CC BY
25
Серия «Биология. Экология»
2011. Т. 4, № 4. С. 46-52 Онлайн-доступ к журналу: http://isu.ru/izvestia
И З В Е С Т И Я
Иркутского
государственного
университета
УДК 579.84:597.552.51(282.256.341)
Высокочувствительная детекция возбудителей бактериального язвенного синдрома байкальского омуля Coregonus migratorius (Georgi, 1775)
Е. В. Дзюба1, Н. Н. Деникина1, Е. В. Суханова1, М. П. Белых2,1 ,
И. В. Ханаев1, Н. М. Пронин3, Н. Л. Белькова1,2
1 Лимнологический институт СО РАН, Иркутск
2 Иркутский государственный университет, Иркутск
3 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ E-mail: [email protected]
Аннотация. Апробированы высокочувствительные методы детекции возбудителей бактериального язвенного синдрома байкальского омуля. В обширных язвенных поражениях внешних покровов байкальского омуля детектированы микроорганизмы филы Цитофаги-Флавобактерии, рода Aeromonas, а также паразитический гриб Saprolegnia ferax. Предполагается, что важнейшими экологическими факторами, определяющими эпизоотическую ситуацию в популяции омуля, являются физиологическое состояние рыб после длительного подлёдного периода с низкой интенсивностью питания, температура воды и плотность стада в период нагула. Обсуждается необходимость проведения микробиологического и паразитологического мониторинга как составляющей части контроля состояния здоровья важнейших видов гидробионтов в озере Байкал.
Ключевые слова: байкальский омуль, бактериальный язвенный синдром, молекулярно-генетические методы, миксинфекция, Aeromonas, Flavobacterium, Saprolegnia ferax.
Введение
Определение таксономического состава и функциональной значимости различных микроорганизмов, в том числе патогенных, и изучение факторов, влияющих на их вирулентность, являются приоритетными направлениями в исследованиях микробиоты рыб и других гидробионтов.
Микроорганизмы, вызывающие язвенные поражения внешних покровов рыб, широко распространены в различных водных экосистемах. Проявления их патогенности связаны с изменениями ряда параметров среды обитания и характеристик состояния рыбного населения. В связи с этим определение ключевых индикаторных видов патогенных агентов в конкретных водоёмах и разработка современных методов их детекции являются актуальной и важной задачей.
Ввиду комплексной этиологии заболеваний внешних покровов рыб проведение идентификации микроорганизмов связано с рядом трудностей: возбудители инфекций часто относятся к нормальной микрофлоре водных сообществ и патогенные виды могут успешно «маскироваться» сапрофитными формами того же или
близкого по физиолого-биохимическим свойствам рода [18]; патогенные бактерии способны переходить в некультивируемое, но жизнеспособное состояние, сохраняя при этом свою вирулентность [10]; для культивирования некоторых микроорганизмов требуется длительное время, что затрудняет или делает невозможным своевременную организацию санитарнопрофилактических мероприятий. Множество современных сравнительных исследований посвящены оценке возможности использования молекулярно-генетических методов на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) для детекции и идентификации возбудителей инфекций [14; 18]. Прямой анализ маркерных фрагментов геномов позволяет избегать проблем культивирования и неспецифической детекции, а также эффективно и быстро выявлять целевые группы микроорганизмов в пробах биологического материала.
Байкальский омуль Coregonus migratorius (Оео^, 1775) считается достаточно хорошо изученным видом; постоянное внимание к его биологии определяется его экологической (ключевой вид в экосистеме) и экономической (основной промысловый вид оз. Байкал) значимостью. Известно, что язвенные поврежде-
ния внешних покровов байкальского омуля могут быть вызваны травмами, особенно в садках рыболовных заводов, и последующими поражениями грибами рода Saprolegnia и миксос-поридией Henneguya zschokkei - возбудителем «бугорковой болезни» сиговых рыб [13].
Цель настоящей работы заключается в отработке методов высокочувствительной детекции возбудителей бактериального язвенного синдрома рыб на примере байкальского омуля.
