Значение системных и локальных показателей цитокинов в оценке гепатоцеллюлярного повреждения при HCV-инфекции Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 612.017:616.36-002-036.12

Л.Ф. Скляр

ЗНАЧЕНИЕ СИСТЕМНЫХ И ЛОКАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЦИТОКИНОВ В ОЦЕНКЕ ГЕПАТОЦЕЛЛЮЛЯРНОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПРИ НСУ-ИНФЕКЦИИ

ГОУ ВПО ВГМУ Росздрава, Владивосток

Вирус гепатита С является ведущей причиной хронического гепатита, цирроза печени и ге-патоцеллюлярной карциномы. Повреждение печени при хроническом вирусном гепатите С (ХВГС) обусловлено как прямыми цитопатическими эффектами вируса, так и иммуноопосре-дованными механизмами. Цитокины, как продуцируемые локально в печени, так и циркулирующие в системном кровотоке, играют важную роль в контролировании вирусной репликации и вносят существенный вклад в гепатоцеллюлярное повреждение. Целью данного исследования являлось изучение показателей содержания некоторых цитокинов в сыворотке крови и их локального уровня во взаимосвязи с показателями некровоспалительных изменений в ткани печени. Установленные связи между содержанием исследуемых цитокинов на системном и локальном уровне с морфологическими показателями свидетельствуют о том, что из всех изученных в работе иммунологических тестов наибольшей значимостью для определения стадии фиброза являлись показатели содержания как в сыворотке так и в супернатантах биоптатов печени ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р70 и ФНО-?. Следовательно, использование определения концентраций указанных цитокинов в сыворотке крови является альтернативным методом неинвазивного скрининга фиброза печени.

Ключевые слова: хронический вирусный гепатит С, цитокины, фиброз

THE SIGNIFICANCE OF SYSTEMIC AND LOCAL CYTOKINE INDICES (COUNT)

IN EVALUATING HEPATOCELLULAR DAMAGE CAUSED BY HCV INFECTION.

L.Ph.Skljar

State Educational Establishment, Higher Vocational Education, Vladivostok State Medical University, Health

Care System Department, RF, Vladivostok

Hepatitis C Virus (HCV) is the leading cause of chronic hepatitis, cirrhosis of the liver and hepatocellular carcinoma. The liver damage caused by Chronic Viral C Hepatitis (CVCH) is conditioned by both direct cytopathologic viral effect and indirect immune mechanisms. Both cytokines produced locally in the liver and cytokines circulating in the systemic blood flow play an important role in controlling the virus replication and result in considerable hepatocellular damage. The goal of the present study was to investigate the proportion of some cytokines in the blood serum and their local level in association with the indices of necrotic inflammatory changes in the liver tissue. The determined correlation between the count of' the investigated cytokines at the systemic and local level and morphological indices testify to the fact that of all the immunology tests studied in the research the content indices of IL-4, IL-10, IL-12p70 and TNF-a both in the blood serum and liver histology examination samples were of the greatest significance for determining the fibrosis stage Consequently, determining the concentration of above-mentioned cytokines in the blood serum is an alternative method of non-invasive liver fibrosis screening.

Key words: Chronic Viral C Hepatitis; cytokines., fibrosis

Вирус гепатита С (НСУ) является ведущей причиной хронического гепатита, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, а также наиболее частым показанием к проведению трансплантации печени [3]. Это связано с тем, что прогрессия заболевания от стадии активного хронического гепатита к циррозу печени протекает бессимптомно, и пациент обращается к врачу уже на конечной стадии патологического процесса. Поэтому при обследовании больного с верифицированной НСУ-инфекцией первым и необходимым шагом является определение активности некрозовоспалительных процессов в печени и оценка стадии на основании выраженности фиброза. На современном этапе пункционная биопсия печени (ПБП) считается «золотым стандартом» для диагностики фиброза печени у больного ХГС. Гистологическое исследование печени служит единственной возможностью точного подтверждения уже сформировавшегося, хотя и компенсированного, цирроза печени, по-

