Влияние салсоколлина на окислительный метаболизм крыс с начальными проявлениями диабетической нефропатии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА

В. Б. Молотов-Лучанский

ВЛИЯНИЕ САЛСОКОЛЛИНА НА ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ МЕТАБОЛИЗМ КРЫС С НАЧАЛЬНЫМИ ПРОЯВЛЕНИЯМИ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТИИ

Доцетский курс доврачебной подготовки Карагандинской государственной медицинской академии

Поражение почек при сахарном диабете является одним из наиболее тяжелых осложнений. Интернисты и эндокринологи пользуются понятием «диабетическая нефропатия» (ДН) как собирательным, включающим в себя ряд вариантов поражений почек, в том числе гломеру-лосклероз, инфекцию мочевых путей с пиелонефритом, папиллярный некроз [9]. Однако в последние годы ряд исследователей считает необходимым изменить концепцию ДН в пользу преимущественно сосудистого осложнения, завершающегося развитием гломерулосклероза и утратой функции почек [1]. Это принципиально меняет взгляды на патогенез и возможности коррекции ДН, что особенно важно в отношении поиска средств, влияющих на клеточный метаболизм.

Цель работы - исследование эффектов салсоколлина как препарата с известными анти-оксидантными свойствами в отношении окислительного метаболизма при экспериментальной диабетической нефропатии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Была использована хорошо апробированная модель аллоксанового диабета [11]. Раствор аллоксана вводили в бедренную вену животных из расчета 0,1 мл раствора на 25 г массы. Контрольным животным однократно вводили в бедренную вену стерильный физиологический раствор в объеме, равном объему аллоксана. После введения аллоксана для получения стойкого гипергликемического состояния животные выдерживались в течение 30 сут. Для контроля уровня глюкозы кровь 2 раза в нед. отбирали из хвостовой вены. Уровень глюкозы в крови определяли с помощью тест-полосок фирмы Boehringer Mannheim. На протяжении этих 30 сут уровень глюкозы в крови крыс был в пределах 11,8 - 12,8 ммоль/л. Стойкая гипергликемия на протяжении 30 сут приводит к развитию начальных проявлений диабетической нефропатии [15]. Через 30 сут животные с начальными проявлениями ДН были разделены на 2 группы. I группа животных получала салсоколлин в течение 14 сут для коррекции начальных проявлений диабетической нефропатии. Салсоколлин вводили натощак в эффективной дозе 100 мг/кг. Препарат растворяли в 1 мл физиологического раствора, после чего вводили внутрижелудочно. Животные II группы получали внутрижелудочно в таком же объеме физиологический раствор, но без салсоколлина.

Салсоколлин - гепатопротектор растительного происхождения. Препарат разработан в Институте фитохимии МОН РК и содержит комплекс биологически активных веществ солянки холмовой (Salsolla collina pall). Препарат обладает широким механизмом действия и направлен не только на стимуляцию репаративных процессов, но также на перехват и инактивацию свободных радикалов. Входящие в его состав полифенолы могут образовывать хелатные комплексы с ионами железа, выключая их из процессов перекис-ного окисления липидов (ПОЛ). Салсоколлин потенцирует функцию эндогенных антиоксидан-тов - витамина Е и глутатионпероксидазы и способствует сохранению высокого уровня восстановленного глутатиона [3].

Все манипуляции с животными проводили в утренние часы с учетом влияния циркадианных ритмов. Животных умерщвляли путем неполной декапитации под легким эфирным наркозом, согласно правилам работы с экспериментальными животными [7].

Объектом исследования были кровь и почки экспериментальных животных. Кровь стабилизировали гепарином. Плазму отделяли от эритроцитов центрифугированием в течение 10 мин при 3000 об/мин на центрифуге ОПН-1. Эритроциты трижды промывали охлажденным физиологическим раствором.

Почки промывали охлажденным физиологическим раствором, затем замораживали жидким азотом, растирали в ступке и использовали для биохимических исследований.

