CC BY
12
КЛИНИЧЕСКАЯ ГЕРОНТОЛОГИЯ, 9-10, 2010
Методика. Иммуноцитохимическое изучение экспрессии биогенных аминов и регуляторных пептидов было проведено на молодых (1-4 пассажа) и старых (7 пассажей) культурах клеток тимуса. Материал для культивирования получен у детей в возрасте 6 месяцев и 1-4 лет при операциях по поводу врожденных пороков сердца. Маркерами пролиферативной активности клеток служили PCNA и цик-лин А (Novocastra, 1:100). Экспрессию биогенных аминов и пептидных гормонов верифицировали иммуноцитохимическим методом с применением моноклональных антител к серотонину, соматостатину, гастрину, бета-эндорфину, гистамину (Novocastra, 1:100) и мелатонину (CIDtech Res. Inc., 1:250). Компьютерный анализ микроскопических изображений проводили с помощью системы VideotestMorphology 5.0.
Результаты. В молодой и старой культурах клеток тимуса человека, находящихся на различных стадиях дифференцировки, обнаружена экспрессия гормонов: в предшественниках Т-лимфоцитов содержатся серотонин и мелатонин; в незрелых кортикальных клетках только серотонин; в зрелых медуллярных клетках выявлен серотонин, мелатонин, p-эндорфин и гистамин. В эпителиальных клетках обнаружена экспрессия серотонина и соматостатина, реже гастрина. При старении культуры в эпителиальных клетках возрастает экспрессия серотонина, тогда как экспрессия соматостатина снижается. Кроме того, в старой культуре отмечалось снижение экспрессии маркера PCNA, свидетельствующее об уменьшении пролиферативной способности клеток тимуса.
Вывод. Выявленные четкие возрастные корреляции между экспрессией серотонина и соматостатина эпителиальными клетками тимуса и пролиферативной активностью тимоцитов отражают важное участие молекулярных нейроиммуноэндокринных механизмов в па-ракринной регуляции локального гомеостаза тимуса.
ВОЗРАСТНЫЕ И ПОЛОВЫЕ ОСОБЕННОСТИ ВТОРИЧНОГО ОСТЕОПОРОЗА У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ ПОЧЕК
С.О. Мазуренко, А.Н. Шишкин
Санкт-Петербургский государственный университет
Развивающиеся при терминальной стадии хронической болезни почек (ХБП) метаболические поражения костей нередко приводят к вторичному остеопорозу и переломам, который прогрессирует по иным законам, чем в общей популяции.
Цель исследования: изучить влияние пола и возраста пациентов с терминальной стадией ХБП на риск развития остеопороза и переломов.
Материалы исследования: В исследование включено 609 пациентов (307 мужчин и 302 женщины), средний возраст 43,9 ± 12,3 лет, которые были разделены на три группы: пациенты с 4-5 стадией ХБП до начала заместительной почечной терапии (ЗПТ) (179), пациенты, получающие лечение гемодиализом (ГД) (337), и пациенты после аллотрансплантации почки (АТП) (93).
Лучевое обследование больных включало денситометрию (двухэнергетическую рентгеновскую абсорбциометрию), рентгенографию. Минеральную плотность костей (МПК) оценивали методом денситометрии (Hologic QDR-4500).
Результаты исследования: Сравнение результатов денситометрии пациентов мужского и женского пола в группе больных до начала ЗПТ, не обнаружило статистически достоверных различий между мужчинами и женщинами по критериям T и Z. В группе больных, получающих лечение ГД, пациенты мужского пола достоверно имели больший дефицит МПК по критерию Z в костях предплечья и в позвонках L1-L4 в сравнении с женщинами, в бедренной кости подобной разницы выявлено не было. В группе пациентов с АТП, мужчины имели больший дефицит МПК, оцененный по критерию Z, только в костях предплечья. Статистически достоверной разницы среднего возраста пациентов мужского и женского пола в группах не выявлено.
Корреляционный анализ связи денситометрических показателей в группах исследуемых пациентов с их возрастом показал, что в группах больных получающих лечение ГД и пациентов с функционирующим АПТ возраст пациентов демонстрировал положительное влияние на показатели МПК. Из выполненного анализа следовало, что чем старше был пациент на момент начала заболевания и начала ЗПТ, или трансплантации почки, тем более высокие показатели МПК он имел в период ЗПТ.
