CC BY
37Фізика живого, Т. 1?, No 1, 2009. С.150-154.
© Толстанова Г.М., Берегова Т.В., Остапченко Л.І.
УДК: 616.34-002
ЗМІНИ ЕКСПРЕСІЇ ВАСКУЛЯРНОГО ЕНДОТЕЛІАЛЬНОГО ФАКТОРУ РОСТУ (УЕОЕ) ТА УЕОЕЯ-2 РЕЦЕПТОРА ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ ЗАПАЛЬНИХ ЗАХВОРЮВАННЯХ КИШЕЧНИКА
Толстанова Г.М., Берегова Т.В., Остапченко Л.І.
Київський національний університет імені Тараса Шевченка, біологічний факультет, Київ, Україна, e-mail: [email protected]
Надійшла до редакції 25.03.2009
Підвищення рівня УБвБ було знайдено в крові та слизовій оболонці хворих на запальні захворювання кишечника (ЗЗК) в період загострення хвороби. Експериментальні дані, щодо динаміки зміни експресії УБвБ, УБОРЯ-2 рецептора в різні терміни розвитку ЗЗК відсутні. Метою даної роботи було дослідити зміни експресії білку та мРНК УБвБ, УБвРЯ-2 рецептора в динаміці розвитку експериментального ЗЗК. Дослідження проведені на моделях хімічного йодоацетамід-викликаного коліту у щурів та спонтанно-виникаючого ЗЗК у ІЛ-10 нокаутованих (КО) мишей. Експресію УБвБ, УБвРЯ-2 рецептора визначали методами полімеразно ланцюгової реакції у реальному часі, Вестерн блот та імуноферментним аналізом. Встановлено 2 фази збільшення рівня експресії УБвБ в патогенезі йодоацетамід-викликаного коліту: I фаза - в перші години розвитку коліту, що відображає його роль в ініціації цього процесу; II фаза -пов‘язана з формуванням грануляційної тканини в місті ураження та утворенням нових кровоносних судин (процес самозагоєння). За умов розвитку йодоацетамід-викликаного коліту рівень експресії УБвРЯ-2 рецептора зростав, динаміка його змін була аналогічною змінам рівня експресії УБвБ. Розвиток ЗЗК на моделі спонтанно-виникаючого коліту у ІЛ-10 КО мишей супроводжувався збільшенням експресії УБвБ білку та мРНК.
Ключові слова: запальні захворювання кишечника, експериментальний коліт, васкулярний ендотеліальних фактор росту.
ВСТУП
ЗЗК, до яких належать виразковий коліт та хвороба Крона, характеризуються неспецифічним імунним запаленням та виразками стінки кишечника з частими рецидивами та хронічним протіканням хвороби [10, 18].
В результаті досліджень стінки кишечника хворих на ЗЗК за допомогою Допплер сонографії було показано збільшення густини кровоносних судин та товщини стінки кишки у хворих в період загострення хвороби [8, 14]. Аналогічні результати були отримані на експериментальних моделях ЗЗК (коліт, викликаний 3%-ним розчином декстран сульфату натрія та СВ4+СБ45КБЬі8Ь-Т-клітини-залежний коліт) [2]. Новоутворенні судини мали порушену архітектоніку, характеризувались збільшеною проникністю та підвищенням судинно-тромбоцитарного потенціалу [9]. Це дозволило дослідникам припустити, що ангіогенез (утворення нових кровоносних судин) є один із компонентів патогенезу ЗЗК.
УБОБ є ключовим фактором стимуляції ангіогенезу, так як втрата лише одного його алеллю веде до порушення васкуляризації та ранньої пренатальної смерті [1]. УБОБ, через
взаємодію з УБОРЯ-2 (Бік) рецепторами, стимулює проліферацію, міграцію, формування кровоносної трубки, збільшує кровотік та попереджає апоптоз ендотеліальних клітин [5]. З іншого боку, УБОБ має про-запальні властивості за рахунок збільшення проникності кровоносних судин [13] та підвищення експресії білків адгезії лейкоцитів [11].