В гомогенате ткани почек определяли содержание диеновых конъюгатов (ДК) по методу И. Д. Стальной [13]. Определение содержания малонового диальдегида (МДА) в тканях проводили по методике В. А. Костюка и А. И. Потапо-вич [5]. Уровень оснований Шиффа (ШО) определяли, используя методический прием Е. А. Львовской и соавт. [12]. Активность глутатионпероксидазы (ГПО), глутатионредуктазы (ГР) и глутатион^-трансферазы (rST) определяли по методу В. Б. Кругликова и Ц. М. Штутман [6].

Интенсивность окислительной модификации белков (ОМБ) плазмы крови определяли по методу Е. Е. Дубининой [10].

Интенсивность процессов ПОЛ в эритроцитах крови оценивали по содержанию продуктов, образующихся на разных стадиях перекисного каскада. В эритроцитах определяли содержание диеновых конъюгатов (ДК) и кетодиенов (КД) по методу В. Н. Ушкаловой и Г. Д. Кадочниковой [14]. Содержание малонового диальдегида (МДА) в эритроцитах выявляли по методу М. С. Гонча-ренко и А. М. Латыповой [4]. Содержание суммарных первичных (СПП), суммарных вторичных (СВП) продуктов и оснований Шиффа (ШО) оценивали по методу [12].

Активность КАТ в эритроцитах определяли по методу М. А. Королюк и соавт. [8], активность ГПО в эритроцитах - по методу С. И. Власовой и

Медицина и экология, 2007, 3

соавт. [2]. Результаты обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Проанализированы результаты изучения влияния салсоколлина на показатели ПОЛ и активность ферментов обмена глутатиона в тканях почек крыс с начальными проявлениями диабетической нефропатии (табл. 1).

В тканях почек крыс с начальными проявлениями ДН, получавших салсоколлин, уровень ДК, МДА и ГПО достоверно превышал значения контроля. В то же время отмечено уменьшение содержания ДК и МДА на 59,4% и 23% соответственно по сравнению с группой без коррекции. Также зафиксировано торможение образования ШО, уровень которых был ниже, чем в группе сравнения, на 30,3%. Кроме того, обнаружено возрастание активности ГР и ГПО в 3,4 раза и 2,5 раза соответственно по сравнению с группой без лечения. В то же время не зафиксировано позитивной динамики со стороны глутатион^-трансферазы. При этом активность ферментов глутатионового цикла в почках пролеченных крыс достоверно отличалась от контрольной группы.

Следовательно, салсоколлин способствует торможению образования катаболитов ПОЛ в тканях почек крыс с начальными проявлениями

ДН, повышению активности некоторых ферментов обмена глутатиона. Но несмотря на позитивную динамику со стороны изучаемых показателей, их нормализации не наблюдается

Изучены результаты исследования влияния салсоколлина на показатели окислительной модификации белков в плазме крови крыс с начальными проявлениями ДН (табл. 2).

В плазме крови крыс с ДН, получающих салсоколлин, содержание катаболитов ОМБ было сопоставимо с таковыми без лечения и достоверно превышало значения контроля.

Изучены результаты влияния салсоколли-на на показатели ПОЛ в эритроцитах крови крыс с начальными проявлениями ДН (табл. 3). При использовании салсоколлина наблюдалась тенденция к снижению содержания ДК и КД в эритроцитах на 20% по сравнению с группой животных без лечения.

Содержание МДА и ШО в эритроцитах крови крыс с ДН, получавших салсоколлин, было сопоставимо с контролем. Достоверное снижение зафиксировано только для одного параметра -суммарных вторичных продуктов, содержание которых было ниже, чем в группе сравнения, на 44%. Не влиял салсоколлин на активность ката-лазы эритроцитов, но способствовал снижению активности ГПО.

Таблица 1.