Материалы и методы
При проведении гидроакустической съёмки по учёту ресурсов байкальского омуля в рамках интеграционного проекта СО РАН № 6 «Закономерности поведения байкальского омуля и гидроакустическая оценка динамики его популяций как ключевого промыслового вида» осуществлён мониторинг состояния его популяций. Работы проводились с НИС «Г. Ю. Верещагин» 25 мая - 15 июня 2011 г. по всей акватории оз. Байкал. В качестве орудия лова использовался разноглубинный трал. Проведены 20 контрольных тралений. Общему биологическому анализу согласно стандартной методике [8] подвергнуты 1234 экз. байкальского омуля.
В открытых районах озера рыб с симптомами заболевания не отмечено. В Баргузин-
ском заливе (53,4339° с. ш. и 108,6859° в. д.) 4 июня 2011 г. было выполнено траление на горизонте глубин 215-220 м при температуре воды на поверхности от 2,6 до 4,6 °С. В составе улова обнаружены 12 экземпляров рыб с кровоизлияниями у оснований плавников и один с обширными язвенными поражениями внешних покровов (рис. 1). Общая длина данного экземпляра байкальского омуля прибрежной морфоэкологической группы составила 288 мм, масса 207,04 г. Непосредственно после отлова в лабораторных условиях были взяты соскобы и образцы тканей с пораженных участков тела рыбы, суммарная ДНК из них выделена с использованием коммерческого набора ДНК-сорб В (ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва) согласно протоколу производителя. Дальнейший молекулярно-генетический анализ проводили согласно ранее адаптированным методикам [7]. Фрагменты гена 16S рРНК амплифицировали как с универсальными, так и с групп-специфичными праймерами [1; 7]. Для лигирования полученных ампликонов использовали набор GeneJET™ PCR Cloning Kit (Fermentas, Литва). Компетентные клетки Escherichia coli (штамм XL-1) получали по методике трансформации СаС12-зависимых клеток.
Рис. 1. Байкальский омуль из тралового улова (зал. Баргузинский, 04.06.2011 г.) с язвенными поражениями внешних покровов и оснований плавников (А); внешний вид язвы на теле возле спинного плавника (Б)
Секвенирование осуществляли на автоматическом секвенаторе ABI310A (ABI PRISM 310 Genetic Analyzer) в Новосибирском приборном центре коллективного пользования СО РАН. Сравнительный анализ полученных последовательностей проводили с помощью пакета программ FASTA [25]. Проверка полученных последовательностей на наличие химерных структур проведена с использованием программы Pintail [17].
Результаты и обсуждение
Доля рыб с признаками заболевания из траловой пробы в районе Баргузинского залива составила 4 % от числа рыб в улове. Результаты ПЦР суммарной ДНК, выделенной из изъязвленных тканей байкальского омуля, на универсальных и групп-специфичных праймерах показали присутствие в ней ДНК представителей филы Цитофаги-Флавобактерии и рода Aeromonas (рис. 2). Кроме того, молекулярно-
генетическии анализ позволил определить в исследуемой ДНК последовательности фрагментов малой субъединицы рРНК митохондриального генома Saprolegnia ferax, несмотря на отсутствие внешних проявлений микоза. Микробиологический мониторинг водных объектов традиционно проводится классическими методами, в основе которых лежит культивирование на питательных средах. Ранее из воды и грунтов оз. Байкал были изолированы представители более двух десятков родов и сотен видов культивируемых гетеротрофных микроорганизмов, в том числе Acinetobacter,
Aeromonas, Alcali gene s, Bacillus, Corinebacte-rium, Erwinia, Escherichia, Flavobacterium, Micrococcus, Nocardia, Planococcus, Pseudomonas,
Rhodotorula, Vibrio, Xanthomonas и Zoogloea [5], среди которых не отмечены аэромонады и флавобактерии, патогенные для гидробионтов. Исследование микробных сообществ глубинных вод открытого Байкала молекулярногенетическими методами позволило выявить большое разнообразие прокариот разных таксономических групп и присутствие гетеротрофных бактерий в периоды интенсивного перемешивания вод, при этом патогенных представителей также не детектировали [12]. По сравнению с участками открытого Байкала в зонах мелководных заливов и устьевых участках рек зарегистрированы высокие значения общей численности бактерий и культивируемых гетеротрофов [6].
