Закономерности полового созревания, половой цикл и шкала стадий зрелости гонад минтая (Theragra chalcogramma) Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

УДК 597.562:146.512

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПОЛОВОГО СОЗРЕВАНИЯ, ПОЛОВОЙ ЦИКЛ И ШКАЛА СТАДИЙ ЗРЕЛОСТИ ГОНАД МИНТАЯ (ТНЕВЛвЯЛ СНЛЬСОЄКАММЛ)

Н. П. Сергеева, А. И. Варкентин, А. В. Буслов*

Ст. н. с., зав. лаб., Камчатский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии

683000 Петропавловск-Камчатский, Набережная, 18

Тел., факс: (4152) 41-27-01; (4152) 42-19-35; (4152) 41-57-96

E-mail: [email protected], [email protected]

*Директор, Сахалинский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии 693023 Южно-Сахалинск, Комсомольская, 196 Тел., факс: (4242) 45-67-79; (4242) 45-67-50 E-mail: [email protected]

САМКИ, САМЦЫ, ГОНАДЫ, ООЦИТЫ, ПОЛОВОЙ ЦИКЛ, СТАДИИ ЗРЕЛОСТИ

Проанализирована динамика массы гонад, гонадосоматического индекса по мере созревания, уточнена размерная структура ооцитов минтая разных стадий зрелости яичников. Рассмотрены состояние половых клеток самок и самцов в процессе гаметогенеза, некоторые отклонения в нормальном развитии ооцитов. Показан половой цикл минтая. Приводится шкала стадий зрелости гонад минтая.

NATUREL MATURATION, CYCLIC STAGES AND GONAD MATURATION STAGE SCALING FOR WALLEYE POLLOCK (THERAGRA HALCOGRAMMA) N. P. Sergeeva, A. I. Varkentin, A. V. Buslov*

Senior scientist, head of the laboratory, Kamchatka Research Institute of Fisheries and Oceanography

683000 Petropavlovsk-Kamchatsky, Naberejnaya, 18

Tel., fax: (4152) 41-27-01; (4152) 42-19-35; (4152) 41-57-96

E-mail: [email protected], [email protected]

*Director,, Sakhalin Research Institute of Fisheries Oceanography

693023 Yuzhno-Sakhalinsk, Komsomolskaya st., 196

Tel., fax: (4242) 45-67-79; (4242) 45-67-50

E-mail: [email protected]

FEMALES, MALES, GONADS, OOCYTES, CYCLIC STAGES, STAGES OF MATURATION

Gonad weight dynamics and gonad-somatic index in the course of maturation have been analyzed, and oocyte size structure for walleye pollock of different stages of ovary maturation has been clarified. State of male and female gametes in the course of gametogenesis and some of deviations from oocyte normal development were examined. Cycle of walleye pollock maturation has been demonstrated, and scale of gonad maturation stages has provided.

К вопросам изучения гаметогенеза и экологии не- точной части Охотского моря размножение мин-

реста минтая ученые обращались не раз, что и не тая начинается в конце января - начале февра-

удивительно, учитывая чрезвычайную промысло- ля, пика достигает в конце марта - апреле (Фа-

вую значимость этого вида. Особенности оогене- деев, 1981). Икрометание протекает и в течение

за минтая к настоящему времени довольно осно- всех летних месяцев. В любой сезон года в уло-

вательно изучены (Зверькова, 1973, 1977, 1980, 1988, вах, с той или иной частотой, встречаются рыбы

2003; Yoon, 1981; Sakurai, 1983, 1989, 1993; Иванков, почти всех стадий зрелости — от ювенильных

1987; Hinckley, 1987; Воронина, Привалихин, 1988; до нерестующих и посленерестовых. Одной из

Привалихин, 1998; Лисовенко, 2000). Значительно причин этого можно считать разновременность

меньшее внимание уделялось изучению спермато- созревания гонад отдельных особей в ходе го-

генеза (Yoshida, Yoon, 1981). дичного цикла, что, очевидно, связано с индиви-

Для минтая характерен «прерывистый» тип дуальными особенностями организмов. Другой

созревания ооцитов, по классификации Л.С. Овен причиной продолжительного нереста некоторые

(1976). В яичниках самок желтковые ооциты в не- исследователи считают порционность икромета-

рестовый период обособлены по размерам от ре- ния (Tanino et all, 1959; Зверькова, 1971, 1977,

зервных клеток. 1980; Фадеев, 1981; Балыкин, 1988; Воронина,

Одна из особенностей биологии этого вида — Привалихин, 1988; Sakurai, 1993; Лисовенко,

растянутость нерестового периода. Так, в вос- 1997).

Мы поддерживаем точку зрения ряда исследователей, что у этого вида нет настоящей порцион-ности нереста (Горбунова, 1954; Smith, 1979; Voronina et al., 1990; Привалихин, 1998). Вителло-генез у него синхронный, но икра выметывается не одновременно, а микропорциями из-за асинхронно-сти гидратации, предшествующей овуляции ооцитов (Привалихин, 1998). Вымет икры одной самкой продолжается около месяца. Такой тип нереста называется «растянуто-разовым». Количество микропорций, по данным разных исследователей, варьирует от 2 (Сергеева, 1981) до 18-20 (Балыкин, 1988; Sakurai,1993; Лисовенко, 1997).

Достаточно большое количество работ посвящено исследованию особенностей развития ооцитов минтая. Наиболее изученным считается период тро-фоплазматического роста. Строение ооцитов разных фаз этого периода и процесс их нормального развития отражены в отечественной и зарубежной литературе (Tanino et al., 1959; Зверькова, 1977; Yoon, 1981; Иванков, 1987; Привалихин, 1998; Дроздов, Иванков, 2000; Лисовенко, 2000; Привалихин, Полуэктова, 2002; Stahl, Kruse, 2008; и др.). Размерная структура ооцитов периода трофоплазматического роста, а именно заключительной фазы желтконакопления, а также икринок, готовых к вымету в яичниках преднерестовых и нерестовых самок, рассматривалась Л.А. Лисовенко (2000) и Л.М. Зверьковой (2003) в связи с изучением характера икрометания.

В то же время, в литературе отсутствуют данные о размерной структуре вителлогенных клеток начальных фаз развития, вплоть до фазы наполненного желтком ооцита. Также нет данных о размерах клеток протоплазматического роста, их состоянии и соотношении разных размерных групп в яичниках минтая в онтогенезе.

Исследованиями оогенеза минтая обычно занимаются с использованием фиксированного материала, тогда как известно, что по прошествии времени весовые и размерные характеристики фиксированных проб изменяются (Привалихин, 1998). Непрерывные наблюдения за созреванием минтая из вод Юго-Восточной Камчатки, проведенные в 2008-2010 гг., позволили уточнить, а зачастую и пересмотреть сведения о размерной структуре ооцитов, массе гонад, гонадосоматических индексах, проследить динамику этих показателей.

Миграции особей по функционально различным областям ареала связаны с определенным физиологическим состоянием репродуктивной системы рыб — фазами полового цикла, которые определяются на основе регистрации состояния половых желез особей, с использованием специально раз-

работанных шкал стадий зрелости. Правильное их использование требует от наблюдателя четкого понимания основных черт процесса развития половых клеток, функционирования половых желез, хода половых циклов.

По состоянию гонад судят о фазах полового цикла и готовности особей к нересту. Последовательные, качественно различающиеся состояния гонад называются стадиями развития. Стадии развития, которые можно определить по макроскопическим признакам, «визуально», называются стадиями зрелости (Алексеев, Алексеева, 1996).

Шкалы составляют на основе гистологических и цитологических исследований развития гонад в онтогенезе и в ходе половых циклов с использованием значительного по объему материала и достаточно сложных методик. Поэтому для большинства видов нет специальных шкал, но для минтая наличие таковой крайне необходимо, учитывая его большое промысловое значение, а соответственно, и повышенный научный интерес.

Для определения запасов минтая широко используются методы, основанные на оценке численности плавающей икры (Качина, Сергеева, 1978; Фадеев, 1999). Важными входными параметрами при расчетах нерестового запаса являются: соотношение половозрелых и неполовозрелых особей, численность отнерестившихся самок по размерным группам. Таким образом, для минтая точная идентификация биологического состояния рыб имеет принципиальное значение, что невозможно без корректной шкалы стадий зрелости.

Попытки разработать универсальную шкалу стадий зрелости гонад этого вида предпринимались давно, однако до сих пор общепринятой шкалы не существует. Шкалы, разработанные иностранными учеными (Tanino, 1959; Maeda, Hirakawa, 1977; Yoon, 1977, 1981; Yoshida, Yoon, 1981; Sakurai, 1982, 1989, 1993; Hinckley, 1986; Stahl, Kruse, 2008), отличаются от отечественных не только используемой терминологией, но и взглядами специалистов на процессы созревания и нереста этого вида. В нашей стране в разных отраслевых институтах пользуются своей собственной, зачастую не опубликованной шкалой, что делает весьма затруднительным сопоставление данных. Из опубликованных российскими исследователями данных с описанием внешнего вида и некоторыми другими сведениями, характеризующими самок с гонадами разных стадий зрелости минтая, можно назвать лишь работу А.М. Привалихина (1998). Однако она существует в виде диссертации, в силу чего малодоступна.

Цель работы — исследование некоторых вопросов репродуктивной биологии минтая в прикам-чатских водах и составление шкалы стадий зрелости гонад.

Для ее достижения были поставлены конкретные задачи: рассмотреть особенности созревания минтая в онтогенезе; исследовать структуру полового цикла; показать изменения размерной структуры ооцитов в яичниках разных стадий зрелости и разработать шкалы стадий зрелости гонад самцов и самок, пригодные для использования в полевых условиях.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Данные собирали из траловых уловов в северной части Охотского моря в феврале-апреле 2002 г., снюрреводных уловов у юго-восточного побережья п-ва Камчатка в июле 2004 г. и с июня 2008 г. по март 2010 г.

Как правило, один раз в неделю для исследований брали выборку, состоящую из 20-30 разноразмерных особей минтая. В лаборатории рыб подвергали полному биологическому анализу с взвешиванием гонад (с точностью 0,01 г у половозрелых и 0,001 г — у неполовозрелых). Стадии зрелости гонад определяли по 6-бальной шкале, адаптированной П.А. Балыкиным (КамчатНИРО) для полевых исследований с учетом переходных стадий. Для уточнения визуального определения стадий зрелости яичников самок, анализа размерной структуры ооцитов минтая, все гонады рассматривали под бинокуляром. Из средней части гонады брали фрагмент величиной не более 0,5 г и помещали на предметное стекло. Добавляли 12 капли воды и, по возможности, равномерно распределяли ооциты на стекле с помощью скальпеля и препаровальной иглы. Затем просматривали под бинокулярным микроскопом 01ушрш СН-2 (объектив 4х) или бинокуляром 01ушрш 82И10 с регулируемым увеличением от 2х до 3х (объектив GWH10Х-D). Отмечали наличие клеток, характерных для периодов оогенеза: прозрачные с желтоватым оттенком, желтковые, гидратированные, фолликулярные оболочки. С помощью фотокамеры делали фотографии ооцитов под микроскопом (стадии II, 11-111, III, IV, VI, ^1—11) или бинокуляром (^-У, V). Снимки срезов гонад выполняли при увеличении 4х, а отдельные характерные ооциты разных фаз и ступеней развития — 10х и40х.

В яичниках всех самок измеряли наибольший диаметр превителлогенных яйцеклеток (объектив 4х) с помощью цифровой камеры для микроскопа

(DCM35 (350K pixels, USB2.0)). Цену деления шкалы на экране монитора определили с помощью окуляр-микрометра. У части самок с гонадами на стадиях зрелости от II-III до V измеряли диаметры не менее 50 ооцитов периода вителлогенеза, фаз гидратации и овуляции.

Для характеристики особенностей гаметогенеза самок и самцов минтая и изучения строения яйцеклеток в гонадах разных стадий зрелости применяли гистологические методики. Собранные в 2002 г. и фиксированные в жидкости Буэна фрагменты гонад самок и самцов охотоморского минтая подвергали стандартной обработке (Елисеев, 1959). Материал проводили через спирты возрастающей концентрации, хлороформ, смесь парафи-на-хлороформа. Срезы гонад толщиной 5-7 мкм помещали на предметное стекло и окрашивали железным гематоксилином по методике Гейден-гайна (Волкова, Елецкий, 1982).

Следует помнить, что приводимые в различных литературных источниках и рукописных работах сведения о размерах половых клеток касаются диаметра фиксированных ооцитов либо измерений на гистологических срезах. В процессе работы мы измерили диаметры одних и тех же 50 желтковых ооцитов у 7 самок IV стадии зрелости до фиксации в 4% растворе формальдегида и спустя 1 месяц. Оказалось, что средний диаметр у фиксированных ооцитов на 3,8-6,6% (в среднем — 5,0%) меньше, чем до фиксации.

В представленной работе все фотографии и измерения ооцитов выполнены на «свежем» материале, без фиксации, кроме определения диаметра ооцитов разных фаз и состояний на гистологических срезах. Использованы также неопубликованные сведения Е.И. Сыровацкой о вариациях диаметров и средних размерах превителлогенных ооцитов и их ядер у неполовозрелых, половозрелых и отнерестившихся особей охотоморского минтая в зимне-весенний период из отчета, подготовленного в 1984 г.

Всего было исследовано 1033 особи минтая. Измерены диаметры 5525 желтковых и гидратированных ооцитов. Гонадосоматический (ГСИ) индекс рассчитывали как отношение массы гонад к массе рыбы без внутренностей, выраженное в процентах.

Авторы благодарны всем сотрудникам КамчатНИРО, проявившим интерес к исследуемому вопросу и оказавшим посильную помощь в сборе первичных материалов. Особую благодарность выражаем научному сотруднику лаборатории морских исследований лососей С.Б. Городовской за

помощь в изготовлении препаратов гистологических срезов, полезные советы и консультации по тематике исследований.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

СОЗРЕВАНИЕ В ОНТОГЕНЕЗЕ И ПОЛОВОЙ ЦИКЛ МИНТАЯ Общие представления о строении яйцеклеток, особенностях оогенеза и развития ооцитов минтая

В России в настоящее время наиболее распространенной принято считать схему, разработанную В.А. Мейеном (1939) и позднее усовершенствованную Б.Н. Казанским (1949) и В.Н. Иванковым (1987). Общепризнано, что разделение процесса развития яйцеклетки на отдельные этапы, ступени, фазы условно и отражает глубину наших представлений о происходящих в клетке процессах.

Здесь мы приводим классификацию на периоды (этапы) и фазы, которой придерживается большинство исследователей, изучавших развитие яйцеклетки тресковых рыб (Широкова, 1971, 1977; Yoon, 1981; Лисовенко, 2000; Привалихин, Полуэк-това, 2000). Она и была принята в качестве основной в нашем исследовании. Мы также употребляем характерные названия периодов, фаз, которые используются в этих работах.

Весь процесс развития ооцита делится на

4 периода:

I. Период синаптенного пути (период ядерных превращений).

II. Период протоплазматического роста (период малого роста, превителлогенез).

III. Период трофоплазматического роста (период большого роста, вителлогенез).

IV. Созревание (период гомогенизации и завершения созревания, овуляция).

Согласно современным представлениям, изложенным в работе А.Л. Дроздова и В.Н. Иванкова (2000), у костистых рыб на ранних этапах эмбрионального развития появляются первичные половые клетки. Они обосабливаются от соматических клеток и мигрируют к месту будущей закладки гонады. К моменту вылупления личинок первичные половые клетки завершают миграцию в область предпочечных протоков. Например, у 8-суточных личинок баренцевоморской трески они располагаются в виде цепочки под перитонеальным эпителием, число их от 5 до 8. У 13-суточных личинок их количество увеличивается до 10-12. По мере роста они окружаются эпителиальными клет-

ками, образующими зачаток стромы гонад. Размеры первичных половых клеток трески достигают 20 мкм, они имеют округлое ядро диаметром 10 мкм. В условиях повышенных температур у 46-дневной молоди трески отмечено начало гонадогенеза (Матишов и др., 2010).

