CC BY
53
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
УДК 577:001.891.57:616-006 DOI 10.23683/0321-3005-2017-3-2-37-44
ВЛИЯНИЕ ЦИТОКИНОВЫХ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА ДИНАМИКУ РОСТА И МЕТАСТАЗИРОВАНИЕ ПЕРЕВИВАЕМОЙ МЕЛАНОМЫ В16 В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
© 2017 г. Е.Ю. Златник1, И.А. Новикова1, Е.И. Золотарева1, О.Г. Шульгина1, Е.М. Непомнящая1,Е.П. Ульянова1, Е.С. Бондаренко1
1 Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону, Россия
EFFECT OF CYTOKINE IMMUNOMODULATORS ON GROWTH DYNAMICS AND METASTASIS OF TRANSPLANTABLE B16 MELANOMA IN THE EXPERIMENT
E.Yu. Zlatnik1,1.A. Novikova1, E.I. Zolotareva1, O.G. Shulgina1, E.M. Nepomnyashchaya1, E.P. Ulianova1, E.S. Bondarenko1
1Rostov Research Institute of Oncology, Rostov-on-Don, Russia
Златник Елена Юрьевна - доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник, лаборатория иммунофеноти-пирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected], [email protected]
Новикова Инна Арнольдовна - кандидат медицинских наук, руководитель лаборатории иммунофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Золотарева Екатерина Игоревна - младший научный сотрудник, лаборатория иммунофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Шульгина Оксана Геннадьевна - научный сотрудник, лаборатория иммунофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Непомнящая Евгения Марковна - доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник, лаборатория имму-нофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Ульянова Елена Петровна - научный сотрудник, лаборатория иммунофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Бондаренко Елена Сергеевна - младший научный сотрудник, лаборатория иммунофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Elena Yu. Zlatnik - Doctor of Medicine, Professor, Main Researcher, Laboratory of Immunophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Inna A. Novikova - Candidate of Medicine, Head of the Laboratory of Immunophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Ekaterina I. Zolotareva - Junior Researcher, Laboratory of Im-munophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Oksana G. Shulgina - Researcher, Laboratory of Immunophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Evgenia M. Nepomnyashchaya - Doctor of Medicine, Professor, Main Researcher, Laboratory of Immunophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Elena P. Ulianova - Researcher, Laboratory of Immunophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Elena S. Bondarenko - Junior Researcher, Laboratory of Im-munophenotyping of Tumors, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Изложены результаты экспериментальных исследований противоопухолевого и антиметастатического эффекта различных сочетаний иммуномодуляторов ронколейкина (1Ь-2), ингарона (1МЕ-у), рефнота (ТМЕ-а с тимозином) и цитоста-тика (доксорубицин). Исследование проведено на мышах линии С57В1/6. Животным экспериментальных групп была трансплантирована меланома В16 в дозе 5106 клеток. Иммуномодуляторы комбинировали между собой или с цитостатиком
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
(ронколейкин+ингарон, ронколейкин+ингарон+рефнот, ронколейкин+доксорубицин, ронколейкин+рефнот, доксорубицин). Наилучший эффект обнаружен от воздействия комбинации ронколейкин+ингарон: высокий процент торможения роста опухоли как в процессе введения (29,7 %), так и после окончания воздействия (38,5 %) и стопроцентный антиметастатический эффект. Торможение роста опухоли сопровождалось морфологически регистрируемыми дистрофическими изменениями опухолевых клеток и выраженной лейкоцитарной инфильтрацией. Морфологическое исследование тимуса выявило развитое корковое вещество с плотным расположением тимоцитов, что предполагает активное состояние Т-клеточного звена иммунитета, которое подтверждается результатами субпопуляционного анализа клеток селезенки (увеличение содержание T-клеток за счет Th относительно контроля). Полученные данные свидетельствуют об антиметастатическом и иммуномодулирующем действии комбинации ронколейкин+ингарон, что позволяет рассматривать данную комбинацию в качестве оптимальной при лечении онкологических больных. Помимо этого, проведенное исследование доказывает актуальность поиска действенных сочетаний имеющихся иммуномодуляторов.