Во всех рассматриваемых группах больных с ХБП переломы несколько чаще отмечались у пациентов женского пола. Однако сравнительный анализ кумулятивной доли пациентов без переломов с применением F-критерия Кокса не обнаружил достоверных различий между мужчинами и женщинами в группах больных с ХБП, получающих лечение гемодиализом и пациентов с АТП.
Выводы: Дефицит МПК в предплечье и поясничных позвонках у мужчин, получающих лечение ГД, и в предплечье у пациентов мужского пола с АТП, оказывается более выраженным в сравнении с пациентами женского пола соответствующих групп. Выявленная «парадоксальная» ассоциация возраста исследуемых пациентов и показателей МПК, по-видимому, объясняется драматическим влиянием ХБП на формирование пика костной массы, у пациентов с дебютом ХБП в детском и подростковом возрасте. Как и в общей популяции, у больных с ХБП, переломы чаще выявляются и лиц женского пола, однако тест Кокса не обнаружил существенной разницы кумулятивного риска переломов у мужчин и женщин.
ПОИСК НОВЫХ БОЛЕЕ БЕЗОПАСНЫХ ПРЕПАРАТОВ С ГЛЮКОКОРТИКОИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ДЛЯ ГЕРОНТОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ
П.А. Малкин, П.М. Барышев, А.С. Духанин, Н.Л. Шимановский
Межрегиональная общественная организация «Общество фармакоэкономических исследований».
Российский государственный медицинский университет, Москва
Целью работы явился поиск новых препаратов с глюкокортикоидной активностью, которые бы обладали меньшими побочными эффектами при длительном использовании у геронтологических больных. В работе определяли фармако-биохимические особенности угнетающего действия на фибробласты кожи человека наноразмерных полимеров, содержащих глюкокортикоидные гормоны (гидрокортизон, преднизолон).
Комплексы глюкокортикоидов (ГК) получали на основе природных (сывороточный альбумин человека, САЧ) и синтетических (по-ливинилпирролидон, ПВП) структур. Основные характеристики: 1). ПВП-ГК средняя м.м 24 000, размер 10-30 нм, соотношение ПВП:ГК = 2,1; 2).САЧ-ГК м.м. 69 000, диаметр 7,1 нм, длина 22 нм, соотношение САЧ:ГК = 1,5. Определение базальной и стимулированной концентрации свободных ионов кальция в цитоплазме фибробластов проводили с использованием зонда FURA-2/АМ. Полученную суспензию клеток (10-15 х 105 кл/мл) инкубировали с зондом (конечная концентрация 5 мкМ) при 20°C в течение 40 мин. Невключив-шийся индикатор отделяли, дважды отмывая клетки свежим Кребс буфером, перед определением флуоресценции фибробласты переводили в HEPES-буфер следующего состава (мМ): 145 NaCl, 5 KCl, 1 Na2HPO4, 1 CaCl2, 0,5 MgSO4, 5 глюкоза, 10 NaHEPES, pH 7,4 при 37°C. Пробы объемом 1 л помещали в ячейку спектрофлуориметра MPF-4 «Hitachi» и регистрировали флуоресценцию (500 нм) при длинах возбуждающего света 340 нм и 380 нм, соответствующих максимуму поглощения связанной с ионами и свободной формы зонда FURA-2. Определение коллаген-синтетитческой активности в культуре фибробластов проводили радиоиндикаторным методом. В пробы, содержащие по 120 мкл суспензии клеток, вносили 10 мкл раствора меченного тритием пролина в HEPES-буфере до конечных концентраций 0,1-5 мкМ. Пробы инкубировали в течение 60 минут при температуре 37°C. По окончанию инкубации аликвоты проб (100 мкл) быстро переносили на фильтры GF/C «Whatman» и дважды отмывали 2 мл HEPES-буфера (t = 4°C).
Базальный внутриклеточный уровень ионов кальция в цитоплазме фибробластов не превышал значения 110 нМ (98 ± 12 нМ). Внесение в суспензию клеток 0,1 мкМ ангиотензина II (AII) вызывало увеличение внутриклеточной концентрации кальция: эффект разви-