Клетки начинают усиленно размножаться, образуя гонии первого и последующих порядков. В этот период в яйцеклетках происходят качественные изменения: ядерные превращения, образование хромосом. Гонии, после ряда делений, приступают к синтезу ДНК, превращаясь в ооциты. Гонии пополняют фонд половых клеток в течение всего репродуктивного периода, и их число возрастает по мере роста рыбы. Так, у неполовозрелой самки балтийской трески длиной 6 см фонд гоний разных состояний составляет 3 тыс. шт., а у особи длиной 30 см — около 25 млн шт. (Широкова, 1977).

Яйцеклетки периода протоплазматического роста обнаруживаются уже на первом году жизни. Например, у самки балтийской трески длиной 5 см были выявлены половые клетки начальной фазы периода протоплазматического роста (Широкова, 1971).

В период превителлогенеза происходит существенное увеличение объема цитоплазмы, размера ядра, числа клеточных органелл и ядрышек. Этот период принято делить на две фазы: ювенильную (фазу молодого ооцита) и фазу однослойного фолликула.

Ход морфологических изменений ооцитов периода протоплазматического роста — за время перехода от раннего к более позднему состоянию — наиболее детально изучен для молоди дальневосточных лососевых рыб (Персов, 1966). В основу его деления на ступени положены изменения в цитоплазме ооцитов, которые связаны с появлением и видимыми преобразованиями клеточных включений. Такой классификации в своих работах придерживалась М.Я. Широкова (1971, 1977), она делила ювенильную фазу развития ооцитов балтийской трески на три ступени (1, 2 и 3), в зависимости от появления ядрышек, зон локализации рибонуклеиновой кислоты и интенсивности окрашивания протоплазмы, а в фазе однослойного фолликула различала три ступени (состояния — 4а, 4б, и 4в). Л.А. Лисовенко (2000) описывал более обобщенную схему периода превителлогенеза ооцитов минтая без разделения на ступени: фаза молодого ооцита (МО) и фаза однослойного фолликула (ОФ). В своей работе мы использовали эту упрощенную схему.

Фаза молодого ооцита (МО). Ооциты имеют овальную форму. Их границы хорошо различимы. Ядро расположено асимметрично. В кариоплазме появляются ядрышки, затем зоны локализации рибонуклеиновой кислоты, которые заметны по интенсивности окрашивания протоплазмы и ее включений (рис. 1А). Размеры ооцитов в период прохождения этой фазы увеличиваются в 3-4 раза. Средние размеры ооцитов у особей варьируют от 17 до 59 мкм, а наиболее крупные могут достигать 82 мкм. Отношение диаметра ядра к размеру ооцита составляет 67-72%.

Фаза однослойного фолликула (ОФ). Характерный признак перехода ооцита в эту фазу развития — образование «периферического (циркум-нуклеарного) кольца». Диаметр ооцитов минтая, находящихся в начале этой фазы, изменяется от 87 до 100 мкм. Периферическое кольцо занимает значительную часть цитоплазмы. Структура его может быть фрагментарной или в виде двойного кольца (рис. 1Б). К концу фазы наблюдается исчезновение четко выраженного кольца: оно располагается ближе к оболочке ооцита и приобретает сетчатую структуру. Размеры клеток при этом могут достигать 240 мкм. Половые клетки при прохождении фазы однослойного фолликула — от ее началь-

ных до конечных ступеней — увеличиваются в диаметре в 2 раза. Отношение размера ядра к диаметру ооцита составляет 50-65%, а средний размер ооцитов у отдельных особей к концу фазы достигает 146-196 мкм, при максимальном — 240 мкм. В наших пробах у минтая длиной 31,5-39,1 см размеры самых крупных ооцитов этой фазы развития изменялись от 96 до 219 мкм. Ооциты фазы однослойного фолликула приобретают правильную округлую форму. Процессы, происходящие в ооцитах в период превителлогенеза, не требуют значительных энергетических затрат и не оказывают существенного влияния на обменные процессы, которые направлены на обеспечение оптимальных условий линейного и весового роста рыб (Шатуновский, 1980). После прохождения этой фазы наступает период трофоплазматического роста ооцитов.

В это время развивается иная форма обмена — генеративная, при которой, в первую очередь, обеспечиваются оптимальные метаболические условия для созревания гамет и процесса нереста (Шатуновский, 1980).

Период вителлогенеза принято делить на 4 фазы: вакуолизации цитоплазмы, первичного накопления желтка, интенсивного трофоплазматического роста и наполненного желтком ооцита.

А Б В

Рис. 1. Ооциты минтая разных фаз развития. А — молодой ооцит; Б — ооцит фазы однослойного фолликула; В — ооцит фазы вакуолизации цитоплазмы; Г — ооцит фазы первичного накопления желтка; Д — ооцит фазы интенсивного накопления желтка; Е — ооцит фазы наполненного желтком ооцита

Фаза вакуолизации цитоплазмы. В периферической зоне цитоплазмы ооцитов минтая появляется редкая цепочка вакуолей. Они мелкие, диаметром не более 9,0 мкм. Количество их на срезе до 34 шт. (Иванков, 1987). Размеры ооцитов минтая этой фазы могут изменяться от 150 мкм (Привалихин, Полу-эктова, 2000) до 233-350 мкм (рис. 1В).

Как показали исследования В.Н. Иванкова (1987), в процессе развития вителлогенных клеток у тресковых, и минтая в частности, фаза вакуолизации цитоплазмы характеризуется формированием так называемой «краевой зоны» вакуолей. Вслед за этим отмечается образование «глыбок» желтка, которые впоследствии постепенно заполняют весь ооцит. В отличие от других видов рыб, например, камбал, сельди, терпуговых, у которых вакуоли в процессе развития заполняют всю цитоплазму, и фаза вакуолизации переходит в фазу интенсивной вакуолизации, у тресковых рыб подобного явления не отмечается. Эти особенности присущи не только минтаю, тихоокеанской треске и наваге, они характерны и для атлантической трески, южной путассу, мерланга и пикши (Сорокин, 1957; Иванков, 1987).

Фаза первичного накопления желтка. По мере роста ооцитов минтая, между вакуолями, ближе к периферии яйцеклетки, начинают образовываться мелкие гранулы желтка, диаметр которых составляет около 1,5 мкм (рис. 1Г). Размеры таких яйцеклеток составляют 225-240 мкм (Иванков, 2000). К концу этой фазы ооциты становятся крупнее, диаметр их может достигать 290-350 мкм.

Фаза интенсивного трофоплазматического роста. Ооцит наполовину заполнен гранулами желтка. У минтая вакуоли оттесняются гранулами желтка к центру цитоплазмы (рис. 1Д). Диаметр вакуолей и их количество на срезе остаются прежними. Размеры желточных гранул достигают 3,5 мкм (Иванков, 2000; Дроздов, Иванков, 2000).

Фаза наполненного желтком ооцита. В ооци-тах исчезают вакуоли (Дроздов, Иванков, 2000). Гранулы желтка заполняют практически всю цитоплазму (рис. 1Е). По литературным данным, размеры ооцитов минтая этой фазы развития могут меняться от 360 (Лисовенко, 2000) до 1150 мкм (Привалихин, Полуэктова, 2002). Наполненные желтком ооциты характерны для особей

IV стадии зрелости.

После прохождения фаз трофоплазматического роста в ооцитах тресковых рыб наступает период созревания, который подразделяется на фазы: гомогенизации, гидратации и овуляции.

Фаза гомогенизации. В ооцитах происходит миграция ядра к анимальному полюсу и слияние гранул желтка сначала в глобулы, а в конце процесса формируется одна большая глобула. В этот период оболочка ооцита сильно утончается (Лисовен-ко, 2000).

Фаза гидратации. Наблюдается оводнение ооцита за счет внутриполостной жидкости. Он становится прозрачным, размеры его увеличиваются, оболочка ооцита и фолликулярная оболочка еще более утончаются.

Фаза овуляции. Наступает момент, когда фолликулярная оболочка ооцита разрывается. Овули-ровавшие яйцеклетки вместе с овариальной жидкостью концентрируются в овариальной полости вдоль каждой доли яичника. В этот момент самка минтая готова к вымету икры.

Стадии сперматогенеза

Процесс развития мужских половых клеток костистых рыб распадается на ряд стадий (Сакун, Буцкая, 1963):

1. Стадия размножения сперматогоний. Спер-матогония делится несколько раз, образуя группу более мелких сперматогоний, окруженных оболочкой. Образуется циста.

2. Стадия роста. Сперматогонии становятся сперматоцитами I порядка, которые увеличиваются в размерах, а в ядрах клеток происходят сложные преобразования.

3. Стадия созревания. Сперматоциты I порядка дважды делятся и превращаются в спермати-ды.

4. Стадия формирования спермиев. Спермати-ды постепенно становятся зрелыми сперматозоидами.

Закономерности созревания минтая в онтогенезе

Особенности созревания минтая описывали для 4 групп рыб: неполовозрелых, созревающих, нерестовых и отнерестившихся.

Н е п о л о в о з р е л ы е р ы б ы. Минтай этой группы включает самых мелких особей, пол которых невозможно либо трудно определить (ювенильные рыбы), и молодь первых лет жизни до начала появления признаков полового созревания.

Как справедливо отмечал Г.М. Персов (1975), «дифференцировка пола может быть установлена лишь с того момента, когда появляются какие-либо показатели развития гонад в женском направлении. О развитии в сторону семенников приходится судить по методу исключения: раз нет признаков

развития в женском, значит, оно идет в мужском направлении». Именно так обычно поступают исследователи при выполнении биологического анализа молоди минтая, когда часто возникает ситуация, что у самок гонады можно увидеть, а у самцов железы настолько тонкие и незаметные, и наблюдатель в таком случае считает, что анализируется самец.

Ювенильную стадию минтай проходит в течение первого года жизни. В разных популяциях этого вида длина, при которой можно идентифицировать пол рыбы, отличается. По имеющимся у нас данным, у сеголетков визуальная оценка анатомической дифференцировки гонад достаточно проблематична. Тем не менее, у 95% проанализированных рыб длиной 4,6—9,0 см, пойманных кошельковым неводом в августе-сентябре 1984 г. у берегов Юго-Западной Камчатки, пол был определен в лаборатории. В то же время, длина сеголетков охотоморского минтая, у которых определение пола крайне затруднено, может достигать 9-10 см.

По среднемноголетним данным, в морских экспедициях в северной части Охотского моря наблюдатели различали пол у отдельных экземпляров молоди размерных групп 7,0-14,0 см (вероятность определения — 1,1-40,9%) (рис. 2). При длине 14,4 см равновероятно определить либо не определить пол рыбы. У минтая длиной 18,0 см пол можно определить с вероятностью 99%. В то же время, некоторые наблюдатели не могли идентифицировать пол у рыб длиной до 31 см.

У сеголетков восточнокамчатского минтая длиной 7,6-11,8 см, пойманных в ноябре 2009 г., не смогли определить пол даже в лабораторных условиях и при хорошем освещении, в то время как у молоди длиной 11,1-15,0 см были видны маленькие яичники либо ниточки желез самцов.

У годовиков и двухлеток яичники очень маленькие, мягкие, имеют вид продолговатых водянистых пузырьков (капелек) белесого оттенка, без присутствия розового цвета. У двухлеток масса

Длина, см

°/

/о

Длина, см

Рис. 2. Среднемноголетний размерный состав ювенильных и неполовозрелых особей (А) минтая в северной части Охотского моря в 1996-2009 гг., вероятность определения пола рыб по размерным группам (Б)

гонад самок изменялась от 4-7 мг в марте до 2890 мг — в октябре, при средних показателях — 6 и 51 мг, соответственно. Гонады самцов выглядят как ниточки, и масса их настолько мала, что взвешивание не выполняли.

В качестве практической рекомендации при работе с сеголетками и молодью минтая в лабораторных условиях при хорошем освещении, наличии достаточного опыта или при помощи оптики: пол следует пытаться определить у рыб длиной более 7 см. В полевых условиях идентифицировать пол можно у рыб длиной более 14 см, а у особей длиной более 18 см пол должен быть определен в обязательном порядке.

Стадия II. В период наших наблюдений за созреванием рыб длина неполовозрелых самок восточнокамчатского минтая варьировала от 9,0 до 42,5 см. Масса гонад не превышала 3,3 г, при среднем значении, равном 0,9 г (рис. 3А). ГСИ варьировал в пределах 0,1-0,7% и, в среднем, равнялся 0,4% (рис. 3Б).

Длина неполовозрелых самцов, у которых можно было взвесить гонады, изменялась от 27,3 до

45,1 см. Масса семенников варьировала от 0,05 до 1,0 г и, в среднем, составляла 0,3 г (рис. 3А). Значения ГСИ колебались в пределах 0,03-0,30%, при среднем значении — 0,1% (рис. 3Б).

Микроскопическая картина. Просмотр яичников 2 сеголетков восточнокамчатского минтая

А

50

Длина, см

Рис. 3. Зависимость массы гонад (А) и ГСИ (Б) от длины неполовозрелых самок и самцов минтая

длиной 9,0 и 12,2 см под микроскопом показал, что в гонадах можно было увидеть лишь отдельные ооциты, в которых хорошо различимо ядро. Основная масса яичников состояла из очень мелких половых клеток более раннего периода развития, вид которых даже не удалось рассмотреть при достаточном увеличении. Размеры видимых ооцитов не превышали 42,5-45,0 мкм.

Микроскопическая картина гонад годовиков и двухлеток составлена по анализу ооцитов 7 самок минтая длиной самок 12,5-21,0 см. Время поимки — июль 2004 г. и ноябрь-январь 2008-2009 гг. Все ооциты в гонадах оптически прозрачны. В яйценосных пластинах яйцеклетки плотно прилегают друг к другу, поэтому «свежий» материал трудно рассредоточить на стекле. Размеры наиболее крупных ооцитов в железах самок охотоморского минтая длиной 12,5-15,0 см не превышали 41-68 мкм. В ноябре-январе у особей длиной 17,5-21,0 см диаметр самых крупных яйцеклеток достигал 82 мкм.

У неполовозрелых самок длиной 29,8-38,8 см, пойманных в июле-ноябре 2008-2009 гг., половые клетки оптически прозрачны (рис. 4А). Ядро хорошо заметно и четко выражено. Максимальный диаметр ооцитов у рыб варьировал в диапазоне 168,2-228,0 мкм. Наибольшее количество клеток (около 76%) представляют мелкую фракцию ооцитов размерами до 100 мкм.

Размерная структура клеток и диаметры лидирующих в развитии превителлогенных ооцитов меняются с ростом неполовозрелых рыб. С увеличением длины самок уменьшается доля самых мелких ооцитов размерами менее 50 мкм. Соответственно, возрастает относительное количество более крупных клеток. В железах самок большей длины имеются более крупные и, значит, более развитые ооциты (рис. 5).

Состояние половых клеток. Ооциты неполовозрелых рыб находятся в состоянии различных ступеней периода превителлогенеза. Вероятно, у сеголетков минтая ооциты размерами до 45 мкм могут достигать 2 ступени периода превителлогенеза, как это наблюдала М.Я. Широкова (1971) у молоди балтийской трески, диаметр ооцитов которых не превышал 58 мкм.

В яичнике самки длиной 17,5 см фонд ооцитов представляют молодые клетки 1-3 ступеней ювенильной фазы периода малого роста. Наиболее развитые ооциты 3 ступени достигают диаметра

67,3 мкм (рис. 4Б). Ооциты с однослойным фолликулом отсутствуют. Средний размер ооцитов 1 ступени у охотоморского минтая равняется 17,4 мкм,

Рис. 4. Ооциты (А) и гистологические срезы гонад неполовозрелых самок (Б, В) и самца (Г) минтая. А — длина рыбы 30,4 см (115,8 мкм*); Б — 17,5 см (67,3 мкм); В — 37,0 см (169,2 мкм) (ув. 10х); Г — 32,0 см (ув. 40х); * — здесь и далее в скобках указан диаметр наиболее крупных ооцитов

25 75 125 175 225 10 20 30 40

Диаметр, мкм Длина, см

Рис. 5. Размерная структура (А) и максимальный диаметр (Б) превителлогенных ооцитов неполовозрелых самок разной длины

2-35,4 мкм, 3-58,8 мкм, причем величина отношения диаметров ядра и ооцита уменьшается по мере развития от 72 до 67%. Цитоплазма ооцитов интенсивно окрашивается гематоксилином, и яркость окраски тем выше, чем более развит молодой ооцит (Широкова, 1971).