Підвищення рівня УБОБ було знайдено в крові та слизовій оболонці хворих на ЗЗК в період загострення хвороби [6, 17]. Крім того, терапія інфліксімабом (антитіло до ТНФ-а) викликала швидке та стійке зниження рівня УБОБ у хворих на хворобу Крона [14], що свідчить про можливу патогенетичну роль УБОБ за умов розвитку ЗЗК. Не дивлячись на чисельні клінічні дані про підвищення рівня УБОБ, експериментальні дані, щодо динаміки зміни експресії УБОБ, УБОБЯ-2 рецептора в різні терміни розвитку ЗЗК відсутні.
Метою даної роботи було дослідити зміни експресії білку та мРНК УБОБ, УБОБЯ-2 рецептора в динаміці розвитку експериментального ЗЗК.
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
Дослідження проведені на щурах самках лінії Sprague-Dawley вагою 1б0-200 г. Виразковий коліт викликали одноразовим ректальним введенням 0,1 мл б%-го розчину йодоацетаміду (Sl8ma, США), розчиненим в 1%-ному розчині метилцелюлози (Sl8ma, США) (7 см від анального отвору,
використовуючи гумовий катетер SS (Rusch, Німеччина)) [12]. Тваринам контрольної групи вводили 0,1 мл 1%-го розчину метилцелюлози. Щурів уметрвляли через 0,5, 1, 2, б год. та 1, 3, 7, 14 діб після введення йодоацетаміду, видаляли ділянку товстої кишки 7 см від анального отвору та відразу занурювали в рідкий азот.
Дефіцит цитокіну ІЛ-10 викликає спонтанний розвиток ЗЗК у мишей, які за клінічними та морфологічними ознаками відповідають таким у людей хворих на дану патологію. Ми використовували ІЛ-10 КО мишей (B6.129P2-Il10tm1Cgn/J), виведених на основі лінії C57BL6. У переважної більшості цих мишей спонтанно виникають запальні ураження в ділянках сліпої та ободової кишки в віці S-10 тижнів, які часто супроводжуються пролапсом анального сфінктера. Контролем слугували інтактні миші лінії C57BL6. Мишей уметрвляли в віці 12 та 1S тижнів, видаляли товсту кишку від анального отвору до сліпої кишки та відразу занурювали в рідкий азот.
Ізольовану ділянку товстої кишки гомогенізували в лізуючому буфері з додаванням інгібітора протеіназ (Sl8ma, США). Концентрацію загального білку вимірювали за методом Бредфорда з використанням набору «Blo-Rad для білкового аналізу» (Blo-Rad, США). Розділення та визначення білку (100 мкг заг.білку/зразок) методом Вестерн блот проводили в 10% чи 7% SDS поліакріламідному гелі з наступним переносом на Hybond-ECL нітроцелюлозну мембрану (Amersham Blosclences, США) згідно стандартного протоколу фірми Blo-Rad. Моноклональне антитіло до VEGF (1:500; Santa-Cruz Blotech., США) та VEGFR-2 (1:200; Santa-Cruz Blotech., США) використовували для визначення рівня відповідних білків в стінці товстої кишки, з наступною інкубацією із вторинним HRP-кон’югованним антитілом (1:3000, Santa-Cruz Blotech., США). Візуалізацію Вестерн блот проводили ECL-реагентом (Amersham Blosclences, США).
Визначення концентрації VEGF в стінці товстої кишки проводили методом імуноферментного аналізу з використанням набору для визначення VEGF щура в лізаті клітин та тканини (Rayblotech, Inc.; США) згідно забезпеченого протоколу. Концентрацію ендогенного VEGF розраховували проти концентрації загального білку.