М ARC1 EUB ВЕТ1 ALF BLS1 PLA
ARC2 CYA ВЕТ2 ADF BLS2 CF
Рис. 2. Электрофореграмма продуктов амплификации суммарной ДНК из соскоба язвы байкальского омуля на групп-специфичных праймерах. ARC1 и ARC2 - Археи (600 и 625 п.н.); EUB - универсальные на ген 16S рРНК (900 п.н.); CYA - фила Цианобактерии (600 п.н.); BET1 и BET2 - класс Бета-протеобактерии (600 и 700 п.н.); ALF и ADF - классы Альфа- и Дельта-протеобактерии (500 и 1000 п.н.); BLS1 и BLS2 - фила Вирмикуты (1100 и 700 п.н.); PLA - фила Планктомицеты (600 п.н.); CF - фила Бактероидес (1050 п.н.); AH - Aeromonas hydrophila (686 п.н.); А - род Aeromonas (622 п.н.); PA - Pseudomonas anguilliseptica (439 п.н.). M - маркер молекулярного веса; (-) - отрицательный контроль. Стрелками указаны целевые ам-
пликоны
Использованная в работе система праймеров, специф ичных для гру ппы Цитофаги-Флавобактерии, позволяет амплифицировать до 75 % известных представителей рода Flavobacterium класса Flavobacteria, среди которых известен целый спектр патогенных для рыб микроорганизмов (Flavobacterium psychrophi-lum, F. columnare, F. branchiophilum). Один из вышеперечисленных видов, F. psychrophilum (син.: Cytophaga psychrophila, Flexibacter psyc-hrophilus) первоначально определён как типичный патоген, вызывающий язвы на теле и гниль плавников лососевых рыб при низких температурах (бактериальная холодноводная болезнь, англ. «viscéral myxobacteriosis» и/или «bacterial cold water disease» (BCWD), «coldwa-ter disease» (CWD) [16]). Инфицированные рыбы, как правило, имеют повреждения внешних покровов тела, разрушенные плавники и/или
обширные эрозии хвостового плавника, приводящие к обнажению мышц и позвоночника [19]. Болезнь у рыб обычно возникает при температуре воды 4-10 °С [4]. Наиболее восприимчивы к заболеванию искусственно воспроизводимые виды рыб семейств Salmonidae (роды Salvelinus, Parasalmo и Salmo), Coregonidae, Cyprinidae и Percidae [20]. Потенциальным резервуаром инфекции являются больные и мертвые рыбы, регистрируются горизонтальные и вертикальные пути её передачи [26].
Многие виды рода Aeromonas патогенны для позвоночных животных. Заболевания рыб, вызванные Aeromonas spp., в аквакультуре характеризуются высокой летальностью. Мезо-фильные аэромонады (A. hydrophila, A. caviae и
A. sobria) чаще всего поражают тепловодных прудовых рыб. Септицемия, вызываемая подвижными аэромонадами (A. hydrophila
(= А. formicans и А. liquefaciens), A. hydrophila subsp. dhakenis, A. jandaei, A. bestiarum, А. vero-nii, A. sobria (A. sobria biovar sobria и A. veronii biovar sobria)), отмечена у многих видов пресноводных рыб [15]. В последнее время появились данные о развитии тяжёлых поражений кожи у Oncorhynchus mykiss, инфицированной Aeromonas sрр. при температуре воды 4 °C, которые начинаются с появления локализованных депигментированных пятен, окружённых гиперемированными зонами, и приводят в итоге к потере чешуи, отторжению некротизиро-ванных тканей и образованию язв [24].
Вспышки язвенной болезни рыб неоднократно регистрировали в Чивыркуйском заливе
оз. Байкал: периодические заболевания окуня Perca fluviatilis; гибель щуки Esox lucius, вызванная возбудителем аэромоноза (акт экспертизы Бурятской республиканской научнопроизводственной ветеринарной лаборатории №114-119 от 15.07.05). В бассейне Байкала (оз. Гусиное) гибель рыб (щуки, окуня и леща Abramis brama) от острой формы язвенной болезни отмечали в 1983-1984, 1990 и 2004 гг. Возникновение эпизоотий в ряде случаев обусловлено интродукцией рыб, контаминированных специфичными патогенами [3; 9].
Представители рода Saprolegnia (S.
parasitica, S. diclina, S. monoica и S. ferax) часто рассматриваются не как сапрофиты, а как паразиты различных видов пресноводных рыб [21]. Они являются наиболее важными патогенами, так как вызванные ими заболевания наносят серьезный экономический ущерб аквакультуре рыб, а также способствуют снижению численности диких популяций лососевых по всему миру [21]. Изоляты Saprolegnia из лососевых рыб растут и воспроизводятся при низких температурах воды [22]. Фактором, способствующим заболеванию, является снижение иммунитета рыб в результате травмы, различных форм стресса и общего эндокринного статуса, а развитие инфекции может сильно варьировать из-за разницы в патогенности отдельных штаммов Saprolegnia [22].
