CC BY
36
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА АНАБОЛИЧЕСКУЮ ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕДА
В.А. Долгов1, С.А. Лавина1, Т.С. Арно1, Е.А. Семёнова1, Д.В. Никитченко2
!ФГБНУ «ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и э: Звенигородское шоссе, 5, Москва, Россия, 12302.
2Департамент ветеринарной медицины Российский университет дружбы ул. Миклухо-Маклая, 8/2, Москва, Р
В результате исследований доказана возможность иролЬввания^нфузорий ТейаИутепа руп-бэгтэ в исследованиях биологической оценки медаспеЛью изучения анаболической эффективности меда и влияния на показатель качества разлиЧныХ^коиогических факторов, что имеет как теоретическое, так и практическое значение.
Ключевые слова: мед, инфузории тетрахимещы^иологическая оценка.
Введение. Методы биолариччской^ценки продуктов, кормов окружающей среды с исполЦовани^ биотестов, альтернативны вотным, достаточно информатЯвны^тличаются высокой проижш не требуют сложного оборудования и больших материальных^атг
с этической точки оценки всех ток в исследуемом о
ия. Их использование дает возмо: оединений, в том числе ком ' 5].
ласти биотестирования еще мно асается, в первую очередь, п астоящее время практически не из чена.
тов жи-стью, упречны ированной
ервые было установлено вным параметрам обмена ть адекватным тест-организ гся хорошим питательны: его безвредности и биол (ростостимулирующая) эффе Дополнительными критер
исутствующих
о конца исследован-биологической оценки
Ге1хаЬутепа рупЮгт18, сход-^ысшими животными [1; 4], могут югической оценке меда, который гратов для простейших. Основным крите-толноценности является анаболическая проявляемая в отношении тетрахимен. ут быть концентрации, вызывающие данный эффект; минимальные концентрации меда, при которых обнаруживается стимуляция роста простейших; максимально переносимые концентрации, а также диапазон концентраций в среде, при котором проявляется его ростостимулирующий эффект. Эти критерии качества и безопасности меда могут определяться при визуальном подсчете количества выросших клеток под микроскопом.
Целью наших исследований было изучение возможности использования разработанных нами методических подходов при биологической оценке меда, подвергнутого воздействию различных факторов внешней среды (хранению, нагреванию, фальсификации), что позволило бы определить степень информативности биотестового метода и целесообразность его практического применения.
Материалы и методы исследований. Материалом для исследований служили образцы меда из различных регионов РФ. В работе применяли разработанные нами методические подходы, которые заключаются в тестировании его различных концентраций в среде (вода) и определении влияния на рост инфузорий [2; 3]. Для этого готовили растворы меда на дистиллированной воде в диаПазвне концентраций от 0,1—0,25 до 10%. Растворы вносили во флаконы ич-оод\нтиоиотиков в количестве 2,0 мл, добавляли по 0,1 мл трех-пяти-суточной культуры инфузорий ТейаЪутепа руп1огт18, выращенных на пептонной среде^цедующего состава (г/100 мл дистиллированной воды): пептон бактериологине1кий^^ 2,0; глюкоза — 0,5; дрожжевой экстракт — 0,1; натрий хлористый^^,11Ш среды 7—7,5. Флаконы оставляли при комнатной температуре на 24 тсаЛ'ершдически встряхивая их для лучшей аэрации среды и взмучивания исследуемого субстрата. Каждый образец исследовали в трехкратной повторности^фтролем служила дистиллированная вода.
Спустя 24 часа определяли выживаемость инфузорий. Для этого взмучивали содержимое флаконов, брали бактериологической петлей каплю жидкости и исследовали под микроскопом на^лич^е живых клеток и их подвижнасГЙШля подсчета выросших инфузорий в каждый флакон вносили по одной капле 5%-го спиртового раствора йода (для фиксации клеток), содержимое встряхивали, отбирали пастеровской пипеткой и вносЙли в счетную камеру ФуксЦа-РЫрнталя. Подсчет осуществляли в Ш больших квадратах камеры (по 5 квадратов^каждой сетке) для получения^редкего результата и соотносили его^и^оличеством клеток в контроле (вода), к^§вiое*ринимали за 100%.