РНК ізолювали в TRIZOL реагенті (Invltro8en; США) та очищали з використанням набору Clontech Laboratories для повної ізоляції РНК
(Clontech Laboratories, США). Полімеразно ланцюгову реакцію (ПЛР) у реальному часі проводили з використанням TaqMan системи (Applled Blosystems Inc.; США) для гену VEGF. 5 мкг загального РНК з кожного зразка брали для конвертації мРНК в кДНК застосовуючи MMLV транскриптазу (Invltro8en; США) впродовж 30 хв (t=50oC). Для ПЛР у реальному часі реакції загальним об’ємом 20 мкл, 1 мкл продукту реверс транскрибування з’єднували з TaqMan
універсальною сумішшю для ПЛР та сумішшю для експресії генів (Applled Blosystems; США). ПЛР у реальному часі проводили на ампліфікаторі BloRad lCycler за наступним протоколом: зворотна
транскрипція (1 цикл) - 50oC - 2 хв.; активація Taq інгібітора (1 цикл), - 95oC- 10 хв.; ПЛР ампліфікація (40 циклів) - 95oC - 15 с, 60oC - 1 хв. Рівень мРНК досліджуваного гену визначали за числом умовних одиниць флуоресцентного сигналу(ум.од. флуор.), використовуючи число ум.од. флуоресцентного сигналу гену GAPDH для стандартизації вихідної кількості РНК. Зміни експресії вираховували за різницею числа ум.од. флуоресцентного сигналу експериментальної
групи до контрольної групи.
Статистичну обробку результатів проводили за t тестом Ст’юдента. Дані представлені у вигляді М+с, n - кількість тварин в групі. Статистично значущою для всіх показників вважали різницю Р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
Як правило, хворі на ЗЗК звертаються до лікаря лише в період загострення хвороби, що унеможливлює дослідити молекулярно-біохімічні зміни, що передують клінічним проявам хвороби. Експериментальні моделі ЗЗК є ідеальним для
цього об’ єктом. В своїх дослідженнях ми
використали дві експериментальні моделі ЗЗК: коліт, викликаний б%-им розчином йодоацетаміду та спонтанно-виникаючий ЗЗК у ІЛ-10 КО мишей.
Йодоацетамід-викликаний коліт
характеризується швидким розвитком ознак
хвороби [12] з першими проявами змін в
морфології товстої кишки (збільшення проникності кровоносних судин, масивний набряк слизової оболонки) вже через 1-2 години після введення йодоацетаміду (фаза альтерації). Через б год. (фаза ексудації) спостерігається інфільтрація лейкоцитів в стінку кишки, кількість яких поступово збільшується, досягаючи максимуму на 3-у добу. Ураження слизової оболонки з пенетрацією в підслизовий та м’язевий шари розвиваються на 1-у добу з ознаками повного некрозу на її кінець. Починаючи з 7-ї доби фаза ексудації поступово змінюється проліферацією сполучнотканинних клітин та формуванням грануляційної тканини з вираженим неоангіогенезом і самозагоєнням на 21-у добу.
Толстанова Г.М., Берегова Т.В., Остапченко Л.І.
Кон. 0.5 1
6 24год. 3 7 14 д.
Б УЕвР йАРОН
24 кДа 38 кДа
Кон. 0.5 1
6 24год. 3 7 14 д.
6 год. 3 7 д.
Рис. 1. Рівень експресії УБвБ в стінці товстої кишки щурів в різний термін 6% йодоацетамід-викликаного коліту. А-імуноферментний аналіз; Б-Вестерн блот; В-ПЛР у реальному часі. М±с п=3, *-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001, відносно контролю (Кон.).
УЕСЯР-2
САРОН
►41 І»
200 кДа 150 кДа
38 КДа
Кон. 0.5 1 2 6 24 год. З 7 д.
Рис. 2 Експресія УЕОРЯ-2 рецептора в стінці товстої кишки щурів в різний термін 6% йодоацетамід-викликаного коліту. Вестерн блот. п=3.
