CC BY
24
ОРИГИНАЛЬНЫЕ
РАБОТЫ
динамики не наблюдается, что свидетельствует об автономной денервации сердца.
ЛИТЕРАТУРА
1. Балаболкин, М. И. Состояние и перспективы борьбы с сахарным диабетом / М. И. Балаболкин // Проблемы эндокринологии. - 1997. - Т. 43. - № 6. - С. 3-9.
2. Верткин, А. Л. Диабетическая кардиоваскулярная автономная нейропатия / А. Л. Верткин [и др.] // Сахарный диабет. - 2004. -№ 1. - С. 38-44.
3. Дедов, И. И. Диабетическое сердце : основные закономерности / И. И. Дедов. - М., 2004. - С. 2.
4. Дедов, И. И. Федеральная целевая программа «Сахарный диабет» : метод. реком. / И. И. Дедов, М. В. Шестакова, М. А. Максимова. - М., 2003. - 88 с.
5. Халимов, Ю. Ш. Функциональные аспекты диабетической кардиоваскулярной нейропатии : автореф. дисс. ... д-ра мед. наук / Ю. Ш. Халимов. - СПб., 2003. - 35 с.
6. Balkou, В. High blood glucose concentration is a risk factor for mortality in middle-aged nondiabetic me / B. Balkou [et al] // Diabetes Care. - 1998. - Vol. 21. - P. 360-367.
7. Ewing, D. J. Cardiac autonomic neuropaty in diabete : comparison of measure of RR interval variation / D. J. Ewing [et al] // Diabetologia. - 1981. - № 21. - Р. 18-24.
РЕЗЮМЕ
М. Ю. Ерина
Особенности вегетативной регуляции сердечной деятельности у больных сахарным диабетом 1 типа
У 102 больных сахарным диабетом 1 типа с сопутствующей кар-диальной патологией (диабетическая дистрофия миокарда, ИБС) исследованы показатели вариабельности ритма сердца при декомпенсации и компенсации углеводного обмена. Выявлено достоверное сни-
жение всех показателей вариабельности ритма сердца по сравнению со здоровыми лицами в период декомпенсации. При достижении компенсации в группе с диабетической дистрофией миокарда спектральные и временные показатели восстанавливаются. В группе больных с ИБС при достижении компенсации сахарного диабета сохраняется снижение парасимпатической активности ВНС. В группе больных с диабетической кардиоваскулярной вегетативной нейропатией выявлено отсутствие достоверной положительной динамики показателей вариабельности ритма сердца вследствие автономной денервации сердца, что свидетельствует о необратимости вегетативных нарушений.
Ключевые слова: сахарный диабет 1 типа, диабетическая дистрофия миокарда, ИБС, вариабельность ритма сердца, диабетическая кардиоваскулярная вегетативная нейропатия.
S UMMARY
M. Y. Yerina
Features of vegetative regulation of heart activity in patients with diabetes mellitus type 1
In 102 patients with diabetes mellitus (DM) type 1 associated with cardiac pathology (diabetic myocardium dystrophy - DMD and IHD) parameters of the heart rate variability were investigated in the stages of compensation and decompensation of carbohydrate metabolism. During the stage of glucose level correction all indexes of the heart rate variability were significantly decreased versus the data in the controls. Spectrum and duration indexes in DMD group were normalized after correction of the glucose levels. Decrease of parasympathetic activity of VNS was persisting in patients with IHD in the compensatory stage of DM. In patients with diabetic cardiovascular neuropathy no significant positive dynamics was noticed in the heart rate variability parameters because of autonomous denervation of the heart - which proves inversibility of vegetative disorders.
Key words: diabetes mellitus type 1, diabetic myocardium dystrophy, ischemic heart disease (IHD), heart rate variability, cardiac autonomous neuropaty.
© Коллектив авторов, 2009 г УДК 612.115-08
Л. В. Галебская, И. Л. Соловцова, Е. В. Рюмина, М. А. Соловьева
ВЛИЯНИЕ РЕАМБЕРИНА НА ГЕМОЛИТИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС
Кафедра биохимии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова
ВВЕДЕНИЕ
Препарат «Реамберин» (НТФФ «Полисан», СПб.) нашел широкое применение в разных областях медицины [2-5]. Реамберин предназначен для внутривенного введения, поэтому представляет интерес его возможное влияние на гемолитический процесс.