Ключевые слова: ронколейкин, ингарон, рефнот, доксорубицин, C57BI/6, B16, T-клетки, B-клетки, Th, CTL.
The articles deals with the results of experimental studies of antitumor and antimetastatic effects of various combinations of immunomodulators Roncoleukin (IL-2), Ingaron (INF-y) and Refnot (TNF-a with thymosin) and cytostatics (Doxorubicin). The study included C5 7Bl/6 mice; B16 melanoma was transplanted at a dose of 5-106 cells to animals of experimental groups. Immunomodulators were combined with each other or with cytostatics (Roncoleukin+Ingaron, Roncoleukin+Ingaron+Refnot, Ronco-leukin+Doxorubicin, Roncoleukin+Refnot, Doxorubicin). Roncoleukin+Ingaron was the most effective combination: a high percentage of inhibition of tumor growth during the therapy (29.7 %) and after it (38.5 %), with antimetastatic effect (100 %). Inhibition of tumor growth was accompanied by morphologically registered dystrophic changes in tumor cells and a marked leukocyte infiltration. Morphological examination of the thymus showed a well-developed cortex with densely packed thymocytes supposing an active state of the T-cell immunity component which was confirmed by the results of a subpopulation analysis of spleen cells (increased levels of T-cells due to Th, compared to the controls). The results demonstrated antimetastatic and immunomodulating effects of Roncoleukin+Ingaron allowing considering this combination as the optimal one for cancer treatment. The study showed the importance of a search for effective combinations of immunomodulators.
Keywords: Roncoleukin, Ingaron, Refnot, Doxorubicin, C57Bl/6, B16, T-cells, B-cells, Th, CTL.
Введение
Проблема метастазирования - одна из важнейших в онкологии, поскольку именно метастазы являются основной причиной смерти онкологических больных, даже после успешного воздействия на первичный опухолевый очаг. Методы противоопухолевого лечения нередко являются иммуноде-прессивными, что после временного эффекта способствует развитию из химиорезистентных клеток опухоли и ее метастазированию в организме.
В связи с этим в современной литературе все больше появляется данных об изучении антиметастатического эффекта биологически активных соединений растительного [1-3] и животного [4] происхождения. Полученные авторами данные свидетельствуют об актуальности поиска новых веществ, обладающих противоопухолевым и антиметастатическим эффектом.
Помимо изучения агентов естественного происхождения, в последнее время разработаны и применяются отечественные рекомбинантные препараты интерлейкина-2 (ронколейкин), фактора некроза опухоли, дополнительно содержащего тимозин-альфа-1 (рефнот) и интерферона-гамма (ингарон). Они характеризуются двойным действием на опухолевые клетки: непосредственным, ведущими в реализации которого являются угнетение пролифе-ративной активности опухолевых клеток и индук-
ция их апоптоза, и опосредованным - через активацию различных звеньев иммунной системы, прежде всего цитотоксических (С^- и КК-клеточного), благодаря чему они нашли применение в клинике, в том числе при лечении меланомы [5-7], рака яичника [8] и других опухолей [9-11].
В настоящем исследовании мы предприняли попытку выявить оптимальные комбинации цито-киновых иммуномодуляторов с целью получения противоопухолевого и антиметастатического эффекта в эксперименте.
Материалы и методы
Исследования проведены на 30 мышах-самках линии С57В1/6 массой 18-22 г. Животных содержали в клетках при естественном световом режиме, на стандартном гранулированном корме, при свободном доступе к воде в стандартных условиях вивария ИЛЦ ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России.
Исследуемые препараты (ронколейкин, рефнот, ингарон, доксорубицин) и контрольное вещество (изотонический (0,9 %) раствор хлористого натрия) получены из аптеки ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России.
Меланому В16 трансплантировали подкожно в область правой надлопаточной области в количествах 5-106 живых опухолевых клеток, разведенных в 0,5 мл физиологического раствора.