Смешанные инфекции, вызванные вирусными, бактериальными, паразитарными возбудителями и F. psychrophilum, часто наблюдаются у различных видов рыб. F. psychrophilum часто встречается в сочетании с вирусом инфекционного гемопоэтического некроза (англ. «infectious hematopoietic necrosis virus») и грибами [23]. При проведении молекулярногенетической идентификации инфекционных агентов, ставших причиной массовой гибели
окуня из оз. Арахлей (Забайкальский край) в 2009 г. были детектированы генотипы бактерий родов Flavobacterium и Aeromonas, а также грибы рода Saprolegnia, подтверждена комплексная этиология заболевания [7].
Байкальский омуль - активно мигрирующий и сложноорганизованный в пространстве вид. Переход байкальского омуля от зимовки к весенне-летнему нагулу (миграции со склона в прибрежную зону и образование крупных скоплений с высокой плотностью) происходит при весеннем прогреве поверхностной воды до 4 °С и выше [2]. Эти особенности экологии в сочетании с физиологическим состоянием рыб после длительного подлёдного периода с низкой интенсивностью питания, высокой численностью гетеротрофов в устьевых и присклоновых зонах и оптимальной для развития возбудителей температурой воды, вероятно, могут являться факторами, способствующими возникновению и передаче инфекций внутри нагульных стад. Согласно данным молекулярногенетических исследований микрофлоры икры байкальского омуля в период инкубации было установлено наличие представителей рода Flavobacterium [11], что свидетельствует о возможности вертикального пути передачи инфекции, наряду с горизонтальной контаминацией в крупных скоплениях во время весенних миграций.
Заключение
С использованием высокочувствительных методов молекулярно-генетического анализа в язвенных поражениях внешних покровов байкальского омуля детектированы микроорганизмы филы Цитофаги-Флавобактерии, рода Aeromonas, а также паразитический гриб Saprolegnia ferax. Предложенный подход имеет ряд преимуществ: отсутствие длительных и трудоёмких стадий культивирования, одновременное выявление спектра патогенов и возможность ранней диагностики грибковых инфекций непосредственно в нативных образцах. Создание мультиплексной тест-системы комплексной диагностики на основе молекулярнобиологического подхода становится все более актуальным для проведения микробиологического и паразитологического мониторинга искусственно воспроизводимых и естественных популяций байкальского омуля. Результаты таких исследований позволят контролировать состояние промыслового и нерестового стад байкальского омуля и своевременно корректировать планы интродукционных и рыбоводных
мероприятий с целью минимизации отрицательных последствий для популяций байкальского омуля и экосистемы оз. Байкал в целом.
Авторы выражают искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории гидрологии и гидрофизики ЛИН СО РАН К. М. Кучеру и М. М. Макарову за предоставленные данные по температуре поверхностной воды и ценные консультации.
Работа выполнена при финансовой поддержке ГК № 16.512.11.2075 Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках Программы Президиума РАН «Биологическое разнообразие» проекты № 27.13 и Р 23.10.
Литература
1. Биоразнообразие бактерий на различных глубинах южной котловины озера Байкал, выявленное по последовательностям 16S рРНК / Л. Я. Денисова [и др.] // Микробиология. - 1999. - Т. 68, № . -С. 547-556.
2. Гидроакустический учёт ресурсов байкальского омуля / отв. ред.: В. И. Кудрявцев, Е. В. Дзюба // Справочники и определители по фауне и флоре озера Байкал. - Новосибирск : Наука, 2009. - 244 с.
3. Елизов В. И. Аэромоноз в регионе Байкала /
B. И. Елизов // Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии : материалы Всерос. конф. с междунар. участием. Улан-Удэ 5-10 сентября 2006 г. - Улан-Удэ, 2006. - Т. 2. - С. 151-154.
4. Ихтиопатология : учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений / Н. А. Головина [и др.]. - М. : Мир, 2003. - 448 с.
