CC BY
23
АктуальН проблеми сучасно!' медицини
УДК [577.21:616.5-002]-053.3/.5
Ляховська Н.В., Шликова О.А., Ляховський В.1.
ВПЛИВ ПОЛ1МОРФ1ЗМУ ГЕНУ Б1ЛКА КЛ1ТИН КЛАРА (СС 16) НА ПЕРЕБ1Г БРОНХIАЛЬНОÏ АСТМИ У ДОРОСЛИХ
ВДНЗУ «УкраТнська медична стоматопопчна академiя», м. Полтава
Бронхiальна астма (БА) е поширеним захворюванням, на етологю якого впливае багато фактор/в. Визначено ряд гене, як асоц/юються з розвитком БА, в тому числ/ ген б/лка клтин Клара. Проте, до цього часу немае ч/ткого уявлення про роль кожного гена, взаемодю полiморфних ген/в та Ух вплив на iмунну вдповдь в патогенезi БА. Метою нашоУ роботи було вивчити вплив полiморфiзму гену блку клтин Клара (A38G), питомою вагою 16 кДа, (СС16) на перебг БА. nid нашим спостере-женням протягом 5 роюв знаходились 45 ос/б, хворих на БА. При аналiзi частоти полiморфiзма гена СС16, що у ос/б, що входили до групи контролю мутантний генотип GG не був виявлений, частота гетерозиготного генотипу AG склала 13% (6 ос/б), частота гомозиготного генотипу АА ста-новила 86,9% (40 ос/6). У хворих на БА в/дпов/дн/' дан були такими: GG у 6,52% хворих (3 ос/6), AG -28,9% (13 ос/б), генотип АА - 64,4% (29 ос/б), тобто м'ж частотами генотипв у груп контролю та у хворих на БА в'дм'чаеться достов'рна р/зниця (р = 0,019). У носив пол!'морфно'У алелi G кл/н/ч-ними особливостями були: прояви атопчного дерматиту, грибковоУ сенсиб'т'зацИ, частше викори-стання 1ГКС, тяжчий переб/г БА, хрон/чний обструктивний бронх/т.
Кпючов1 слова: бронмальна астма, пол1морф1зм, б1лок кл1тин Клара.
Бро^альна астма (БА) е поширеним захворюванням, на етюлогю якого мае вплив чимало факторiв. Зростанню розповсюдженост ^eï патологи сприяють сучасний урбашзований стиль життя, вплив несприятливих умов довктпя, Ыфе-кци, пасивне папшня та багато Ыших. Останшм часом широко вивчаються асо^аци ряду гешв з процесом розвитку БА, список гешв-кандида^в постшно розширюеться [1]. До цього часу немае ч^кого уявлення про роль кожного гена, взаемо-дш полiморфних гешв та ïx вплив на iмунну вщ-повщь в патогенезi БА.
Бток кл^ин Клара е важливим ендогенним регулятором, котрий модулюе запапьн реакцп' в тканин легень. Цей бток належить до родини се-кретоглоб^в i продукуеться невшчастими кланами бронхюп. Бток кл^ин Клара (Clara Cell Protein) мае дектька офщшних назв (СС16, СС10, утерогпобш, сечовий бток 1, утерогпобу-пш або секреторний бток штин Клара), як пов'язан з молекулярною масою або мюцем продукту. Доспщжено, що бток клггин Клара здатен шпбувати фосфолгпазу А2. Вивчення участг СС 16 в ¡мунологгчнш вгдповгдг дозволило зробити висновки [2], що цей бток здатен впливати на баланс мгж Th1/Th2.
Ген, що кодуе CC16 довжиною в 5 кб i скпада-еться з 550-BP 5'- нетранспюючоТ дтянки (5'UTR) та з 3 екзошв [3]. Основним, але недостатньо ви-вченим на сьогодшшшй день полГморфГзмом гену СС16 е замша адешна на гуашн в позици' 38 (A38G) по направлення вниз вщ початку транск-рипци' [4].