\ZEGF
САРРН
24 кДа
38 кДа
інтактні ІЛ-10 КО інтактні ІЛ-10 КО
12 тижнів 18 тижнів
Рис. 3. Рівень експресії УБвБ в стінці товстої кишки інтактних та ІЛ-10 нокаутованих мишей. А- Вестерн блот; Б-ПЛР у реальному часі. М±5, п=3, *-р<0,05; відносно інтактних мишей.
Йодоацетамід-викликаний коліт
характеризується швидким розвитком ознак хвороби [12] з першими проявами змін в морфології товстої кишки (збільшення проникності кровоносних судин, масивний набряк слизової оболонки) вже через 1-2 години після введення йодоацетаміду (фаза альтерації). Через 6 год. (фаза ексудації) спостерігається інфільтрація лейкоцитів в стінку кишки, кількість яких поступово збільшується, досягаючи максимуму на 3-у добу. Ураження слизової оболонки з пенетрацією в підслизовий та м’язевий шари розвиваються на 1-у
добу з ознаками повного некрозу на її кінець. Починаючи з 7-ї доби фаза ексудації поступово змінюється проліферацією сполучнотканинних клітин та формуванням грануляційної тканини з вираженим неоангіогенезом і самозагоєнням на 21-у добу.
Імуноферментний аналіз рівня УБОБ в слизовій оболонці товстої кишки щурів (Рис. 1А) показав його збільшення майже в 3 рази (р<0,001, відносно контролю) вже через 0,5 год. після введення йодоацетаміду (39,25±10,92 пг/мг заг. білку проти 11,46±3,09 пг/мг заг. білку в контрольній групі). Рівень УБОБ залишався збільшеним упродовж 1-ої доби після введення йодоацетаміду і співпадав у часі з розвитком гострого запалення, що супроводжувалось інфільтрацією стінки кишки лейкоцитами. Через 24 год. рівень УБОБ поступово почав знижуватися (23,44±17,05 пг/мг заг. білку), з поверненням до базального рівня на 3-у добу (12,39±2,25 пг/мг заг. білку). На 7-у добу після введення йодоацетаміду, коли аналіз гістологічних препаратів показав поступову заміну некротичної тканини грануляційною з вираженим неоангіогенезом, ми відмітили початок другого піку підвищення рівня УБОБ (17,98±8,17 пг/мг заг. білку), який досяг статистично вірогідного збільшення на 14-у добу (22,85±5,56 пг/мг заг. білку; р<0,05, відносно контролю). Аналогічні зміни в рівні УБОБ білку були отримані методом Вестерн блоту (Рис. 1Б). Як видно на рисунку 1В, експресія УБОБ мРНК в слизовій оболонці товстої кишки щурів з йодоацетамід-викликаним колітом була вірогідно підвищена в 1,7 разів (р<0,01, відносно контролю) вже через 1 год. та досягала максимуму через 2 год. (3,5 разів; р<0,05, відносно контролю).
В процесах ангіогенезу УБОБ опосередковує свою дію через взаємодію з УБОБЯ-2 рецептором, тому цікавим було перевірити зміни експресії цього рецептора в товстій кишці щурів при йодоацетамід-викликаном коліті. Результати показали (рис. 2) достовірне підвищення рівня УБОБЯ-2 рецептора білку. Встановлені зміни були аналогічними до змін в рівні УБОБ Цікаво те, що на 3-у добу, коли рівень УБОБ повертався до вихідного рівня, збільшувалась експресія УБОБЯ-2 білку, що можливо є компенсаторним механізмом.
Аналізуючи отримані нами дані, можна заключити, що експресія УБОБ в патогенезі хімічно-викликаного коліту має 2 фази. Щодо пояснення механізму виникнення вищезазначеного явища, нами було припущено, що УБОБ може справляти різноспрямовану дію в патогенезі ЗЗК. Так підвищений рівень УБОБ, що значно перевищує його рівень в нормі, (І фаза) відіграє патологічну роль, шляхом збільшення проникності кровоносних судин в стінці капілярів та збільшення експресії адгезивних молекул, що полегшують інфільтрацію лейкоцитів в стінку кишки.