Комплекс половых клеток у самок длиной 29,838,8 см состоит из молодых ооцитов и ооцитов с однослойным фолликулом (рис. 4В). Последние могут находиться в разных состояниях, характерных для 4 ступени превителлогенеза (фазы однослойного фолликула). У неполовозрелых самок ли-

дирующие в развитии ооциты достигают состояния 4А, 4Б или 4В при наличии всех предшествующих данному состоянию клеток. Присутствие лидирующих клеток того или иного состояния зависит от длины самки и, очевидно, сказывается на скорости ее созревания. Во всяком случае, анализ срезов неполовозрелых рыб показал, что чем крупнее рыба, тем более развиты половые клетки. В ооцитах 4А ступени (ранняя перинуклеарная стадия) периферическое кольцо нечеткое, участки РНК располагаются рассеянно во всей цитоплазме в виде отдельных штрихов, которые затем «сгруппировываются» в

более четко выраженные фрагменты. Диаметр ооцитов у охотоморского минтая варьировал в диапазоне 87-100 мкм, а в среднем был равен 95,0 мкм. Ооциты 4Б ступени имеют хорошо выраженное пе-ринуклеарное (циркумнуклеарное) кольцо, занимающее значительную часть цитоплазмы. Структура его может быть фрагментарной или в виде двойного кольца (рис. 1Б). Размеры клеток 4Б ступени изменялись от 90 до 200 мкм, при среднем значении — 140,0 мкм. Размеры ооцитов 4В ступени — заключительной ступени периода превителло-генеза — варьировали от 130 до 240 мкм, при средней величине, равной 172,4 мкм.

У неполовозрелых самцов половые клетки представлены крупными сперматогониями, а у относительно крупных особей — и сперматоцита-ми начального этапа размножения, образующими многочисленные цисты, примыкающие к соединительной оболочке ампул (рис. 4Г). Размеры цист со сперматоцитами могут достигать 51 мкм.

С о з р е в а ю щ и е. В эту группу рыб включили особей, стадия зрелости гонад которых визуально определена как 11-111, III, Ш-1У и IV.

Стадия П-Ш. Размеры самок с гонадами на П-Ш стадии зрелости изменялись от 31,8 до 62,0 см. Масса яичников зависит от длины рыб и в наших пробах колебалась в пределах 2,1-22,0 г, при средней величине — 8,9 г (рис. 6А). ГСИ варьировал в диапазоне 0,7-3,5% и составлял, в среднем, 1,4% (рис. 6Б).

Длина,

Рис. 6. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая П-Ш стадии зрелости

Длина самцов с железами П-Ш стадии зрелости изменялась от 40,4 до 65,0 см. Масса семенников варьировала между 1,6 и 33,4 г, при среднем значении — 10,1 г (рис. 6А). ГСИ имел несколько меньшие значения, чем у самок, и колебался в пределах 0,3-3,4%, при среднем значении — 1,2% (рис. 6Б).

Микроскопическая картина составлена по анализу внешнего вида и размеров клеток 17 самок длиной 31,8-53,4 см, пойманных в июле-декабре 2008-2009 гг.

При просмотре под бинокуляром в яичниках П-Ш стадии зрелости основную массу половых клеток представляли мелкие прозрачные ооциты разных размеров. Хорошо заметны мутноватые и непрозрачные клетки, что свидетельствует о начале полового созревания (рис. 7А). Эти клетки были равномерно распределены среди прозрачных ооцитов. На этой стадии невозможно разделить по размерам ооциты текущей и резервной генераций, и зачастую при просмотре отмечали, что диаметр некоторых мутноватых ооцитов меньше, чем крупных, но прозрачных. Так, в железах самки длиной 38,9 см отмечены прозрачные клетки диаметром до 280,3 мкм и мутные, размером 222,3 мкм и более. При таком составе половых клеток диаметр самых мелких мутноватых ооцитов у разных самок изменялся от 192,7 до

266,0 мкм (в среднем — 244,6 мкм), а наиболее крупные и непрозрачные достигали 501,1-648,6 мкм (560,2 мкм). У относительно крупных особей, имеющих большие значения ГСИ, отмечаются и более крупные лидирующие ооциты (рис. 8).

Состояние половых клеток. На срезах, где отмечались клетки периода раннего вителлоге-неза, наблюдали, кроме молодых ооцитов, яйцеклетки с однослойным фолликулом 4А и 4В ступеней, а образование вакуолей просматривалось в некоторых более крупных ооцитах. Вакуоли располагались цепочкой в периферической зоне цитоплазмы. По мере развития и увеличения размеров ооцитов над слоем вакуолей и между ними начинают образовываться мелкие гранулы желтка. На этом этапе формируется второй слой желточной оболочки (рис. 7Б). На одном препарате могут быть отмечены ооциты фаз образования вакуолей и начального накопления желтка. На срезах гонад, где имеются клетки начала периода желткообразования, уже нет превителлоген-ных ооцитов состояния 4В. Самую старшую генерацию ооцитов периода малого роста представляют клетки с однослойным фолликулом и хорошо выраженным циркумнуклеарным кольцом состояния 4Б.

А Б В

Рис. 7. Ооциты (А) и гистологические срезы гонад самки (Б) и самца (В) минтая II—III стадии зрелости. А — длина рыбы 38,8 см; Б — 38,8 см (283,2 мкм); В — 39,2 см

Рис. 8. Изменение ГСИ самок минтая П-Ш стадии зрелости в зависимости от размеров лидирующих ооцитов

В семенниках П-Ш стадии зрелости происходит дальнейшее размножение сперматоцитов, продолжается их созревание, а в некоторых цистах формируются сперматиды. Цисты становятся заметно крупнее, ампулы тоже увеличивают свои размеры (рис. 7В). Развитие половых клеток одной цисты во все периоды сперматогенеза происходит синхронно.

Стадия III. Длина самок III стадии зрелости изменялась от 40,8 до 59,5 см. Масса яичников варьировала в диапазоне 6,7-43,2 г, при средней массе — 25,1 г (рис. 9А). ГСИ, как и масса гонад, увеличились более чем в 2 раза по сравнению с предыдущей стадией зрелости. Значение этого показателя колебалось между 1,4 и 5,4% и, в среднем, составляло 3,3% (рис. 9Б). Масса половых желез самцов длиной от 36,5 до 56,1 см варьировала между 1,4 и 84,5 г, при среднем значении — 23,2 г (рис. 9А). Средняя величина ГСИ равнялась 3,1%, при колебаниях от 0,4 до 10,5% (рис. 9Б).

Микроскопическая картина составлена по результатам анализа 17 самок длиной 40,8-59,5 см, пойманных с сентября 2008 г. по январь 2009 г. Фонд ооцитов представляли численно доминирующие мелкие прозрачные клетки резервной гене-

45 50

Длина, см

Рис. 9. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая III стадии зрелости

рации и мутные или темные непрозрачные ооциты текущей генерации (рис. 10А). Хорошо заметно, что резервный и текущий фонды половых клеток по размерам визуально четко различаются. Однако в яичниках некоторых самок можно было обнаружить относительно крупные клетки, в которых просматривалось ядро. Мы полагаем, что железы таких рыб находились в начале III стадии развития.

Размеры самых мелких желтковых ооцитов изменялись от 231,3 до 453,9, а самых крупных — от

493,6 до 709,5 мкм, а в целом в выборке средний диаметр был равен 452,6 мкм. Основной фонд резервных клеток представлен мелкими ооцитами диаметром менее 100 мкм. Наиболее крупные про-

Рис. 10. Ооциты (А) и гистологические срезы гонад самки (Б) и самца (В) минтая III стадии зрелости. А — длина рыбы 40,8 см; Б — 38,8 см (358,1 мкм); В — 35,0 см

зрачные ооциты у разных самок достигали диаметра 204,0-281,2 (среднее — 240,8) мкм.

Состояние половых клеток. Состав половых клеток в яичниках этой стадии зрелости включает ооциты текущего фонда в фазе начала или интенсивного накопления желтка и ооциты периода пре-вителлогенеза (МО, ОФ состояний 4А и 4Б). Ооциты в фазе вакуолизации цитоплазмы отсутствуют. На одном препарате отмечаются желтковые ооциты разного наполнения желтком. В одних ооцитах цитоплазма более чем наполовину заполнена желточными гранулами, в других процесс желткона-копления только начался (рис. 10Б).

В семенниках III стадии зрелости присутствуют половые клетки всех стадий сперматогенеза: от сперматогониев, которые всегда имеются в железах («резерв»), до сперматид и сперматозоидов. В начальной стадии происходит созревание сперматоцитов, но старшая генерация половых клеток представлена сперматидами. В процессе развития в наиболее крупных цистах сперматиды вступают в период формирования и превращаются в сперматозоиды (рис. 10В). Из одной сперматиды развивается один сперматозоид. Цисты со спермиями находятся в центре ампул, а цисты со сперматидами — ближе к оболочке.

Стадия III-IV. Стадию III-IV представляли 29 самок длиной 41,3-67,4 см. Масса яичников варьировала от 12,2 до 122,1 г, в среднем составив 53,0 г (рис. 11А). ГСИ колебался в диапазоне 1,8-16,1%, при среднем показателе — 6,6% (рис. 11Б).

Размеры самцов (63 экз.) изменялись от 40,6 до 60,4 см. Масса семенников варьировала в широком диапазоне: от 8,0 до 165,4 г, составив, в среднем, 67,4 г (рис. 11А). ГСИ, по сравнению с III стадией зрелости, заметно увеличился и колебался между значениями 1,7 и 19,9%, при средней величине — 8,7% (рис. 11Б).

Микроскопическая картина составлена по анализу ооцитов 18 самок длиной 47,9-60,2 см,

200,0 -і

150.0 -

100.0 -

50,0 -

0,0 -

30 35 40 45 50 55 60 65 70

Длина, см

20,0

15,0

О 10,0 и

♦♦

V » „

♦ ♦ Д ♦ ЦА

о ♦ ♦ -♦ ~ .

о ♦

«О

П°Р ♦

♦ о в

♦*°

5,0 0,0

30 35 40 45 50 55 60 65 70

Длина, см

Рис. 11. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая III—IV стадии зрелости

собранных в сентябре 2008 - январе 2009 гг. В половых железах самок, визуально оцененных стадией Ш-ТУ, размеры более мелких желтковых ооцитов изменялись от 370,0 до 618,9 мкм, а диаметр самых крупных — от 496,0 до

952,3 мкм. Средний диаметр желтковых ооцитов равнялся 622,0 мкм при колебаниях у разных особей от 489,4 до 782,6 мкм. На этой стадии развития яичников отмечается дальнейшее накопление желтка. Все яйцеклетки текущего фонда становятся непрозрачными. Размеры лидирующих ооцитов резервного фонда у разных самок достигали 211,0-297,0 мкм, при средней величине — 247,4 мкм.

Состояние половых клеток. Комплекс ооцитов такой же, как на III стадии. Размеры ооцитов

текущего фонда увеличиваются по сравнению с ТУТ стадией, в них проходят процессы интенсивного отложения желтка. На этой стадии также полностью отсутствуют ооциты фазы вакуолизации.

Стадия ТУ. Особи с гонадами на IV стадии зрелости были представлены 106 самками длиной 39,9-75,1 см. Яичники на этой стадии достаточно крупные: масса их варьировала от 34,5 до 334,4 г, а в среднем составляла 128,6 г (рис. 12А). ГСИ достигал значительных величин и колебался от 4,7 до 30,6%, и в среднем равнялся 17,8% (рис. 12Б).

Длина самцов (108 экз.) изменялась в диапазоне 38,3-62,0 см. Масса гонад варьировала от 10,7 до 140,7 г и в среднем равнялась 60,7 г (рис. 12А). ГСИ по сравнению со стадией ТТТ-ТУ увеличился

Рис. 12. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая на ТУ стадии зрелости

незначительно, средний показатель составил 9,3% при колебаниях от 2,5 до 19,1% (рис. 12Б).

Микроскопическая картина составлена по анализу 44 самок длиной 46,3-62,7 см, выловленных в ноябре 2008 - апреле 2009 гг. Под бинокуля-ром состав половых клеток такой же, как на III-

IV стадии, но заметно увеличились размеры желтковых яйцеклеток (рис. 13А). Их диаметры варьировали от 452,1 до 1254,9 мкм. Средний диаметр ооцитов у разных самок изменялся от 633,0 до

1138,1 мкм. Такая большая вариабельность средних размеров клеток объясняется тем, что этой стадией зрелости визуально оцениваются яичники самок с ооцитами, достигшими дефинитивного (конечного) размера, и клетками, в которых накопление желтка еще не закончено. Предельные размеры ооцитов резервной генерации у исследованных самок изменялись от 177,8 до 327,3 мкм, и в среднем составили 261,6 мкм.

Состояние половых клеток. В яичниках на этой стадии присутствуют ооциты фаз накопления желтком (рис. 13Б). Согласно имеющимся данным, приведенным в работе T. Yoon (1981), в разных яичниках одновременно могут находиться ооциты различных фаз наполнения желточными гранулами: начального, активного и наполненного желтком, которые соответствуют принятым у нас 3 фазам желтконакопления: начала отложения желтка, интенсивного и заполненного желтком ооцита. У отдельных самок состав ооцитов текущей генерации может состоять из клеток наполненного желтком ооцита и на стадии миграции ядра к анимальному полюсу.

Сведений о состоянии резервных ооцитов нам найти не удалось, кроме упоминания, что размеры ооцитов резервного фонда на срезах не превышали 50-75 мкм (Лисовенко, 2000). Проведенные ранее исследования показали, что старшая генерация ооцитов резервного фонда у самок охото-

Рис. 13. Ооциты (А) и гистологические срезы гонад самки (Б) и самца (В) минтая ТУ стадии зрелости. А — длина рыбы 40,8 см; Б — 61,0 см (615,3 мкм); В — 33,4 см

морского минтая ТУ стадии зрелости находится в состоянии 4Б, и средний их диаметр равен 140142 мкм.

На срезах гонад самцов видно, что в отдельных ампулах сперматозоиды вышли из цист в просветы семенных канальцев. Ампулы становятся еще более крупными за счет образования семенной жидкости (рис. 13В). По их периферии остаются цисты со сперматидами и крупные спермато-гонии.

Н е р е с т о в ы е. К нерестовым особям относили рыб с гонадами ТУ-У, V, УТ-ТУ стадий зрелости, т. е. частично отнерестившихся и текучих особей.

Стадии ТУ-У, У Анализу подвергнуто 45 самок длиной 39,0-67,2 см, стадия зрелости гонад которых определена как ТУ-У. Масса половых желез изменялась от 34,3 до 740,0 г (рис. 14А), ГСИ варьировал в диапазоне 10,0-74,0%, при среднем — 27,7% (рис. 14Б).

Длина самок У стадии зрелости изменялась от 42,1 до 66,7 см. Масса гонад варьировала в диапазоне 74,1-482,0 г (рис. 15А). Гонадосоматический индекс колебался от 15,2 до 55,6% (рис. 15Б). Среди проанализированных самок лишь у двух в яичниках присутствовали ооциты последней порции (яйцеклетки свободны от фолликулярных оболочек, желтковые ооциты отсутствовали), остальные выглядели как ТУ-У, но при надавливании вытекала икра.

В период исследования стадия УІ-ІУ встречена лишь у 6 самок длиной 50,5-66,5 см. Особи такой стадии достаточно редко встречаются в уловах. Масса гонад изменялась от 79,1 до 210,0 г, а ГСП — от 6,6 до 25,1%. Средний показатель гонадосоматического индекса равен 16,7%, что ниже, чем у самок ІУ-У и V стадий.

Длина исследованных самцов с текучими половыми продуктами изменялась от 38,0 до 58,8 см. При выделении стадий у них наблюдатель, очевидно, ориентируется на величину семенника. Однако следует подчеркнуть, что невозможно установить, — вытекает сперма по естественным причинам или в результате сдавливания в орудии лова. Также невозможно утверждать, принимала ли особь участие в нересте или еще нет. Кроме того, как и у самок, масса гонад и ГСП рыб ІУ-У и V стадий соответствующей длины имеют достаточно близкие значения (рис. 14-15). Масса семенников у нерестовых самцов ІУ-У стадии варьировала от 14,5 до 84,2 г, при среднем ГСП, равном 8,1% (рис. 14). Масса гонад У стадии изменялась от 17,3 до 129,6 г, а средняя величина ГСП была равна 8,8% (рис. 15).