При вивченн СС16, як можливу мшень для пкарських засобГв вГдмГчено, що полГморфГзм G38A гену СС16 може характеризувати зниження чутпивост до прийому стеро'^в [ 5].
Мета до^дження
Метою нашоТ роботи було вивчити вплив по-лГморфГзму гену бтку клГтин Клара (A38G), питомою вагою 16 кДа, (СС16) на перебГг БА.
Матерiали та методи дослiдження
Нами було обстежено 45 дорослих хворих на БА на базГ апергопопчного i пупьмонопопчного вщдтення ПоптавськоТ обпасноТ клЫчноТ пкарш. ДГагноз та ступшь тяжкост встановлено вщповщ-но до затверджених критери'в (наказ МОЗ Укра'ши №767 та м1жнародш рекомендаци GINA, 2014). Анамнестичн дан зГбранГ шляхом анкетування з використанням спецГального опитувальника. Уам патентам з БА були проведет загальноктшчне лабораторне, шструментапьне та апергопопчне обстеження. Наявнють сенсиб^заци' до аперге-ыв дГагностовано шляхом проведення шфного тестування (прик-тест) з основними аероаперге-нами (побутовими, пилковими, епщермапьними, грибковими) i харчовими алергенами (ТОВ «1му-нолог», м. Вшниця). Обстеження проводили за умови вщсутносп у патента загострення основного чи супутшх хрошчних захворювань, гострих iнтеркурентниx Ыфекцш та тяжко!' супутньоТ патолог^', яка б могла вплинути на результати дос™-дження. В якост групи контролю доспiджувапись зразки ДНК 46 практично здорових оаб, без алерголопчного анамнезу з бази НД1 генетичних та ¡мунолопчних основ розвитку патологи та фарма-когенетики ВДНЗУ «УкраУнська медична стоматолопчна академiя». Видтення геномноТ ДНК здш-снювали методом феноп-хпороформноТ екстрак-цп [6]. По^морфну дтянку гена сС16 амп^фку-вали за допомогою методу ПЛР на амплiфiкаторi «Терцик» («ДНК-Технология», Роая) з використанням специфiчниx опiгонукпеотидниx прайме-рГв СС16; для щентифкаци апепей проводили рестрикцiйний аналiз амппiконiв при 37 С протягом 12 годин з використанням ендонукпеази рес-трикци AspS9 I (НПО «СибЭнзим», Роая). Мате-матичну обробку отриманих даних здшснювали з використанням програми «STATISTICA 6.0» (StatSoft Inc). Розподт генотипiв за дослщжува-ними по^морфними покусами перевiряпи на вщ-повщнють рiвновазi Хардi-Вайнберга за допомо-
В1СНИК ВДНЗУ «Украгнська медична стоматологгчна академЫ»
2
гою критерю х ■ Для оцiнки достовiрностi вщмш-ностей мiж групами використовували точний дво-стороннiй критерiй Фiшера (для малих груп). Для усiх видiв аналiзу статистично значущими вважа-ли вщмЫносп при р < 0,05.