зволяет определить исходное состояние печени до лечения и прогноз ХГС и ответа на противовирусную терапию [2,7]. К сожалению, ПБП, оставаясь «золотым стандартом» определения стадии фиброза, все-таки является инвазивной методикой с определенным процентом осложнений вплоть до летальных (по данным ряда исследований количество летальных случаев варьирует от 0 до 3,3 на 1000) [4] и, по мнению некоторых авторов, обладает сомнительной информативностью для установления показаний к противовирусной терапии [7]. По их мнению, ценность биопсии ограничивается вариабельностью получаемого образца ткани печени, так как, несмотря на то, что гепатит — диффузное заболевание печени, доля фиброзной ткани в исследуемом образце может не соответствовать доли фиброзной ткани в печени в целом. Кроме этого, ПБП имеет ряд абсолютных и относительных противопоказаний. Необходимо отметить, что нередко для оценки прогноза заболевания и эффектйв-

ности лечения существует необходимость повторных биопсий в течение жизни одного больного [ 1 ]. За последние 10 лет опубликовано значительное число работ, в которых приводятся данные о достижениях в изучении механизмов формирования фиброза и диагностической значимости сывороточных маркеров фиброза [1,4,8]. В основу диагностических тестов для определения степени выраженности фиброза включены методы выявления молекулярных соединений, участвующих в патофизиологии процесса образования внеклеточного матрикса или являющихся активаторами фиброге-неза [1,5,6]. Данные литературы позволяют сделать заключение о том, что большинство исследователей считают серологические маркеры фиброза полезным методом мониторирования фиброза печени, методом, с помощью которого можно разграничивать стадии фиброза в печени и оценивать эффект противовирусной терапии. Однако ряд исследователей не подтверждает эти заключения [6,8]. В настоящее время признано, что иммунологические механизмы являются ведущими в формировании хронического гепатита. В связи с этим внимание исследователей все чаще обращается на иммунную систему — важнейшее звено, как защиты, так и повреждения печени. Предполагается, что повреждение печени при ХВГ обусловлено как прямыми цитопатическими эффектами вируса, так и иммуноопосредованными механизмами с возможным преобладанием тех или других на различных этапах заболевания. В процессе иммунного воспаления ведущая роль отводится провоспалительным цитокинам — продуктам активированных клеток системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ). Хорошо известно, что на региональном уровне развитие фиброзно-цирротических изменений в печени тесно связано с мононуклеарной инфильтрацией. В стадии прогрессирующих воспалительных инфильтратов в печени активность коллагеназы в печеночной ткани резко возрастает, а в периоде малообратимого фиброза — стойко снижается. При ХГС это связывают с депрессией клеток Куп-фера — основных «поставщиков» коллагеназы в печени или с торможением поступления и фиксирования макрофагов в воспалительных инфильтратах. Число функционально активных макрофагов в септах по мере стабилизации процесса фиброза ткани печени неуклонно снижается, а в стадии стойких малообратимых фиброзных преобразований становится минимальным. В стадии хронического воспаления провоспалительные ци-токины стимулируют пролиферацию фиброблас-тов и синтез коллагена как непосредственно, так и через индукцию каскада других цитокинов: тромбоцитарного фактора роста фибробластов (РБСР), универсального трансформирующего ростового фактора (ТСРР), фактора роста фибробластов (БСР), которые в совокупности усиливают процессы неоангиогенеза. При длительной и не контролируемой активации макрофагов в органном очаге хронического иммунного воспаления сочетанный эффект перечисленных медленно действующих цитокинов и ростовых факторов приводит к замещению функционально пол-

ноценных тканей фиброзной тканью. Выступая в качестве первой линии защиты организма от вирусного патогена, мононуклеарные фагоциты сами становятся мишенями атаки вируса, что приводит к нарушению их функций. Следовательно, возбудитель фактически может ускользать от эф-фекторных механизмов иммунитета, сохраняя вирулентность, что объясняет прогрессирующее хроническое поражение клеток печеночной паренхимы с исходом либо в цирроз, либо в рак печени. Таким образом, цитокины, как продуцируемые локально в печени, так и циркулирующие в системном кровотоке, играют важную роль в контролировании вирусной репликации и вносят существенный вклад в гепатоцеллюлярное повреждение.