Микроскопическая картина составлена по анализу ооцитов 21 самки. В гонадах ІУ-У и У стадий присутствуют овулированные, гидратированные и желтковые ооциты, соотношение которых может значительно различаться (рис. 16А, Б). В наших пробах доля гидратированной и овулирован-

800,0

700,0

30 35 40 45 50 55 60 65

Длина, см

К

О

І-Ч

80,0

70.0

60.0

50.0

40.0

30.0

20.0 10,0

0,0

70

30 35 40 45 50 55 60 65 70

Длина, см

Рис. 14. Пзменение массы гонад (А) и ГСП (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая ІУ-У стадии зрелости

Рис. 15. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая У стадии зрелости

Рис. 16. Ооциты (А, Б) и гистологический срез (В) нерестовых самок и самца (Г) минтая. А — длина рыбы 61,0 см, стадия 1У-У; Б — 49,6 см, стадия V; В — 38,2 см, стадия У1-1У (799,5 мкм), (ув. 4х); Г — 32,4 см, стадия V

ной икры (от текущего фонда) изменялась от 0,3 до 79,0%, причем наиболее высока она была у особей, уже принимавших участие в нересте (видны следы икрометания).

Размеры желтковых ооцитов варьировали от

911,7 до 1330,2 мкм, составляя, в среднем, 1084,2 мкм. Заметим, что их диаметр значительно превосходит размеры желтковых ооцитов в яичниках IV стадии зрелости. Можно предположить, что в течение этой стадии продолжается процесс отложения желтка и (или) диаметр ооцитов увеличивается в процессе миграции ядра к анималь-ному полюсу. Размеры гидратированных ооцитов, находящихся в фолликулярной оболочке, достигали 2262,1 мкм, овулированных икринок — варьировали от 1335,8 до 2235,3 мкм, при среднем диаметре 1793,8 мкм. Максимальные размеры ооцитов резервного фонда в гонадах у разных самок 1У-Устадии зрелости изменялись от

212,0 до 311,1 мкм, при среднем показателе —

276,3 мкм. В яичниках, в которых оставалась лишь последняя порция икринок, диаметр наиболее крупных прозрачных резервных клеток варьировал в пределах 249,6-307,7 мкм, составляя, в среднем, 280,3 мкм.

Стадия У1-1У. В яичниках У1-ГУ стадии находились желтковые ооциты. Гидратированные ооциты либо отсутствовали, либо единично встреча-

лись между яйценосными пластинами. В овариальной полости и по краю яйценосных пластин имелись многочисленные фолликулярные оболочки.

На рисунке 17 показан процесс гомогенизации и гидратации ооцитов. Достигнув дефинитивных размеров, в желтковых ооцитах происходит слияние гранул желтка сначала в мелкие, затем — в более крупные глобулы. Одновременно происходит поглощение внутриполостной жидкости, увеличиваются размеры ооцитов. По периферии цитоплазмы яйцеклетки, даже при просмотре под би-нокуляром, заметна более светлая зона — слой пристенной цитоплазмы (Привалихин, Полуэкто-ва, 2002). По мнению указанных авторов, такие ооциты еще не перешли к созреванию, и ядро расположено в центре яйцеклетки. Дальнейшее увеличение объема ооцита происходит только за счет поступления воды. Таким образом, протоплазма ооцита становится сначала полупрозрачной. Яйцеклетка при этом уже отделена от фолликулярной оболочки. Вскоре последняя разрывается и происходит овуляция. В этот момент содержимое икринки еще не гомогенно. Плазменное вещество смещается ближе к анимальному полюсу. Затем икринки становятся прозрачными, после чего происходит их вымет.

Состояние половых клеток. На срезах яичников ГУ-У стадии зрелости, наряду с ооцитами,

Рис. 17. Изменение внешнего вида ооцита в процессе гидратации и овуляции. А — желтковый ооцит перед началом гидратации (1051,0 мкм); Б — гидратация (видна оболочка ооцита и фолликулярная оболочка), В — овулированные ооциты (1810,4 мкм)

заполненными желтком, присутствуют клетки в процессе гидратации желтка и завершившие гидратацию (Зверькова, 2003). T. Yoon (1981) также показал, что в яичниках не нерестовавших, но готовых к нересту самок минтая из з. Функа ооциты текущего фонда представлены клетками, заполненными желтком, в фазе миграции ядра, гидратации и зрелого ооцита. В железах частично отнерестившихся самок, кроме ооцитов перечисленных фаз развития, присутствуют постовулярные фолликулы. Встречаются также самки, уже принимавшие участие в нересте, в гонадах которых есть овулированные яйцеклетки, ооциты фазы миграции ядра, а также ооциты фазы вакуолизации цитоплазмы. Этот факт подтверждает наше предположение о том, что при прохождении IV, а также IV-V стадии развития гонад вполне возможно, что старшая генерация ооцитов резервного фонда может достигать состояния 4В.

На гистологическом срезе самки с яичниками VI-IV стадии зрелости видны желтковые ооциты. При увеличении заметно, что гранулы желтка сливаются в глобулы. Также хорошо видны фолликулярные оболочки (рис. 16В). Старшая генерация превителлогенных клеток представлена ооцитами с однослойным фолликулом и хорошо выраженным перинуклеарным кольцом. Последнее расположено ближе к оболочке ооцита. По своему развитию такие клетки более близки к состоянию 4В или находятся в переходной стадии между 4Б и 4В.

В семенниках продолжается образование семенной жидкости и выделение спермы. В одних ампулах виден «поток» сперматозоидов, в других продолжается их выход из цист (рис. 16Г). По краям ампул находятся цисты со спермати-дами, что свидетельствует о многократном участии в нересте.

О т н е р е с т и в ш и е с я. К таким рыбам мы относим минтая с гонадами на стадиях VI и VI-II.

Стадия VI, VI-II. Исследованию подвергнуты 9 самок VI стадии зрелости и 47 особей с железами на VI-II стадии. Размеры особей первой группы варьировали от 43,3 до 65,0 см, второй — от 42,8 до 65,7 см. Масса гонад у первой группы была выше (36,1 г) по сравнению со второй (20,0 г) (рис. 18А, рис. 19А). Вариации ГСИ только что отнерестившихся самок составляли 1,9—8,1%, при средней величине — 3,9% (рис. 18Б). У самок с гонадами на VI-II стадии зрелости ГСИ колебался в диапазоне 1,5-3,7%, в среднем составив 2,3% (рис. 19Б).

Такие же особенности отмечены и для самцов этих двух стадий. При сходной длине рыб масса семенников и ГСИ имеет большие значения для

Рис. 18. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая VI стадии зрелости

самцов на стадии VI, чем VI-!! (рис. 18Б, 19Б). Так, средняя масса недавно отнерестившихся самцов (VI стадия) составляла 8,6 г, тогда как желез стадии VI-II — 5,9 г. Средние показатели

50,0 -і ^ 40’° ' I 30,0 -

3 20,0 -

О ей

^ 10,0 -0,0

к

о

и

5.0 і

4.0

3.0

2.0 -1,0 -0,0

0 Самки ♦ Самцы

30 35

40

45 50 55

Длина, см

60 65

70

70

30 35 40 45 50 55 60 65

Длина, см

Рис. 19. Изменение массы гонад (А) и ГСИ (Б) в зависимости от длины самок и самцов минтая VI—II стадии зрелости

ГСИ равнялись 1,5 и 0,9%, а вариации — 0,7-3,7% и 0,6-1,5%, соответственно.

Микроскопическая картина. Все мелкие ооциты были прозрачными, ядро хорошо заметно. В цитоплазме крупных клеток при большом увеличении были едва заметны структуры, похожие на сеточку, являющиеся, очевидно, вакуолями. Диаметр наиболее крупных ооцитов изменялся у разных особей VI стадии зрелости от 272,4 до 300,3 мкм, составив, в среднем, 280,5 мкм. Хорошо заметны следы прошедшего нереста: выраженные кровеносные сосуды, остатки фолликулярных оболочек (рис. 20А, Б). В железах отдельных самок в незначительном количестве оставались гидратированные, но не овулированные ооциты и непрозрачные желтковые клетки. Размеры остаточных гидратированных икринок у отнерестившейся самки длиной 53,8 см не превышали 1010,5 мкм, а непрозрачных — 491,4 мкм. Размеры последних значительно меньше, чем у желтковых на стадии IV. Очевидно, они перешли к резорбции еще в процессе накопления желтка.

Самки с гонадами на стадии VI—II у Восточной Камчатки встречались на протяжении 2 месяцев, начиная с конца мая. При просмотре заметны фолликулярные оболочки, кровеносные сосуды, в некоторых яичниках еще единично

Рис. 20. Ооциты (А, Б) и гистологический срез (В) отнерестившихся самок и самца (Г) минтая. А — длина рыбы 52,2 см (300,6 мкм); Б — 48,5 см (357 мкм); В — 48,5 см (237,9 мкм); Г — 32,9 см

встречались резорбирующиеся желтковые клетки. Размеры лидирующих прозрачных ооцитов увеличивались от 293,4 мкм в мае до 323,0 мкм в июне. Однако уже через месяц — в конце июня — в яичниках, наряду с массой мелких прозрачных клеток, появились мутные ооциты (при большом увеличении в них были видны желточные гранулы), размеры которых составляли 339,7372,1 мкм.

В первой половине июля диаметр наиболее крупных ооцитов у постнерестовых рыб VI-II стадии зрелости достигал 296,4-418,1 мкм, при среднем — 356,9 мкм, а к концу месяца размеры ооцитов увеличились до 403,5-438,7 мкм (среднее значение —

421,1 мкм). Эти ооциты были желтыми и непрозрачными, размеры их соответствовали таковым в яичниках II-III стадии зрелости. Вместе с ними присутствовали мутные ооциты меньших размеров. При просмотре было невозможно разделить ооциты на вителлогенные и резервные. Т. е. в это время четкого разделения текущего и резервного фонда ооцитов не наблюдается, как и при протекании II-III стадии. В то же время, анализируя результаты визуальных определений, просматривая затем ооциты под бинокуляром, мы убедились, что при выполнении биологического анализа у отнерестившихся особей невозможно определить, начался ли в ооцитах процесс очередного созревания гонад или еще нет. Надо полагать, что определение стадии II-III можно применить лишь для впервые созревающих самок.

Состояние половых клеток. У самок, принимавших участие в нересте, в яичниках присутствуют молодые ооциты, клетки с однослойной фолликулярной оболочкой состояний 4Б и 4В (рис. 20В). Хорошо заметны пустые фолликулярные оболочки, размеры которых сильно варьируют, видимо, в зависимости от того, как прошел срез, и времени, прошедшего после нереста. Вначале длина их может достигать 380-500 мкм, а ширина — 100150 мкм. Оболочки подвержены процессу резорбции, постепенно сжимаются и превращаются в комки клеток. Размеры таких остаточных фолликулярных оболочек варьируют от 5-8 до 7075 мкм (Лисовенко, 2000).

Нередко встречаются самки, в яичниках которых остались желтковые ооциты. Вероятно, эти клетки перешли к резорбции еще в процессе накопления желтка. В таких ооцитах на срезах отмечается утолщение и разрушение оболочки (Yoon, 1981; Привалихин, Полуэктова, 2002).

В семенниках самцов после нереста имеются остатки спермы, в ампулах наблюдается по-

лость (рис. 20 Г). Происходит размножение спер-матогониев, начинается новый половой цикл.

Подводя итог, подчеркнем следующее. Масса гонад самцов и самок значительно варьирует и имеет минимальные значения у неполовозрелых (до 3,3 г у самок и 1,0 г — у самцов) и максимальные — у преднерестовых рыб (до 740,0 г и 129,6 г, соответственно). Средняя величина ГСИ у неполовозрелых самок и самцов составляет 0,4 и 0,1%, соответственно. Максимальное среднее значение ГСИ самцов наблюдается на IV стадии зрелости, самок — у нерестовых особей. В онтогенезе зависимость длина рыбы — масса гонад чаще всего имеет вид степенной функции. ГСИ изменяется не столь значительно, и его отношение к длине рыб, в основном, характеризуется небольшим положительным трендом. В процессе созревания гонад ГСИ самок находится в тесной зависимости от степени зрелости и, следовательно, диаметра ооцитов.

Стадии зрелости характеризуются определенным качественным составом и размерами половых клеток. У неполовозрелых самок в железах все ооциты проходят последовательные фазы периода протоплазматического роста. Увеличение диаметра ооцитов происходит за счет увеличения объема цитоплазмы. В железах самцов происходит размножение сперматогоний и сперматоцитов.

О начавшемся половом созревании свидетельствуют появление мутных ооцитов в железах самок и формирование сперматид у самцов. Не все вителлогенные ооциты в яичнике по развитию находятся в одной фазе желткового накопления. В начале созревания — на П—Ш стадии — в них присутствуют ооциты фаз вакуолизации и накопления желтка. Ооциты увеличиваются в размерах не только благодаря увеличению объема цитоплазмы, но и в результате накопления трофических веществ.

Переход на III стадию характеризуется отсутствием ооцитов фазы вакуолизации и наличием клеток с разным накоплением желтковых гранул: от начала отложения желтка до половины и даже более заполненного желтком ооцита. Следовательно, отделение ооцитов расходной генерации от резервного фонда половых клеток происходит на III стадии развития яичников. В семенниках сперма-тиды в наиболее крупных цистах преобразуются в сперматозоиды.

Ооциты в железах Ш—ГУ и IV стадий отличаются от таковых на III стадии только количеством отложенного желтка. Так, в фазе первичного (на-

чального) отложения желтка размер желточных гранул на гистологических срезах равен 1,3 мкм, а когда ооцит заполнен желтком наполовину, желточные гранулы увеличивались до 3,8 мкм (Иванков, 1987). На последующей фазе желточного накопления гранулы становятся еще крупнее. Их размеры в нефиксированных ооцитах из яичника IV стадии зрелости в наших пробах изменялись от 6,3 до 11,0 мкм. В конце этой стадии в лидирующих ооцитах прекращается накопление трофических веществ, они достигают дефинитивных размеров. Затем происходят миграция ядра к анимальному полюсу и слияние гранул желтка. Хотя эти два указанных состояния представляют период созревания ооцитов, скорее всего наблюдатель полагает, что это яичники IV стадии зрелости, т. к. гидратация ооцитов еще не началась. В семенниках продолжается процесс превращения сперматид в сперматозоиды и выход их из цист.

На стадии IV—V происходят качественные изменения состояния ооцитов. В достигших дефинитивных размеров ооцитах происходит процесс гидратации и овуляции. Зрелая икра выметывается порциями. Гидратация и овуляция происходят до тех пор, пока вся зрелая икра не будет выметана. У самцов наблюдается разжижение сперматозоидов и выделение спермы.

В яичниках отнерестившихся самок остаются превителлогенные ооциты, фолликулярные оболочки. У некоторых рыб могут быть резорбирующиеся желтковые и гидратированные клетки. Не более чем через месяц в наиболее крупных ооцитах образуются вакуоли, начинается отложение желтка. В семенниках происходит размножение сперматогониев.

По мере созревания гонад самок, в железах увеличиваются размеры половых клеток текущей генерации и лидирующих в развитии превителло-генных ооцитов.

Представление об общей размерной структуре ооцитов и ее изменении в текущей (стадии Ш—У)

и резервной (стадии II и VI-II) генерациях дают таблица 1 и рисунок 21.

Учитывая вышеизложенное, подчеркнем, что шкала стадий зрелости гонад минтая, которой традиционно пользовались в КамчатНИРО, нуждается в уточнении и изменении.

Поскольку визуально гонады впервые (стадия II-III) и повторно созревающих (стадия VI-II-III) самок различить трудно без проведения специальных микроскопических исследований, предлагаем всех рыб с гонадами начальных фаз созревания в летне-осенний период обозначать одной стадией — II-III. В зимне-весенний период у таких рыб гонады следует идентифицировать II стадией, что позволит отделить нерестовую часть от остального запаса.