Результати дослщження та \х обговорення
Пiд нашим спостереженням протягом 5 рош були 45 осiб хворих на БА. При первинному об-стеженн (2010-2011 рр.) була проаналiзована частота полiморфних варiантiв генiв СС 16 серед хворих на БА та у груш популяцшного контролю. У зразках ДНК 46 оаб, що входили до групи контролю, мутантний генотип GG не був виявлений, частота гетерозиготного генотипу AG склала 13% (6 оаб), частота гомозиготного генотипу АА ста-новила 86,9% (40 оаб). У хворих на БА вщповщж дан були такими: GG у 6,52% хворих (3 оаб), AG - 28,9% (13 оаб), генотип АА - 64,4% (29 оаб), тобто мiж частотами генотишв у груш контролю та у хворих на БА в^^чаеться достовiрна рiзни-ця (р = 0,019). При розглядi клУчних особливос-тей вiдмiчено, що в груш з штерм^уючим перебн гом БА 1 хворий мав генотип АG, 2 - GG; з легким
Кпiнiчнi с
nepe6iroM - 8 oci6 мали генотип AG; з nepe6iroM середньо'' тяжкост 4 обстежених - AG, 1- GG. Середня тривалють захворювання на момент пе-рвинного обстеження склала 6,5 роки. Спадкова схильнють до виникнення БА в^^чена у 70%. Переважна бшьшють осiб мали сенсиб^зацш до двох i бiльше алергешв, особливiстю цих хворих була пперчутливють до грибкових алергенiв (найчастiше до групи Aspergillus), так в груш з ге-терозиготою гену СС16 вказан прояви були у 6 оаб, з мутантною гомозиготою у 2 оаб, що е статистично достовiрно при порiвняннi з генотипом АА гену СС16 (табл.1). Серед супутньо''' патологи звертае на себе увагу достовiрна рiзниця за точ-ним методом Фiшера по кшькосп осiб, що мають прояви атошчного дерматиту (табл.1) при порiв-няннi груп з полiморфiзмом гену СС 16. Так, серед носив генотипу GG 2 особи, що мають штер-м^уючий переб^ хворшть на атопiчний дерматит, серед носив генотипу AG - 4 особи. Насправд^ вплив полiморфiзму гешв епiтелiальних клiтин легень (СС16) на ушкодження шкiри носить в лн тературних джерелах суперечливий характер.
Табл. 1
ивост! переб1гу БА в залежностi Bid полиморфизму гену СС16
Наявнють ознаки Хворi на БА носи генотипу АА гену СС16, (n=29) Хворi на БА носи алелю G гену СС16, (n= 16) р*
Мають прояви атотчного дерматиту так ш 4 24 6 10 0,04
Частше користуються 1ГКС так нi 3 26 9 7 0,02
Прояви грибково''' сенсибтзаци так ш 3 26 8 8 0,03
Хворi на БА носи генотипу АА гену СС16, (n=24) Хворi на БА носи алелю G гену СС16, (n=16) Р*
Тяжчий перебк БА так нi 2 22 7 9 0,045
Хронiчний обструктивний бронхiт так нi 1 23 6 10 0,032
Пщ час перших оглядiв проводилось aнaлiзу-вання лiкарських засобiв, що приймали хворi, яке показало, що особи, як були ноаями генотипу AG або GG гену СС 16 частше використовували ш-галяцiйнi глюкокортикостероУдш (1ГКС) препарати (табл.1). Це можна пояснити де в чому схожою дiею на молекулярному рiвнi бiлкiв клiтин Клара та глюкокортико'фв. Вiдомо, що активацiя гена СС16 шпбуе функцiю ядерного фактору - кр (NF-кр) шляхом подавлення фосфорилювання 1кВ-р в епiтелiальних клiтинах дихальних шляхiв, що в свою чергу призводить до зменшення запалення в легеневш тканинi [7]. Глюкокортикостеро'ди, як i бiлки кштин Клара подавляють активнiсть фос-фолтази А2, що призводить до гальмування утворення ряду медiаторiв запалення - простаг-ландинiв, лейкотриенiв та шших. Можливо, при-йом стеро'дних препара^в виконуе, як би замiсну функцш бiлкiв клiтин Клара, що дозволяе хворим з генетичним полiморфiзмом СС16 досягати стану ремiсй'■ Отже, свiтовi рекомендаций щодо про-фтактичного прийому 1ГКС е важливою необхщ-нiстю для хворих на БА, особливо з полiморфiз-мом гену СС16. Незважаючи на частiший прийом
1ГКС, при повторному оглядi (2015-2016), з'ясувалося що у 7 оаб, що у носив полiморфного алелю G (табл.1) вiдмiчався тяжчий переб^ БА (кiлькiсть госпiталiзацiй, тривалiсть та частота за-гострень, показники зовшшнього дихання). Тодi як у груш носив генотипу АА (в яку ввшшли 24 по-передньо обстежених особи) лише у 2 в^^ча-лись дан ознаки (р = 0,045). Також нашу увагу привернув той факт, що у 6 оаб носив aлелi G (табл.1) в останнш час був встановлений дiaгноз хрошчного обструктивного бронхiту■ З цих хворих двое з генотипом GG первинно мали штерм^ую-чий переб^, 1 з генотипом GG та 3 з генотипом АG - перебiг середньо' тяжкостi■ У носив генотипу АА був лише 1 патент з хрошчним обструктив-ним бронхiтом■
Висновок
У хворих на БА, котрi е ноаями полiморфноl aлелi G гену СС16 в^^чаеться несприятливий перебiг бронхолегеневих захворювань.
