,9 нг/мл. При этом уровень sICAM-' в обеих анализируемых подгруппах и группе сравнения находился в нормальном диапазоне - от 50 до 67 нг/мл.
Ключевые слова: антифосфолипидный синдром, апоптоз, диагностика, иммунобиохимический анализ, наномолекулярные биомаркеры, эндотелиальная дисфункция.
Медицинские новости. — 2021. — №12. — С. 89—92. Summary. The article presents the results of the expression biomarkers of apoptosis, antiphospholipid syndrome (sAPO-'/FAS, annexin V) and endothelial dysfunction (sICAM-', sVCAM-',) in blood serum, obtained from 52 children (3-'7years old) with nonimmune (subgroup I, n='3), immune-mediated (subgroup II, n=25) kidney disorders in comparison with urinary tract infection group (n='4). In first subgroup (n='3, '00%)) various concentration fluctuations of the sAPO-'/FAS factor (from 0.046 to 0.24 ng/ml) in comparison with normal level (0.023+0.002 ng/ml) were revealed. The AnV level in these children were corresponded the reference range. At the same time, in subgroup II, the concentration of sAPO-'/ FAS was significantly exceeded (from 0.2 to 0.24 ng/ml) to the reference range. In 6 patients (24%) from this subgroup, the AnV quantitative values were exceeded the normal range to 7.5-8.49 ng/ml, and in ' patient (4%) - a three-fold increase to 2'.06 ng/ml. In comparison group, the concentration of these biomarkers were corresponded the reference range. Based on endothelial dysfunction biomarkers, it was found that in '0 children (40%) of subgroup II showed variations in the expression of sVCAM-' (from 0 to '.2 ng/ml) with the normal range (0.7-0.9 ng/ ml). At the same time, the level of sICAM-' in both analyzed subgroups and in comparison group was in the normal range (from 50 to 67 ng/ml). Keywords: antiphospholipid syndrome, apoptosis, diagnostics, immunobiochemical analysis, nanomolecular biomarkers, endothelial dysfunction. Meditsinskie novosti. - 2021. - N12. - P. 89-92.
Почки являются жизненно-важными органами, участвующими в гомеостазе организма за счет поддержания объема и нормального ионного состава жидкостей, регулирования кислотно-щелочного баланса, концентрации электролитов, контроля артериального давления, секреции гормонов, а также очищения крови и вывода продуктов конечного метаболизма в виде мочи [1]. Эти и другие функции выполняются соответствующими изменениями скорости почечной экскреции воды и электролитов, контролируемых механизмами обратной связи, в которых участвует нервная, сердечно-сосудистая, эндокринная и другие системы организма [1]. Гомеостатические функции почек включают контроль баланса воды, натрия, хлорида, калия, кальция, магния, ионов водорода и фосфата и др.
Факторы развития ренальных заболеваний у детей разнообразны. Активно
обсуждаются системные заболевания организма, вирусные поражение клубочков и почечных канальцев, врожденные аномалии нефрона и/или мочевыводящих путей, гипертензия и др. [2]. Среди патогенетических механизмов рассматриваются неиммунные (НФП), иммунные, врожденные и/или наследственные факторы прогрессирования. НФП могут быть одной из доминирующих форм или триггеров развития хронических заболеваний почек [2]. Они развиваются вследствие сочетанного воздействия нескольких патологических процессов, таких как артериальная гипертензия в детском возрасте, гемодинамические нарушения, дислипидемия, протеинурия, нарушения углеводного, белкового и/или жирового обмена, перенесенные инфекционные и неинфекционные заболевания и др. [2]. Актуальной задачей в настоящее время поиск и анализ наиболее информативных и ранних диа-
гностических показателей биологических жидкостей организма (кровь, моча и др.), позволяющих по количественным значениям прогнозировать течение и скорость прогрессирования патологических процессов в ренальной ткани для выбора оптимальной тактики этиопатогенетиче-ской терапии [3]. Тем не менее многие аспекты, касающиеся изменений в экспрессии наномолекулярных биомаркеров апоптоза (фактор sAPO-1/FAS), антифосфолипидного синдрома (аннексин V), эндотелиальной дисфункции (молекулы межклеточной адгезии - sVCAM-1, sICAM-1) и других белковых компонентов при заболеваниях почек у детей остаются малоизученными [3].
