CC BY
76
УДК 616.72-002-001.6-615.45
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ ПОЛИФЕРМЕНТНОГО, ХОНДРОПРОТЕКТИВНОГО И АНТИГИПОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СУСТАВАХ КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ АУТОИММУННЫМ АРТРИТОМ
В.А. МИТРОФАНОВ, Д.М. ПУЧИНЬЯН, М.В.ФЕДОТОВА*
Изучали влияние препаратов полиферментного, хондропротектив-ного и антигипоксического действия при их раздельном и сочетанном использовании на морфологические изменения в синовиальной оболочке и суставном хряще крыс с экспериментальным аутоиммунным артритом для выбора оптимального воздействия.
Ключевые слова: аутоиммынный артрит, влияние препаратов
Ведущим патогенетическим механизмом аутоиммунных артритов признано хроническое аутоиммунное воспаление, ведущее к деструкции суставных тканей с последующими функциональными нарушениями суставов [2,5]. Ведётся экспериментальная работа по поиску эффективных и безопасных методов и средств подавления воспалительного процесса, в т.ч. и при аутоиммунных артритах, используя препараты с разнонаправленными механизмами действия, которые влияют на различные пути разрушения тканей суставов и имеют минимальное отрицательное действие на организм больного [5,6]. Учитывая сложность развития патологического процесса надо одновременно применять средства, воздействующие на различные его механизмы.
Полиферментные препараты снижают активность воспаления за счёт уменьшения инфильтрации интерстициальной ткани циркулирующими плазменными белками, способствуют восстановлению микроциркуляции и снабжения тканей кислородом, а также элиминации иммунных комплексов [3]. Иммуномодулирующее действие протеолитических энзимов, в частности препарата «Вобэнзим», проявляется в достижении оптимальной активности клеток, участвующих в иммунологических реакциях. В результате такого лечения регулируется иммунный ответ и ограничивается возможность нежелательных иммунологических эффектов. Однако не было обнаружено данных об изолированном использовании вобэнзима при аутоиммунных артритах.
Для защиты суставного хряща от разрушения широко используется хондропротективный препарат «Дона», действующим веществом которого является глюкозамина сульфат. Глюкозамин содержится в костной, хрящевой тканях и других компонентах сустава. Он является одной из ключевых молекул в синтезе гликозаминогликанов и гиалуроновой кислоты. Логично предположить, что экзогенное введение глюкозамина компенсирует его эндогенный дефицит, предохраняя хрящ от разрушения. В экспериментах на животных показано, что глюкозамин участвует в реакциях биосинтеза протеогликанов, а также подавляет образование супероксидных радикалов и ферментов, разрушающих коллаген [6,8]. Препарат «Дона» проявил себя как эффективное и безопасное средство для лечения остеоартроза, однако для лечения аутоиммунных артритов он не применялся.
Принимая во внимание важность участия одного из основных факторов аутоиммунного воспаления - региональной тканевой гипоксии - в деградации протеогликанов суставного хряща, представляется целесообразным изучить действие антигипоксан-та, в частности оксибутирата натрия (натриевая соль гамма-оксимасляной кислоты) на структуры сустава при аутоиммунном артрите. Известно, что это средство повышает устойчивость тканей организма к воздействию различных видов гипоксии. Антигипоксический эффект препарата обусловлен активизацией системы митохондриального окисления за счёт усиления транспорта электронов в дыхательной цепи и ускорения высвобождения энергии. В доступной литературе не было найдено сведений о применении оксибутирата натрия для предотвращения воспалительной деструкции соединительнотканных структур суставов.
Это позволило предположить, что действие всех трёх препаратов - «Вобэнзима» (полифермент), «Доны» (хондропротек-тор) и «Оксибутирата натрия» (антигипоксант) должно обеспечивать угнетение ряда патогенетических процессов, участвующих в воспалительной деструкции соединительной ткани суставов.
Цель исследования - изучение влияния препаратов поли-ферментного, хондропротективного и антигипоксического действия при их раздельном и сочетанном использовании на морфоло-
* ФГУ «Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии»
гические изменения в синовиальной оболочке и суставном хряще крыс с экспериментальным аутоиммунным артритом для выбора оптимального регуляторного воздействия.
Материал и метод. В качестве экспериментальной модели использовался адъювантный артрит у крыс, который по клинической и морфологической картине наиболее близок к аутоиммунным артритам человека [4].