Підвищений, але не в такій мірі як в І фазу, рівень VEGF на 7-14-ті дні (ІІ фаза) після введення йодоацетаміду, коли на гістологічних зрізах відмічались ознаки ангіогенезу та формування грануляційної тканини, відіграє позитивну роль, стимулюючи міграцію та проліферацію
ендотеліальних клітин, таким чином полегшуючи самозагоєння виразки, яке характерно для експериментальних моделей хімічно-викликаного коліту. Наше припущення підтверджене даними про виникнення перфоруюючих виразок в шлунково-кишковому тракті пацієнтів, що отримували терапію з бевацізумабом, препаратом, який є нейтралізуючим моноклональним антитілом до VEGF, що використовується в схемі анти-ракової терапії після операцій з приводу видалення пухлин товстої кишки. Автори зробили висновок, що ця побічна дія бевацізумаба пов’ язана з пригніченням активності VEGF в місці загоєння післяопераціїної рани [16]. З іншого боку мікросудини в шкірі трансгенних мишей з надмірно підвищеним рівнем експресії VEGF виявили збільшення адгезії лейкоцитів та значне підвищення проникності судин, що супроводжувалось набряком і мало всі ознаки хронічного запалення [3, 15].
На відміну від хімічно-викликаного ЗЗК, спонтанно-виникаючий ЗЗК у ІЛ-10 КО мишей характеризується хронічним протіканням хвороби. В стерильних умовах ураження кишечника локалізуються переважно в проксимальному
відділі товстої кишки та характеризуються втратою ворсинок, підвищенням проліферації ентероцитів, помірними ураженнями без виразок, стінка кишки інфільтрована переважно гігантськими клітинами (високодифереційовані макрофаги), що сприяють утворенню гранульоми в lamina propria, де не де зустрічаються нейтрофіли [7].
В наших дослідженнях хронічне протікання ЗЗК у ІЛ-10 КО мишей супроводжувалось збільшенням експресії VEGF білку та мРНК (рис. 3А, Б). Причому у мишей в віці 1S тижнів (коли ознаки хвороби більш виразні) рівень експресія як VEGF білку так і мРНК статистично достовірно перевищував такий у мишей віком 12 тижнів, що підтверджує наше припущення про участь VEGF в патогенезі ЗЗК.
ВИСНОВКИ
1. Встановлено 2 фази збільшення рівня експресії VEGF в патогенезі йодоацетамід-викликаного коліту: I фаза - в перші години розвитку коліту, що відображає його роль в ініціації цього процесу; II - пов‘язана з формуванням грануляційної тканини в місті ураження та утворенням нових кровоносних судин (процес самозагоєння).
2. За умов розвитку йодоацетамід-викликаного коліту рівень експресії VEGFR-2 рецептора зростав, динаміка його змін була аналогічною змінам рівня експресії VEGF.
Розвиток ЗЗК на моделі спонтанно-виникаючого коліту у ІЛ-10 КО мишей супроводжується збільшенням експресії VEGF білку та мРНК.
Література
1. Carmeliet P., Ferreira V., Breier G., Pollefeyt S., Kieckens L., Gertsenstein M., Fahrig M., Vandenhoeck A., Harpal K., Eberhardt C., Declercq C., Pawling J., Moons L., Collen D., Risau W., Nagy A. Abnormal blood vessel development and lethality in embryos lacking a single VEGF allele // Nature. - 1996. - Vol. 380. -Р. 435-439.
2. Chidlow JH. Jr., Langston W., Greer J.J., Ostanin D., Abdelbaqi M., Houghton J., Senthilkumar A., Shukla D., Mazar A.P., Grisham M.B., Kevil C.G. Differential angiogenic regulation of experimental colitis.// Am J Pathol. - 2006.- Vol.169, №6. - Р. 2014-2030.