Цель исследования - провести клиническое обследование детей с заболеваниями почек и оценить уровень экспрессии и значимость определения наномолекулярных биомаркеров (апоп-тоза, антифосфолипидного синдрома,
эндотелиальной дисфункции) в крови пациентов как показателей нарушения ренального гомеостаза.
Материалы и методы
Клиническое обследование детей проводилось на базе 2-й городской детской клинической больницы Минска и включало уточнение жалоб, сбор анамнеза, а также проведение клинического, лабораторного, иммунологического, инструментального, морфологического исследований. Во всех случаях первоначально оценивали показатели крови и мочи (общий анализ, суточная экскреция с мочой белка, кристаллов солей, проба Зимницкого), а также биохимические показатели сыворотки крови, включающие уровень мочевины, креатинина, показатели белкового обмена (общий белок, альбумин), липидный спектр, маркеры воспалительного ответа (СОЭ, С-реактивный белок, антистрептолизин О), электролитный баланс и др. В сыворотке крови по клиническим показаниям выполнялось определение уровня иммуноглобулинов основных классов A, M, G, комплемента С3 и С4, антинуклеарных и антител к цитоплазме нейтрофилов.
Для иммунобиохимического анализа исследованы 52 образца сывороток крови детей (возраст от 3 до 17 лет) с неиммунными (подгруппа I, n=13) и иммунными (подгруппа II, n=25) заболеваниями почек, а также пациентов с врожденными аномалиями мочевой системы (ВАМС) (группа сравнения, n=14) на биомаркеры sAPO-1/FAS, аннексин V, sICAM-1, sVCAM-1. Количественное определение их концентрации проводили с использованием тест-систем Human sFas/sAPO-1 ELISA kit (E -ELH5537, Elabscience, США) и Human ANXA 5 ELISA kit (E -ELH0422, Elabscience, США), Human sICAM-1 ELISA kit (E -ELR2850, США), Human sVCAM-1 ELISA kit (E -EL-H5587, США).
Статистический анализ проводили в программе STATISTICA 7.0 c использованием непараметрического критерия Манна - Уитни. Результаты представляли как среднее±стандартное отклонение.
Результаты и обсуждение
Клиническая характеристика пациентов с заболеваниями почек. Среди обследованных детей клинически выделена основная группа исследования (возраст от 3 до 17 лет), в нее вошли дети (n=38) с различными нефропатиями, у которых по результатам гистологического исследования ренальной ткани установлен морфологический диагноз. Выделено несколько подгрупп: I - не-
имунные заболевания почек (п=13), II -иммунные (п=25). В группу сравнения вошли 14 пациентов с урологической патологией, имеющие в анамнезе врожденные аномалии мочевыводящих путей (ВАМП), но с сохранением фильтрационной функции почек, рецидивирующие инфекции мочевыводящих путей, тубуло-патии. Большинство пациентов (п=29) по результатам клинико-инструментального обследования имели сохранную функцию почек, то есть без снижения уровня клубочковой фильтрации. Терминальная стадия ренальной недостаточности, требующая почечной заместительной терапии, определена у 10 детей. Хроническая болезнь почек 2-3 стадии установлена у 3 пациентов.
Среди неиммунных поражений регистрировались: амилоидоз почек, болезнь минимальных изменений (БМИ), фокально-сегментарный гломерулоскле-роз, наследственный нефрит. Иммунные нефропатии были представлены первичными (1дА-нефропатия, СЗ-нефропатия) и вторичными (1дА-васкулит, системная красная волчанка, АНЦА-васкулит, системные васкулиты, недифференцированные диффузные заболевания соединительной ткани).