Результаты исследований. При изучени на его анаболическую эффективность в отнош было исследовано 12 образцов продукта .1х регионов РФ. Срок хранения со£ к^ловиях бытового холодили е (плюс 22—25 °С). На основании
словий хранения меда фузорий тетрахимен нами х и 7 темных медов) из различ-4,5 года. Образцы хранились (плюс 4 °С), так и при комнатной темпера-оведенных исследований установлено, чтУ у большинства изученных^образцовХ. 1—10) ростостимулирующая актив-ость меда спустя 3 года хранения не изменилась. Как у светлых, так и у темных медов ростостимулирующая активность после трехлетнего хранения сохранилась на достаточно высоком уровне, аналогичном свежим медам. Светлые образцы, как свежие, так и хранивШи^ся, стимулировали рост тетрахимен в 1,8—4 раза, темные — в 2—3 раза. Минимальные стимулирующие концентрации составляли от 0,1 до 0,2%, максимальные — от 2 до 4—5% у светлых медов и от 1 до 2% у темных. Максимальные переносимые концентрации у светлых медов были в интервале 4—8%, у темных — от 3 до 5%. В то же время у двух исследованных образцов (№ 11 и 12) темного меда было обнаружено заметное различие в их биологических свойствах, которое проявлялось в существенном снижении ростости-мулирующей активности спустя 3 года хранения, что можно видеть из данных, представленных в табл. 1.
Таблица 1
Рост инфузорий, в % к контролю (вода)
Концентрация меда, % Образец № 11 Образец № 12
Свежий Хранившийся Свежий Хранившийся
0,25 220 170 120
0,5 235 175 150
1 280 205 132
2 340 190 100 X Г^ 0
3 290 170 75 V
4 250 144 9 >
5 227 130 0
6 200 0 />%Л
7 95 VI
8 0
№ 11 — Орловская область, № 12 — Саратовская област
устя 4—4,5 года хранени рые проявляли выраженную тенденция к ее снижению. достигать 3—4 кратной в
Как видно из приведенных данных, у образца № 11 до хранения максимальный ростостимулирующий эффект'нштношцнии инфузорий достигал 280—340% в диапазоне концентраций в среде от^кдо 3%; после трехлетнего храниия он снизился при этих же концентпациях^до 175—205%, то есть почти в 2 раа. В^мень-шей степени была выражена также ростовая эффективность минимальных концентраций меда (соответственно2й0% у свежего и 170% у храищшегося.медов), а также диапазоны концентраций, при которых она проявляетш[(у свежро от 0,125 до 6%, у хранившегося от 0,125 до 5%). Уменьшилась и^аксиЫдльно переносимая инфузориям^конйентрация. Если у свежего меда ^на составляла от 7 до 8%, то у хранившегося — от 5 до 6%.
Аналогийная^ б^лее выраженная картина вы&вленаЧ^образца № 12, который после хранения практически не проявлял ростостимулирующий эффект в от-ношениипростейших, а при концентрации^меду в среде выше 1% вызывал их ги-бел!Ц|^о время как у свежего продуктамавсимально переносимая концентрация
оставляла 4—5%. ^х. ^
[иякракти жстРстим;
|| раньЩс 0
ны, то чер
ки у всех испытуемых медов, кото-улирующую активность, обнаружена (до 3 лет хранения) этот показатель мог через 4—4,5 года практически у всех изученных образцов меда он уж^е превышал 140—190%, а у некоторых был и того ниже (110—120%).