ISSN 0321-3005 ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. СЕВЕРО-КАВКАЗСКИИ РЕГИОН._ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ. 2017. № 3-2
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
Выбор исследуемых доз препаратов производился путем перерасчета рекомендуемых доз для человека на килограмм массы тела животного (согласно инструкции): 150ME ронколейкина на животное паратуморально (п/т), 150 МЕ ингарона п/т, 50 МЕ рефнота п/т, 0,2 мл (1:100) доксорубицина внутрибрюшинно (в/б), 0,5 мл физиологического раствора п/т.
Воздействие начинали на 10-й день после перевивки (по достижении опухолью замеряемого размера) и продолжали в течение 8 дней по схеме:
1. 4 дня - ронколейкин; затем 4 дня - доксору-бицин.
2. Ронколейкин и ингарон через день.
3. Ронколейкин и рефнот через день.
4. Чередование ронколейкина, ингарона и реф-нота.
5. Доксорубицин.
6. Контроль, физиологический раствор.
Суммарная концентрация препаратов на одно животное составила в 1-й группе 600 МЕ ронколейкина и 16 мкг доксорубицина; во 2-й - по 600 МЕ ронколейкина и ингарона; в 3-й - 600 МЕ ронколейкина и 200 МЕ рефнота; в 4-й - по 450 МЕ ронколейкина (3 инъекции) и ингарона (3 инъекции) и 100 МЕ рефнота (2 инъекции); в 5-й - 32 мкг доксорубицина.
При проведении исследования были использованы стандартные методы работы с лабораторными животными [12]. Все манипуляции с животными выполнены в соответствии с Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных [13, 14].
Критериями оценки эффективности препаратов были торможение роста опухоли (ТРО) и индекс ингибирования метастазирования (ИИМ). Провели также морфологическое исследование опухоли и тимуса, субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови и ткани селезенки.
ТРО было определено на основании измерения линейных размеров подкожной опухоли с вычислением объема опухоли (V).
V - V¿
ТРО= V-ё -100 %, где Vo и Vk - Vcp в опыте
VÉ
и в контроле [15].
ИИМ определен на основании подсчета количества метастатических очагов и числа животных с метастазами (mts).
ИИМ= • JÉ )-(А • А) -100 % , где Ак и А -
Аё • АЁ
частота метастазирования в легкие у мышей контрольной и опытной групп; Вк и В - среднее число метастазов в легких контрольной и опытной групп [16].
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови и ткани селезенки мышей С57В1/6, включая определение относительного (процентного) содержания CD3+-, CD4+-, CD8+-, CD(16+56)+-, CDI^-r^to^ исследовали стандартным методом проточной цитофлюориметрии с помощью моноклональных антител (МАТ) фирмы BD. Инкубацию с антителами проводили согласно инструкции производителя.
Ткани тимуса, селезенки и опухоли фиксировали с помощью нейтрального забуференного формалина и проводили по стандартному протоколу [17]. После проводки срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Учет результатов производился с помощью светового микроскопа Leika.
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (M) и стандартную ошибку среднего (m). Для проведения статистической обработки была использована программа STATISTICA 7.0. Достоверность отличий между группами данных оценивали с помощью параметрических (t-критерия Стьюдента) и непараметрических (Вилкоксона - Манна - Уитни) критериев. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.
Результаты
Динамика роста опухоли и метастазирование. В процессе сравнительного анализа эффективности различных сочетаний цитокиновых препаратов было выявлено ТРО под действием комбинации рон-колейкин+ингарон (ТРО=29,7^38,5 %). Эффект торможения обнаруживают и комбинации ронко-лейкин+доксорубицин (ТРО=11,5^27,0 %), ронко-лейкин+рефнот (ТРО=13,5^18,9 %), а также доксорубицин (ТРО=16,2 %), но только до тех пор, пока продолжается воздействие препарата, а по окончании воздействия опухоль начинает резко расти (рис. 1, таблица).