3. Detmar M., Brown L.F., Schon M.P., Elicker B.M., Velasco P., Richard L., Fukumura D., Monsky W., Claffey K.P., Jain R.K. Increased microvascular density and enhanced leukocyte rolling and adhesion in the skin of VEGF transgenic mice. // Invest Dermatol. - 1998. - Vol. 111, №1. -Р. 1-6.
4. Di Sabatino A., Ciccocioppo R., Benazzato L., Sturniolo G.C., Corazza G.R. Infliximab dowregulates basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor in Crohn’s disease patients // Aliment Pharmacol Ther . -2004. - Vol.19. -Р. 1019-1024.
5. Ferrara N., Gerbere H.P., LeCourter J. The biology of VEGF and its receptors // Nat Med. - 2003. - Vol. 9. -Р.669-676.
6. Kanazawa S., Tsunoda T., Onuma E., Majima T., Kagiyama M., Kikuchi K. VEGF, basic-FGF, and TGF-beta in Crohn's disease and ulcerative colitis: a novel mechanism of chronic intestinal inflammation // Am J Gastroenterol.- 2001. Vol. 96, №3.-P. 822-828.
7. Kuhn R., Lohler J., Rennick D., Rajewsky K., Muller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis // Cell. -1993. - Vol.75. - Р. 263-274.
8. Maconi G., Sampietro G.M., Russo A., Bollani S., Cristaldi M., Parente F., Dottorini F., Bianchi Porro G. The vascularity of internal fistulae in Crohn's disease: an in vivo power Doppler ultrasonography assessment.// Gut. - 2002.-Vol. 50, №4.- Р.496-500.
9. McLaren W.J., Anikijenko P., Thomas S.G., Delaney P.M., King R.G. In vivo detection of morphological and microvascular changes of the colon in association with colitis using fiberoptic confocal imaging (FOCI) // Dig Dis Sci.- 2002. - Vol. 47.- Р. 2424-2433.
10. Mizoguchi A., Mizoguchi E. Inflammatory bowel disease, past, present and future: lessons from animal models.// J Gastroenterol. - 2008. - Vol. 43, №1. - Р.1-17.
11. Reinders M.E.J, Sho M., Izawa A., Wang P., Mukhopadhyay D., Koss K.E., Geehan C.S., Luster A.D., Sayegh M.H., Briscoe D.M. Proinflammatory functions of vascular endothelial growth factor in alloimmunity // J Clin Invest. - 2003. - Vol. 112. -Р. 1655-1665.
Толстанова Г.М., Берегова Т.В., Остапченко Л.І.
12. Satoh H., Sato F., Takami K., Szabo S. New ulcerative colitis model induced by SH blockers in rats and the effects of antiinflammatory drugs on the colitis. // Jpn J Pharmacol.- 1997.- Vol. 73. - P. 299-309.
13. Senger D.R., Perruzzi C.A., Feder J., DvorakH.F. A highly conserved vascular permeability factor secreted by a variety of human and rodent tumor cell lines // Cancer Res.
- 1986. - Vol. 46. -P. 5629-5632.
14. Spalinger J., Patriquin H., Miron M.C., Marx G., Herzog
D., Dubois J., Dubinsky M., Seidman E.G. Doppler US in patients with crohn disease: vessel density in the diseased bowel reflects disease activity// Radiology. -2000.
- Vol. 217, №3. - P. 787-791.
15. Thurston G., Suri C., Smith K., McClain J., Sato T.N., Yancopoulos G.D., McDonald D.M. Leakage-resistant
blood vessels in mice transgenically overexpressing angiopoietin-1 // Science. - 1999. - Vol. 286.
- P.2511-2514.
16. Tol J., Cats A., Mol L., Koopman M., Bos M.M., van der Hoeven J.J., Antonini N.F., van Krieken J.H., Punt C.J. Gastrointestinal ulceration as a possible side effect of bevacizumab which may herald perforation // Invest New Drugs. - 2008. - Vol.26. - P. 393-397.