Целью настоящей работы явилось изучения воздействия реамберина на два разных вида гемолиза: 1) фотолизиса эритроцитов, обусловленного окислительным стрессом; 2) комплементзависимого гемолиза, протекающего без участия активных форм кислорода.
В экспериментах использовалась разработанная нами модель фотолизиса эритроцитов человека [6]. В качестве фотосенсибилизатора использовали препарат «Радахло-рин» (ООО «Рада-Фарма», Москва).
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эритроциты человека получали из цитратной крови путем центрифугирования при 1500 об./мин в течение 10 минут с последующим трехкратным отмыванием физиологическим раствором. Далее клетки стабилизировали не менее суток при 4 оС в реактиве Олсвера. Перед использованием эритроциты трижды отмывали от реактива физиологическим раствором и готовили стандартную взвесь клеток в 5 мМ вероналово-мединаловом буфере (рН 7,4). В стандартной взвеси после разведения ее в 8 раз буферным раствором оптическая плотность при 800 нм составляла 0,560±0,020. К 0,1 мл стандартной взвеси эритроцитов добавляли 0,02 мл раствора радахлорина (фотосенсибилизатор) и буферный раствор до объема 0,8 мл. Конечная концентрация радахлорина составляла 87,5 мкг/мл. Инкубационную смесь облучали светом гелий-неонового лазера ШАТЛ-1 (11=633 нм, мощность на выходе - 13 мВт). Исследованные эритроциты значитель-
УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XVI • №4 • 2009
Таблица 1
Средние параметры фотолизиса эритроцитов человека в присутствии разных концентраций реамберина, в % к контролю (физиологический раствор)
Реамберин (мл) 150 V
0,02 (п=10) 111±36 98±33
0,04 (п=9) 116±27 82±44
0,06 (п=9) 13 2±21 * 73±39 *
0,08 (п=9) 172±42 * 55±26 *
0,10 (п=6) 234±87 * 25±23 *
* р<0,01.
но отличались по чувствительности к облучению, поэтому перед экспериментом проводился подбор оптимальной дозы путем варьирования времени экспозиции лучевого воздействия. Облученную смесь (0,8 мл) переносили в кювету спектрофотометра и регистрировали динамику снижения светопоглощения при 800 нм с автоматической пятисекундной регистрацией. Параметрами гемолитической кривой являлись следующие: t50, или время 50 % лизиса эритроцитов (в секундах), и V, или скорость гемолиза (в (Е/мин).
При изучении влияния реамберина на фотогемолиз в стандартную смесь эритроцитов до облучения вносили различные объемы (0,02-0,10 мл) реамберина, 0,02 мл радахлорина и буфер до объема 0,8 мл. В контроле вместо реамберина добавляли соответствующее количество физиологического раствора. Регистрировали динамику фотогемолиза.
Регистрация комплементзависимого гемолиза осуществлялась в термостатированной при 37 оС кювете спектрофотометра, в которую добавляли 0,1 мл сыворотки крови человека и 5 мМ вероналово-мединаловый буфер (рН 7,4) до объема 0,7 мл. После прогревания инкубационной смеси в течение 3 минут в нее добавляли 0,1 мл предварительно отмытых эритроцитов кролика. Регистрировали снижение оптической плотности взвеси при 800 нм через пятисекундные интервалы. По полученным гемолитическим кривым определяли параметры комплемент-зависимого гемолиза, а именно: или продолжительность индукционного периода в секундах, и V, или скорость гемолиза в млн эритроцитов, лизированных за 1 минуту [1].
При изучении влияния реамберина на комплемент-зависимый гемолиз различные количества препарата (от 0,02 до 0,10 мл) добавляли в инкубационную систему. В качестве контроля в инкубационную смесь вместо препарата добавляли соответствующее количество физиоло-
Таблица 2
Средние величины (п=10) параметров активации комплемента человека в присутствии реамберина, в % к контролю (физиологический раствор)
Реамберин (мл) Lag-t V
0,02 115±33 99±15
0,04 102±22 99±13
0,06 109±31 111±18
0,08 110±33 109±20
0,10 113±29 108±22
гического раствора. Регистрировали комплементзависи-мый гемолиз.