При изучении антиметастатического эффекта отмечено, что лучший эффект демонстрирует комбинация ронколейкин+ингарон. При обследовании легких на наличие визуально регистрируемых mts мы не зафиксировали их ни у одного из животных этой группы. Антиметастатический эффект относительно контроля обнаружен и в группах с воздействиями ронколейкин+доксорубицин (25 %) и рон-колейкин+рефнот+ингарон (25 %). Под воздействием доксорубицина mts выявлялись у 50 % животных, в то время как в контроле - у 60 %, как и в группе, получавшей ронколейкин+рефнот (таблица). Результаты макроскопической оценки мета-стазирования получили подтверждение при анализе гистологических препаратов легких.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE.
2017. No. 3-2
V (см3)
10
11
ронколейкин+ доксорубицин
; ронколейкин+ ингарон
ронколейкин+ рефнот
ронколеикин_
ингарон+
рефнот
доксорубицин
контроль
Х
Рис. 1. Динамика роста опухоли при различном воздействии препаратов (ось Х - дни от начала введения препаратов, вертикальной линией отмечено окончание введения) / Fig. 1. Dynamics of the tumor growth in different drug combinations (the X axis -days from the therapy start; end of therapy is marked by a vertical line).
Количество метастатических очагов было минимальным в группе, получавшей ронколей-кин+ингарон+рефнот, а также в группе, получавшей ронколейкин+доксорубицин. Процент животных с mts в этих двух группах одинаков, однако
количество метастатических очагов в группе рон-колейкин+доксорубицин намного больше и сравнимо с их количеством в контроле. В группе с введением доксорубицина количество метастатических очагов было меньше, чем в контроле (таблица).
Эффекты воздействия на опухоль в зависимости от сочетаний препаратов / Effects of various drug combinations on tumors
Воздействие ТРО, % Количество животных с mts, % Количество метастатических очагов ИИМ, %
8-й день Эвтаназия
Ронколейкин+доксорубицин -27,0 -11,5 25 9 58,3
Ронколейкин+ингарон -29,7 -38,5 0 0 100
Ронколейкин+рефнот -18,9 -13,5 60 15 -1,7
Ронколейкин+ингарон+рефнот -5,4 +3,8 25 1 95,4
Доксорубицин -16,2 +1,9 50 4 62,9
Контроль - - 60 9 -
Однако при подсчете ИИМ, кроме комбинации ронколейкин+ингарон, обнаружившей 100%-е ин-гибирование метастазирования, высокий ИИМ был выявлен только в группе ронколей-кин+игарон+рефнот (95,4 %). Остальные комбинации оказались менее эффективны (62,9 % -доксорубицин и 58,3 % - ронколейкин+ +доксорубицин), либо совсем не эффективны (рон-колейкин+ рефнот).
Y
Иммунологические показатели крови и селезенки. Введение ронколейкина совместно с доксору-бицином, а также ронколейкина с ингароном не вызывает значимых изменений иммунологических показателей крови. Наоборот, применение комбинации препаратов ронколейкин+рефнот и ронко-лейкин+ингарон+рефнот приводит к снижению содержания Т-клеток и увеличению содержания B-клеток в крови (рис. 2).
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE.
2017. No. 3-2
80
Т-клеткн (CD3e+)
Х
В клетки Th С TL
(С Dl 9+) (CD3e+CD4+) (CD3e+C8+)
п Контроль, физ. раствор
ронколейкин+ доксорубицин
H ронколейкин+ ингарон
ронколейкин+ рефнот
ронколейкин+
ингарон+
рефнот
доксорубицин
Рис. 2. Лимфоцитарный состав крови мышей при введении различных комбинаций препаратов (ось Y - %) / Fig. 2. Lymphocyte composition of blood of mice in different drug combinations (the Y axis - %)
В селезенке введение ронколейкина совместно с и снижению содержания В-клеток, а также увели-доксорубицином, а также ронколейкина с ингаро- чению содержания Th и снижению содержания ном приводит к увеличению содержания Т-клеток CTL относительно контроля (рис. 3).