У тех самок, которые будут нереститься в текущем (ближайшем) нерестовом сезоне, осенью гонады из стадии II-III переходят в стадию III. Мы полагаем, что не следует выделять предлагаемую А.М. Привалихиным (1998) стадию VI-III (повторно созревающих особей), т. к. визуально таких рыб можно идентифицировать только среди крупных особей. Т. е. всех рыб с признаками созревания необходимо обозначать III стадией.

Стадия зрелости III-IV считается переходной. Обычно наблюдатель, не очерчивая для себя какие-либо отличительные признаки, обозначает ее именно как переходную, т. е. когда есть сомнения — поставить III или IV стадию. Скорее всего, если величина гонад покажется ему относительно большей, чем у III стадии, он идентифицирует особь как III-IV. Об этом свидетельствуют результаты наших исследований, показанные на рисунке 22. Замечено, что при схожей длине масса половых желез и ГСИ самок, определенных III-IV стадией, могут быть близкими или даже ниже, чем у особей III стадии. И наоборот, значения массы гонад и ГСИ некоторых рыб находятся в поле распределения IV стадии зрелос-

Таблица 1. Длина самок и размеры ооцитов в гонадах минтая разных стадий зрелости

Стадия Длина рыб, см Диаметр лидирующих превителло-генных ооцитов (макс.), мкм Средний диаметр вителло-генных ооцитов, мкм Средний диаметр гидратированных ооцитов, мкм

II 2б,5-55,0 Іб8,2-228,0 (І98,9) - -

II-III 3І,8-42,5 І53,0-280,3 (2І8,0) 322,7-442,6 (392,9) -

III 40,8-59,5 204,0-28І,2 (240,8) 338,4-5б8,3 (452,б) -

III-IV 4і,3-67,4 2ІІ,0-297,0 (247,4) 489,4-782,6 (б3І,І) -

IV 4І,2-75,І І77,8-327,3 (26і,6) 633,0-і І38,І (860,і) -

IV-V, V 39,0-б7,2 2І2,0-3ІІ,І (276,6) і003,4-іі68,7 (1084,2) 1335,8-2235,3 (1793,8)

VI 43,3-б5,0 274,2-278,8 (276,6) - -

VI-II 42,8-65,7 237,9-33І,9 (300,І) 35б,5 -

н--------1------1-------1------1-------1------1-------1

25 225 425 625 825 1025 1225 1425 1625 1325 2025 2225

Диаметр, мкм

Рис. 21. Размерный состав ооцитов минтая разных стадий развития гонад (1 — превителлогенные, 2 — желтковые, 3 -гидратированные, 4 — овулированные)

ти. На зернистость и степень видимости ооцитов невооруженным глазом, очевидно, внимание не акцентируется. Из 13 самок ІІІ-ІУ стадии зрелости гонад, у которых были измерены ооциты, у 2

особей значения среднего диаметра желтковых клеток находились в пределах изменения для III стадии, а у 5 самок — IV. Поскольку гонады на Ш-^ и IV стадиях зрелости отличаются друг от

Рис. 22. Некоторые показатели зрелости гонад самок по визуальным определениям

друга только количественными характеристиками, а четкого разделения самок по массе желез, ГСИ, размерам желтковых ооцитов не отмечено, мы предлагаем в дальнейшем их обозначать IV стадией.

Ранее в полевых исследованиях выделяли рыб с гонадами на ГУ-У стадии зрелости. У. 8акшга1 (1993) полагает, что самки, у которых в яичниках появились зрелые прозрачные икринки, уже приступили к нересту. Как показали результаты экспериментов по нересту минтая в аквариальных условиях, процесс превращения из непрозрачных ооцитов этапа миграции ядра к анимальному полюсу в прозрачные зрелые гидратированные ооциты, выделения их из стромы яичника, накопления в полости яичника и вымета неоднократно

повторяется, с промежутком 2-3 дня. В соответствии с многократно повторяющимся выметом, внешний вид яичников изменяется от состояния, когда среди большого числа непрозрачных желтковых ооцитов наблюдается небольшая доля гидратированных прозрачных ооцитов, до состояния, когда, наоборот, большая часть яиц в яичниках или практически все представлены гидратированными клетками. Следовательно, можно говорить о том, что самки, в яичниках которых отмечается большое количество прозрачных икринок, находятся в состоянии после многократного нереста. Выделить промежуточные этапы нереста между выметом отдельных порций визуально у минтая невозможно. Кроме того, нельзя однозначно определить, выметала ли самка первую порцию икры или нет. В этой связи, разделяя точку зрения У. 8акшш (1993), мы предлагаем считать всех рыб, в яичниках которых есть гидратированные икринки, приступившими к нересту и обозначать их одной стадией — V.

Сразу после вымета очередной порции яичники переходят в стадию, внешне похожую на IV, которую в шкалах для порционно нерестящихся рыб обычно обозначают как VI-IV. По визуальным признакам такие гонады похожи на яичники до вымета первой порции, но меньшего размера. По мере вымета очередной порции, яичники все более уменьшаются в размерах, становятся мягкими и приобретают красноватый оттенок. Оболочка гонад становится слегка дряблой, прозрачной, с хорошо видимыми кровеносными сосудами. Овариальная полость имеет заметный просвет, который все более увеличивается по мере вымета очередной порции. Между яйценосными пластинами могут быть оставшиеся прозрачные икринки. Сквозь стенку ястыка видны только желтковые ооциты. Учитывая, что в яичниках идет подготовка яйцеклеток к очередному вымету, стадию зрелости гонад следует обозначать V стадией. Яичники с последней порцией икры достаточно редко встречаются в уловах, т. к. икра выдавливается в трале.

Определение промежуточных стадий у самцов, кроме VI-!!, вызвано лишь представлениями наблюдателя о соотношении величины семенников и полости тела, поэтому мы рекомендуем их не выделять.

Таким образом, для определения зрелости гонад особей минтая (кроме ювенильных) предлагается использовать 7 стадий половой зрелости для самок (II, П-Ш, III, IV, V, VI, VI-II) и 6 — для самцов (II, III, IV, V, VI, VI-II).

Явления резорбции ооцитов и другие отклонения в развитии гонад

Отклонения в нормальном развитии ооцитов отмечены для многих видов рыб. А.М. Привали-хин (1998), изучая особенности созревания и случаи резорбции ооцитов минтая, полагал, что высокий уровень патологических процессов в яичниках, проявляющихся в форме частичной или тотальной резорбции, происходит на всех этапах роста и созревания ооцитов. Степень и частота их проявления различны у самок разной длины и возраста. Так, в Беринговом море доля самок с тотальной резорбцией половых клеток, в зависимости от длины рыб, изменялась от 12 до 67%, в Охотском море — от 3 до 26%, увеличиваясь в разгар нереста и уменьшаясь к завершению икрометания примерно в 3 раза. Вероятными причинами аномалий развития половых клеток автор считал нарушения нормальных условий нереста, неблагополучное состояние интенсивно эксплуатируемых популяций минтая.

В период накопления желтка в ооцитах резор-бирующиеся клетки слабо заполнены желтком, часто имеют неправильную форму, либо становятся прозрачными, обводненными (Привалихин, По-луэктова, 2002). В ооцитах нарушается структура оболочек. С развитием дегенеративных процессов отмечается сильная гиперемия, коагуляция содержимого ооцитов. Такие ооциты располагаются гроздьями в отдельных участках яйценосных пла-

стин. На поздних этапах резорбции атретические фолликулы концентрируются между пластинами и в овариальной полости, образуя затвердевшие части, которые могут располагаться в части или даже по всей длине гонады.

В период наших исследований отмечали частичную резорбцию половых клеток в гонадах самок стадий III, Ш-ГУ, IV, ГУ-У и VI-II. У одних особей резорбция была заметна при внешнем осмотре яичников (затвердевшие части, изменение цвета), у других — только при просмотре части гонады под микроскопом (гроздья прозрачных клеток неправильной формы) (рис. 23А, Б).

В ноябре-декабре 2008 г. нам встречались самки с яичниками, определенными как V стадия. Сквозь оболочку были видны ооциты, похожие на гидратированные (рис. 23В), однако просмотр под бинокуляром показал, что это резорбирующиеся клетки.

Тотальная резорбция ооцитов за весь период исследований была отмечена только у двух самок. Она хорошо определялась визуально: по внешнему виду и окраске яичников. Железы были белесыми, без присутствия желтковых клеток. В гонадах одной самки имелись крупные прозрачные клетки разнообразной формы (рис. 23Д). Яичник другой содержал ооциты правильной формы диаметром до 296,1 мкм. На оболочке ооцитов были видны включения (рис. 23Е).

А Б В

Рис. 23. Ооциты минтая в яичниках с частичной (А, Б, В, Г) и тотальной (Д, Е) резорбцией. А — длина рыбы 51,2 см, III стадия; Б — 52,8, IV стадия; В — 53,1 см, V стадия; Г — 49,8 см, VГ-II стадия; Д — 59,2 см; Е — 57,3 см

В яичниках самки длиной 49,8 см с гонадами VI-II стадии зрелости наряду с превителлогенны-ми ооцитами присутствовали обводненные прозрачные разнообразной формы клетки, достаточно плотно прилегающие друг к другу (рис. 23Г). По своему виду они напоминали обводненные ре-зорбирующиеся образования в гонадах на стадии в ноябре-декабре 2008 г. Не выметанные икринки, а также остаточные желтковые ооциты отсутствовали. Кровеносные сосуды были хорошо выражены.

Таким образом, не отрицая факт существования атретических явлений в гонадах минтая, мы склоняемся к точке зрения большинства исследователей, которые полагают, что «атрезия развивающихся ооцитов выполняет адаптивную функцию регуляции плодовитости, как индивидуальной, так и популяционной» [цит. по Привалихин, 2003, с. 511].

Кроме особей с резорбцией ооцитов, среди крупных рыб нередко встречаются особи без каких-либо признаков созревания гонад. Половые железы выглядят в виде утолщенных тяжей, тянущихся вдоль позвоночника. Идентифицировать пол у таких рыб зачастую сложно, и наблюдатели в полевых условиях, как правило, определяют их самками на II стадии зрелости. Очевидно, такой минтай является «стерильным». Возможно также, и мы склоняемся к этому мнению, что такие особи уже потеряли свою репродуктивную функцию (климаксные рыбы). Таких рыб следует учитывать и относить в отдельную группу.

Другие случаи отклонения от нормального развития гонад у минтая отмечаются чрезвычайно редко. Так, в декабре 2003 г. в западной части Берингова моря при вскрытии минтая из улова тралом были встречены 2 особи, имеющие и яичники, и семенники. У одной из них брыжейкой прикреплен яичник и более развит семенник, у другой— прикреплен семенник и визуально более развитым выглядит яичник. По мнению Г.М. Персова (1975), гонады таких особей бисексуальны. Женская и мужская части гонады сохраняются на всем протяжении жизни и могут развиваться в двух направлениях: синхронном (женская и мужская части функционируют одновременно) и последовательном (сначала железа функционирует как яичник или семенник, затем развитие одной подавляется и происходит развитие части гонады противоположного пола).

Структура полового цикла минтая

Л.М. Зверькова (1977) годичный цикл развития гонад минтая северо-восточной части Японского

моря разделяла на 3 периода: 1) преднерестовый — ноябрь и декабрь, когда половые железы находятся преимущественно в IV стадии зрелости; 2) нерестовый — с января по май (IV-V и IV-VI стадии зрелости); 3) посленерестовый и период роста половых клеток — с июня по октябрь (VI—II, II и

III стадии зрелости половых желез).

В.А. Вышегородцев (1986) половой цикл минтая в течение года также разбивал на 3 периода, но при этом отличались как их названия, так и соответствующие им стадии зрелости гонад: 1) нерест, гонады находятся в текучем или близком к нему состоянии (IV-V, V, VI-Ш, VI-ГV, VI-V стадии); 2) восстановление гонад (VI, VI-II стадии); 3) рост и развитие половых клеток новой генерации (П-Ш, III, III-IV, IV стадии). Применительно к североохотоморскому минтаю данный автор определил и примерные сроки прохождения указанных периодов: первый — с февраля по июль-август, второй — с марта-апреля по сентябрь, и третий — с августа по июнь следующего года.

Т. Maeda (1986) при описании годового цикла минтая, обитающего в заливе Функа (о. Хоккайдо), выделял 4 периода: нерестовый, промежуточный между нерестовым и нагульным, нагульный и промежуточный между нагульным и нерестовым. Границы указанных периодов накладываются друг на друга. Кроме того, календарные сроки каждого отдельного периода варьируют в разные годы.

Проанализировав общую продолжительность нерестового сезона минтая в заливе Функа, которая составляет около 4-5 месяцев, длительность размножения одной особи — до 1 месяца, У. 8акшш (1993) пришел к выводу о существовании у минтая «таймер-календаря», регулирующего процесс созревания половых продуктов и времени воспроизводства. На основе сезонной динамики гистологического строения гонад и ГСИ, им был смоделирован репродуктивный цикл популяции, состоящий из 4 периодов:

- период неполовозрелых рыб;

- период медленного созревания или восстановительный период у повторно созревающих рыб (у самок — период появления гранулированного желтка в ооцитах, у самцов — период размножения сперматоцитов);

- период активного созревания (у самок — активное накопление желтка в ооцитах, у самцов — формирование сперматозоидов после завершения размножения сперматоцитов);

- период нереста, который включает в себя время, непосредственно предшествующее вымету и сразу после него (у самок — период миграции ядра

к анимальному полюсу, завершение вымета икры, у самцов — завершающие этапы формирования сперматозоидов, завершение вымета спермы).

Данный автор полагает, что у отдельных рыб время, необходимое на весь репродуктивный цикл — от начала созревания ооцитов до завершения нереста — составляет примерно полгода. Из-за асинхронности начала созревания гонад у отдельных особей, вследствие различий в индивидуальных половых циклах, нерестовый сезон всей популяции растягивается до полугода. Так, отдельные особи минтая в заливе Функа начинают созревать для очередного нереста в июле, тогда как у запаздывающих рыб начало этого процесса приходится на октябрь. Тем не менее, в течение 1—2 месяцев нерест минтая особенно активен.

Проанализировав жизненный цикл минтая в Беринговом море, А.М. Привалихин (1998) заключил, что часть минтая созревает в этом районе на втором, а основная масса рыб — третьем году жизни. Гонады переходят во II—III, III стадии зрелости (у самок начинается формирование фонда вителлогенных ооцитов, у самцов — образование сперматоцитов). Автор предполагает, что эти процессы у основной массы рыб начинаются зимой и сильно растянуты во времени, поэтому впервые созревающие особи нерестятся обычно позже остальных — в конце нерестового сезона. В дальнейшем — на 4—6 годах жизни — минтай созревает быстрее и нерестится раньше. Переход гонад из VI—III в III—IV стадию зрелости у самок минтая растянут во времени и происходит в течение нагульного периодов. Сроки завершения трофоплаз-матического роста ооцитов зависят от времени нереста, длины и возраста самки, гидрологических условий года. В короткие — до 1 месяца — сроки самки переходят в преднерестовое состояние. Окончательные процессы созревания протекают в период преднерестовых миграций, в результате на нерестилища подходят подготовленные к нересту особи. Переход ооцитов от дефинитивного состояния к овулировавшим икринкам кратковременен,

т. к. в уловах редко встречаются самки с частично гомогенизированным желтком в ооцитах.

По физиологическому состоянию минтая этот автор выделяет 6 групп: неполовозрелые рыбы (особи с гонадами II стадии зрелости); впервые созревающие, которые в текущем году нереститься не будут (П-Ш, III стадии); преднерестовые (III-IV, IV стадии); нерестящиеся (IV-V, V стадии); посленерестовые (VI, VI-II стадии); нагульные (VI-III стадия).

Выполненные ранее исследования, вместе с новыми данными, собранными в 2008-2010 гг., позволяют нам обосновать свою точку зрения относительно полового цикла минтая (рис. 24).

Ювенильную стадию минтай обычно проходит в течение первого года жизни. У самок лидирующие половые клетки — молодые ооциты. К началу полового созревания ооциты достигают заключительной ступени фазы однослойного фолликула.