Целью данного исследования являлось изучение показателей содержания некоторых цитокинов в сыворотке крови и их локального уровня во взаимосвязи с показателями некровоспалительных изменений в ткани печени.

МЕТОДИКА

Объектом исследования были 40 пациентов с ХГС в возрасте от 18 до 44 лет (в среднем 29,3±1,5 года; 84% мужчин),‘ никогда ранеё не получавших лечения противовирусными препаратами. Диагно- \

стика ХГС складывалась из данных анамнеза, физикального обследования, определения уровня трансаминаз, маркеров вирусной инфекции (а/ тВГС-сум., а/тВГС-IgG, а/тВГС-IgM, а/тВГС-№(3-5)), виремии по данным полимеразной цепной реакции (ПЦР) с генотипированием. Анализировали содержание 8 цитокинов — ИЛ-1а, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ФНО-а, ИФН-у в сыворотке крови и супернатанте биоптата печени пациентов ХГС и здоровых доноров (15 человек). Для этого периферическую кровь (5 мл) забирали шприцем из локтевой вены, центрифугировали при 3000 об./мин на холоде в течение 10 мин. Сыворотку разливали по 0,5 мл в эпиндор-фы, замораживали и хранили до использования при -76°С. Всем пациентам выполнялась чрескожная пункционная биопсия печени иглой Менгини с получением столбика биоптата не менее 20 мм, от которого 2-3 мм субстрата гомогенезировали с добавлением физиологического раствора (5 мл), ресуспендировали и центрифугировали при 5000

об./мин на холоде в течение 10 мин. Полученный супернатант распределяли по 0,5 мл в эпиндор-фы, замораживали и хранили до использования при -76°С. Применяли метод твердофазного ИФА с использованием диагностических наборов (R&D Diagnostics Inc., USA) с чувствительностью 1 пг/ мл. Расчеты количества цитокинов проводили путем построения калибровочной кривой с помощью компьютерной программы и выражали в пг/ мл. В качестве контроля при исследовании уровней цитокинов в гомогенизатах печеночных био-птатов использовались образцы печеночной ткани 5 доноров, не имеющих хронических заболеваний и маркеров инфицирования вирусами парентеральных гепатитов. Учитывая небольшие пределы разбросов показателей, мы сочли воз-

можным ограничиться этим количеством исследований. Необходимо принять во внимание также сложность и специфику забора материала. Оценку результатов проводили с использованием статистических приемов для малых выборок. Для морфологического исследования биоптаты обрабатывали по общепринятым методикам и заключали в парафин. В гистологических срезах, окрашенных гематоксилином и эозином и по Ван-Гизону, определяли активность некровоспалитель-ных изменений на основе полуколичественной оценки по Я.С. Кпос1е11 е! а1. (1981) в модификации В.В. Серова (1996) и индекс фиброза по У.Л.Оевше! е1 а1. (1994) по алгоритму МЕТАУШ [10]. Для оценки информативности системного и локального статуса цитокинов провели корреляционный анализ взаимосвязей между морфологическими характеристиками ХГС и их концентрацией в сыворотке крови и супернатантах биопта-тов печени. Статистическая обработка полученных материалов произведена на ПЭВМ РепИит-100 с применением прикладных программ ВЮБТАТ. С целью определения достоверности различий использован 1-критерий Стьюдента для факторов, имеющих нормальное распределение. Корреляционный анализ проводили с использованием непараметрической корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ

При изучении содержания цитокинов в сыворотке крови при ХГС наблюдалось достоверное увеличение концентраций цитокинов ТЬ2-типа (ИЛ-