Т-клетки (CD3e+)
Контроль, физ. раствор
ронколейкин+ доксорубицин
ронколейкин+ ингарон
ронколейкин+ рефнот
ронколейкин+
ингарон+
рефнот
доксорубицин
CTL
(С Dl 9+) (CD3e+CD4+) (CD3e+C8+)
Рис. 3. Лимфоцитарный состав в селезенке мышей при введении различных комбинаций препаратов (ось Y - %) / Fig. 3. Lymphocyte composition of spleen of mice in different drug combinations (the Y axis - %)
Применение комбинаций ронколейкин+рефнот держания B-клеток, а также снижению содержа-и ронколейкин+ингарон+рефнот приводит к сни- ния Th. Сходные изменения отмечены в крови и в жению содержания Т-клеток и увеличению со- селезенке.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE.
2017. No. 3-2
Морфологическое строение меланомы. У контрольных животных меланома имеет обычное строение, в ряде срезов отмечены спонтанные некрозы и отложения меланина, местами в клетках наблюдаются дистрофические изменения. В
легких контрольных мышеи отмечены полнокровие, кровоизлияния; у части животных выявлены меланомы как мелкие, так и крупные, иногда множественные с обширным поражением легких (рис. 4б).
Рис. 4. Микроскопическая картина здорового легкого мыши (а) и легкого с метастазом (б) (х40, гематоксилин-эозин) / Fig. 4. Microscopic image of the intact lung of a mouse (a) and the lung with metastasis (b) (*40, hematoxylin-eosin)
Под воздействием иммуномодуляторов в опухоли отмечались обширные очаги некроза (до 2/3 площади), лейкоцитарная инфильтрация, кровоизлияния, тромбы в просвете сосудов и дистрофические изменения клеток в опухоли.
Под воздействием доксорубицина наблюдались дистрофические изменения в опухоли и отложения меланина.
Морфологическое строение тимуса. После введения ронколейкина в сочетании с доксорубицином наблюдаются более высокая плотность расположения тимоцитов в дольках, где преобладает корковое вещество, по сравнению с действием одного доксо-
рубицина, а также снижение частоты встречаемости эпителиальных клеток. Отмечено также усиление кровоснабжения долек тимуса: при введении ронколейкина в сочетании с доксорубицином сосудов много, они крупные, расширенные, заполнены эритроцитами. Тимусы мышей, получавших ронко-лейкин с ингароном и ронколейкин с рефнотом, отличаются от других групп высоким количеством макрофагов в мозговом веществе, особенно в группе, получавшей ронколейкин с ингароном, где также отмечена высокая плотность расположения ти-моцитов в корковом веществе и умеренная в мозговом (рис. 5б).
I ГйЙР
Рис. 5. Морфологическое строение тимуса. Границы коркового и мозгового вещества: а - размыты, б - четкое разделение; высокая плотность расположения тимоцитов (х40, гематоксилин-эозин) / Fig. 5. Morphological structure of the thymus. Borders between the cortex and the medulla: a - blurred; b - clear distinction; densely packed thymocytes (*40, hematoxylin-eosin)
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Интересно, что у животных, получавших сочетание трех цитокиновых препаратов (ронколейки-на, ингарона и рефнота), отмечены признаки истощения тимуса: дольки маленькие, разноразмерные, сосуды долек сужены, плохо выражены, пустые, плотность расположения тимоцитов в дольках разреженная, нет четкости разделения долек на корковое и мозговое вещество (рис. 5а); не отмечено преобладания коркового вещества.
Обсуждение
Оптимальной среди исследованных комбинаций оказалась ронколейкин+ингарон, которая как в ходе введения, так и после его окончания вызывает ТРО на 30+38 % по сравнению с контролем. При применении данной комбинации наблюдается выраженный (100%-й) антиметастатический эффект, т.е. полное отсутствие mts у животных, тогда как в контрольной группе они выявлены у 60 %. ТРО сопровождается морфологически регистрируемыми дистрофическими изменениями опухолевых клеток и выраженной лейкоцитарной инфильтрацией. Морфологическое исследование тимуса выявило развитое корковое вещество с плотным расположением тимоцитов, что свидетельствует об активном состоянии Т-клеточного звена иммунитета, которое подтверждается результатами субпопуля-ционного анализа спленоцитов: содержание Т-клеток было выше контроля (60,33±1,42 % против 46,1±2,06 %) за счет Th. Добавление к комбинации ронколейкин+ингарон третьего иммуномодулятора рефнота не приводит к дальнейшей положительной динамике: антиметастатический эффект сохраняется, но составляет 95,4 % на фоне незначительного торможения роста меланомы. Сравнение групп, получавших доксорубицин в монорежиме и доксо-рубицин с ронколейкином, показывает, что ронко-лейкин усиливает ТРО как в процессе введения (-27 против -16,2 %), так и на момент эвтаназии (-11,55 против +1,9 %), но не оказывает значимого влияния на метастазирование в данной комбинации. Иммунологические показатели в комбинации ронколейкин+доксорубицин обнаруживают динамику, аналогичную таковой в других группах, получавших ронколейкин (повышение уровня T-клеток за счет Th и снижение B-клеток по сравнению с контролем), в то время как доксорубицин вызывает депрессию T-клеточного звена.