Появление в гонадах самок минтая ооцитов фаз вакуолизации цитоплазмы и начальных этапов накопления желтка свидетельствует о начале созревания рыб — гонады из II переходят во П-Ш стадию. У впервые созревающих самок для прохождения периода вителлогенеза, очевидно, требуется около 1 года, поэтому в текущем нерестовом сезоне такие особи принимать участие в размножении не будут. Разделение впервые созревающих рыб на тех, которые в предстоящем нерестовом сезоне будут нереститься (гонады переходят в III стадию зрелости), и тех, которые созреют только к следующему икрометанию (гонады остаются на стадии П-Ш), происходит примерно за полгода до начала нереста.

Следующим этапом полового цикла минтая является переход гонад в IV стадию зрелости. Весь период накопления желтка — от П-Ш до IV стадии — длится 7-8 месяцев.

Как мы уже говорили выше, всех самок, у которых в яичниках есть гидратированные икринки, мы считаем приступившими к нересту. Переход желтковых ооцитов от дефинитивного состояния к

Рис. 24. Схема полового цикла минтая. Примечание: *самки

овулировавшим икринкам, по мнению А.М. Прива-лихина (1998), скоротечен. Учитывая небольшие промежутки времени между выметом отдельных порций (Sakurai, 1993) и их количество — до 18—20 (Балыкин, 1988; Sakurai,1993; Лисовенко, 1997), можно предположить, что одна самка может принимать участие в нересте в течение месяца или немногим более.

После вымета последней порции икры гонады минтая переходят в VI стадию. Рыбы с гонадами на этой стадии в уловах встречаются редко, что связано, очевидно, с ее непродолжительностью.

Нерест, которым завершается годовой процесс жизнедеятельности рыб, обеспечивающий основную функцию — размножение, является конечным звеном годового биоцикла. У минтая за ним следует первое звено нового годового цикла, биологическая сущность которого заключается в стремлении к местам нагула для восстановления утраченных сил, генеративной функции гонад, накопления жира.

На восстановление гонад после икрометания у минтая уходит примерно 2—3 месяца (стадия VI— II). Внутри гонад наблюдается ликвидация последствий нереста и рост половых клеток новой генерации.

Таким образом, в течение года половозрелый минтай проходит следующие периоды:

— период созревания гонад (стадии зрелости II— III, III, IV). У впервые созревающих рыб эти ста-

дии наблюдаются около 1 года, у повторно созревающих рыб весь период вителлогенеза занимает около 8 месяцев;

- период нереста (стадия V), продолжается 1-

2 месяца;

- постнерестовый период или период восстановления гонад (стадии VI, VI-II), длится 2-3 месяца.

Основные сроки размножения минтая в различных частях ареала отличаются, что связано с адаптацией рыб к специфике гидрологических, гидробиологических условий конкретных районов (Шунтов и др., 1993). Если на южной периферии ареала массовый нерест минтая происходит в осенне-зимний период (в ноябре-декабре), то по мере продвижения к его северной периферии наблюдается постепенное смещение сроков икрометания от зимнего сезона к летнему (в мае-июне) (рис. 25). Соответственно, сдвигаются и сроки начала/завершения годичного полового цикла рыб. Кроме того, из-за неодновременного созревания особей отдельные этапы репродуктивного цикла всей популяции сильно растянуты, а временные границы — размыты, что позволяет ей адаптироваться к изменяющимся условиям окружающей среды.

В качестве примера, на рисунке 26 приведена схема полового цикла самок минтая, размножающегося у Западной Камчатки. Самок в нерестовом состоянии в этом районе можно встретить практи-

Рис. 25. Основные сроки размножения минтая в различных частях ареала: 1 — весенний нерест, 2 — зимний нерест, 3 — осенне-зимний нерест. Цифры — месяцы, изолинии — поверхностные изотермы 0, 2, 5 и 10 °С в январе (Шунтов и др., 1993)

і-------------1------------1------------1------------1------------1-------------1------------1------------1------------1------------1------------1

Т II III IV V VI УП VIII IX X XI XII

Месяцы

Рис. 2б. Схема полового цикла самок минтая у Западной Камчатки (прямоугольниками отмечены месяцы, в которые встречаемость рыб с гонадами данной стадии превышает i0% от общего количества)

чески круглогодично, однако массовый нерест, когда размножаются более 90% производителей, происходит в марте-мае с пиком, по среднемноголетним данным, в середине апреля. Позднее нерест начинается в заливе Шелихова и далее распространяется на северо-западную часть моря (Фадеев, 1987). Различия в сроках икрометания на каждом из соседних нерестилищ составляют примерно 2-3 недели. Наиболее поздний нерест наблюдается на восточно-сахалинском шельфе с пиком в первой-третьей декадах мая, изредка в первых числах июня.

ШКАЛА СТАДИЙ ЗРЕЛОСТИ ГОНАД МИНТАЯ Обзор шкал стадий зрелости гонад минтая

Шкалы стадий зрелости рассчитаны на макроскопический анализ и включают только те стадии развития, которые имеют четкий диагноз, распознаваемый невооруженным глазом.

В разные годы и разными исследователями для минтая было разработано несколько шкал, однако до сих пор не существует единой общепринятой шкалы как среди зарубежных, так и среди российских исследователей.

Наиболее раннее упоминание о шкале стадий зрелости гонад минтая в научной литературе можно найти у японских исследователей. В работе У. Ташпо с соавт. (1959) есть указание, что приведенная шкала общепринята в группе исследований запасов донных рыб Хоккайдского НИИ рыбного хозяйства. По наличию или отсутствию в невскрытых яичниках самок непрозрачных или прозрачных икринок, предложено идентифицировать гонады по 5-бальной шкале (1 — неполовозрелые,

2 — незрелые яичники, содержащие непрозрачные (желтковые) икринки, 3 — отмечается присутствие прозрачных икринок, 4 — все икринки прозрачны, 5 —яичники рыб, завершивших нерест).

Шкала стадий зрелости гонад самцов и самок минтая, разработанная Т. Maeda и Н. Hirakawa

(1977), также содержит 5 стадий (10, 20, 30, 40 и 50). Основана она на визуальных признаках (цвет и размер гонад, состояние половых продуктов и др.), что явно недостаточно для полноценной шкалы. В частности, в ней не учитываются особенности созревания и нереста минтая, а стадии зрелости не соответствуют основным этапам оогенеза и сперматогенеза.

При исследовании степени созревания и годового цикла развития яичников, Т. Yoon (1981) предложил выделять 9 стадий зрелости: (I — стадия безжелтковых ооцитов, II — стадия желтковых вакуолей, III — стадия начала формирования желтка, IV — стадия активного формирования желтка,

V — стадия миграции ядра к анимальному полюсу, VI — стадия зрелых ооцитов (через оболочку видны прозрачные ооциты), VII — стадия начального периода нереста (видны прозрачные ооциты, но имеются постовуляторные фолликулы), VIII — стадия конечного периода нереста (большая часть или почти весь яичник заполнен прозрачными ооцитами, множество постовуляторных фолликулов), IX — стадия завершения нереста (вся икра выметана). Позднее, H. Yoshida и Т. Yoon (1981), исследуя степень созревания рыб в летний период и изучая гистологические срезы гонад, предложили стадию желтковых вакуолей разделять на

2 подстадии (этапа): этап до формирования одного слоя желтковых гранул в прилегающей к по-

верхности части цитоплазмы получил название раннего этапа формирования желточных гранул, тогда как присутствие в цитоплазме более одного ряда желтковых гранул выделено в качестве позднего этапа формирования желтковых гранул.

У самцов стадия размножения сперматоцитов, в течение которой происходит увеличение числа половых клеток в результате митозов, также разделена на 2 подстадии: период, когда большая часть сперматоцитов представлена сперматоци-тами первого порядка, был назван ранним периодом размножения сперматоцитов, тогда как период, когда в большей части семенника присутствуют сперматоциты 2 порядка, назван поздним периодом размножения сперматоцитов. Обе подстадии характерны как для неполовозрелых, так и посленерестовых особей. Поскольку указанные признаки визуально не различимы, надо полагать, что речь идет о стадиях развития гонад, а не о стадиях зрелости.

В работах Y. Sakurai (1983, 1989, 1993) приведена 9-бальная шкала стадий развития гонад самок, аналогичная показанной Т. Yoon (1977, 1981) — от I (безжелтковая стадия) до IX (отнерестившиеся рыбы) — с описанием критериев для разделения неполовозрелых и созревающих, неполовозрелых и посленерестовых рыб.

S. Hinckley (1987) с помощью гистологических методов исследовала яичники минтая разных стадий зрелости, собранные в восточной части Берингова моря. По степени развития ооциты разделены на 12 категорий, а по преобладанию ооцитов той или иной категории яичники разделены на

10 классов. В отличие от шкалы, предложенной Y. Sakurai (1993), в этой шкале введен дополнительный класс — предсозревание (начало созревания). Предлагаемая шкала достаточно сложна для широкого применения из-за того, что основана на микроскопических признаках. В полевых условиях американские специалисты в советско-американских рейсах определяли лишь 4 стадии: неполовозрелые, созревающие, нерестящиеся и отнерестившиеся.

Из последних публикаций иностранных исследователей, посвященных данной теме, следует отметить работу J.P. Stahl и G.H. Kruse (2008). Представленная ими шкала стадий зрелости, снабженная цветными фотографиями яичников самок, предваряется достаточно обстоятельным исследованием оогенеза минтая с применением современных гистологических методов.

По состоянию ооцитов старшей генерации авторы разделили степень развития гонад самок на

5 стадий: 1 — неполовозрелые, 2 — созревающие,

3 — преднерестовые, 4 — нерестовые и 5 — отнерестившиеся. Преднерестовую стадию гонад в зависимости от цвета, относительного объема яс-тыков, а также степени видимости сквозь оболочку яичника икринок, предложено разделять еще на

3 подстадии: I — икринки невидимы, длина яичников менее половины длины полости тела, II — икринки видимы, яичники занимают около 8 полости, III — икринки видимы, яичники занимают около 2/3 полости.

К достоинствам данной работы можно отнести наличие цифровых фотографий гонад с вариациями размеров и цвета, что делает ее использование достаточно удобным в полевых условиях.

Подводя итог анализу существующих шкал стадий зрелости гонад минтая, предложенных зарубежными исследователями, следует отметить общие для всех работ недостатки, которые затрудняют их использование на практике. Во-первых, слабое освещение созревания самцов. Во-вторых, применяемая авторами терминология, обозначения и названия стадий не соответствуют принятым среди российских исследователей стандартам (Сакун, Буцкая, 1963). В некоторых шкалах не учитываются особенности созревания и нереста минтая, а стадии зрелости не соответствуют основным этапам оогенеза и спермиогенеза. За исключением последней работы, предлагаемые шкалы не содержат цветных фотографий, что делает весьма затруднительным использование их в полевых условиях.

Среди шкал стадий зрелости, разработанных отечественными исследователями, нам известна шкала, предложенная в 1990-х годах Н.С. Фадеевым. К сожалению, она не опубликована, но, тем не менее, длительное время использовалась специалистами ТИНРО-Центра (нам ее любезно предоставил А.В. Смирнов). В ней описано 6 стадий зрелости гонад самцов и самок: от I (ювенильные особи) до VI (выбой) стадии.

Стадия II, к которой автор относит созревающих особей и особей с гонадами после нереста, подразделена на 2 подстадии: Па — впервые созревающие особи, которые в текущем году принимать участие в нересте не будут и которые представляют собой пополнение нерестового запаса (обычно рыбы 20-35 см); Пб — группа отнерестившихся рыб, гонады которых приняли обычную форму (особи длиной 36-40 см).

По описанным в данной шкале признакам затруднительно различить впервые созревающих

особей и рыб, которые нерестились один раз, т. к. предлагаемые отличительные критерии — матовый цвет яичников, утолщенная оболочка и другие — обычно хорошо заметны только у старшевозраст-ных особей.

В описании шкалы есть указание, что для минтая возможно выделение и промежуточных стадий, при этом преобладающая стадия ставится впереди: например ]^-У, VI-!! и т. д.

Позднее эта шкала была изменена. В частности, в ее новом варианте ювенильные особи выделяются отдельно, а к I стадии рекомендовано относить неполовозрелых самцов и самок с очень маленькими, но хорошо различимыми визуально гонадами.

Что касается II стадии, то в новом варианте шкалы она уже не разделена на подстадии. В качестве одного из основных диагностических признаков для самок с яичниками на этой стадии в ней указан цвет гонад: от бледно-желтого до слабооранжевого, тогда как в прежней версии шкалы для этой же стадии цвет был серый. Особи с такими гонадами не нерестились и не будут участвовать в размножении в текущем сезоне. Очевидно, в прежней шкале эта стадия обозначалась как Па. Выделявшаяся ранее стадия Пб в новом варианте шкалы, по всей видимости, соответствует VIII стадии зрелости.

Кроме указанных отличий, в новой шкале есть описание переходной стадии ГУ-У для самок. При этом в примечании автором рекомендовано избегать написания в журнале анализов этой стадии зрелости. Вместо нее следует рыб относить к V стадии, если количество прозрачных икринок в гонаде немного больше, чем непрозрачных, хотя свободного вытекания икры может не быть, и наоборот — к IV стадии.

Таким образом, во-первых, по этим 2 шкалам достаточно сложно соотнести данные, собранные в разные годы. Во-вторых, весьма произвольной представляется процедура отнесения рыб с гонадами на IV-V стадии к IV, т. е. преднерестовым рыбам, либо к V — нерестящимся особям, основанная лишь на визуальной оценке соотношения желтковых и гидратированных ооцитов.

Другой шкалой стадий зрелости гонад минтая, разработанной еще в 1980-х годах П.А. Балыкиным и также не опубликованной, длительное время пользовались в КамчатНИРО. Основана она на визуальной оценке наиболее характерных макроскопических признаков гонад: размер и цвет половых желез, толщина оболочки, состояние половых продуктов и др. Помимо стандартных (II, III, IV,

V, VI), она содержит подробное описание и переходных стадий (П-Ш, Ш-Щ ^-У V-VI, VI-IV, VI-II), в т. ч. и для самцов. Всего для самок предлагается идентифицировать 11, а для самцов —

10 стадий.

Некоторые переходные стадии описаны впервые. Например, стадия П-Ш, к которой автор предлагает относить рыб, впервые готовящихся к нересту либо отнерестившихся особей. Отличается от других шкал описание П.А. Балыкиным V стадии зрелости для самок: «Яичник чаще всего имеет вид пирога: в середине прозрачные легко вытекающие из разреза икринки, по краям отдельными участками расположены желтковые ооциты. Икра выделяется только при сильном надавливании на брюшко».

Кроме того, в данной шкале есть описание стадии V-VI, которой нет в других шкалах. При тех же внешних признаках, что и для V стадии, она отличается от нее тем, что «при надавливании на брюшко икра выделяется струей». Впервые в шкале представлено описание VI-IV стадии, характерной для порционно нерестящихся рыб.

В последние годы специалисты ТИНРО-Цен-тра используют шкалу стадий зрелости самок, предложенную А.М. Привалихиным (1998). Автор приводит достаточно подробное описание 10 стадий зрелости (от II до VI-ПI) гонад самок минтая с указанием: внешнего вида желез, размера, веса и цвета яичников, состояния кровеносной системы, оболочки. Шкала снабжена фотографиями гистологических срезов и нефиксированных ооцитов с бинокуляра. Приводятся сведения о ГСИ самок разных стадий. В качестве оценки биологического состояния самок минтая принимаются следующие стадии зрелости гонад: II — неполовозрелые, П-Ш — созревающие (гонады занимают до 1/3 полости тела), III — половозрелые созревающие впервые (яичники занимают около 2/3 полости тела), III-V — дальнейшее созревание (впервые и повторно созревающие яичники занимали до 3/4 полости тела), IV — преднерестовые (длина яичников до 25% размера самки), IV-V — созревающие преднерестовые, V — текучие нерестовые,

VI — только что отнерестившиеся, VI-П — отнерестившиеся достаточно давно, VI-ПI — после-нерестовые созревающие.

Стадию автор предложил разбить на

3 подстадии:

IV-Va — яичники минтая содержат до 10% овулировавших икринок. Внешне очень похожа на стадию IV. Выявить принадлежность к стадии IV-Va можно, только вскрыв гонаду.

