CC BY
22
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Таким образом, было установлено, что регуляторные клетки действительно принимают участие в сдерживании патологического процесса при инфекции, но модуляция инфекционного процесса с помощью клеточной терапии является очень сложной задачей, решение которой требует, как минимум, детальных знаний о динамике воспалительного процесса, и кратности введения клеток.
Работа выполнена при поддержке гранта Российского Научного Фонда 15-15-30020.
ВЛИЯНИЕ СЕМАФОРИНА 3А НА ФУНКЦИИ ТИМОЦИТОВ МЫШИ
Рутто К.В., Кудрявцев И.В., Людыно В.И., Киселева Е.П.
ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
Семафорин ЗА (Sema 3A) известен как фактор, направляющий рост аксонов. Однако действие этого фактора гораздо шире и затрагивает клетки иммунной системы. В тимусе он синтезируется эпителиальными клетками и регулирует процесс адгезии тимоцитов к эпителиальным клеткам тимуса человека (Lepelletier Y., 2007).
Цель. Изучение влияния Sema ЗА на пролиферацию, миграцию и адгезию тимоцитов к эпителиальным клеткам тимуса мыши.
Адгезию тимоцитов проводили на двух линиях эпителия тимуса мыши — кортикального cTEC1-2 и медуллярного mTEC3-10 (Kasai M. et al., 1996). Пролиферацию ти-моцитов изучали в присутствии конканавалина А (Con А) и без него с помощью МТТ-теста и визуального подсчета клеток. Миграцию тимоцитов мыши изучали с использованием поликарбонатных вставок с диаметром пор 5 мкм 24-луночного формата (Kim C. et al., 1998).
На первоначальном этапе исследований с использованием реакции обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР) было выявлено, что тимоциты экспрессируют мРНК следующих рецепторов Sema ЗА: PlexA1, PlexA2, PlexA3 и Nrp-1. При исследовании поверхностной экспрессии рецепторов с помощью проточной цитометрии среди тимоцитов было выявлено 37,5% PlexA1+ клеток и 89,8% Nrp-1+ клеток. Полученные данные указывают на то, что тимоциты могут служить мишенями для действия Sema 3A.
С помощью MTT-теста было показано, что Sema ЗА снижает митоген-индуцированную пролиферацию ти-моцитов в концентрациях 100 нг/мл (ОП570 в контроле - 0,285±0,014, n = 6; с Sema ЗА - 0,236±0,013, n = 5, p < 0,05) и 200 нг/мл (ОП570 в контроле - 0,З17±0,021, n = 6; с Sema ЗА - 0,24З±0,011, n = 6, p < 0,05). Полученные данные подтвердились при визуальном подсчёте клеток (в контроле - 4,82±0,09 млн/мл, n = З; с Sema ЗА 100 нг/мл - 4,28±0,06 млн/мл, n = З, p < 0,05; с Sema ЗА 200 нг/мл -З,48±0,11 млн/мл, n = З, p < 0,05).
Далее было показано, что Sema ЗА в концентрациях 10-200 нг/мл дозозависимо ингибировал адгезию тимо-цитов к обеим клеточным линиям (при З0 и 120 мин инкубации) с максимальны эффектом в концентрации 200 нг/мл. Чтобы выяснить, какие клетки являются мишенью действия Sema ЗА, тимоциты и эпителиальные клетки прединкубировали раздельно с Sema ЗА (200 нг/мл) в течение 2 ч, после чего клетки отмывали З раза и проводили
адгезию в течение 30 мин. Ингибирующий эффект Sema 3A сохранялся только при предварительной обработке тимоцитов, как на cTEC1-2 (индекс адгезии в контроле 33,12±0,57 n = 10; с Sema 3A 28,4±1,6 n = 10, p < 0,05), так и на mTEC3-10 (в контроле 39,66±0,82 n = 8; с Sema 3A 32,53±0,76 n = 10, p < 0,001). При этом предобработка Sema 3A клеток эпителия эффекта не давала. Обработка тимоцитов блокирующими антителами к Nrp-1 полностью отменяла ингибирующий эффект 200 нг/мл Sema 3A на адгезию тимоцитов к кортикальным (индекс адгезии в контроле 43,96±1,85 n = 6; с Sema 3A 21,58±9,96 n = 6; с Sema 3A и антителами к Nrp-1 — 42,67±1,33 n = 6, p < 0,001) и медуллярным клеткам (в контроле: 28,85±1,10 n = 6; с Sema 3A 24,40±1,59 n = 6; с Sema 3A и антителами к Nrp-1: 32,54±1,95 n = 6, p < 0,05). Таким образом, ингибирующий эффект Sema 3A был связан с его действием на тимоциты, а не на клетки эпителия, и опосредован через рецептор Nrp-1 на тимоцитах.
Кроме того, Sema 3A в концентрации 100 нг/мл оказывал хеморепеллентный эффект в отношении тимоцитов, а предобработка тимоцитов антителами к Nrp-1 отменяла эффект Sema 3A (индекс миграции в контроле 1,49±0,01 n = 5; с Sema 3A 0,65±0,08 n = 5, p < 0,001; с Sema 3A и антителами к Nrp-1 - 1,21±0,08 n = 5, p < 0,01).
Таким образом, были получены новые данные о влиянии Sema3A на пролиферацию, миграцию тимоцитов мыши и их адгезию к эпителиальным клеткам тимуса, имеющие значение для лучшего понимания процесса созревания Т-лимфоцитов.
Работа поддержана грантом РФФИ № 15-04-06150.
ЛПС-СТИМУЛИРОВАННЫЕ МАКРОФАГИ МИГРИРУЮТ В ТИМУС И ИНДУЦИРУЮТ АПОПТОЗ ТИМОЦИТОВ
Семенова М.А., Сергеев В.Г.
ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет» Ижевск, Россия ФГБОУ ВО «Ижевская государственная медицинская академия», Ижевск, Россия
Введение. Представление о роли тимуса в иммунологических механизмах инфекционных заболеваний ограничивается представлением о закономерной акциден-тальной инволюции этого органа в ходе формирования адаптационного синдрома в ответ на действие стрессор-ных инфекционных агентов. Наряду с данными о прямом атрофическом действии на тимус гормонов надпочечников, появляется информация о том, что и сами бактериальные агенты через клеточное опосредование влияют на интенсивность гибели тимоцитов. Важную роль в механизмах такого взаимодействия могут играть макрофаги, которые, как показали последние исследования, способны проникать в тимус после нагрузки антигеном на периферии и вызывать селективную клональную делецию тимоцитов, имеющих рецепторы к данному антигену.
Однако из этих экспериментов остается неясным ограничено ли их действие только делецией относительно зрелых антигенспецифических Т-клеток мозгового вещества, или мигрирующие в тимус макрофаги способны к индукции апоптоза малодифференцированных тимоцитов корковой зоны, т.е. участвовать в процессе атрофии тимуса. Для ответа на этот вопрос мы провели эксперимент, целью которого явилась оценка интенсивности