Лiтература
1. Фрейдин М.Б. Генетика атопии: современное состояние / М.Б. Фрейдин, ЕЮ. Брагина, Л.М. Огородова [и др.] // Вестник ВО-ГиС. - 2006. - Том 10, №3. - С. 492-503.
АктуальН проблеми сучасно! медицины
References
1. Frejdin M.B. Genetika atopii: sovremennoe sostojanie / M.B. Frejdin, E.Ju. Bragina, L.M. Ogorodova [i dr.] // Vestnik VOGiS. -2006. - Tom 10, №3. - S. 492-503.
2. Sengler C. Clara cell protein 16 (CC16) gene polymorphism influences the degree of airway responsiveness in asthmatic children / C. Sengler, A. Heinzmann, S.P. Jerkic // J. Allergy Clin. Immunol. - 2003. - V. 111. №3. - P. 515-519.
3. Hay J.C. Human CC10 gene expression in airway epithelium and subchromosomal locus suggest linkage to airway disease / J.C. Hay, C. Danel, C.S. Chu [et al.] // Am J Physiol. - 1995. - V. 268. - P. 565-575.
4. Laing I. CC16: the A38G polymorphism is associated with airway responsiveness at one month and asthma at 6 years in children unselected for asthma / I. Laing, E. Eber, C. Hayden [et al.] // Am J Respir Crit Care Med. - 1998. - V.157. - P. 857.
5. Chen L.C. Evaluation of a common variant of the gene encoding clara cell 10 kd protein (CC10) as a candidate determinant for asthma severity and steroid responsiveness among Chinese children / L.C. Chen, H.M. Tseng, C.J. Wu [et al.] // J Asthma. -2012. - V.49(7). - P. 665-672
6. Metodi klinichnih ta eksperimental'nih doslidzhen' v medicini. / za red. prof. Kajdasheva I.P. - Poltava : Polimet, 2003. - 320 s.
7. Laing A. A polymorphism ofthe CC16 gene is associated with an increased risk of asthmal / A. Laing // J.Med. Genet. — 1998. — №35. — P.463-467.
Реферат
ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА БЕЛКА КЛЕТОК КЛАРА (СС 16) НА ТЕЧЕНИИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ВЗРОСЛЫХ Ляховская Н.В., Шлыкова О.А., Ляховский В.И.
Ключевые слова: бронхиальная астма, полиморфизм, белок клеток Клара.
