CC BY
42
DOI: 10.23868/201808025
влияние трансплантации аллогенных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга на регенерацию печени после обширной резекции в эксперименте
В.С. Рудаков1, Р.В. Деев2, К.К. Губарев1, Т.А. Астрелина1, И.И. Еремин3, Ю.А. Жгутов1, Е.И. Онницев4, М.О. Мавликеев5, А.А. Титова5, С.Э. Восканян1
1 Государственный научный центр «Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» ФМБА России, Москва, Россия
2 Рязанский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия
3 Центральная клиническая больница с поликлиникой управления делами президента, Москва, Россия
4 Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
5 Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
effect of transplantation of allogeneic multipotent mesenchymal bone marrow stromal cells on regeneration of liver after extended hepatectomy (experimental study)
V.S. Rudakov1, R.V. Deev2 , K.K. Gubarev1, T.A. Astrelina1, I.I. Eremin3, Yu.A. Zhgutov1, E.I. Onnitsev4, M.O. Mavlikeev5, A.A. Titova5, S.E. Voskanyan1
1 АА. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center, Federal Medical Biological Agency, Moscow, Russia
2 N.I. Pavlov Ryazan Medical University, Ryazan, Russia
3 Central Clinical Hospital with Polyclinics of Administration of President of the Russian Federation, Moscow, Russia
4 S.M. Kirov Military Medical Academy, Saint-Petersburg, Russia
5 Kazan (Volga region) Federal University, Kazan, Russia
e-mail: [email protected]
Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) могут быть рассмотрены как основа биомедицинского клеточного продукта для лечения острой печеночной недостаточности. Цель исследования заключалась в оценке влияния ММСК, введенных в нижнюю полую вену, на пролиферативную активность гепатоцитов и морфометрические критерии регенерации печени после резекции 68 % её объема у крыс. В работе оценивали количество митозов, долю РС1\1Д-позитивных клеток, диаметр ядра гепатоцитов, площадь гепатоцитов, ядерно-цитоплазматическое соотношение (ЯЦС), размер печеночных долек на 1, 2, 4, 14 сутки после операции. Результаты исследования показали, что внутривенное введение 2,5 млн аллогенных ММСК костного мозга (КМ) в нижнюю полую вену после расширенной резекции печени увеличивает количество пролиферирующих гепатоцитов (РС1\1Д-позитивных клеток), но не влияет на количество фигур митозов, диаметр ядра, площадь гепатоцитов, ЯЦС и печеночной дольки, что, вероятно свидетельствует в пользу регенерации, протекающей в изученные сроки на внутриклеточном уровне.
ключевые слова: обширная резекция печени, трансплантация, мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, нижняя полая вена.
введение
Известно, что острая печеночная недостаточность (ОПН) в большинстве случаев возникает вследствие токсического и вирусного повреждения печени, а также развивается после обширной резекции этого органа и проявляется острой утратой функций печени, которая приводит к желтухе, коагулопатии и печеночной энцефалопатии. Без лечения ОПН может привести к полиорганной недостаточности, коме и смерти [1]. Ортотопическая трансплантация печени является операцией выбора при тяжелой ОПН, однако нехватка органов ограничивает возможность применения этой операции [2]. Кроме этого, пожизненное применение иммуносупрессантов после трансплантации печени сопряжено с высоким риском развития побочных эффектов (артериальной гипертензии, почечной недостаточности, опухоли,
Multipotent mesenchymal stromal cells can be a drug for treatment of acute liver failure. The purpose of this study was to assess the effect of multipotent mesenchymal stromal cells on the proliferative, mitotic activity of hepatocytes and morphometric criteria for the regeneration of liver parenchyma after 68 % partial hepatectomy in rats. The number of mitosis, PCNA positive cells, diameter of nucleus of hepatocytes, size of hepatocytes, nuclear-cytoplasmic ratio (NCR), the area of hepatic lobules were evaluated on 1, 2, 4, 14 days after surgery. The results of the study showed that intravenous administration of allogeneic mesenchymal multipotent stromal cells from bone marrow after extended hepatectomy increase the number of proliferating hepatocytes (PCNA positive cells), but does not affect the number of mitoses, the diameter of the nucleus, the area of hepatocytes, NCR and hepatic lobules. Probably, at this time, regeneration proceeds primarily through an intracellular mechanism.