До манифестации основного заболевания большинство детей (п=17) были здоровы. Острую респираторную инфекцию перенесли 7 пациентов, пневмонию - 1, рецидивирующие заболевания ЛОР-органов - 5, инфекцию мочевыводящих путей - 2, реактивный артрит - 2, кишечную инфекцию - 1.
Среди первых клинических симптомов отмечались полный нефроти-ческий синдром (7,9%), протеинурия нефротического уровня (5,3%), микро- и макрогематурия (7,9%), нефритический синдром (5,9%), геморрагическая сыпь (7,9%), боль и отечность суставов (15,8%), повышение температуры до субфебриль-ных значений (7,9%), снижение диуреза (5,3%), изолированный мочевой синдром (26,3%), склерит (1,9%), геморрагический васкулит (7,9%).
Отягощенный аллергологический анамнез (пищевая аллергия, атопи-ческий дерматит, крапивница) имели 13 детей. Сопутствующая патология сердечно-сосудистой системы (дополнительная хорда левого желудочка, феномен укороченного при ЭКГ интервала PQ, пролапс митрального клапана с регурги-тацией, нарушения ритма, персистирую-щее овальное окно, гипертрофия стенок и перегородок сердца) выявлена у 20 па-
Уровень белка (г/л) в первом от манифестации заболевания анализе мочи у детей с нефропатиями
циентов. Отягощенный наследственный анамнез по заболеваниям почек и мочевыводящей системы обнаружен у 8 человек (19%): хронический гломе-рулонефрит и мочекаменная болезнь у родителей, семейный наследственный нефрит, поликистоз.
Анализ биологических жидкостей (кровь, моча) пациентов с почечной патологией. Установлено, что в общем анализе мочи наблюдались следующие изменения. Протеинурия различной степени выраженности отмечена у 36 детей (85,7%) и характеризовалась количеством белка от 0 до 12 мг/л (рисунок).
Гематурия была у 26 пациентов (61,2%), из них макрогематурия - у 8 (19%), у остальных детей число эритроцитов в моче составило от 15 до 80 клеток, преимущественно измененных. У 7 детей в общем анализе мочи обнаружена кри-сталлурия (16,7%).
В общем анализе крови выявлен повышенный уровень СОЭ (23 пациента, 54,75%), который соответствовал значениям от 18 до 68 мм/ч. Анемия обнаружена у 18 детей (42,8%), 11 из них имели макрогематурию. В биохимическом анализе снижение уровня общего белка и альбуминов отмечено у всех детей, имеющих выраженную протеинурию. У 10 пациентов установлено превышение уровня холестерина (выше 5,2) и дислипидемия.
Детекция наномолекулярных биомаркеров апоптоза, антифосфолипид-ного синдрома (sAPO-1/FAS, аннексин V) и эндотелиальной дисфункции (sICAM-1, s \VCAM-1) в крови детей с нефропатиями.
На следующем этапе проанализированы образцы сывороток крови от детей с неимунными (подгруппа I) и иммунными (подгруппа II) заболеваниями почек в сравнении с биообразцами, полученными
от урологических пациентов. Выявлены более выраженные колебания в концентрации фактора sAPO-1/FAS у детей с иммунными нефропатиями (таблица).
Установлено, что у 13 детей отмечались колебания в концентрации белка sAPO-1/FAS (от 0,029 до 0,24 нг/ мл) при нормальных значениях данного биомаркера для сыворотки крови, не превышающих 0,023±0,002 нг/мл. У 3 пациентов из этой подгруппы (17,6%) уровень анализируемого белка был в норме. В группе сравнения уровень данного биомаркера также соответствовал референсным значениям. Наиболее высокие значения (до 0,24 нг/мл) в концентрации фактора sAPO-1/FAS установлены у детей с иммунными нефропатиями, имеющими в анамнезе системный ва-скулит, 1дА-васкулит, системную красную волчанку, 1дА-нефропатию. При анализе концентрации другого биомаркера (АнV) установлено, что уровень данного белка в большинстве анализируемых проб (п=45, 86,5%) соответствовал нормальным значениям (от 0 до 6,7 нг/мл). В то же время у 6 пациентов (24%) концентрация биомаркера превышала показатели нормы в 1,1-1,2 раза (7,5-8,49 нг/мл). У одного ребенка (4%) с 1дА-васкулитом отмечено превышение данного показателя в 3,1 раза (21,06 нг/мл).