4, ИЛ-10) и провоспалительных цитокинов ФНО-

а, ИЛ-1а, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70 на фоне достоверного снижения уровней ТЫ цитокинов (ИЛ-2 и ИФН-у). При этом имеется статистически значимое отличие показателей содержания уровней цитокинов в группах пациентов с разными стадиями фиброза (табл. 1). Из таблицы видно, что количество провоспалительных цитокинов (ИЛ- 1а, ФНО-а) в сыворотке крови более, чем в 2,5 раза превышают их уровни у здоровых людей. При этом содержание ИЛ- 1а и ФНО-а у больных с Б2 и БЗ достоверно выше их уровня в группе больных без признаков фиброза (БО). При этом не определено достоверных различий между концентрацией исследуемых цитокинов в группах с Р0 и начальными его проявлениями (Б 1) (р>0,05). Уровни сывороточных цитокинов ИЛ-2 и ИФН-у, продуцируемых Т-клетками 1 типа, значительно снижены, в особенности ИФН-у. При сравнении содержания исследуемых цитокинов у больных с разными стадиями фиброза отмечено, что статистически значимые различия определялись в группе больных с БЗ (р<0,01). В то время как в группе с Б0 показания уровней сывороточных ИЛ-2 и ИФН-у по сравнению со здоровыми не отличались (0,17 =±=0,09 пг/ мл и 10,0±4,8 пг/мл против 0,2±0,03 пг/мл 14,3±1,7 пг/мл соответственно, р<0,05). Что касается сыво-. роточного содержания цитокинового профиля Т-клеток 2 типа, то для ИЛ-4 и ИЛ-10 обнаружены значительные повышения их уровней по мере прогрессирования фиброза. Концентрация ИЛ-4 в группе без фиброза статистически значимо не от-

личалась от показателя уровня исследуемого ци-токина в сыворотке крови у здоровых (4,5±1,0 пг/ мл против 3,2±1,2 мг/мл, р>0,05). Содержание сывороточного ИЛ-10 в группах больных с Р0 и Б1 также достоверно не изменялось (28,5±7,8 пг/мл и 34,4±8,1 пг/мл соответственно, р>0,05). Исследование локального содержания ИЛ-1а, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ФНО-а свидетельствует о достоверном увеличении их уровней, а также о снижении концентраций ИЛ-2, ИФН-у по сравнению с группой контроля (табл.2). Самый низкий локальный уровень провоспалительных и ТЫ-продуцируемых цитокинов наблюдался при Р1 для ИФН-у (р<0,01) и при Р2 для ИЛ-2 (р<0,05). Содержание ИЛ-1а в супернатанте печени достоверно не отличалось между показателями в группах с Р2 и РЗ (75,0=8= 10,8 пг/мл и 100,0±21,5 пг/мл соответственно, р>0,05). Локальный уровень ФНО-а в исследуемых группах имел достоверную тенденцию к увеличению его концентрации при прогрессировании фиброза и в отличие от сывороточного уровня был достоверно отличен в группах с Р0 и Р1 (10,1 ± 1,5 пг/мл и 59,0±2,8 пг/мл соответственно, р<0,01). Содержание цитокинов профиля ТЬ 2 типа на местном уровне характеризовалось статистически значимым увеличением концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 в исследуемых группах. В отличие от сывороточных значений этих цитокинов наблюдалось значительное их увеличение (на местном уровне) по сравнению с группой здоровых более, чем в 20 раз в группе с РЗ (для ИЛ-4, р<0,001). Содержание ИЛ-12р40 на системном уровне в исследуемых группах достоверно отличалось от группы здоровых (р<0,05), однако в группах с разной стадией фиброза статистическая значимость различий была неравномерной. В отличие от этого на местном уровне четко определялась статистическая значимость различий в содержании исследуемого цитокина в группах с разными стадиями фиброза (р<0,001). При этом в группе с высокой стадией фиброза (РЗ) концентрация локального ИЛ-12р40 превосходила нормальные значения в 300 раз, что отличалось от сывороточного показателя (в 5 раз). Таким образом, несмотря на определенные различия, изменение баланса цитокинов ТЫ и ТЬ2 на локальном и системном уровнях носит однонаправленный характер. При изучении корреляционных взаимосвязей между исследуемыми ци-токинами в различных биологических субстратах (сыворотке крови и супернатантах печени) и выраженностью фиброза печени в баллах выявлена высокая степень корреляции между параметрами ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р70 и ФНО-а, что дает возможность использования их в качестве достоверных маркеров выраженности фиброза печени (табл.З). Наиболее значимыми для оценки выраженности фиброза явилось повышение уровней сывороточных ИЛ-4 (>5,6 пг/мл), ИЛ-10 (>35 пг/ мл), ФНО-а (>14 пг/мл) и ИЛ-12р70 (>8,5 пг/мл). Следовательно, определенные интервалы параметров иммунитета могут служить критериями неблагоприятного течения болезни. Согласно литературным данным, высокий уровень ФНО-а связывают с индукцией апоптоза гепатоцитов и