По-видимому, причиной такого заметного снижения биологического качества меда может быть инактивация в процессе хранения биологически активных веществ, которые проявляют биостимулирующее действие (ферментов, гормонов, витаминов и др.). Нельзя исключить и накопления токсичных соединений (например, оксиметилфурфурола, продуктов распада белков, мелаидинов). Вполне вероятна также частичная фальсификация данных медов.
При изучении влияния условий хранения меда (в бытовом холодильнике и при комнатной температуре) на его ростостимулирующую активность не обна-
ружено каких-либо статистически достоверных различий между образцами, хотя органолептически они отличались. Так, мед, хранившийся в холодильнике, был более однородным, плотным и светлым, в то время как продукт, находившийся при комнатной температуре, был более мягким, иногда расслаивался (что характерно для темных медов).
Нами было также изучено влияние нагревания (распускания) м1дгна%ш анаболическую эффективность в отношении тетрахимен. ДандыйДехнологический прием обычно применяется при розливе и фасовке закристаллизовавшегося меда.
Установлено, что одномоментный высокотемпер^Еурн^1й нагрев меда (до 85—90 °С) существенно влиял на его биологическое мачество, что проявлялось в снижении роста инфузорий (на 20—49%) по сравизнЧЮт исходным продуктом.
Исследовали также более щадящее температурЕре#оздействие, которое применяется в коммерческой практике (прибор«Ме!ртерм», иммерсионные и пластинчатые нагреватели), а именно кратковременный нагрев меда до относительно высокой температуры с последующим быстрым охлаждением.
1неЦ|емЛ!ратура 65—70 °С) до его расплав-зез 0,5—1 минуту (температура^амрго меда затем следовало быстрое охлаждение для ми-1едовали 7 образцов меда (Земных щ4 свет-!ы в табл. 2.
Мед прогревали на водяно ления, которое обычно наступ при этом не превышала 50 нимизации воздействия тепла. Ис лых). Результаты анализа п
Таблица 2
Из представленных данных видно, что испытанные нами тепловые режимы распускание меда практически не повлияли на его ростостимулирующую активность у образцов 1—4 (темные и один светлый меда) — различия были статистически недостоверными. В то же время у трех образцов светлого меда (№ 5—7) этот показатель несколько снизился (на 11,1—21,4%), что лишний раз свидетельствует о различии состава и свойств медов, в результате чего однозначно переносить данные, полученные на одном виде продукта, на другой надо с известной долей вероятности. По-видимому, причиной некоторого снижения ростостимули-рующей активности трех образцов меда может быть инактивация и денатурация биологически активных веществ (ферментов, гормонов, пептидов и др.), а также возможное образование антиметаболических соединений. Нельзя также исключить
и специфику состава медов, их происхождение, вид цветочной пыльцы, возможное наличие фальсифицирующих примесей. Тем не менее, в целом можно утверждать, что соблюдение щадящих режимов нагрева (не превышающих 50—55 °С) существенного влияния на биологическое качество большинства медов не оказывает.
Для изучения влияния фальсификации на биологические качества меда нами исследовались три образца, которые по органолептическим показателям — цвет,
вкус, консистенция, запах — вызывали сомнение в своей натуральншхиш 1ри биотестировании только один из них проявлял снижение ростового эффекта в отношении инфузорий, в то время как два других отличались высокой ростостимули-рующей активностью, что свидетельствует о субъективносГи^рТанолептического анализа.
Также была смоделирована фальсификация меда ахарным сиропом, который добавляли в продукт в количестве 50%. Данные '^Ш ^Цны в табл. 3.