Известно, что процесс апоптоза реализуется через ряд патологических процессов в почках: поражении гломерул, тубулоинтер-стициального компонента, аутоиммунных и воспалительных заболеваниях [4]. Интенсивность апоптоза прямо коррелирует со снижением фильтрационной функции почек, что лежит в основе хронических заболеваний ренальной ткани [5, 6].
Патологический механизм повышения концентрации АнV у пациентов с заболеваниями почек до настоящего времени активно дискутируется. Известно, что данный белок экспресси-руется преимущественно в дистальных канальцах нефрона и эпителиальных клетках капсулы Боумена - Шумлян-
ского [7]. В ряде работ показано, что повышение концентрации AhV приводит к повышению активности лизосомаль-ных ферментов (например, N-ацетил-ß-D-глюкозаминидазы) нефрона и низкомолекулярных белков, таких как а1-микроглобулин и ß2-микроглобулин [7]. Известно, что фермент N-ацетил-ß-D-глюкозаминидаза (НАГ) секре-тируется эпителием проксимальных канальцев и участвует в деградации мукополисахаридов и гликопротеинов. В норме НАГ не проходит через гло-мерулярный барьер. При повреждении клеток эпителия происходит высвобождение НАГ, что приводит к увеличению концентрации фермента в первичной моче. Это может быть ранним субклиническим маркером повреждения проксимальных канальцев и окружающей их соединительной ткани при острых и хронических заболеваниях почек [8, 9]. В наших исследованиях значительно большие концентрации АнV отмечены у 7 детей с иммунными заболеваниями почек (IgA-васкулитом, системным ва-скулитом, системной красной волчанкой). В ряде других работ показано, что значительно выше концентрации АнV были отмечены в группах пациентов с нефротическим синдромом, волчаноч-ным нефритом, IgA-нефропатией по сравнению с другими нозологиями, при этом самый высокий уровень - у лиц с нефротическим синдромом [6, 10]. Можно предположить, что выявленные изменения в экспрессии АнV в сыворотке крови у части детей с иммунными нефропатиями являются результатом реализации патофизиологического механизма, связанного с апоптозом и активацией циркулирующих клеточных элементов (лимфоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов), участвующие в каскаде иммунопатологических реакций.
По биомаркерам эндотелиальной дисфункции (sVCAM-1, sICAM-1) установлено, что у 10 пациентов (40%) из подгруппы II отмечались колебания в
концентрации белка sVCAM-1 (от 0 до 1,2 нг/мл) при нормальных значениях данного биомаркера для сыворотки крови, не превышающих 0,7-0,9 нг/мл. У 42 детей (80,7%) уровень анализируемого белка был в норме. При анализе концентрации другого биомаркера ЫСАМ-1) установлено, что уровень данного белка во всех анализируемых пробах соответствовал показателям нормы и не превышал значений 50-67 нг/мл.
Известно, что молекулы адгезии играют решающую роль в патогенезе некоторых форм нефропатий. Молекулы адгезии, которые принадлежат к семейству хемокинов (интерлейкин-18 и RANTES) и суперсемейству иммуноглобулинов ^ЮАМ-1 и sVCAM-1), могут быть повышены при диабетической не-фропатии, а также высоко экспрессиру-ются при других нефропатиях, таких как волчаночный нефрит, 1дА-нефропатия, подагрическая нефропатия, мембра-нозная нефропатия и БМИ [11]. Предполагается, что их гиперэкспрессия указывает на грубые нарушения в трансэндотелиальном транспорте и нарушении прочности щелевидных контактов между эндотелиоцитами. Однако до сих пор имеются недостаточные сведения о роли этих и других молекул адгезии в качестве прогностических биомаркеров нефропатий.