ЛИТЕРАТУРА:

1. Жданов К.В. Значение морфологических исследований в диагностике и лечении парентеральных вирусных гепатитов / К.В. Жданов, Ю.В. Лоб-зин, Д.А. Гусев, Чирский B.C. // Вирусные гепатиты (достижения и перспективы): Информ. бюл. — 2003. - №2(17). - С. 11-16.

2. Майер К. П. Гепатит и последствия гепатита. Практическое руководство / К.П. Майер — М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. — 432 с.

3. Никитин И.Г. Хронический гепатит С у пациентов, перенесших трансплантацию печени: механизмы прогрессирования и подходы к лечению / И.Г. Никитин, Г.И. Строжаков, И.Г. Федоров // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол.

- 2003. - № 4. - С. 4-10.

4. Grant A. Guidelines on the use liver biopsy in clinical practice / A. Grant, J. Neuberger // Gut. — 1999. - Vol. 45(4). - P. 1-11.

5. Kanzler S. Prediction of progressive liver fibrosis in hepatitis С infection by serum and tissue levels of transforming growth factor-beta / S. Kanzler, M. Baumann, P. Schirmacher // J. Viral Hepat. — 2001. - Vol. 8(6). - P. 430-437.

6. Leroy V. Changes in histological lesions and serum fibrogenesis markers in chronic hepatitis С patients non-responders to interferon alpha / V. Leroy, C. De Traversay, R. Barnoud // J. Hepatol. — 2001.

- Vol. 35(1). - P. 120-126.

7. Manns M.P. Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2b plus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C: a randomized trial / M.P. Manns, J.G. Hutchison, S.C. Gorton // Lancet. - 2001. - Vol. 358. - P. 898-965.

8. Regev A. Sampling error and intraobserver variation in liver biopsy in patients with chronic HCV infection / A. Regev, Berho М., Jeffers L.J. // J. Gastroenterol. - 2002. - Vol. 97(10). - P. 2614-2618.

Таблица 1

Содержание цитокинов (в пг/мл) в сыворотке крови у больных ХГС с различной стадией фиброза

Группы обследо- ванных ил-1а ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-10 ИЛ-12р40 ИЛ-12р70 ФНО-а ИФН-а

F0 (п=12) 1,2±0,2‘ Р2>0,05 Р3<0,05 Р4<0,001 0,17±0,09 Р2>0,05 Р3>0,05 Р4>0,05 28,5±7,8‘ Рг<0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 69,5±11,2 Р2>0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 85,8±11,1* Рг>0,05 Р3<0,01 Р4<0,001 9,1 ±2,5* Р2<0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 10,0±4,8 Р2>0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 Р2>0,05 Р3>0,01

F1 (п=13) 1,5±0,4* Р, >0,05 Р3<0,01 р4<0,01 0,15±0,05 Р, >0,05 Р3>0,01 р4<0,0 11,5±2,1 * Р1 ,<0,05 Р3<0,05 Р4<0,01 34,4±8,1* Р,>0,05 Р3<0,05 Р4<0,01 100,8±17,0‘ Р, >0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 62,5±9,4‘ Р, ,<0,05 Р3<0,01 р4<0,01 13±1,8* Р,>0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 8,1 ±2,5* Р,>0,05 Р3>0,01 Р4<0,01