РЕЗУЛЬТАТЫ1 ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Регистрация фотолизиса сенсибилизированных рада-хлорином эритроцитов человека выявила значительные индивидуальные особенности в чувствительности клеток к облучению. При исследовании влияния реамберина на фотогемолиз было выявлено существенное дозозависи-мое ингибирование процесса, которое проявлялось в повышении t50 и снижении скорости гемолитического процесса (табл. 1). Таким образом, реамберин оказался мощным ингибитором фотогемолиза.
Оказалось, что различные пробы эритроцитов отличались не только разной чувствительностью к облучению, но и индивидуальной реакцией на действие препарата. Из-за значительного разброса данных, обусловленной различной чувствительностью индивидуальных эритроцитов к облучению и к реамберину, ингибирование фотогемолиза было статистически достоверным (р<0,01) только при количестве препарата 0,06 мл и выше.
Причинами торможения фотогемолиза под действием реамберина может быть либо антиоксидантный эффект, либо мембранопротекторные свойства препарата.
Комплементзависимый гемолиз протекает без участия активных форм кислорода. Система комплемента представляет собой совокупность белков плазмы крови, которые при активации чужеродными агентами образуют комплекс мембранной атаки. Этот комплекс внедряется в чужеродную клетку и вызывает цитолиз. В нашей тест-системе в качестве чужеродных агентов были использованы эритроциты кролика. Результаты исследования влияния реамберина на комплементзависимый гемолиз приведены в табл. 2. Из данных табл. 2 видно, что реамбе-рин не влиял на комплементзависимый гемолиз: не произошло изменений ни ни скорости процесса.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты исследования влияния реамберина на два вида гемолиза показали, что препарат эффективно замедляет фотогемолиз, но не влияет на гемолиз, опосредованный активацией системы комплемента. Таким образом, действие реамберина не связано с прямым мембрано-протекторным эффектом препарата. В основе фотогемолиза лежит атака клеточной мембраны активными формами кислорода. Следовательно, реамберин защищает клетки от лизиса благодаря своему антиоксидантному действию.
ЛИТЕРАТУРА
1. Галебская, Л. В. Анализ динамики комплементзависимого гемолиза / Л. В. Галебская [и др.] // Клин. и лаб. диагн. - 2001. -№ 3. - С. 47-49.
2. Галенко-Ярошевский, В. П. Протекторное действие реамберина на функциональную активность митохондрий в условиях ишемии кожи / В. П. Галенко-Ярошевский, А. В. Агаджанова // Бюлл. эксперимент. биол. и мед. - 2006. - Т. 40. - № 10. - С. 436-439.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ
РАБОТЫ
3. Коломоец, А. В. Роль реамберина в модуляции метаболического ответа у больных с сепсисом / А. В. Коломоец, Н. Н. Мосенцев // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. - 2006. - № 1. - С. 81-89.
4. Мазина, Н. К. Системный анализ клинико-фармакоэкономи-ческой эффективности реамберина при ишемическом инсульте / Н. К. Мазина [и др.] // Вестник СПбГМА. - 2006. - № 1. - С. 35-42
5. Ржеутская, Р. Е. Интенсивная терапия больных с тяжелой внебольничной пневмонией / Р. Е. Ржеутская // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. - 2006. - № 1. - С. 105-109.
6. Соловцова, И. Л. Кинетический подход в исследовании фотогемолиза / И. Л. Соловцова, М. А. Соловьева, Л. В. Галебская // Актуальные проблемы лазерной медицины. - СПб., 2006. -С. 307-312.