Заключение
Проведенные исследования свидетельствуют об антиметастатическом и иммуномодулирующем эф-
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
фекте п/т применения комбинации ронколейкин+ингарон в эксперименте, а также о целесообразности ее использования в лечении онкологических больных. Дальнейший поиск может выявить и другие эффективные сочетания иммунопрепаратов, что позволит оптимизировать цитокинотерапию и уточнить ее роль и место в комплексном лечении злокачественных опухолей, в том числе в комбинации с химиотерапией.
Литература
1. Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., Семенов А.А., Жа-пова Ц., Погодаева Н.Н., Хоружая Т.Г. Исследование противоопухолевых и антиметаститических свойств растительных средств из аконита байкальского // Сиб. онкол. журн. 2002. № 3-4. С. 138-141.
2. Алефиров А.Н., Беспалов В.Г., Стуков А.Н., Семенов А.Л., Лесиовская Е.Е. Антиметастатическая активность настойки подземной части Aconitum soongaricum (Ranuncu-laceae) на моделях перевиваемых опухолей // Растительные ресурсы. 2014. Т. 50, вып. 2. С. 254-270.
3. Лопатина К.А., Разина Т.Г., Зуева Е.П., Крылова С.Г., Гурьев А.М., Амосова Е.Н., Рыбалкина О.Ю., Сафонова Е.А., Ефимова Л.А., Белоусов М.В. Доклиническое исследование лекарственной формы а(1;2)-Ь-рамно-а(1;4)-Э-галакто-пиранозилуронана из корневищ аира болотного Acorus calamus L. в онкологическом эксперименте // Сиб. онкол. журн. 2015. № 1. С. 59-63.
4. Фадеева Е.В., Лебединская Е.А., Лебединская Е.В. Влияние иммуномодулятора стимфорте на рост и метаста-зирование меланомы B16 у мышей // Успехи соврем. естествознания. 2010. № 7. С. 53-54.
5. Абрамов М.Е., Гуторов С.Л., Славина Е.Г., Кадагид-зе З.Г., Черткова А.И., Черноглазова Е.В., Ротобельская Л.Е., Личиницер М.Р. Химиотерапия диссеминированной меланомы кожи с включением ингарона (у-ИФН). Клинико-иммунологическое исследование // Рос. биотерапев. журн. 2009. № 1. С. 64-74.
6. Абрамов М.Е., Кадагидзе З.Г., Славина Е.Г. Ингарон (интерферон-гамма) в сочетании с химиотерапией в лечении онкологических больных // Фарматека. 2006. № 11. С. 38-44.
7. Proper D.J., Chao D., Braybrooke J.P., Bahl P., Thavasu P., Balkwill F., Turley H., Dobbs N., Gatter K., Talbot D.C., Harris A.L., Ganesan T.S. Low-Dose IFN-y Induces Tumor MHC Expression in Metastatic Malignant Melanoma // Clinic. Cancer Research. 2003. Vol. 9. P. 84-92.
8. Windbichler G.H., Hausmaninger H., Stummvoll W., Graf A.H., Kainz C., Lahodny J., Denison U., Müller-Holzner E., Marth C. Interferon-y in the first-line therapy of ovarian cancer: a randomized phase III trial // Br. J. Cancer. 2000. Vol. 82. P. 1138-1144.