Следует отметить, что в здоровом организме и при патологических процессах клеточная адгезия имеет жизненно важное значение в следующих процессах: рециркуляция и движение лейкоцитов, дифференциация клеток и организация ткани для поддержания структуры ткани, активация и связь между иммунными клетками, а также размножение и метастатическое распространение опухолевых клеток [11]. В частности, адгезия лейкоцитов является фундаментальным явлением при воспалении, поскольку лейкоциты, как сообщается, - жизненно важные медиаторы повреждения при некоторых типах гломерулонефрита, васкулита, тубулоинтерстициального нефрита и отторжения трансплантата [12]. В проведенном исследовании отмечена высокая экспрессия фактора sVCAM-1 у детей с 1дА-васкулитом, фокально-сегментарным гломерулосклерозом, 1дА-нефропатией и БМИ.
В ряде работ показано, что повышенная экспрессия ICAM-1 происходит в клубочках, клетках проксимальных
Я Количественные значения белкового фактора sAPO-1/FAS, аннексина V, молекул межклеточной адгезии (sVCAM-1, sICAM-1) в сыворотке крови у детей с нефропатиями
Анализируемый биомаркер Концентрация (нг/мл) Референсные значения (нг/мл)
подгруппа I подгруппа II
sAPO-1/FAS 0,046-0,2 0,2-0,24 0,023±0,002
Аннексин V Не выявлен 0-21,06 0-6,7
sVCAM-1 0-0,49 0-1,2 0 (0,7-0,9)
sICAM-1 Не выявлен 0-55 50-67
канальцев и интерстициальных клетках при нескольких воспалительных заболеваниях почек, таких как активный гломерулонефрит с «полулуниями», мезангиопролиферативный гломерулонефрит, !дД-нефропатия, васкулит Шенлейна - Геноха и волчаночный нефрит класса II и IV [13, 14]. Однако уровни ЮДМ-1 могут быть нормальными или сниженными при БМИ. Белковый фактор VCAM-1 изначально экспрессируется на клетках почечных канальцев у пациентов с васкулитом и «полулунным» нефритом, волчаночным нефритом (класс II, III, IV и V), !дД-нефропатией и острым интерстициальным нефритом, вызванным применением нестероидных противовоспалительных препаратов [15]. Фактически результаты наших исследований показывают, что повышенная экспрессия VCAM-1 в сыворотке крови у части пациентов с иммунными нефро-патиями, вероятно, обусловлены тем, что циркулирующие в крови лейкоциты обеспечивают повышенную адгезию к почечной ткани, что, вероятно, опосредует их повреждение. Интересно, что уровни VCAM-1, как правило, являются самыми
высокими у пациентов с системной красной волчанкой и васкулитом. В наших исследованиях гиперэкспрессия фактора VCAM-1 отмечена у 4 детей, имеющих в анамнезе системную красную волчанку и системный васкулит.
Заключение
По анализу биологических жидкостей (кровь, моча) организма выявлены клинические маркеры ренальной патологии. По результатам иммунобиохи-мического исследования установлено, что у детей с заболеваниями почек в крови выявляются в различных количественных соотношениях биомаркеры апоптоза, антифосфолипидного синдрома и молекулы межклеточной адгезии. Установлено, что молекулы адгезии могут иметь важную роль в патогенезе некоторых нефропатий (например, иммунных заболеваний почек). Дальнейшая качественная и количественная оценка биомаркеров апоптоза и эндотелиальной дисфункции позволит получить важные сведения о тонких звеньях молекулярного повреждения структурных элементов ренальной ткани.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Смирнов А.В., Наточин Ю.В. // Нефрология. -2019. - Т.23, №4. - C.9-26.
2. Fogo A.B. // Pediatr. Nephrol. - 2007. - Vol.2. -P.2011-2022.
3. Комарова О.В. [и др.] // Нефрология и диализ. -2013. - №15. - С.135-139.