Влияние салсоколлина на показатели ПОЛ и активность ферментов обмена глутатиона в почках

крыс с начальными проявлениями ДН

Показатель Контроль (п=6) Начальные проявления ДН (п=6) Начальные проявления ДН+салсоколлин (п=6)

ДК (М-6/г) 5,4±0,342 88,3±0,432* 55,4±1,84*

МДА (ммоль/г) 18,14±3,22 42,8±0,872* 34,9±0,93*#

ШО (у. е) 0,09±0,0031 0,45±0,067* 0,354±0,002*

ГР (мкМ/мин/г) 4,2±0,054 0,56±0,025* 1,89±0,245*#

ГПО (мкМ/мин/г) 17,8±0,89 3,29±0,854* 8,3±0,45*#

ГТ (мкМ/мин/г) 175,5± 14.8 79,9±3,27 82,7±2,12*

* р<0,05 и ниже по сравнению с контролем, # р<0,05 и ниже по сравнению с группой без коррекции

Таблица 2.

Показатели спонтанной окислительной модификации белков плазмы крови крыс с начальными проявлениями ДН на фоне коррекции салсоколлином

Группа Показатель

КДНФГ нейтр. у.е. /мл АДНФГ нейтр. у. е./мл КДНФГ основ. у.е./мл АДНФГ основ. у.е./мл

Контроль (п=6) 3,7±0,49 3,65±0,27 3,0±0,17 0,55±0,006

Начальные проявления ДН (п=6) 8,8±0,76* 10,4±0,304* 6,39±0,345* 1,1±0,36*

Начальные проявления ДН+салсоколлин (п=6) 8,5±0,14* 9,8±0,28* 6,1±0,43* 1,5±0,06*

* р<0,05 и ниже по сравнению с контролем 100

* р<0,05 и ниже по сравнению с контролем, # р<0,05 и ниже по сравнению с группой без коррекции

Таблица 3.

Показатели ПОЛ эритроцитов крови крыс с аллоксановым диабетом и ДН на фоне коррекции салсоколлином

Показатель Контроль (n=6) Начальные проявления Начальные проявления

ДК (у.е.) 19,9±0,97 94,51±7,95* 78,71±2,44*

КД (у.е.) 7,12±0,35 75,2±14,93* 62,5±3,95*

МДА (мкмоль/мл) 6,4±0,17 11,4±0,672* 10,1±0,345*

СПП (у.е.) 0,48±0,023 0,71±0,036* 0,64±0,036*

СВП (у.е.) 0,11±0,022 0,56±0,067* 0,39±0,058*#

ШО (у.е.) 0,039±0,004 0,26±0,005* 0,23±0,002*

КАТ (нмоль/Н2О2/ мл эр./мин) 0,47± 0,002 0,24±0,019* 0,22±0,014*

ГПО (нмоль GSH/мл эр./мин) 78,0±2,03 121,0±4,17* 110,0±3,81*

Таким образом, салсоколлин существенно тормозил процессы ПОЛ в почках крыс с начальными проявлениями ДН, но не оказывал положительного влияния на ПОЛ в эритроцитах и окислительную модификацию белков в плазме крови. Это свидетельствует о возможном протектив-ном действии салсоколлина в отношении ткани почек и отсутствии системного эффекта в отношении окислительного метаболизма при развившейся ДН. В этой связи, очевидно, можно прогнозировать эффекты салсоколлина как средства профилактики, но не лечения ДН.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бондарь И. А. Сахарный диабет типа 2: стандарты диагностики и лечения: Учеб.-метод. пособие /И. А. Бондарь, В. В. Климонтов. - Новосибирск: Сибмедиздат НГМА, 2005. - 56 с.

2. Власова С. Н. Активность глутатионзависи-мых ферментов при хронических заболеваниях печени у детей /С. Н. Власова, Е. И. Шабунина, И. А. Переслегина //Лаб. дело. - 1990. - №8. -С. 19 - 22.