РЕЗЮМЕ
Л. В. Галебская, И. Л. Соловцова, Е. В. Ркмина,
М. А. Соловьева
Влияние реамберина на гемолитический процесс
Препарат «Реамберин» (НТФФ «Полисан», СПб.) был исследован в качестве эффектора гемолитического процесса, инициированного низкоинтенсивным лазерным облучением (Х=633 нм) в присутствии фотосенсибилизатора радахлорина (ООО «Рада-Фарма», Москва) и комплементзависимого гемолиза. Обнаружено значительное дозозависимое ингибирование фотогемолиза реам-
берином, проявляющееся в увеличении времени 50 %-го гемолиза и снижении скорости процесса. Реамберин существенно не влиял на параметры лизиса эритроцитов активированным комплементом. Следовательно, антигемолитический эффект реамберина обусловлен его антиоксидантным действием.
Ключевые слова: гемолиз, лазерное облучение, фотосенсибилизатор, антиоксидант, система комплемента.
S UMMARY
L. V. Galebskaya, I. L. Solovtzova, E. V. R'urina, M. A. Solov'eva
Reamberin action in relation to the hemolysis process
Reamberin («Polysan», SPb) was tested as an effector of a hemolytic process initiated by low-intensity laser irradiation (X=633 нм) with a photosensitizer radachlorine («Rada-Pharma», Moskow) supplement and the complement-dependent hemolysis. Strong dose-dependent inhibition of photohemolysis was manifested in marked elongation of the t50 period of hemolysis and in decrease of its rate. Reamberin didn't influence hemolysis induced by activated complement system. Cell protective effect of reamberin may be based on its antioxidant action.
Key words: hemolysis, laser irradiation, photosensitizer, anti-oxidant, complement system.
© А. Г. Козырев, А. А. Жлоба, 2009 г. УДК 616.248:612.015.33
А. Г. Козырев, А. А. Жлоба
МЕТАБОЛИТЫ ОКСИДА АЗОТА У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
НИИ пульмонологии, отдел биохимии НИЦ Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова
Оксид азота (N0) и его метаболиты играют важную роль в патогенезе бронхиальной астмы (БА). Уровень N0 в выдыхаемом воздухе больных БА используется для оценки активности воспалительного процесса и эффективности лечения. Оксид азота обладает бронхопротективным действием; ряд исследований продемонстрировал усиление реактивности бронхов в случае предварительного применения ингибиторов N0-синтазы, а также возможность бронходилатации в ответ на ингаляцию N0. Не исключено, что оксид азота способен играть и отрицательную роль. Действуя как вазодилататор, N0 может усиливать отек бронхиального дерева; есть данные, что выделение больших количеств N0 приводит к росту образования пероксинитрита, оказывающего повреждающее воздействие на дыхательные пути [7, 9, 10].
Основной задачей нашего исследования стало изучение метаболитов оксида азота у больных БА путем оценки содержания суммы нитратов и нитритов (N0^ + N0^ и S-нитрозотиолов в плазме.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Были обследованы 102 больных БА, в том числе 28 мужчин и 74 женщины. Средний возраст пациентов составил 53,4±0,7 года. В 9 случаях была диагностирована БА легкого персистирующего течения (БАл), в 69 -средней степени тяжести (БАс), в 24 - тяжелого течения (БАт).
Обследовались амбулаторные пациенты, обращавшиеся к пульмонологу в связи с ухудшением течения БА, без клинически выраженных/перенесенных сердечно-сосудистых заболеваний (ишемическая болезнь сердца, инсульты) и поражений почек, с нормальным уровнем глюкозы в сыворотке натощак, никогда не курившие. Контрольную группу составили 10 здоровых лиц (3 мужчины и 7 женщин, средний возраст -57,1±1,7 года).
Пациенты обследовались дважды, до и после лечения обострения БА (промежуток между обследованиями составлял от 1 до 2 месяцев). Терапия БА проводилась в соответствии с рекомендациями GINA, 2006. Содержание N0^ + N0^ и S-нитрозотиолов в плазме, мкмоль/л, анализировалось по методу Грисса [1]. Забор крови осуществлялся в утреннее время (845-900), натощак. За 6 часов до забора крови пациенты воздерживались от ингаляций Р2-агонистов короткого действия, за 24 часа - Р2-аго-нистов пролонгированного действия, в течение 2 суток не употребляли в пищу продуктов с высоким содержанием нитратов.
Статистическую обработку полученных данных проводили общепринятыми методами с использованием программы STATISTICA 6,0.