Keywords: extended hepatectomy, transplantation, multipotent mesenchymal stromal cells, inferior vena cava.
инфекции и т. д.) [3]. Указанные обстоятельства и высокие затраты на трансплантацию и лечение в послеоперационном периоде привели к поиску дополнительных методов лечения ОПН.
Количество экспериментальных методик применения стромальных клеток (включая ММСК, полученных из костного мозга (КМ)) за последние годы существенно возросло. Их эффективность была показана при хронической и острой печеночной недостаточности как в экспериментах, так и в инициативных клинических исследованиях [4]. В отличие от гепатоцитов, они легкодоступны и могут быть успешно культивированы in vitro [4]. Кроме того, при применении аутогенных клеток нет потребности в применении иммуносупрессантов [4]. Механизмы, с помощью которых ММСК оказывают положительное влияние на регенерацию печени, полностью не изучены.
Предполагается, что они могут участвовать в клеточной регенерации печени, слиянии с гепатоцитами и (или) секреции паракринных факторов, которые стимулируют деление клеток, ингибируют апоптоз или модулируют местные и системные воспалительные реакции [5].
В настоящем исследовании мы оценивали влияние аллогенных ММСК КМ на пролиферативную активность гепатоцитов и регенерацию печени после обширной резекции.
Материал и методы
Дизайн исследования
Исследование выполнено на 63 крысах — самцах породы Вистар массой 155-185 г. Медиана массы крыс составила 173 г. Животных содержали в виварии ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России в одинаковых условиях при постоянной температуре окружающей среды, кормление производили стандартным лабораторным кормом. Помещение, в котором находились животные, вентилировалось с постоянным контролированием давления воздуха и температуры, соблюдали суточный цикл (12 часов день/ночь). Накануне операции крыс не кормили, все манипуляции выполняли в период с 7.30 до 10.30. Крыс выводили из эксперимента декапитацией под в/м наркозом раствором Золетила из расчета 15 мг/ кг массы тела животного. Эксперимент проводили и завершали в соответствии с требованиями Хельсинской конвенции о гуманном обращении с экспериментальными животными (1975). Эксперимент одобрен этическим комитетом ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им А.И. Бурназяна ФМБА России (протокол № 1 от 20 июня 2012).
Животные подразделены на 2 группы: 1 — контрольная (n=28), крысам которой выполняли резекцию 70 % печени без трансплантации аллогенных ММСК КМ в нижнюю полую вену (НПВ); 2 — экспериментальная группа (n=28), выполняли резекцию 70 % печени с трансплантацией 2,5 млн аллогенных ММСК КМ в НПВ. 7 крыс из 1 и 2 групп были использованы для определения мор-фометрических показателей печени в норме (на 0 сутки, до резекции 70 % печени), им выполнена лапаротомия, взятие фрагмента органа на исследование, а также бедренной кости для получения ММСК КМ.
Животным в обеих группах выполнена резекция 70 % печени по стандартной методике [6], в НПВ введено 0,5 мл 0,9 % раствора NaCl (BBraun, Германия), в экспериментальной группе с данным раствором вводили 2,5 млн аллогенных ММСК КМ в нПв. В последующем по 7 крыс выводили из эксперимента на 1, 2, 4, 14 сут. эксперимента, оценивали количество митозов, PCNA-позитивных клеток, диаметр ядра гепатоцитов, площадь гепатоцитов, ЯЦС, размер печеночных долек. Выбор сроков выведения из эксперимента был выполнен с учетом пиков синтеза ДНК в клетках печени [8].
Получение ММСК КМ
ММСК получены из КМ бедренных костей крыс по стандартной методике [7]. Центрифугирование выполняли в течение 7 мин. при 300 g. Состав культураль-ной среды — DMEMF12 + 10 % FBS (BioInd, Индия) + пенициллин 100 ед/мл + стрептомицин 100 мкг/мл + L-глютамин 2 мл. В эксперименте использованы клетки третьего пассажа. Фенотип ММСК подтвержден при помощи проточной цитометрии при использовании стандартной (для ММСК) панели антител.