3. Влияние салсоколлина на метаболические показатели печени крыс после введения этанола и его отмены /М. И. Селевич, В. В. Лелевич, А. Г. Виницкая и др. //Патол. физиология и эксперим. терапия. - 2001. - №3. - С. 26 - 28.

4. Гончаренко М. С. Метод оценки перекисно-го окисления липидов /М. С. Гончаренко, А. М. Латипова //Лабораторное дело. - 1985. - №1. -С. 60 - 61.

5. Костюк В. А. Определение продуктов пере-кисного окисления липидов с помощью тиобарби-туровой кислоты в анаэробных условиях /В. А. Костюк, А. М. Потапович //Вопр. мед. химии -1987. - №3. - С. 115 - 118.

6. Кругликова Г. О. Глутатионпероксидаза и глутатионредуктаза печени крыс после введения селенита натрия /Г. О. Кругликова, Ц. М. Штут-ман //Укр. биохим. журн. - 1976. - №2. - С. 223 - 227.

7. Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных //Хроника ВОЗ. -1985. - Т. 39, №3. - С. 3 - 9

8. Метод определения активности каталазы / М. А. Королюк, Л. И. Иванова, И. Г. Майорова и др. //Лаб. дело. - 1988. - №1. - С.16 - 19.

9. Мухин Н. А. Диабетическая нефропатия / Н. А. Мухин, М. В. Шестакова //Нефрология: Рук. для врачей /Под ред. И. Е. Тареевой. - М.: Медицина, 2000. - С. 448 - 454.

10. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека. Метод ее определения /Е. Е. Дубинина, С. О. Бурмистров, Д. А. Ходов, И. Г. Поротов //Вопр. мед. химии. - 1995. - №1. - С. 24 - 26.

11. Садовникова Н. В. Моделирование сахарного диабета у крыс: латентная и манифестная формы /Н. В. Садовникова, Я. Ю. Кондратьев, В. П. Федотов //Пробл. эндокринологии. - 1988. -№5. - С. 69.

12. Спектрофотометрическое определение конечных продуктов перекисного окисления ли-пидов. /Е. И Львовская, И. А. Волчегорский, С. Е. Шемяков, Р. И. Лифшиц //Вопр. мед. химии. -1991. - №4. - С. 92-93.

13. Стальная И. Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот //Современные методы в биохимии. - М., Медицина, 1977. - С. 63 - 64.

14. Ушкалова В. Н Исследование параметров, характеризующих активность перекисного окисления липидов при изучении адаптации человека к новым климатогеографическим условиям /В. Н. Ушкалова, Г. Д. Кадочникова //Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1987. - №5. - С. 571 -573.

15. Mogensen C. E. Predictions of clinical diabetic nephropaty in IDDM patients. Alternatives to microalbuminuria? //Diabetes. - 1990. - №7. - P. 761 -767.

Поступила 31.07.07

Медицина и экология, 2007, 3

V. B. Molotov-Luchanskij

INFLUENCE OF SALSOCOLLIN ON OXIDATIVE METABOLISM IN RATS WITH THE FIRST DIABETIC NEPHROPATHY MANIFESTATIONS

The influence of Salsocollin on the processes of oxidative metabolism in the debut of diabetic nephropathy in rats with alloxanic diabetes had been researched. It was revealed the positive activity of Salsocollin on the processes of oxidative metabolism in the kidneys tissue of laboratory animals to the moment of the development of the first stage of diabetic nephropathy manifestations. At the same time it had not been revealed the trustworthy positive effect in the treatment with Salsocollin at the oxidative metabolism on the system level (blood plasma and erythrocytes). It was concluded, that Salsocollin may be used as the remedy of local protection of oxidative metabolism breaches.