17. Tsiolakidou G., Koutroubakis I.E., Tzardi M., Kouroumalis
E.A. Increased expression of VEGF and CD146 in patients with inflammatory bowel disease // Dig Liver Dis. - 2008.
- Vol. 40, №8.- P. 673-679.
18. Xavier R.J., Podolsky D.K. Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease. // Nature. -2007. - Vol. 448, №7152. - P. 427-434.
ИЗМЕНЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ ВАСКУЛЯРНОГО ЭНДОТЕЛИАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА ^ЕОР) И VEGFR-2 РЕЦЕПТОРА ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ КИШЕЧНИКА
Толстанова А.Н., Береговая Т.В., Остапченко Л.И.
По данным литературы пациенты с диагнозом воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) имеют повышенный уровень УБвБ в крови и слизистой оболочке кишечника в период обострения. Експериментальнные данные про динамику изменений експрессии УБвБ, УБОРЯ-2 рецептора в процессе развития ВЗК отсутствуют. Целью данной работы было изучить изменения експрессии белка и мРНК УБвБ, УБОРЯ-2 рецептора в динамике развития экспериментального ВЗК. Исследования проведены на моделях химически йодоацетамид-вызванном колите у крыс и спонтанно-возникающем ВЗК у ИЛ-10 нокаутированых (КО) мышей. Экспрессию УБвБ, УБОРЯ-2 рецептора измеряли методами полимеразной цепной реакции в реальном времени, Вестерн блот и иммуноферментным анализом. Установлено 2 фазы увеличения уровня экспрессии УБвБ в патогенезе йодоацетамид-вызванного колита: I фаза - в первые часы развития колита, что отображает его роль в инициации этого процесса; II фаза - обусловлена формированием грануляционной ткани в месте поражения и образованием новых кровеносных сосудов (процесс замозаживления). Уровень экспрессии УБОРЯ-2 рецептора увеличивался в патогенезе йодоацетамид-вызванного колита, динамика этих изменений была аналогичной изменениям уровня экспрессии УБвБ. Развитие ВЗК на модели спонтанно-возникающего ВЗК у ИЛ-10 КО мышей сопровождается повышением экспрессии УБвБ белка и мРНК.
Ключевые слова:. воспалительные заболевания кишечника, экспериментальный колит, васкулярный эндотелиальный фактор роста.
CHANGES IN EXPRESSION OF VASCULAR ENDOTHEIAL GROWTH FACTOR (VEGF) & VEGFR-2 RECEPTOR DURING EXPERIMENTAL INFLAMMATORY BOWEL DISEASE
Tolstanova G.M., Beregova T.V., Ostapchenko L.I.
Recent data showed increased level of VEGF in serum and colonic tissue of patients with acute stage of inflammatory bowel disease (IBD). Experimental data on changes of VEGF and VEGFR-2 receptors protein and mRNA expression during development of experimental IBD are absent. The aim of the present study was to investigate VEGF and VEGFR-2 receptors protein and mRNA expression during development of experimental IBD. Models of chemically iodoacetamide-induced colitis in rats and spontaneously-developed IBD in IL-10 knockout (KO) mice were used. Expression of VEGF, VEGFR-2 receptor were measured by real time PCR, Western blot, immunosorbent analysis. Increased expression of VEGF protein during iodoacetamide-induced colitis has 2 phases: I phase - during first hours of colitis development that represents its role in initiation of this process; II phase - due to formation of granulation tissue in ulcer area and development of new blood vessels (self-healing). Level of VEGFR-2 expression increased during iodoacetamide-induced colitis and was similar to VEGF expression. Development of IBD in IL-10 KO mice was associated with elevation of VEGF protein and mRNA expression.
Key words: inflammatory bowel disease, experimental colitis, vascular endothelial growth factor.