Протокол операции
Резекция 68 % печени у крыс выполнена по методике G.M. Higgens, R.M. Anderson [6]. Под в/м анестезией
раствором Золетила из расчета 15 мг/кг веса выполняли верхнюю срединную лапаротомию (разрез длиной 3-4 см). Срединную и левую латеральную доли печени выводили в рану, долевые сосуды перевязывали у основания и доли удаляли. Удаленная часть составляла 2/3 (67-70 %) от общей массы печени. Лапаротомный разрез ушивали наглухо непрерывным швом.
Определение количества митозов
Материал фиксировали в 4 % забуференном формальдегиде в течение 24 часов, затем заливали в парафин по стандартной методике, парафиновые срезы толщиной 4-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Определяли суммарное количество фигур митоза в 5 полях зрения при увеличении х400. Все измерения производили в программе AxioVision 4.8 (Carl Zeiss AG, Германия).
Определение диаметра ядра гепатоцитов
Диаметр ядра измеряли полуавтоматическим методом после окраски препаратов гематоксилином и эозином в 5 полях зрения при увеличении х400.
Определение площади гепатоцитов
Площадь гепатоцитов определяли полуавтоматическим методом после окраски препаратов гематоксилином и эозином в 5 полях зрения при увеличении х400.
Определение ядерно-цитоплазматического
соотношения (ЯЦС)
ЯЦС в % высчитывали по формуле S^SL|x100. Где ЭЯ — площадь ядра клетки, ЭЦ — площадь цитоплазмы (ге-патоцита). ЭЯ=1/4xnxd2. Где d — диаметр ядра. Значение п=3,1415926.
Определение площади печеночных долек
Классическую печеночную дольку представили в виде правильного шестиугольника, в центре которого располагается центральная вена, а по углам — портальные тракты. Площадь правильного шестиугольника вычисляли по формуле: S= 3xl2xV3/2, где S-площадь шестиугольника, l-длина одной из сторон шестиугольника (измеряли расстояние между двумя близлежащими портальными трактами). Проводили измерение не менее 25 порто-портальных расстояний.
Определение доли PCNA-позитивных клеток
Парафиновые срезы печени крысы окрашивали иммуногистохимически с антителами к ядерному антигену пролиферирующих клеток (Proliferating cell nuclear antigen — PCNA) (клон PC10, DAKO, Denmark; разведение 1 :1 00). Детекцию результатов иммуногистологи-ческой реакции проводили стрептавидин-биотиновым методом (LSAB), визуализацию производили с помощью 3-аминоэтил-9-карбазола (АЭК), ядра докрашивали гематоксилином. Высчитывали среднее процентное соотношение количества PCNA-позитивных ядер к общему количеству ядер в 5 полях зрения при увеличении x400.
Статистический анализ
Статистическая обработка полученных данных выполнена с помощью программного обеспечения SPSS 22 для Windows. Количественные данные представляли в виде медианы и межквартильного размаха. Для сравнения значений количественных признаков в независимых группах использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Различия признавали статистически значимыми при значении р<0,05.
Сутки
Сутки
□ Без ММСК □ С ММСК
Сутки
Рис. 1. Количество фигур митозов (А), доля PCNA-позитивных (%) гепатоцитов (Б), диаметр ядра (В), площадь гепатоцитов (Г) на разные сроки после операции с применением аллогенных ММСК КМ (зеленый цвет) и без применения ММСК КМ (белый цвет). * — статистически значимый результат между группами (P<0,05); v — статистически значимый результат внутри группы при сравнении с нормой (P<0,05). Розовым цветом отмечен коридор средних нормальных значений (нативный контроль)
Результаты
В ходе эксперимента все крысы перенесли операции удовлетворительно, осложнений и нежелательных реакций не отмечено.
Количество фигур митозов
Пик митозов приходился на 2 сутки как в контрольной, так и в экспериментальной группе, однако статистически достоверных различий при сравнении двух групп не выявлено (рис. 1А, 2). Следовательно трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет на количество митозов после 68 % резекции печени.
Количество PCNA-позитивных гепатоцитов
При постановке реакций с антителами к PCNA до выполнения резекции печени была отмечена минимальная пролиферативная активность. В дольках печени наблюдали лишь единичные позитивно окрашенные гепато-циты (рис. 1Б). Однако уже через сутки после операции мы наблюдали резкое нарастание числа делящихся ге-патоцитов, максимум их пролиферативной активности приходился на 2 сутки, к 14 суткам отмечали нормализацию внутри каждой группы (см. рис. 1Б, 3). При анализе
между группами выявили статистически достоверное их увеличение в экспериментальной группе на 1 и 2 сутки (на 8-18 %) после операции (рис. 1Б, 3).
Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ увеличивает количество пролиферирующих гепато-цитов после 70 % резекции печени.
Диаметр ядер гепатоцитов
Наибольший диаметр ядра отмечен на 1 сутки в обеих группах. Повышение диаметра ядра внутри групп отмечено на всех сроках после операции. Однако при сравнении между группами статистически значимых различий не было выявлено (рис. 1В), что свидетельствует в пользу того, что трансплантация ММСК КМ не влияет на диаметр ядра гепатоцитов после резекции 68 % печени.
Площадь гепатоцитов
Наибольшая площадь гепатоцитов отмечена на 1 и 14 сутки в двух группах. Статистические различия между группами не отмечены на всех сроках после операции (рис. 1Г). Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет на площадь гепатоцитов после резекции 68 % печени.
рис. 2. Срез печени крысы на 2 сутки после резекции 70 % печени: А — без применения аллогенных ММСК КМ; Б — с применением аллогенных ММСК КМ. * — фигуры митоза. Окраска гематоксилин и эозин. Ув.: х400
рис. 3. Срез печени крысы на 2 сутки после резекции 70 %% печени: А — без применения аллогенных ММСК КМ; Б — с применением аллогенных ММСК КМ. Иммуногистохимическая реакция с антителами к PCNA, докраска — гематоксилин и эозин. Ув.: х200
2.00 Сутки
□ Без ММСК □ С ММСК
рис. 4. ЯЦС (%) в сравниваемых группах. V — статистически значимый результат внутри группы при сравнении с нормой (Р<0,05). Розовым цветом отмечен коридор средних нормальных значений (нативный контроль)
ЯЦС
Пик ЯЦС отмечен на вторые сутки после операции. Внутри обеих исследуемых групп наблюдали увеличение ЯЦС на 1, 2, 4 сутки после операции (табл. 1, рис. 4). Статистически значимых различий между группами не выявлено.
Площадь печеночных долек
Площадь печеночных долек была больше нормы в 1,5-2 раза на 2 и 4 сутки после операции. Наибольший размер печеночных долек отмечен на 4 сутки после операции внутри двух исследуемых групп, с последующим восстановлением их размеров к 1 4 суткам (табл. 1 ). Статистически значимых различий между группами не было выявлено на всех сроках после операции.
Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет на площадь печеночной дольки после резекции 68 % печени.
обсуждение
Биохимические признаки регенерации печени после обширной резекции в эксперименте были показаны ранее [5]. Полученные данные сложно трактовать без морфологического объяснения феноменов, развивающихся в печени после резекции и трансплантации аллогенных
Таблица 1. Оценка площади дольки и ЯЦС
Контрольная группа Экспериментальная группа
Оценка Сутки Медиана Процентили (25 %-75 %) Медиана Процентили (25 %-75 %) Р
Норма 100 60,13-151,86 100 60,13-151,86 —
1 121,50 79,05-159,77 110,35 65,40-253,07 0,80
Площадь 2 177,30 101,06-322,70 173,02 107,95-245,44 0,66
дольки (%)* 4 221,12 129,11-430,14 223,07 131,32-489,79 0,50
14 119,79 80,44-239,82 131,79 58,76-225,85 0,50
Норма 12,84 10,44-16,07 12,84 10,44-16,07 —
18,12 '
14,31-22,33 1
18,04 1
13,72-22,77 1
0,83
1
ЯЦС (%)
18,05 1
13,98-23,73 1
17,28 1
12,83-25,88 1
0,84
2
4
15,53 1
12,31-19,52 1
15,44 1
10,22-20,63 1
0,64
14
13,81
10,33-18,02
12,94
10,79-17,53
0,540
Примечания: * % от площади дольки нормальной печени; V — статистически значимый результат внутри группы (между нормой и выбранными сутками) (Р<0,05).