9. Козлов В.А., Черных Е.Р. Современные проблемы иммунотерапии в онкологии // Бюл. СО РАМН. 2004. № 112 (2). С. 13-19.
10. Артамонова Е.В. Модификаторы биологических реакций (иммуномодуляторы, интерфероны, интерлейкины) в терапии злокачественных опухолей // Эффективная фармакотерапия. Онкология, гематология и радиология. 2014. № 1 (14). С. 8-21.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE.
2017. No. 3-2
11. Vladimirova L.Y., Kit O.I., Nikipelova E.A. Resilts of monoclonal antibodies against EGFR-receptors application in patients with metastatic colorectal cancer // J. of Clinical Oncology. 2013. Vol. 31, № 155. P. 19047.
12. Каркищенко Н.Н., Грачев С.В. Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских технологиях. М. : Профиль, 2010. 358 c.
13. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей. Страсбург, 1986.
14. Int. Guiding Principles for Biomedical research Involving Animals. Geneve, 1990.
15. Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К., Андронова Н.В., Гарин А.М. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. Изд. 2-е. М. : Медицина, 2005. С. 637-651.
16. Архипов С.А., Юнкер В.М. Изменение интенсивности метастазирования в легкие перевиваемых опухолей мышей в зависимости от величины перевивочной дозы опухолевых клеток // Исследование по индукции и метастазированию опухолей у экспериментальных животных. Новосибирск, 1984. С. 14-32.
17. Манских В.Н. Патоморфология лабораторной мыши: в 3 т. Т. 1 : Технические аспекты. Общая и органная патология. М. : ВАКО, 2016. 208 с.
References
1. Povet'eva T.N., Pashinskii V.G., Semenov A.A., Zhapova Ts., Pogodaeva N.N., Khoruzhaya T.G. Issledovanie protivoopukholevykh i antimetastiticheskikh svoistv rastitel'nykh sredstv iz akonita baikal'skogo [Investigation of antitumor and antimetasthetic properties of plant remedies from akonite of Baikal]. Sib. onkol. zhurn. 2002, No. 3-4, pp. 138-141.
2. Alefirov A.N., Bespalov V.G., Stukov A.N., Semenov A.L., Lesiovskaya E.E. Antimetastaticheskaya aktivnost' nastoiki podzemnoi chasti Aconitum soongaricum (Ranunculaceae) na modelyakh perevivaemykh opukholei [Antimetastatic activity of the tincture of the underground part of Aconitum soongaricum (Ranunculaceae) on models of transplanted tumors]. Rastitel'nye resursy. 2014, vol. 50, iss. 2, pp. 254-270.
3. Lopatina K.A., Razina T.G., Zueva E.P., Krylova S.G., Gur'ev A.M., Amosova E.N., Rybalkina O.Yu., Safonova E.A., Efimova L.A., Belousov M.V. Doklinicheskoe issledovanie lekarstvennoi formy a(1;2)-L-ramno-a(1;4)-D-galaktopiranozilu-ronana iz kornevishch aira bolotnogo Acorus calamus L. v onkologicheskom eksperimente [Preclinical study of a (1; 2)-L-rhamno-a(1; 4)-D-galactopyranosyluronan dosage form from the rhizomes of the aureus of Acorus calamus L. in the oncological experiment]. Sib. onkol. zhurn. 2015, No. 1, pp. 59-63.
4. Fadeeva E.V., Lebedinskaya E.A., Lebedinskaya E.V. Vliyanie immunomodulyatora stimforte na rost i metastazirovanie melanomy B16 u myshei [Influence of the immunomodulator stymforte on the growth and metastasis of melanoma B16 in mice]. Uspekhi sovrem. estestvoznaniya. 2010, No. 7, pp. 53-54.
5. Abramov M.E., Gutorov S.L., Slavina E.G., Kadagidze Z.G., Chertkova A.I., Chernoglazova E.V., Rotobel'skaya L.E., Lichinitser M.R. Khimioterapiya disseminirovannoi melanomy kozhi s vklyucheniem ingarona (u-IFN). Kliniko-immunologicheskoe
issledovanie [Chemotherapy of disseminated skin melanoma with inclusion of inharone (y-IFN). Clinical and immunological study]. Ros. bioterapevt. zhurn. 2009, No. 1, pp. 64-74.