Таблица 3
>ицированного меда
Из представленных данных видно, что фальсификация меда сахарным сиропом в количестве 50% снижает его ростовой эффект в отношении инфузорий на 21,1%. Учитыввя,#т1|нами ранее [2] было установлено" практическое отсутствие ростостимулирующей активности сахаров (глюкоза, фруктоза, сахароза), то логично предполагать проявление этих свойств и при добавлении их в мед, что и выразилось в полученных нами результатах. Интересно отметить, что в данном случае 50%-ного снижения ростового эффекта не наблюдалось (что можно было логивно предположить исходя из уровия^фальсифиЧЬрующей примеси). Это явля-ельством того, что мед в сил%своег^состава и свойств обладает доста-выраженной буферностью и^опредРленной степени, как и любой биологи-полноценный продукт, нивелирует отрицательное воздействие на его анаболическую эффективность менее питательных компонентов, а при их специально подобранных сочетаниях может существенно затруднять факт обнаружения фальсификации продукта.
Заключение. В результатепроведенных исследований показана возможность применения метода биологической оценки меда с использованием инфузорий Те1-гаЪушепа руг1Рэгш18 для изучения его анаболической эффективности и влияния на этот качественный показатель различных факторов внешней среды, что имеет как теоретическое, так и практическое значение.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Долгов В.А. Методические аспекты и практическое применение ускоренной биологической оценки кормов, продуктов животноводства и других объектов ветеринарно-сани-тарного и экологического контроля: Дисс. ... докт. вет. наук. М., 1992.
[2] Долгов В.А., Лавина С.А., Арно Т.С., Семенова Е.А., Никитченко В.Е. Биологическая оценка меда // Вестник РУДН, сер. Агрономия и животноводство. 2013. № 1. С. 61—67.
[3] Долгов В.А., Лавина С.А., Арно Т.С., Семенова Е.А. Применение инфузорий тетраимен для биологической оценки меда // Росийский журнал «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». 2013. № 1 (9). С. 13—15.
[4] Игнатьев А.Д., Шаблий В.Я. Использование инфузории тетрахименЫтяриформис как тест-объекта при биологических исследованиях в сельском хозяйстве.^Мг ВАСХНИЛ 1978.
[5] Лавина С.А. Биотесты на основе ферментных систем для оце ксенобиотиков на объекты ветеринарно-санитарного и экологическо докт. биол. наук. М., 2002.
А/
EFFECT O^VlRIOUS FACTORS FOR ANABOLJC EFFICIENCY OF HONEY
сического действия о контроля: Дисс. ...
LV л
ovL S.A Lavina1, T.S. Arno1, emeJbva1, D.V. Nikitchenko2
V.A.
E.AI
'All-Russian scientific research institute of veterinai Zvenigorodskoe shosse, 5, Moscow, Russia,
2Department of Veterinary Peoples' Friendship University o«Russia
Miklukho-Maklay str., 8/9, Moscow, Russia, 1
J198
search it is show the possibility < La pyrformis to study the anabolic efficie ironmental factors that has both the
words: honey, ciliates of Tetrahii
l evaluation of honey with ciliates and the impact on the quality indicator ctical importance.
evaluation.
[1] Dolgov V.A. Methodological^spefs and^practical application of the rapid biological assessment of forages, animal products and oth0robjects of veterinary-sanitary and environmental control. Doctor vet. scienc
[2] Dolgov V.A., Lavina Arnault T.S., Semenova E.A., Nikitchenko E.V. Biological assessment of honey. Bulletin of of Peoples' Friendship University of Russia. Series Agronomy and animal industries. 2013. No. 1. P. 61—67.
[3] Dolgov V.A., Lavina S.A., Arnault T.S., Semenova E.A. The Use of the ciliate for biological tetramer evaluation of honey. Russian journal "problems of veterinary sanitation, hygiene and ecology ". 2013. No. 1 (9). P. 13—15.
Ignatiev A.D., Shabliy V.Y. The Use of ciliates of Tetrahymena pyriformis as the test subject in biological research in agriculture. Moscow: VASKHNIL, 1978.
Lavina S.A. Bioassays based on enzyme systems to assess the toxic effect of xenobiotics on the objects of veterinary-sanitary and environmental control. Doctor. biol. sciences. M., 2002.
[4]