ММСК. Считается, что ММСК могут влиять на восстановление печени 3 основными путями: 1) замена поврежденных и недостающих клеток путем трансдифферен-цировки в гепатоциты и (или) слияния с гепатоцитами; 2) синтез ростовых факторов и цитокинов; 3) прямое и опосредованное воздействие на Т- и В-лимфоциты, что уменьшает степень активности воспалительного ответа в поврежденной печени [9].
Остается не изученным в какой мере конкретный механизм действия ММСК влияет на полученный результат. Данные, касающиеся выживаемости ММСК после их трансплантации, разнятся и зависят от пути введения клеток, экспериментальной модели и используемого метода маркировки клеток [10]. При использовании модели, аналогичной нашей (резекция 70 % печени и внутривенное введение ММСК крысам), меченые ММСК обнаруживали в печени на 3 сутки после операции, они составляли 8 % от всех клеток печени [11].
При анализе морфометрических показателей не выявлено статистически значимых отличий между группами при определении количества митозов, диаметра ядра, площади гепатоцитов, ЯЦС и печеночных долек, но выявлены статистические отличия при анализе количества РС1\1Д-позитивных гепатоцитов.
Увеличение размеров печеночных долек внутри группы на 2-3 сутки с последующей нормализацией их размера отмечали и другие авторы [12]. Увеличение печеночных долек связывали с гипертрофией печеночных долек, в то время как уменьшение в первую очередь с разделением гипертрофированных долек [12]. Пролиферацию гепатоцитов рассматривали в качестве единственного механизма увеличения размеров печеночной дольки. На наш взгляд, это может также происходить за счет
гипертрофии гепатоцитов (что подтверждается проведенным исследованием, в котором обнаружено увеличение диаметра ядер гепатоцитов и площади гепатоцитов), отека стромы и расширения синусоидов как результата увеличения объемного кровотока в условиях снижения объема органа, набухания гепатоцитов в результате дистрофических изменений. В качестве механизма уменьшения размеров печеночной дольки возможен апоптоз.
При этом следует отметить, что снижение размеров гепатоцитов после их увеличения на 1 сутки происходит достаточно быстро, ко 2-4-м суткам — это скорее говорит о дистрофических процессах в гепатоцитах с их последующим разрушением, затем к 14-м суткам происходит повторное увеличение площади гепатоцитов, что скорее можно трактовать как результат гипертрофии гепатоцитов.
Полученные данные наводят на мысль, что аллогенные ММСК КМ посредством синтеза ростовых факторов и ци-токинов способствуют пролиферации гепатоцитов и ин-гибируют апоптоз, первое подтверждается в в нашей работе при анализе количества РС1\1Д — позитивных клеток. Однако, действия данных факторов не достаточно для статистически значимого увеличения числа митозов, диаметра ядра, площади гепатоцитов, ЯЦС или печеночной дольки. Необходимо иметь в виду, что при измерении площади гепа-тоцитов, ЯЦС, площади долек оценивали изменение микроструктуры печени после ОРП в двухмерном пространстве. При этом необходимо учитывать, что изменения в трехмерном пространстве будут отличаться, так как при вычислении данных показателей необходима еще одна переменная — высота гепатоцита и печеночной дольки, определение которых на плоскостных препаратах весьма затруднительно.
Увеличение количества РС1\1Д-позитивных клеток на фоне трансплантации ММСК отмечали и другие
авторы [13, 14]. Как известно, PCNA выполняет роль кофактора ДНК-полимеразы в S-фазе клеточного цикла, несмотря на устоявшуюся традицию отождествления выявление этого маркера в ядре с митозом, в большей степени его наличие свидетельствует об активации репарации и синтезе ДНК, т. е. процессах, не тождественных митозу.
В доступных источниках не было найдено работ, касающихся влияния ММСК при ОПН на такие показатели как: число фигур митозов, диаметр ядра, площадь гепатоцита, ЯЦС и печеночной дольки. Однако, в других работах при оценке регенерации печени данные показатели учитывали [5, 15-17]. Редкое применение данных показателей связано с трудоемкостью морфо-метрического исследования.
Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет на количество митозов, диаметр ядра, площадь гепатоцитов, ЯЦС и размер печеночных долек, но увеличивает количество PCNA-положительных гепатоцитов после резекции 68 % печени.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Putignano A., Figorilli F., Alabsawy E. et. al. Long-term outcome in patients with acute liver failure. Liver Int. 2018; 10.1111/liv.13914.