F2 (п=8) 5,0±0,9* Р,<0,01 Р2<0,01 Р.<0,05 4 ’ 0,16±0,03‘ Р,>0,01 Р2>0,01 Р4<0,05 17,0±1,1 * Р,<0,01 Р2<0,05 Р4<0,05 70,1 ±15,1' Р,<0,01 Р2<0,05 Р4<0,05 180±30,5‘ Р,<0,01 Р2<0,01 Р4>0,05 30,5+2,3' Р,<0,01 Р2<0,01 Р4<0,01 20±1,9* Р,<0,01 Р2<0,01 Р4<0,01 5,4±1,8* Р,>0,01 Р2>0,01 Р4<0,01

F3 (п=7) 7,7±1,3* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,05 0,1 ±0,02* Р,<0,05 Рг<0,05 Р3<0,01 8.3±1,2* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,05 107,5± 10,9* Р, <0,001 Р2<0,01 Р3<0,01 250±70,0* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3>0,05 10,9±1,2* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,01 28,5+3,5’ Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,01 1,2±0,4‘ Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,01

макрофагов, что стимулирует экспрессию интег-рина Мас-1, который в свою очередь манифестирует переход воспалительного процесса в цирроз и ограничивает выработку цитокинов ТЫ-типа ответа [5]. Именно этим можно объяснить высокую степень корреляционных связей между концентрацией ФНО-а, продуцируемого, преимущественно, клетками СММ, и ИЛ-4, ИЛ-10 — продуцируемых Т11 2 типа, на системном и локальном уровнях и выраженностью фиброза, что возможно ведет к избыточной активации гуморальной составляющей иммунной системы с иммунопатологическими последствиями. Преобладание увеличения концентрации локальных цитокинов может быть связано и с нарушением их инактивации поврежденной печенью. К противовоспалительным механизмам относится локальное и системное действие ИЛ-10, направленное на ингибирование продукции ФНО-а и регуляцию синтеза ИЛ-12. Однако при дисбалансе провоспали-тельных и противовоспалительных цитокинов иммунологические механизмы приобретают патологический характер, что имеет место при ХГС.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, установленные связи между содержанием исследуемых цитокинов на системном и локальном уровне с морфологическими показателями свидетельствуют о том, что из всех изученных в работе иммунологических тестов наибольшей значимостью для определения стадии фиброза являлись показатели содержания как в сыворотке так и в супернатантах биоптатов печени ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р70 и ФНО-а. Следовательно, использование определения концентраций указанных цитокинов в сыворотке крови является альтернативным методом неинвазивного скрининга фиброза печени.

Таблица 1 (продолжение)

Г руппы обследованных ИЛ-1а ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-10 ИЛ-12р40 ИЛ-12р70 ФНО-а ИФН-а

контроль (п=5) 0,53±0,1 0,2+0,03 3,2±1,2 13,9±0,7 54,8±3,7 6,3±1,2 4,3±1,2 14,3±1,7

Достоверность различий изучаемого показателя по сравнению с:' - контрольной группой (Р<0,05)

Р, - группой с Р0 Р2 - группой с Р1 Р3 - группой с Р2 Р4 - группой с ЯЗ

Таблица 2

Содержание цитокинов (в пг/мл) в супернатанте печени у больных ХГС с различной стадией фиброза

Группы обследо- ванных ИЛ-1а ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-10 ИЛ-12р40 ИЛ-12р70 ФНО-а ИФН-у

РО (п=12) 20,0±3,5* Р2<0,01 Р3<0,01 Р4<0,01 30,1+3,1 Р2>0,01 Р3<0,01 р4>0,01 75,1 ±20,0' Р2<0,001 Р3<0,001 Р4<0,001 150,1 ±30,1 Р2>0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 20,5±3,5* Р2<0,01 Р3<0,01 Р4<0,001 30,3±5,1' Р2<0,05 Р3<0,01 Р4<0,01 10,1±1,5* Р2>0,05 Р3<0,01 Р4<0,001 70,5±12,5* Р2>0,05 Р3<0,05 Р4<0,01