^^Ь — количество икринок составляет 50% и более от ооцитов текущего года размножения. По мере прохождения овуляции, периферийный слой желтковых ооцитов становится все тоньше, сквозь него видны отдельные гидратированные икринки.

^^с — яичники заполнены овулировавшими икринками примерно на 90%. Эта подстадия характерна для завершающих этапов созревания яичников. Желтковые ооциты в краниальной части гонады практически отсутствуют.

Считаем, что такое разделение стадии не корректно, с точки зрения особенностей размножения минтая, и отражает лишь изменение относительного количества зрелых ооцитов. Как упоминалось в первой части работы, из-за асинхрон-ности гидратации икра выметывается микропорциями, число которых может достигать 20. Следовательно, если количество овулировавших икринок составляет 50% и более, то, скорее, это стадия завершающих этапов нереста.

Согласно предлагаемой классификации, гонады самок, отнерестившихся в текущем году, в летний период следует обозначать VI-Ш стадией. В отличие от III стадии, которая характерна для впервые созревающих рыб, оболочка гонад у таких особей имеет матовый оттенок, что связано с ее утолщением.

Как и в большинстве других шкал, в ней указывается, что самки с гонадами на V стадии зрелости редко встречаются в уловах из-за кратковременности ее прохождения и преждевременного выме-та зрелой икры еще в трале. По наблюдениям автора, схожими внешними признаками обладают гонады рыб с тотальной резорбцией развивающихся ооцитов. Последние отличаются по цвету — от серо-зеленого до красновато-бурого. Правильно отмечено, что таких самок в летне-осенний период можно ошибочно принять за нерестящихся.

Таким образом, шкалы стадий зрелости гонад минтая, разработанные отечественными исследователями, достаточно существенно отличаются как от иностранных аналогов, так и между собой, что во многом объясняется разными взглядами ученых на процессы созревания и нереста этого вида. Во всех представленных шкалах, в меньшей или большей степени, используется стандартный набор диагностических признаков: величина гонад, размеры (диаметр), цвет и прозрачность ооцитов (для самок), наличие, локализация и консистенция спермы (для самцов). Многочисленные прочие признаки имеют вспомогательное значение и только дополняют основные: консистенция гонад (плот-

ные, упругие, мягкие, дряблые), цвет гонад, который зависит от характера и степени пигментации и от толщины оболочки, состояния половых клеток, а также состояния кровеносных сосудов гонады. Цвет, обусловленный состоянием сосудистой системы, может существенно меняться в уловах разными орудиями лова. Кроме того, он зависит от глубины лова и величины улова как фактора механического воздействия на рыб и т. д.

Учитывая вышеизложенное, считаем вопрос создания унифицированной, по крайней мере, среди российских специалистов, шкалы стадий зрелости гонад минтая актуальным. В данной работе предлагается шкала стадий зрелости самок и самцов, при разработке которой исходили из следующих представлений.

В развитии и функционировании яичников и семенников рыб имеются существенные различия. Каждая стадия развития гонад самок характеризуется качественно специфичным именно для нее состоянием ооцитов, а главным критерием для определения стадий зрелости яичников является состояние наиболее развитых ооцитов (старшей генерации). Особенности внешнего облика гонад в значительной степени зависят от изменения количества, размеров, цвета и прозрачности ооцитов в ходе их развития и потому могут использоваться в качестве вспомогательных диагностических признаков стадий зрелости. Кроме того, многие признаки, такие, например, как цвет гонад, внешний вид оболочки и другие, носят субъективный характер и зависят от опыта наблюдателя, освещения и др. У самцов зрелые половые клетки (спермии) появляются уже на III стадии зрелости. Различия между этой и последующими стадиями зрелости в большей мере количественные, чем качественные. Стадии зрелости половозрелых самцов определяет не состояние половых клеток старшей генерации, а количественное соотношение разных элементов сперматогенного ряда.

Дополнительно авторами статьи подготовлен к печати «полевой» определитель стадий зрелости гонад минтая, снабженный цветными фотографиями внешнего вида яичников и семенников разных стадий внутри и вне полости тела, микроскопической картины под бинокуляром и гистологических срезов. Помимо этого, есть групповые фотографии гонад каждой стадии, демонстрирующие вариации размеров, цвета в зависимости от длины рыб. Определитель также содержит описание (с фотографиями) различных отклонений в нормальном развитии гонад минтая. Для удобства применения он снабжен словарем использованных терминов.

Шкала стадий зрелости гонад минтая

Ювенильные (неполовозрелые).

Анатомическое оформление гонад не завершено, по макроскопическим признакам гонад пол не различим.

При работе с сеголетками и молодью минтая в лабораторных условиях при хорошем освещении, наличии достаточного опыта или при помощи оптики пол можно определить у рыб длиной более 7 см. В полевых условиях идентифицировать пол с вероятностью 50% возможно у рыб длиной более 14 см, 99% — более 18 см.

Ювенильную стадию минтай обычно проходит в течение первого года жизни.

Самки

II стадия (неполовозрелые, девственные).

Завершена анатомическая дифференцировка гонад, пол визуально различим.

Диагноз. Яичники маленькие, но хорошо заметные, упругие. Размеры, масса, цвет гонад зависят от длины рыбы. Наиболее характерный цвет гонад

— матово-серый или слегка оранжевый. Оболочка тонкая, прозрачная. Овариальная полость без свободного просвета. Ооциты визуально не различимы.

Микроскопическая картина. Яичники содержат только превителлогенные ооциты. Все клетки оптически прозрачны. Ядро хорошо заметно и четко выражено. Диаметр ооцитов изменяется от 10 до 250 мкм, а наибольшее количество клеток (около 76%) представляют мелкую фракцию размерами до 100 мкм.

ГСИ изменяется от 0,1 до 0,7% (среднее — 0,4%).

Встречаются круглогодично, в размножении участия не принимают.

П-Ш стадия (половозрелые, созревающие впервые).

На этой стадии начинает формироваться фонд ооцитов для будущего нереста, представляющий величину индивидуальной плодовитости.

Описание. Яичники маленькие, но хорошо заметные, упругие. В отличие от стадии II, цвет гонад — от светло- до темно-оранжевого. Оболочка яичников тонкая, прозрачная. Овариальная полость без свободного просвета. Ооциты визуально не различимы.

Микроскопическая картина. Клетки представлены прозрачными ооцитами (диаметр до 153280 мкм), слегка желтоватыми (150-375 мкм) и непрозрачными желтковыми (193-649 мкм).

Самки минтая с гонадами на П-Ш стадии зрелости встречаются в уловах круглогодично. Иден-

тификация этой стадии в преднерестовый период визуально затруднительна, поэтому в это время ее выделять не рекомендуется. Напротив, в постне-рестовый период популяции стадия П-Ш хорошо идентифицируется по макроскопическим признакам: отличается от стадии II большей массой гонад, цветом (слегка оранжевые) и значением ГСИ (в 3-4 раза). Разделение ооцитов текущей генерации от резервной не наблюдается.

ГСИ варьирует от 0,7 до 3,5% (среднее — 1,4%).

У рыб, которые будут нереститься в текущем (ближайшем) нерестовом сезоне, гонады из стадии П-Ш переходят в стадию III.

III стадия (половозрелые, впервые и повторно созревающие, преднерестовые).

Описание. Гонады занимают до 1/2 брюшной полости. Упругие, цвет от оранжевого до бурого. Оболочка яичников тонкая, прозрачная, у созревающих повторно — утолщенная, матовая. Овариальная полость без свободного просвета. На срезе заметна зернистость, но отдельные икринки не различимы.

Микроскопическая картина. Половые клетки представлены мелкими прозрачными ооцитами таких же размеров, как и на стадии П-Ш, и желтыми мутными или непрозрачными ооцитами. Слегка желтоватых клеток не наблюдается. Отмечается четкое разделение ооцитов на текущий и резервный фонды. Самые крупные клетки увеличиваются в диаметре до 710 мкм.

ГСИ варьирует от 1,4 до 5,4%, при среднем значении 3,3%.

Встречаются в преднерестовый период. Будут нереститься в текущем сезоне.

IV стадия (половозрелые, преднерестовые).

Описание. Гонады занимают всю свободную

полость тела. Упругие, желто-оранжевые - желтые. Оболочка яичников тонкая, прозрачная. На срезе хорошо заметны крупные желтые икринки, легко отделяющиеся друг от друга. Овариальная полость без свободного просвета.

Микроскопическая картина. Среди ооцитов есть две резко различающиеся по диаметру группы. Одну из них представляют ооциты резервного фонда. Они прозрачные с хорошо заметным ядром. Размеры клеток достигают 327 мкм, но основное их количество (65%), по-прежнему, составляют мелкие ооциты диаметром до 100 мкм. Доля желтковых ооцитов равна около 20%, но не все они достигли дефинитивных размеров. Диаметр непрозрачных наполненных желтком ооцитов варьирует от 452 до 1255 мкм, составляя, в среднем, 860 мкм.

ГСИ изменяется в широких пределах: от 1,8 до 30,6%, а в среднем равен 17,8%.

Наиболее часто встречаются в преднерестовый и нерестовый периоды. Будут нереститься в текущем сезоне.

V стадия (половозрелые, нерестовые).

Описание. В зависимости от того, на каком этапе многократно повторяющегося нереста находится самка — в начале, середине или ближе к его концу, а также на какой стадии процесса дозревания икринок — гидратации, овуляции или вымета— находятся яичники рыб, внешний вид гонад сильно различается.

На начальных этапах нереста они занимают всю свободную полость тела. Гонады упругие, желтые - светло-желтые. Оболочка тонкая, прозрачная, сквозь которую среди массы желтковых ооцитов видны отдельные гидратированные икринки.

В середине икрометания большая часть яиц в яичниках представлена гидратированными, а не желтковыми ооцитами. Объем гонад уменьшается. Они становятся слегка мягкими. Цвет яичников изменяется от желтого до темно-желтого. Оболочка растянутая, прозрачная. Овариальная полость выражена.

По мере вымета очередной порции яичники уменьшаются в размерах, становятся все более дряблыми, приобретают красно-бурый оттенок. Овариальная полость с заметным просветом, который все более увеличивается после вымета очередной порции. Между яйценосными пластинами могут быть оставшиеся прозрачные икринки.

На завершающих этапах нереста в яичниках остаются, в основном, гидратированные икринки. Гонады мягкие, слегка дряблые. Цвет яичников от темно-желтого до бурого. Оболочка тонкая, прозрачная. В незначительном количестве могут отмечаться желтковые ооциты, которые в дальнейшем будут резорбироваться.

Если исследования рыбы пришлись на процесс овуляции ооцитов, то икра выделяется при легком надавливании на брюшко.

Микроскопическая картина. Фонд половых клеток составляют прозрачные ооциты резервного фонда диаметром до 311 мкм и желтковые, гидратированные, либо овулированные ооциты. Размеры желтковых клеток варьируют от 912 до 1330 мкм, гидратированных — от 964 до 2080 мкм, овулированных — от 1335,8 до 2235,3 мкм. По краю яйценосных пластин находятся фолликулярные оболочки.

ГСИ изменяется в очень широких пределах: от

10,0 до 74,0% (среднее значение — 27,7%).

Характерная стадия для нерестового периода.

VI стадия (половозрелые, недавно отнерестившиеся).

Описание. Гонады занимают до 1/3 полости тела. Дряблые, воспаленные, красно-бурого цвета. Оболочка утолщенная, плотная, непрозрачная, с белесым налетом. Овариальная полость с большим просветом. Внутри нее заметны сгустки крови и остатки не выметанных икринок, которые впоследствии будут резорбироваться. В яйценосных пластинах могут быть отдельные гидратированные и не достигшие дефинитивного размера желтковые ооциты.

Микроскопическая картина. В яичниках присутствуют мелкие прозрачные клетки размерами до 278,8 мкм и большое количество фолликулярных оболочек. Ооцитов с желтоватым оттенком не наблюдается. Могут встречаться не выметанные гидратированные икринки, редко — резорбирую-щиеся желтковые клетки.

ГСИ варьирует от 1,9 до 8,1%, при среднем значении, равном 3,9%.

Наиболее часто встречаются во время нереста и сразу после его завершения.

VI-II стадия (половозрелые, отнерестившиеся давно).

Описание. Гонады по размерам меньше, чем на VI стадии, упругие, беловатого цвета. Оболочка утолщенная, плотная, непрозрачная, с белесым оттенком. Внутри гонад наблюдаются ликвидация последствий нереста (нет оставшихся икринок и сгустков крови) и рост половых клеток новой генерации. В овариальной полости просвет слабо выражен.

Микроскопическая картина. Хорошо заметны следы нереста: кусочки соединительной ткани, фолликулярные оболочки. В яичниках отмечены прозрачные ооциты и небольшое количество мутных ооцитов. Их наибольший диаметр достигает 439 мкм.

ГСИ изменяется от 1,5 до 3,3% (среднее — 2,2%).

Рыбы с гонадами на этой стадии встречаются в нерестовый и постнерестовый периоды.

Самцы

II стадия (неполовозрелые, девственные).

Описание. Семенники слабо заметны, особенно у рыб длиной менее 30 см. Гонады имеют вид двух тонких полупрозрачных ленточек вдоль позвоночника в районе анального отверстия. По краям наблюдается волнистость. Цвет — от серого до розового.

ГСИ варьирует от 0,03 до 0,3%, при среднем показателе — 0,1%.

Встречаются круглогодично, в размножении участия не принимают.

III стадия (половозрелые, впервые и повторно созревающие, преднерестовые).

Описание. Гонады увеличиваются в размерах и к концу стадии занимают около половины брюшной полости. Плотные, упругие. В центральной части семенников сохраняется серый, серо-розовый цвет, сходящийся на полупрозрачный к краям гонад. При поперечном разрезе сохраняют форму. Семенные каналы не заполнены.

ГСИ изменяется от 0,4 до 10,5%, в среднем —

3,1%.

Встречаются в преднерестовый период, будут нереститься в текущем сезоне.

IV стадия (половозрелые, преднерестовые).

Диагноз. Семенники занимают всю свободную

от других органов полость тела, плотные, упругие. Цвет гонад — белый или бело-розовый. На срезе не сохраняют форму, оплывают, выделяя густую сперму. В семенных каналах есть семенная жидкость со спермиями, а в выводном протоке спер-миев нет.

ГСИ варьирует от 1,7 до 19,9%, в среднем —

9,0%.

Наиболее часто встречаются в преднерестовый и нерестовый периоды. Будут нереститься в текущем сезоне.

V стадия (половозрелые, нерестовые).

Описание. На начальных этапах нереста гонады занимают всю свободную полость тела. Чем ближе завершение нереста, тем меньшим остается объем гонад. Они становятся мягкими. Цвет изменяется с молочно-белого на грязно-белый, коричневый. На гонадах видны красноватые, бурые или коричневые пятна.

Семенные каналы и выводной проток забиты зрелой спермой. При нажатии на брюшко или при порезе семенников ножом сперма свободно выливается.

ГСИ изменяется от 3,9 до 12,9%, составляя, в среднем, 8,1%.

В зависимости от физиологического состояния особи нерест может продолжаться от нескольких дней до месяца.

VI стадия (половозрелые, недавно отнерестившиеся).

Описание. Семенники маленькие, занимают около 1/3 полости тела. На ощупь мягкие, дряблые. Цвет гонад грязно-серый, серо-красный с прожилками кровеносных сосудов. Могут сохраняться

мелкие белые пятна — остатки спермы. На поперечном разрезе может выделяться небольшое количество остаточной спермы.

Среднее значение ГСИ — 1,5%, при вариациях от 0,7 до 3,7%.

Встречаются в период нереста и сразу по его завершении.

VI-II стадия (половозрелые, отнерестившиеся давно).

Описание. Гонады имеют вид VI стадии, но уже частично или полностью восстановившиеся после нереста. Семенники коричневого или серого цвета, без остатков спермы. Вновь приобретают упругость.

ГСИ изменяется в пределах 0,6-1,5%, при среднем значении — 0,9%.

Встречаются в нерестовый и постнерестовый периоды.

Некоторые количественные критерии определения биологического состояния минтая

Зачастую в полевых условиях у исследователей возникают трудности в идентификации неполовозрелых (стадия II) и начавших созревание рыб (стадия II-III), неполовозрелых и отнерестившихся (VI-II стадия) особей. В этой связи неоднократно предпринимались попытки подобрать критерии, по которым можно было бы безошибочно различать рыб разного состояния.