5. Качество воды озера Байкал, проблемы и перспективы её использования / В. В. Парфенова [и др.] // Водоочистка. Водоподготовка. Водоснабжение. - 2009. - Т. 1. - С. 48-54.
6. Микробиологический мониторинг
мелководных участков озера Байкал / О. П. Дагурова [и др.] // Вест. Бурят. ун-та. Сер.: Биология. - 2002. - № 4. - С. 124-127.
7. Определение индикаторных микроорганизмов для мониторинга инфекционных заболеваний рыб на примере Perca fluviatilis (озеро Арахлей, Забайкальский край) / Е. В. Суханова [и др.] // Изв. Самар. науч. центра РАН. - 2010. - Т. 12, № 1(4). -
C. 1153-1155.
8. Правдин И. Ф. Руководство по изучению рыб (преимущественно пресноводных) / И. Ф. Правдин.- М. : Пищ. пром-сть, 1966. - 376 с.
9. Пронин Н. М. Об экологических последствиях акклиматизационных работ в бассейне озера Байкал / Н. М. Пронин // Биологические ресурсы Забайкалья и их охрана. - Улан-Удэ : Изд-во БФ СО АН СССР, 1982. - С. 3-18.
10. Салина Е. Г. «Некультивируемые» формы бактерий Mycobacterium smegmatis и Mycobacterium tuberculosis и их биохимическая характеристика :
автореф. дис. ... канд. биол. наук / Е. Г. Салина. -М., 2006. - 26 с.
11. Становление ассоциированной микрофлоры в онтогенезе байкальского омуля / Е. В. Суханова [и др.] // Пятая Междунар. Верещагин. Байк. конф. : материалы всерос. конф. с междунар. участием. Иркутск, 4-9 октября 2010 г. - Иркутск : Иркут. обл. тип. № 1, 2010. - С. 156.
12. Характеристика биоразнообразия
микробного сообщества водной толщи озера Байкал / Н. Л. Белькова [и др.] // Микробиология. - 2003. -Т. 72, № 2. - С. 239-249.
13. Экология, болезни и разведение байкальского омуля / Г. А. Афанасьев [и др.]; ред. А. Г. Егоров. - Новосибирск : Наука, 1981. - 232 с.
14. An RT PCR-DGGE survey of gill-associated bacteria in Norwegian seawater-reared Atlantic salmon suffering proliferative gill inflammation / T. Steinum [et al.] // Aquaculture. - 2009. - Vol. 293. - P. 172179.
15. Austin B. Taxonomy of bacterial fish pathogens / B. Austin // Veterinary Research. - 2011. - Vol. 42. - P. 20.
16. Baudin-Laurencin F. La myxobactéiose viscérale de la truite arc-en-ciel Salmo gairdneri R: Une forme nouvelle de la maladie de l’eau froide à Cyto-phaga psychrophila / F. Baudin-Laurencin // Acad. Vét. de France. - 1989. - Vol. 62. - P. 147-157.
17. Bioinformatics Toolkit. Web-Pintail [Electronic resource]. - URL: http://www.bioinformatics-
toolkit.org/ Pintail/index.html
18. Diagnosis of flavobacteriosis by direct amplification of rRNA genes / M. Tiirola [et al.] // Dis. Aquat. Organ. - 2002. - Vol. 51, N 2. - P. 93-100.
19. Fish Histology and Histopathology Manual /
S. Mumford [et al.] // USFWS-NCTC. - 2007. - 357 p.
20. Lonnstrom L.-G. Flavobacterium psychrophi-lum associated with mortality of farmed perch, Perca fluviatilis L. / L.-G. Lonnstrom, M. L. Hoffren, T. Wiklund // J. Fish Dis. - 2008. - Vol. 31. - P. 793-797.
21. New insights into animal pathogenic oomy-cetes / A. J. Phillips [et al.] // Trends in Microbiol. -2007. - Vol. 16, N 1. - P. 13-19.
22. Noga E. J. Water mold infections of freshwater fish: recent advances / E. J. Noga // Annual Rev. of Fish Diseases. - 1993. - P. 291-304.
23. Protective immunity in rainbow trout Oncor-hynchus mykiss following immunization with distinct molecular mass fractions isolated from Flavobacterium psychrophilum / B. R. La Frentz [et al.] // Dis. Aquat. Org. - 2004. - Vol. 59. - P. 17-26.