В. Б. Молотов-Лучанский

ДИАБЕТТ1К НЕФРОПАТИЯНЬЩ БАСТАПКЫ БЕЛГ1ЛЕР1 БАР ЕГЕУК¥ЙРЬЩТАРДЬЩ КЫШКЫЛДЫ МЕТАБОЛИЗМ1НЕ САЛСОКОЛЛИННЩ ЭСЕР1

Диабетпк нефропатияныч бастапкы белгiлерi бар егеукуйрыктардыч кышкылды метаболизм^е «Салсоколлин» препаратыныч эсерi зерттелдг Наукастыч бастапкы кезечшде егеукуйрыктардыч бYЙректерiндегi кышкылды метаболизм процестер^е салсоколлиныч оч эсер етет^ аныкталды. Сонымен катар, жYЙелiк дечгейде (плазмада жэне кан эритроциттерiнде) салсоколлиныч кышкылды метаболизмге тиiмдi емдiк эсерi айкын аныкталран жок. Салсоколлиндi кышкылды метаболизмыч бузылуларына окшауланран ем тYрi ретiнде колдану мYмкiндiгi туралы корытынды жасалды.

С. А. Шалина, А. И. Добрецов, В. И. Новиков

ОСОБЕННОСТИ УСТАНОВЛЕНИЯ ПРИЧИН СМЕРТИ НА ТРУПАХ С РЕЗКИМИ ГНИЛОСТНЫМИ ИЗМЕНЕНИЯМИ

Карагандинский филиал ГУ ЦСМ, Темиртауское отделение

Одной из задач судебно-медицинской экспертизы является установление причины смерти. Однако в ряде случаев этому в значительной степени препятствуют развившиеся гнилостные изменения, которые протекают с разной интенсивностью в зависимости от температуры и состояния окружающей среды, влажности, причины смерти, длительности агонии и ряда других причин. Известно, что на темп гниения оказывают влияние многие факторы, которые следует учитывать эксперту при решении вопроса о давности наступления смерти [1, 2, 3].

Общеизвестно, что в независимости от состояния трупа его исследование должно осуществляется в полном объеме согласно предъявляемым требованиям правил организации и производства судебно-медицинской экспертизы. Наличие гнилостных изменений не может служить основанием отклонения от судебно-медицинской экспертизы трупа в должном объеме. Напротив, резко выраженные изменения обязывают эксперта проводить детальное исследование с использованием современных дополнительных методов, необходимых для исчерпывающего ответа на вопросы органов расследования. Ошибочно, когда эксперт по визуальным данным судит о невозможности проведения экспертизы с использованием дополнительных методов для качественной оценки трупных изменений. Только

всестороннее исследование трупа, даже при глубоких гнилостных изменениях, может дать важные сведения для органов расследования.

Необходимо учитывать, что детальной экспертизе гнилостного и вмененного трупа порой препятствует психологический момент, когда внешний вид объекта производит отталкивающее, глубоко неэстетическое впечатление, усугубляемое резким гнилостным запахом. В связи с этим эксперт должен преодолеть психологический барьер и особенно внимательно провести наружный и внутренний осмотр. До начала исследования трупа, в частности, при подозрении на повреждение внутренних органов, костей скелета, целесообразна рентгенография головы, позвоночника, плечевого и тазового пояса, конечностей для выявления возможных скрытых повреждений костей. В случаях обнаружения трупа неизвестного лица или когда имеются сомнения в принадлежности его полу, следует выявить и детально описать его индивидуальные особенности при наружном осмотре, учитывая, что трупы с выраженными гнилостными процессами трудно идентифицировать. Особое внимание заслуживает описание характерологических признаков кожных покровов в местах соприкосновения с поверхностью. Если труп длительное время лежал на спине, кожа и глубжележащие ткани в области спины при разрезе темно-красного цвета, как бы пропитаны кровью, что является признаком гнилостной имбибиции. Гнилостные процессы и явления проявляются в виде гнилостных газов, кожные покровы зеленовато-грязной окраски, выражен рисунок венозных сетей, характерно наличие пузырей, тканевой эмфиземы, расплавление органов и тканей, которые в дальнейшем превращаются в однородную грязно-зеленую массу. При судебно-