H. Yoshida и Т. Yoon (1981) предложили использовать длину тела и величину ГСИ в качестве количественного критерия для разделения в летнеосенний период нерестившихся и не нерестившихся рыб в поверхностных слоях акватории Берингова моря. У самцов граничные значения, соответственно, равны 35 см и 0,2%, у самок — 39 см и 1,0% (табл. 2).

Y. Sakurai (1989, 1993) указывал на возможность использования ГСИ в качестве надежного критерия для разделения неполовозрелых и половозрелых рыб, незрелых и постнерестовых. В частности, к половозрелым рыбам этот автор рекомендует относить самок минтая с гонадами на стадии раннего формирования желтка и ГСИ, больше или равным 2,5; самцов — на стадии сперма-тоцитов с ГСИ, больше или равным 1,0. Поскольку в летний период в яичниках самок присутствуют желтковые ооциты диаметром более 0,3 мм, этот показатель также можно включить в число диагностических критериев. Но наиболее оптимальным периодом для разделения таких рыб, по мнению автора, являются 2 месяца до нереста.

J.P. Stahl, G.H. Kruse (2008) показали, что ГСИ является достаточно надежным критерием для разделения половозрелых и неполовозрелых рыб. На представленном в работе графике зависимости этого параметра от длины минтая четко заметен разрыв в значениях между 3,8 и 6,9%. Примерно 74% исследованных гонад по гистологической картине отнесены авторами к половозрелым рыбам, а ГСИ располагался выше разрыва. Для всех рыб, яичники которых были однозначно классифицированы как неполовозрелые, ГСИ располагался ниже разрыва и был меньше или равен 1. Этот показатель авторы и предложили использовать в

качестве критерия разделения неполовозрелых и половозрелых самок минтая.

В своей работе мы исследовали возможность использования ГСИ для дополнительной идентификации рыб по стадиям зрелости гонад. По нашим данным, если ГСИ самок на II стадии изменяется от 0,1 до 0,7, а в среднем составляет 0,4%, то на ІІ-ІІІ — от 0,7 до 3,5%, при среднем значении 1,4% (рис. 27). Еще больше по этому индексу отличаются самки УІ-ІІ стадии: ГСИ варьирует от 1,5 до 3,3, а в среднем равен 2,2%.

Таким образом, в качестве критерия для разделения неполовозрелых (ІІ стадия) и половозре-

Длина,

Рис. 27. Значения ГСИ самок минтая с гонадами на ІІ и ІІ-ІІІ (А), ІІ и УІ-ІІ (Б) стадиях зрелости

лых (II-III и более стадии) самок, неполовозрелых и отнерестившихся рыб (VI-II стадия) можно рекомендовать значение ГСИ, равное 0,7%.

Значение ГСИ у самцов на стадии II изменяется от 0,03 до 0,3% (среднее — 0,i%), а на стадии VI-II — от 0,б до І,5% (среднее — 0,9%). Как видим, между крайними значениями есть разрыв

в 0,3% (рис. 28). Критерием для разделения половозрелых и неполовозрелых самцов является значение ГСИ, равное 0,3%. Полученные данные достаточно близки к результатам других исследователей (табл. 2).

Следует, однако, иметь в виду, что использование ГСИ в качестве критерия для разделения не-

Таблица 2. Граничные значения ГСИ минтая для разделения неполовозрелых и половозрелых, неполовозрелых и отнерестившихся рыб

Проблема Граничное значение ГСИ Авторы

Самки Самцы

Залив Функа

Разделение неполовозрелых

и половозрелых рыб 2,5 i,0 Yoon, 1981; Sakurai, 1989

Центральная часть Берингова моря

Разделение неполовозрелых и отне-

рестившихся рыб i,0 0,2 Yoshida, Yoon, 1981

Восточная часть Берингова моря

Разделение неполовозрелых и поло-

возрелых рыб i,0 - Stahl, Kruse, 2008

Восточная Камчатка

Разделение неполовозрелых и поло-

возрелых рыб, неполовозрелых

и отнерестившихся рыб 0,7 0,3 Наши данные

30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66

Длина, см

S

и

1,6 1,4 1,2 1,0 Н 0.8 0,6 -0,4 -0,2 -0,0

о VI II

о

о

о о

л о °

о о

0,3

Т I I I I I I I I I I I I I I I I I

30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66

Длина, см

Рис. 28. Значения ГСИ самцов минтая: неполовозрелых (нз) и половозрелых (пз) (А), с гонадами на ІІ и УІ-ІІ (Б) стадиях зрелости

половозрелых и половозрелых рыб на практике возможно только в лабораторных условиях, т. к. требует точного взвешивания гонад особей (до сотых долей грамма), что в морских условиях сделать невозможно. Кроме того, очевидно, этот показатель отличается у представителей разных популяций минтая (табл. 2).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

У неполовозрелых самок в железах все ооциты проходят последовательные фазы периода прото-плазматического роста. Увеличение диаметра ооцитов происходит за счет увеличения объема цитоплазмы. В железах самцов происходит размножение сперматогоний и сперматоцитов. Появление мутных ооцитов в железах самок и формирование сперматид у самцов свидетельствует о начавшемся половом созревании.

Не все вителлогенные ооциты в яичнике по развитию находятся в одной фазе желткового накопления. В начале созревания — на П-Ш стадии — в яичниках присутствуют ооциты фаз вакуолизации и накопления желтка. Ооциты увеличиваются в размерах не только благодаря увеличению объема цитоплазмы, но и в результате накопления трофических веществ. Переход на III стадию характеризуется отсутствием ооцитов фазы вакуолизации, но наличием клеток с разным накоплением желтковых гранул: от начала отложения желтка до половины и даже более заполненного желтком ооцита. Тогда же происходит разделение ооцитов расходной генерации и резервного фонда половых клеток. В железах самцов сперматиды преобразуются в сперматозоиды.

Ооциты в железах III-IV и IV стадий отличаются от таковых III стадии только количеством отложенного желтка. На стадии IV-V происходят качественные изменения состояния ооцитов. Достигшие дефинитивных размеров ооциты гидратируются, затем происходит овуляция, и эти процессы повторяются до тех пор, пока вся зрелая икра не будет выметана. В семенниках нерестовых самцов продолжается процесс образования сперматозоидов, выход из цист, разжижение и вымет.

В яичниках отнерестившихся самок вместе с многочисленными фолликулярными оболочками и овариальной жидкостью могут оставаться резор-бирующиеся желтковые и гидратированные клетки, а в семенниках — ампулы с остаточной спермой. Размеры превителлогенных ооцитов увеличиваются, и не более чем через месяц в наиболее крупных ооцитах образуются вакуоли, а вскоре начинается отложение желтка.

По мере созревания гонад самок, в железах увеличиваются размеры лидирующих в развитии превителлогенных ооцитов.

В течение года половозрелый минтай проходит следующие периоды:

- период созревания гонад (стадии зрелости II-

III, III, IV). У впервые созревающих рыб эти стадии наблюдаются около І года, у повторно созревающих рыб весь период вителлогенеза занимает около S месяцев;

- период нереста (стадия V), продолжается І-2 месяца;

- постнерестовый период, или период восстановления гонад (стадии VI, VI-II), длится 2-3 месяца.

В результате исследования предложена шкала стадий зрелости гонад минтая, включающая определение 7 стадий, характеризующих развитие половых желез самок, и б стадий — самцов.

В работе исследованы критерии для разделения самцов и самок разных стадий зрелости по ГСИ. В частности, для разделения неполовозрелых (II стадия) и половозрелых (II-III и более стадии) самок, неполовозрелых и отнерестившихся рыб (VI-II стадия) рекомендовано значение ГСИ, равное 0,7%. Критерием для разделения самцов на стадиях II и VI-II является значение ГСИ, равное 0,3%.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Балыкин n.A. І9SS. О количестве порций икры, выметываемых минтаем // Вопр. ихтиологии. Т. 2S. Вып. 2. С. 33І-332.

Волкова О.В., Елецкий Ю.К. i9S2. Основы гистологии с гистологической техникой. М.: Медицина, 304 с.

Воронина Э.A., Привалихин A.М. i9SS. Особенности созревания и формирования плодовитости минтая Theragra chalcogramma (Pallas) Берингова моря // Тез. докл. IV Всерос. конф. по раннему онтогенезу рыб. М: ВНИРО. Ч. І. С. 45-47.

Вышегородцев ВЛ. 19S6. Минтай северной части Охотского моря: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. М.: ВНИРО, 25 с.

Горбунова Н.Н. І954. Размножение и развитие минтая // Тр. ИОАН СССР. Т. ІІ. С. І39-І95.

Дроздов A.Л., Иванков В.Н. 2000. Морфология гамет животных. Значение для систематики и филогенетики. М.: Круглый год, 4б0 с.

Елисеев В.Г. І959. Основы общей гистологии и гистологическая техника. М.: Наука, 27 І с.

Зверькова Л.М. І97І. Размножение минтая у ЮгоЗападного Сахалина // Изв. Тихоокеан. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Т. 7б. С. б2-75.

Зверькова Л.М. І973. К вопросу о нересте минтая в северной части Японского моря // Исследования по биологии рыб и промысловой океанографии. Владивосток: ТИНРО. Вып. 4. С. І29-І34.

Зверькова Л.М. І977. Созревание, плодовитость и районы размножения минтая Theragra chalcogramma (Pallas) в северо-восточной части Японского моря // Вопр. ихтиологии. Т. І7. Вып. 3. С. 4б2-4б8.

Зверькова Л.М. І980. Особенности размножения минтая в северо-западной части Тихого океана // Распределение и рациональное использование водных зооресурсов Сахалина и Курильских островов. Владивосток: ТИНРО. С. б5-7б.

Зверькова Л.М. І988. Особенности оогенеза и полового цикла минтая // Тез. докл. 4-й Всес. конф. по раннему онтогенезу рыб. Ч. І. Мурманск. С. І00-І02.

Зверькова Л.М. 2003. Минтай. Биология, состояние запасов. Владивосток: ТИНРО, 248 с.

Иванков В.Н. І987. Строение яйцеклеток и систематика рыб. Владивосток: ДВГУ, Іб0 с.

Казанский Б.Н. І949. Особенности функции яичника и гипофиза у рыб с порционным икрометанием // Тр. лаб. основ рыбоводства. Т. 2. Л.: ЛГУ. С. І2І-І39.

Качина Т.Ф., Сергеева Н.П. І978. Методика расчета нерестового запаса восточноохотского минтая // Рыб. хоз-во. № І2. С. І3-І4.

Лисовенко ЛЛ. І997. Современные представления об оогенезе морских рыб и механизмах формирования количественных репродуктивных параметров // Тез. докл. I конгресса ихтиологов России. М.: ВНИРО, 254 с.

Лисовенко ЛЛ. 2000. Размножение рыб с прерывистым оогенезом и порционным нерестом на примере минтая Западной Камчатки. М.: ВНИРО, ІІІ с.

Матишов Г.Г., Журавлева Н.Г., Оттесен О. (Оddvar Ottesen), Кириллова Е.Э. 20І0. Локализация первичных половых клеток личинок трески Баренцева моря // Докл. Академии наук. Т. 430. № б. С. 84І-843.

Мейен В.А. 1939. К вопросу о годовом цикле изменений яичников костистых рыб // Изв. АН СССР. Сер. Биология. № 4. С. 389-420.

Овен Л.С. 1976. Особенности оогенеза и характер нереста морских рыб. Киев: Наукова думка, 132 с.

Персов Г.М. 1966. Ранний период гаметогенеза у проходных лососей / Воспроизводство и акклиматизация лососевых в Баренцевом и Белом морях. М.: Наука. С. 31-36.

Персов Г.М. 1975. Дифференцировка пола у рыб. Л.: ЛГУ, 148 с.

Привалихин А.М. 1998. Воспроизводительная способность минтая Theragra chalcogramma (Pallas): Автореф. дис. ... канд. биол. наук. М.: ВНИРО, 24 с.

Привалихин А.М., Полуэктова О.Г. 2002. Изучение механизмов резорбции развивающихся ооцитов у минтая Theragra chalcogramma (Pallas) // Тр. Всес. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Т. 141. С. 247-259.

Сакун О.Ф., Буцкая Н.А. 1963. Определение стадий зрелости и изучение половых циклов рыб. М.: Знание, 36 с.

Сергеева Н.П. 1981. Плодовитость восточноохотоморского минтая // Экология, запасы и промысел минтая. Владивосток: ТИНРО. С. 73-78.

Сорокин В.П. 1957. Оогенез и половой цикл у трески (Gadus morhua morhua L.) // Тр. Полярн. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 10. С. 125-144.

Фадеев Н.С. 1981. Сроки размножения и нерестовых подходов минтая // Экология, запасы и промысел минтая. Владивосток: ТИНРО. С. 3-18.

Фадеев Н.С. 1987. Нерестилища и сроки размножения минтая северной части Охотского моря // Популяционная структура, динамика численности и экология минтая: Сб. науч. тр. Владивосток: ТИНРО. С. 5-23.

Шатуновский М.И. 1980. Экологические закономерности обмена веществ морских рыб. М.: Наука, 283 с.

Широкова М.Я. 1971. Особенности раннего оогенеза балтийской трески // Тр. Атлант. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Т. 35. С. 114-123.

Широкова М.Я. 1977. Особенности полового созревания самок балтийской трески Gadus morhua callarias L. // Вопр. ихтиологии. Т. 17. Вып. 4 (105).

С. 650-658.

Шунтов В.П., Волков А.Ф., Темных О.С., Дуле-пова Е.П. 1993. Минтай в экосистемах дальневосточных морей. Владивосток: ТИНРО, 426 с.

Hinckley S. 1987. The reproductive biology ofWalleye Pollock, Theragra chalcogramma, in the Bering Sea with reference to spawning stock structure // Fish. Bull. US. Vol. 85. № 3. P. 481-498.

Maeda T., Hirakawa H. 1977. Spawning grounds and distribution pattern of Alaska Pollack in the eastern Bering Sea // Bull. Jpn. Sci. Fish. Vol. 38. P. 362-371.

Sakurai Y. 1983. Reproductive behavior of Walleye Pollock in captivity // Aquabiology. № 5. P. 1-7.

Sakurai Y. 1989. Reproductive characteristics of Walleye Pollock with special reference to ovarian development, fecundity and spawning behavior // Symp. Biol. Mgmt. Walleye Pollock. Alaska Sea Grant. Vol. 89. P. 97-115.

Sakurai Y. 1993. Reproductive characteristics and spawning strategies of Walleye Pollock, Theragra chalcogramma // Sci. Rep. Hokk. Fish. Exp. St. № 42. P. 51-68.

Smith G.B. 1979. The biology of walleye Pollock // Fish. oceanogr. Eastern Bering Sea shelf. Seattle, Northwest and Alaska Fish. Center. P. 213-279.

Stahl J.P., Kruse G.H. 2008. Classification of Ovarian Stages of Walley Pollock (Theragra chalcogramma) // Resiliency of Gadid Stocks to Fishing and Climate Change. Alaska Sea Grant College Programm. AK-SG-08-01. P. 1-23.

Tanino Y., Tsujisani H., Nakamichi K., Kyushin K. 1959. On the maturity of Alaska Pollock, Theragra chalcogramma (Pallas) // Bull. Hokk. Reg. Fish. Res. Lab. № 20. P. 145-164.

Voronina Eh.A., Privalikhin A.M., Suchkova M.G. 1990. Fecundity of walleye pollock, Theragra chalcogramma (Pallas), from the Bering Sea // Proc. Intern. Sci. Symp. on Bering Sea Fish. April 2-5, Khabarovsk, USSR, 61 p.

Yoon T.H. 1981. Reproductive cycle of female walleye Pollock, Theragra chalcogramma (Pallas), in the adjacent waters of Funka, Hokkaido // Bull. Fac. Fish. Hokk. Univ. V. 32. № 1. P. 22-38.

Yoshida H., Yoon T.H. 1981. Maturity and identification of the post-spawner of walleye pollock, Theragra chalcogramma (Pallas), in the surface layer of the central Bering Sea in summer // Bull. Fac. Fish. Hok. Univ. V. 32 (4). P. 329-337.