24. Rehulka J. Aeromonas causes severe skin lesions in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss): clinical pathology / J. Rehulka // Haematology and biochemistry. Acta Vet. Brno. - 2002. - Vol. 71. - P. 351-360.
25. Sequence similarity searching. FASTA [Electronic resource]. - URL:. http://www.ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta
26. The Health Situation in Farmed Salmonids 2008 / R. Johansen [et al.] // Norwegian National Veterinary Institute, Oslo. - 2009. - 31 p.
High sensitivity detection of etiological agents of bacterial ulcerous syndrome of Baikalian omul Coregonus migratorius (Georgi, 1775)
E. V. Dzyuba1, N. N. Denikina1, E. V. Sukhanova1, M. P. Belykh2,1, I. V. Khanaev1,
N. M. Pronin3, N. L. Bel’kova1,2
1 Limnological Institute SB RAS, Irkutsk
2 Irkutsk State University, Irkutsk
3 Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude
Abstract. High sensitivity methods for detection of bacterial ulcerous syndrome of Coregonus migratorius were approved. Microorganisms of phyla Cytophaga-Flavobacteria, genus Aeromonas, as well as parasitic fungus Saprolegnia ferax were detected in extinctive ulcerous erosion of skin of C. migratorius. We proposed that the most important ecological factors those determined epizootic situation in population of C. migratorius were: fish physiology after long subglacial condition with low feeding intensity, water temperature, and high density of fish during growing period. Microbiological and parasitological monitoring as a part of control of healthiness of the main important hydrobionts of Lake Baikal was proposed.
Key words: Coregonus migratorius, bacterial ulcerous syndrome, molecular-genetic methods, mixed infection,
Aeromonas, Flavobacterium, Saprolegnia ferax.
Дзюба Елена Владимировна Лимнологический институт CO РАН 664033, Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3 кандидат биологических наук,
и. о. заведующего лабораторией тел. (3952)42-26-95, факс (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Dzyuba Elena Vladimirovna Limnological Institute SB RAS 3 Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033 Ph. D. in Biology, Head of laboratory
phone: (3952)42-26-95, fax: (3952)42-54-05 Е-mail: [email protected]
Деникина Наталья Николаевна Лимнологический институт CO РАН 664033, Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3 кандидат биологических наук, доцент, старший научный сотрудник тел. (3952)42-84-22, факс (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Denikina Nataliya Nikolaevna Limnological Institute SB RAS 3 Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033 Ph.D. in Biology, ass. prof., senior research scientist phone: (3952)42-84-22, fax: (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Суханова Елена Викторовна Лимнологический институт CO РАН 664033, Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3 научный сотрудник
тел. (3952)42-54-15, факс (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Sukhanova Elena Viktorovna Limnological Institute SB RAS 3 Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033 research scientist
phone: (3952)42-54-15, fax: (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Белых Марина Петровна Иркутский государственный университет 664003 г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора, 5 студент
тел. (факс) (395 2) 24-18-55 E-mail: [email protected]
Belykh Marina Petrovna Irkutsk State University
5 Sukhe-Bator St., Irkutsk, 664003 student
phone (fax): (3952) 24-18-55 E-mail: [email protected]
Ханаев Игорь Вениаминович Лимнологический институт CO РАН 664033, Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3 старший научный сотрудник тел. (3952)42-26-95, факс (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Khanaev Igor Veniaminovich Limnological Institute SB RAS
3 Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033 senior research scientist phone: (3952)42-26-95, fax: (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Пронин Николай Мартемьянович Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН 670047, Улан-Удэ, Сахъяновой, 6 доктор биологических наук, заведующий лабораторией тел. (3012)43-42-29 E-mail: [email protected]
Белькова Наталья Леонидовна Лимнологический институт CO РАН 664033, Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3 кандидат биологических наук, доцент, старший научный сотрудник тел. (3952)42-54-15, факс (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
Pronin Nikolai Martemyanovich Institute of General and Experimental Biology SB RAS
6 Sakhyanova St., Ulan-Ude, 670047
D. Sc. in Biology, Head of laboratory
phone: (3012)43-42-29 E-mail: [email protected]
Bel 'kova Nataliya Leonidovna Limnological Institute SB RAS
3 Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033 Ph.D. in Biology, ass. prof., senior research scientist phone: (3952)42-54-15, fax: (3952)42-54-05 E-mail: [email protected]