Бронхиальная астма (БА) является распространенным заболеванием, на этиологию которого влияет много факторов. Определен ряд генов, которые ассоциируются с развитием БА, в том числе, ген белка клеток Клара. Однако до сих пор нет четкого представления о роли каждого гена, взаимодействии полиморфных генов и их влиянии на иммунный ответ в патогенезе БА. Целью нашей работы было изучить влияние полиморфизма гена белка клеток Клара (A38G), удельным весом 16 кДа, (СС16) на течение БА. Под нашим наблюдением в течение 5 лет находились 45 человек, больных БА. При анализе частоты полиморфизма гена СС16 у лиц, входивших в группу контроля, мутантный генотип GG не был обнаружен, частота гетерозиготного генотипа AG составила 13% (6 человек), частота гомозиготного генотипа АА составила 86,9% (40 человек). У больных БА соответствующие данные были следующими: GG в 6,52% больных (3 человека), AG - 28,9% (13 человек), генотип АА - 64,4% (29 человек), то есть между частотами генотипов в группе контроля и у больных Ба отмечается достоверная разница (р = 0,019). У носителей полиморфной аллели G клиническими особенностями были: проявления атопического дерматита, грибковой сенсибилизации, частое использование ИГКС, тяжелое течение БА, хронический об-структивный бронхит.
Summary
INFLUENCE OF POLYMORPHISM OF CLARA СЕЦ. PROTEIN ON DEVELOPMENT OF BRONCHIAL ASTHMA
Lyakhovska N. V., Shlykova O. A., Lyakhovskiy V. I.
Key words: bronchial asthma, polymorphism, protein Clara cells.
Bronchial asthma (BA) is a common disease, whose aetiology is influenced by many factors. There has been identified a number of genes associated with the development of asthma, including protein gene Clara cells. However, there is still no clear picture of the role of each gene, the interaction of polymorphic genes and their effect on the immune response in the pathogenesis of asthma. The aim of our study was to examine the effect of the protein gene polymorphism Clara cells (A38G) specific weight of 16 kDa (SS16) for BA. 45 patients with asthma were under our observation for 5 years. The analysis of the frequency of the gene polymorphism SS16 in the persons of control group did not reveal a mutant genotype GG, the occurrence rate of heterozygous genotype AG made up 13% (6 people), the occurrence rate of the homozygous genotype AA was 86.9% (40 people). The patients with asthma demonstrated the following data: GG was in 6.52% of patients (3 people), AG was detected in 28.9% (13 people), and genotype AA was in 64.4% (29 people), i.e. there was a significant difference (p = 0.019) in the occurrence rate between the genotypes in the control group control and test group. The carriers of G alleles of polymorphic clinical features manifested atopic dermatitis, fungal sensitization, and frequent use of inhaled corticosteroids, severe asthma, and chronic obstructive bronchitis.
2. Sengler C. Clara cell protein 16 (CC16) gene polymorphism influences the degree of airway responsiveness in asthmatic children / C. Sengler, A. Heinzmann, S.P. Jerkic // J. Allergy Clin. Immunol. - 2003. - V. 111. №3. - P. 515-519.
3. Hay J.C. Human CC10 gene expression in airway epithelium and subchromosomal locus suggest linkage to airway disease / J.C. Hay, C. Danel, C.S. Chu [et al.] // Am J Physiol. - 1995. - V. 268. - P. 565-575.
4. Laing I. CC16: the A38G polymorphism is associated with airway responsiveness at one month and asthma at 6 years in children unselected for asthma / I. Laing, E. Eber, C. Hayden [et al.] // Am J Respir Crit Care Med. - 1998. - V.157. - P. 857.
5. Chen L.C. Evaluation of a common variant of the gene encoding clara cell 10 kd protein (CC10) as a candidate determinant for asthma severity and steroid responsiveness among Chinese children / L.C. Chen, H.M. Tseng, C.J. Wu [et al.] // J Asthma. -2012. - V.49(7). - P. 665-672
6. Методи кшшчних та експериментальних дослщжень в медици-Hi. / за ред. проф. Кайдашева 1.П. - Полтава : Полiмет, 2003. -320 с.
7. Laing А. A polymorphism ofthe CC16 gene is associated with an increased risk of asthmal / A. Laing // J.Med. Genet. — 1998. — №35. — Р.463-467.