2. O'Grady J. Timing and benefit of liver transplantation in acute liver failure. J Hepatol. 2014; 60(3): 663-70.
3. Watt K.D., Pedersen R.A., Kremers W.K. et al. Evolution of Causes and Risk Factors for Mortality Post Liver Transplant: Results of the NIDDK Long Term Follow-up Study. American Journal transplantation 2010; 10(6): 1420-7.
4. Котенко К.В., Восканян С.Э., Еремин И.И. и др. Перспективы применения клеточных продуктов в хирургической гепатологии. Гепатога-строэнтерология 2011; 5-6: 208-16.
5. Рудаков В.С., Восканян С.Э., Еремин И.И. и др. Применение муль-типотентных мезенхимальных стромальных клеток в лечении острой печеночной недостаточности после обширной резекции печени в эксперименте. Гены и Клетки 2016; 11(4): 70-4.
6. Рудаков В.С., Восканян С.Э., Еремин И.И. и др. Экспериментальные модели острой печеночной недостаточности. Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова 2015; 4: 138-44.
7. Sun X.E., Zhang X.Q., Liu M.M. Effect of bone marrow mesenchymal stem cells on the TGF-B1/Smad signaking pathway of hepatic stellate. Genetic and Molecular Research 2015; 14: 8744-54.
8. Michalopoulos G.K., Marie C. Liver Regeneration. DeFrances Science 1997; 276: 60-6.
9. Liu W., Song F., Ren L.N. et al. The multiple functional roles of mes-enchymal stem cells in participating in treating liver diseases. Cell. Mol. Med. 2015; 3: 511-20.
заключение
Трансплантация ММСК КМ после обширной резекции печени посредством синтеза ростовых факторов и цитокинов способствуют пролиферации гепатоцитов (РС1\1Д позитивных клеток), но не влияет на количество митозов, диаметр ядра, гепатоцитов, ЯЦС, площадь печеночной дольки, что говорит об активации молекулярных внутриядерных репаративных процессов, которые допустимо рассматривать как реактивные изменения в ответ на повреждение и трансплантацию, протекающие по сценарию внутриклеточной репаративной регенерации. Для более полного понимания механизмов терапевтического действия ММСК при ОПН необходимо проведение дополнительных исследований.
конфликт интересов
Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов. Финансирование осуществлено за счет средств ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна.
10. Cen P., Chen J., Hu C. et al. Noninvasive in-vivo tracing and imag-img of transplanted stem cells for liver regeneration. Stem Cell Research & Therapy 2016; 7: 1-11.
11. Akhan E., Tuncel D., Akcali K.C. Nanoparticle Labeling of Bone Marrow-Derived Rat Mesenchymal Stem Cells: Their Use in Differentiation and Tracking. Biomed. Res. Int. 2015; 19: 511-20.
12. Газизов И.М., Калигин М.С., Андреева Д.И. и др. Изменения микроструктуры печени после частичной гепатэктомии у крыс. Гены и Клетки 2013; 8(3): 101-5.
13. Liu T., Mu H., Shen Z. et al. Autologous adipose tissue-derived mesenchymal stem cells are involved in rat liver regeneration following repeat partial hepatectomy. Mol. Med. Rep. 2016; 13(3): 2053-9.
14. Yu J., Yin S., Zhang W. et al. Hypoxia preconditioned bone marrow mesenchymal stem cells promote liver regeneration in a rat massive hepatectomy model. Stem Cell Research & Therapy 2013; 4: 1-9.
15. Baretta G.A., Gama Filho O., Toderke E.L. et al. Effect of cyclosporine on liver regeneration in partial hepatectomized rats. Acta Cir. Bras. 2015; 30(1): 54-9.
16. Biondo-Simöes M.L.P., Matias J.E.F., Montibeller G.R. et al. Effect of aging on liver regeneration in rats. Acta Cirurgica Brasileir 2006; 1(4): 197-202.
17. D'Espressailles A., Dossi C., Intriago G. et al. Hormonal pretreat-ment preserves liver regenerative capacity and minimizes inflamation after partial hepatectomy. Annals of hepatology 2013; 12(6): 981-91.
Поступила: 10.052018