4. Jaber B.L., et al. // J. Leuk. Biol. - 2001. - Vol.69. -P.1006-1012.
5. Green D.R., Kroemer G. // Science. - 2004. -Vol.305. - P.626-629.
6. Jakubowska A., Kilis-Pstrusinska K. // Postepy Hig. Med. Dosw. - 2015. - Vol.28. - P.153-157.
7. Markoff A., Gerke V // Am. J. Physiol. Renal Physiol. - 2005. - Vol.289. - P.949-956.
8. Мельник А. // Почки. - 2016. - №4. - C.37-47.
9. Mohkam M., Ghafari A. // J. Ped. Nephrology. -2015. - Vol.3. - P.84- 91.
10. Simsek B., et al. // Pediatric Nephrology. - 2008. -Vol.23. - P.79-82.
11. Uwaezuoke S. // Integrative Molecular Medicine. -2019. - Vol.6. - P.1-5.
12. Mousa S. // Methods Mol. Biol. - 2010. -Vol.663. - P.261-276.
13. Danilewicz M., Wagroska-Danilewicz M. // Nefrologia. - 1998. - Vol.18. - P.357-436.
14. Mischak H., et al. // Nat. Rev. Nephrol. - 2015. -Vol.11. - P.221-232.
15. Zhu L., et al. // BMC Nephrol. - 2013. - Vol.14. - P.1-7.
Поступила 20.08.2021 г.
ВЫХОДНЫЕ ДАННЫЕ Адрес для переписки: Журнал «Медицинские новости»
220004, Минск, включен в электронные базы
«Медицинские новости» №12 (327) 2021 г. ул. Короля, 51, офис 22 (7 этаж) данных «КиберЛенинка»
Рецензируемый научно-практический Тел.: (+375-17) 350-06-41 (гл. редактор), и РИНЦ eLIBRARY.ru
информационно-аналитический журнал. 373-07-01, факс: 374-07-02 Цитируемость - 10 633.
Свидетельство о регистрации № 965 Velcom (+375-29) 695-94-19 Impact factor - 0,237.
выдано Министерством информации Е-mail: [email protected] индекс Хирша - 14.
Республики Беларусь 9 июля 2010 года. (для рекламодателей);
Периодичность - 1 раз в месяц [email protected] Подписка: по каталогам
(для авторов) РУП «Белпочта»
Учредитель www.mednovosti.by и РУП «Белсоюзпечать»
Частное издательское индексы: 74954 (инд.),
унитарное предприятие Ответственность 749542 (вед.);
«ЮпокомИнфоМед». за достоверность Украина (ГП «Пресса»),
Юридический адрес и интерпретацию предоставленной Литва (АО «Летувос паштас»),
220018, г. Минск, ул. Якубовского, 70-5. информации несут авторы. Латвия (ООО
УНП 191350993 Редакция оставляет «Подписное агентство PKS»),
за собой право Болгария (Фирма INDEX),
Редакция по своему усмотрению РФ (ООО «Информнаука»),
Шарабчиев Юрий Талетович размещать полные тексты РФ (ЗАО «МК-Периодика»),
(главный редактор, директор) публикуемых статей Молдова (ГП «Пошта Молдовей»)
Ясевич Татьяна Владимировна на сайте редакции www.mednovosti.by
(редактор, зам. директора) и в электронных базах данных Подписано в печать 27.12.2021 г.
Капля Марина Николаевна (на сайтах) своих партнеров Формат 60х84 1/8.
(ответственный секретарь, Гарнитура Helvetica Narrow.
руководитель направления) По данным Google Analytics Уч.-изд. 13,2.
Колоницкая О.М. (дизайн, верстка) (ноябрь 2021 г.): Типография: Государственное
посещаемость сайта предприятие «СтройМедиаПроект»
Цена свободная. www.mednovosti.by - 199500; ЛП № 02330/71 от 23.01.2014
Тираж распространения, включая читаемость журнала ул. В. Хоружей, 13/61,
электронную подписку, 1025 экз. «Медицинские новости» - 14500. 220123, г. Минск