Исследование проведено на 110 половозрелых лабораторных крысах-самцах массой 200-230 г, содержавшихся в стандартных условиях вивария, с одинаковым рационом. Адъювантный артрит вызывали введением в подушечку правой задней лапки 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда. Адъювантный артрит у крыс проявлялся выраженным отёком мягких тканей стопы и увеличением суставов правой нижней конечности - межфаланговых, плюснефаланговых, голеностопного и коленного, повышением температуры в подколенной ямке. Отмечалось значительное снижение объёма активных и пассивных движений в опытных коленных суставах и выраженная болезненность при их ощупывании. Животные были разделены на 7 серий: 1 - здоровые (контрольная серия); 2 - артрит без лечения (серия сравнения); 3 -ежедневное внутрижелудочное введение вобэнзима (42,85 мг/кг массы тела); 4 - ежедневное внутрижелудочное введение доны (21,4 мг/кг); 5 - внутрисуставное введение оксибутирата натрия 2 раза в неделю (5,7 мг/кг); 6 - ежедневное внутрижелудочное введение вобэнзима и доны (42,85 мг/кг и 21,4 мг/кг соответственно); 7 - ежедневное внутрижелудочное введение вобэнзима и доны с одновременным внутрисуставным введением 2 раза в неделю оксибутирата натрия (42,85 мг/кг, 21,4 мг/кг и 5,7 мг/кг соответственно). Дозировка препаратов рассчитывалась по рекомендациям по их применению.
«Вобэнзим» содержит смесь протеолитических ферментов: панкреатина, трипсина, липазы, амилазы, химотрипсина, броме-лаина, папаина, рутина. Препарат оказывает противовоспалительное, противоотёчное и иммуномодулирующее действие, ограничивает патологические проявления аутоиммунных и им-мунокомплексных процессов. Хондропротектор «Дона» содержит глюкозамина сульфат, участвующий в биосинтезе протеог-ликанов суставного хряща и гиалуроновой кислоты синовиальной жидкости. «Оксибутират натрия» - натриевая соль у-оксимасляной кислоты, свойства которой связаны с его способностью активизировать бескислородное окисление энергетических субстратов и уменьшать потребность организма в кислороде. Препараты начинали вводить на 3 сутки после введения полного адъюванта Фрейнда, когда появлялись признаки артрита. Введение препаратов шло в течение 16 дней. Животных выводили из опыта путём декапитации под эфирным наркозом. Для исследования брали коленные суставы, из которых изготавливались гистологические препараты по общепринятой методике.
Препараты изучали следующими методами: морфологический - окраска тканей сустава гематоксилином-эозином и пикро-фуксином по Ван Гизону для изучения их структуры в целом; гистохимический - окраска толуидиновым синим для выявления гликозаминогликанов, как основного структурного компонента суставного хряща; морфометрический - количественная и качественная характеристика клеточных элементов (гистиоцитов, лимфоцитов, плазмоцитов и фибробластов) и морфологических проявлений патологических изменений синовиальной оболочки и суставного хряща. Морфологические признаки изменений количественно определяли с помощью морфометрического анализа по 5 основным признакам поражения синовиальной оболочки (пролиферация синовиоцитов, отложение фибрина, воспалительная клеточная инфильтрация, пролиферация фибробластов, очаговый фиброз) и 5 признакам поражения суставного хряща (убыль гликозаминогликанов, узурация поверхностного слоя, дистрофия хондроцитов, потеря хондроцитов, разволокнение матрикса).
Степень выраженности признаков поражения тканей оценивали с помощью окулярной измерительной сетки [1] в % и в баллах. Общий принцип оценки морфологических проявлений поражения суставных тканей заключался в том, что за 0 баллов принималась норма признака в соответствии с типом ткани, за 4 балла - его максимальная выраженность, промежуточные степени оценивались как слабая (1 балл), умеренная (2 балла) и сильная (3 балла) выраженность признака [7].