Р1 (п=13) 70,0±11,2* Р,<0,01 Р3>0,05 Р4<0,01 20,5±5,1 р,<0,001 Р3<0,001 Р4<0,001 200±95,1* Р„<0,01 Р3<0,05 Р4<0,01 170±18,5* Р1 >0,05 Р3<0,05 Р4<0,01 50,1 ±7,8’ Р,<0,01 Р3<0,01 Р4<0,001 20,5±1,2* р„<0,01 Р3<0,01 Р4<0,001 59±2,8" Р,<0,01 Р3<0,01 Р4<0,001 30,1 ±9,5* Р,<0,05 Р3>0,05 Р4<0,05

Р2 (п=8) 75±10,8* Р,<0,01 Р2>0,05 Р4<0,05 10,5±1,5* Р,<0,01 Р2<0,01 Р4>0,05 400±90,3" Р,<0,01 Р2<0,05 Р4<0,01 240±70,8* Р,<0,01 Р2<0,05 Р4<0,01 200,1 ±90,1 * Р,<0,01 Р2<0,01 Р4<0,001 10,2±2,4* Р,<0,01 Р2<0,01 Р4<0,01 100± 15,9* Р,<0,01 Р2<0,01 р4<0,01 30,8±8,1* Р,<0,05 Р2>0,05 Р4>0,05

РЗ (п=7) 100±21,5* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3>0,05 8,3±1,1* Р,<0,001 Р2<0,01 Р3>0,01 800±100,0“ Р,<0,001 Р2<0,01 Р3<0,001 450,5±80,0* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,01 2000±180* Р,<0,001 Р2<0,001 Р3>0,001 2,1 ±0,9* Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,01 200±20,8" Р, <0,001 Р2<0,001 Р3<0,01 25,3±7,5* Р,<0,01 Р2>0,05 Р3>0,05

контроль (п=5) 16,4±2,9 29,0±2,8 55,0±9,4 139,4± 13,2 6,8±0,9 3,3±0,7 4,9±1,4 64,4±2,9

Достоверность различий изучаемого показателя по сравнению с:' - контрольной группой (Р<0,05)

Р, - группой с Р0 Р2 - группой с Р1 Р3 - группой с Р2 Р4 - группой с РЗ

Таблица 3

Коэффициенты корреляции (Я) и уровни их значимости (р) между выраженностью фиброза (Р) и показателями содержания сывороточных и локальных цитокинов при ХГС

Сыворотка Супернатант печени

Цитокины Р1(1-4) (п = 15) Р2(5-8) (п = 10) РЗ(9-12) (п = 5) Р1(1-4) (п = 15) Р2(5-8) (п = 10) РЗ(9-12 (п = 5)

Р И Р Я Р Я Р Я Р Я Р

ИЛ-1а 0,1 0,8 0,09 0,7 0,65 0,01 0,14 0,7 0,33 0,2 0,68 0,001

ИЛ-2 0,26 0,4 0,33 0,2 0,49 0,1 0,28 0,4 0,22 0,4 0.95 0,001

ИЛ-4 0,97 0,001 .0,87 0,001 0,98 0,001 0,95 0,01 0,89 0,001 0,97 0,001

ИЛ-10 0,96 0,001 0,93 0,001 0,94 0,001 0,91 0,01 0,92 0,001 0,94 0,01

ИЛ-12р40 0,1 0,8 0,99 0,001 0,97 0,001 0,18 0,6 0,9 0,7 0,93 0,001

ИЛ-12р70 0,94 0,01 0,93 0.001 0,98 0,001 0,94 0,01 0,99 0,01 0,98 0,001

ФНО-а 0,87 0,001 0,9 0,001 0,98 0,01 0,93 0,01 0,9 0,01 0,98 0,001

ИФН-у 0,76 0,001 0,67 0,01 0,48 0,1 0,17 0,6 0,3 0,2 0,96 0,001

Выделенные цифры означают максимальную степень Я и р между изучаемыми показателями