6. Abramov M.E., Kadagidze Z.G., Slavina E.G. Ingaron (interferon-gamma) v sochetanii s khimioterapiei v lechenii onkologicheskikh bol'nykh [Ingaron (interferon-gamma) in combination with chemotherapy in the treatment of cancer patients]. Farmateka. 2006, No. 11, pp. 38-44.
7. Proper D.J., Chao D., Braybrooke J.P., Bahl P., Thavasu P., Balkwill F., Turley H., Dobbs N., Gatter K., Talbot D.C., Harris A.L., Ganesan T.S. Low-Dose IFN-y Induces Tumor MHC Expression in Metastatic Malignant Melanoma. Clinic. Cancer Research. 2003, vol. 9, pp. 84-92.
8. Windbichler G.H., Hausmaninger H., Stummvoll W., Graf A.H., Kainz C., Lahodny J., Denison U., Muller-Holzner E., Marth C. Interferon-y in the first-line therapy of ovarian cancer: a randomized phase III trial. Br. J. Cancer. 2000, vol. 82, pp. 1138-1144.
9. Kozlov V.A., Chernykh E.R. Sovremennye problemy immunoterapii v onkologii [Modern problems of immunotherapy in oncology]. Byul. SORAMN. 2004, No. 112 (2), pp. 13-19.
10. Artamonova E.V. Modifikatory biologicheskikh reaktsii (immunomodulatory, interferony, interleikiny) v terapii zlokachestvennykh opukholei [Modifiers of biological reactions (immunomodulators, interferons, interleukins) in the therapy of malignant tumors]. Effektivnaya farmakoterapiya. Onkologiya, gematologiya i radiologiya. 2014, No. 1 (14), pp. 8-21.
11. Vladimirova L.Y., Kit O.I., Nikipelova E.A. Resilts of monoclonal antibodies against EGFR-receptors application in patients with metastatic colorectal cancer. J. of Clinical Oncology. 2013, vol. 31, No. 155, p. 19047.
12. Karkishchenko N.N., Grachev S.V. Rukovodstvo po laboratornym zhivotnym i al'ternativnym modelyam v biomeditsinskikh tekhnologiyakh [Guide to laboratory animals and alternative models in biomedical technology]. Moscow: Profil', 2010, 358 p.
13. Evropeiskaya konventsiya po zashchite pozvonochnykh zhivotnykh, ispol'zuemykh dlya eksperimental'nykh i drugikh nauchnykh tselei [European convention for the protection of vertebrates used for experimental and other scientific purposes]. Strasbourg, 1986.
14. Int. Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals. Geneve, 1990.
15. Treshchalina E.M., Zhukova O.S., Gerasimova G.K., Andronova N.V., Garin A.M. [Methodological guidelines for the study of the antitumor activity of pharmacological agents]. Rukovodstvo po eksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniyu novykh farmakologicheskikh veshchestv [Guide to experimental (preclinical) study of new pharmacological substances]. Ed. R.U. Khabriev. Ed. 2nd. Moscow: Meditsina, 2005, pp. 637-651.
16. Arkhipov S.A., Yunker V.M. [Change in the intensity of metastasis in the lungs of transplanted mice tumors as a function of the leno of the tumor cells]. Issledovanie po induktsii i metastazirovaniyu opukholei u eksperimental'nykh zhivotnykh [Research on the induction and metastasis of tumors in experimental animals]. Novosibirsk, 1984, pp. 14-32.
17. Manskikh V.N. Patomorfologiya laboratornoi myshi [Pathomorphology of the laboratory mouse]. Vol. 1: Tekhnicheskie aspekty. Obshchaya i organnaya patologiya [Technical aspects. General and organ pathology]. Moscow: VAKO, 2016, 208 p.
Поступила в редакцию /Received
5 июня 2017 г. / June 5, 2017