Результаты. У здоровых животных контрольной серии (1 серия) в синовиальной оболочке наблюдалось преобладание фибробластов с единичными гистиоцитами и лимфоцитами при
этом признаки поражения синовиальной оболочки и суставного хряща отсутствовали (сумма баллов признаков поражения равна 0). При формировании адъювантного артрита количество фиб-робластов в синовиальной оболочке резко снижалось с одновременным увеличением числа воспалительно-клеточных элементов (гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов). Особенностью морфологической характеристики клеточного состава синовиальной оболочки явилось увеличение количества фибробластов во всех сериях животных, получавших каждый из препаратов в отдельности и комплексно в сравнении со 2 серией (табл.1). Особенно резко количество фибробластов возросло в 7 серии животных, получавших 3 препарата сочетано. Следует отметить, что повышение количества фибробластов в 7 серии было больше, чем в 3 и 6 сериях.
Таблица 1
Морфометрическая характеристика клеточного состава синовиальной оболочки коленных суставов крыс (М±т, %)
Серии Фибробласты Гистиоциты Лимфоциты Плазмоциты
2 n=20 16,91±1,11 28,22±0,61 36,80±1,06 18,10±0,90
3 n=20 26,65±1,13** 25,56±0,34** 32,78±0,75** 15,01±0,82*
4 n=10 26,13±1,34** 26,88±0,87** 32,52±1,85** 15,07±0,44*
5 n=10 26,15±1,62** 25,78±0,6** 31,03±0,66** 15,04±0,32*
6 n=20 27,45±0,94** 24,89±1,25* 31,96±1,15* 15,70±0,79
7 n=10 43,58±0,97** 23,64±0,26** 22,53±0,74** 10,25±0,68**
Примечание: * - р<0,05, ** - р<0,001 - по сравнению с 2 серией.
Количество гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов с высокой степенью статистической достоверности снижалось у животных в 3-7 сериях по сравнению со 2 серией. Снижение количества гистиоцитов было максимальным у крыс, получавших комплекс из полифермента, хондропротектора и антигипоксанта (7 серия). Аналогичная закономерность отмечена при изучении числа лимфоцитов и плазмоцитов в синовиальной оболочке суставов крыс с адъювантным артритом после введения им одного из препаратов или их комбинаций. Снижение количества лимфоцитов в синовиальной оболочке при использовании каждого из препаратов по отдельности было менее выраженным, чем при комбинации полифермента и хондропротектора. Максимальное снижение количества лимфоцитов наблюдалось при сочетанном применении всех 3 препаратов. Количество плазмоцитов в синовиальной оболочке изменялось с той же закономерностью, что и лимфоцитов и было наиболее выраженным в 7 серии.
Не менее важные данные получены при изучении влияния различных препаратов и их комбинаций на сумму морфологических признаков поражения суставных тканей. При изучении признаков поражения синовиальной оболочки опытного сустава обнаружено статистически достоверное их снижение во всех сериях животных, получавших препараты (табл. 2).
Таблица 2
Характеристика суммы морфологических признаков поражения суставных тканей крыс (М±т, баллах)
Серии Синовиальная оболочка Суставной хрящ
2 (n=20) 12,96±1,20 9,25±0,76
3 (n=20) 8,07±0,25* 8,35±0,20*
4 (n=10) 7,56±0,18* 8,02±0,27*
5 (n=10) 7,24±0,24* 7,69±0,17*
6 (n=20) 6,19±0,21** 6,28±0,19**
7 (n=10) 4.62±0.49** 4.26±0.50**
Примечание: * - р<0,02, ** - р<0,001 - по сравнению с 2 серией (артрит без лечения).
Максимальным снижение суммы морфологических признаков поражения синовиальной оболочки было в 7 серии (сочетанное действие всех трёх препаратов). Сочетанное применение 3 субстанций оказалось более эффективным, чем использование только одной или двух. Аналогичным было и снижение суммы морфологических признаков поражения суставного хряща. Применение комбинации полифермента и хондропротектора (6 серия) более значимо снизило изучаемый показатель, чем применение одного препарата (3-5 серии). Также максимальным было снижение суммы морфологических признаков поражения суставного хряща в 7 серии животных, получавших комплекс из 3 препаратов. Изучение особенности влияния каждого из препаратов и их комбинаций на морфологические признаки воспалительного повреждения синовиальной оболочки и суставного хряща у крыс с адъювантным артиртом показало, что все препараты и две их комбинации не смогли полностью нормализовать морфологию суставных тканей.
Отмечена общая тенденция действия всех препаратов в отдельности и их комбинаций на морфологические признаки воспалительного повреждения тканей опытных суставов, заключа-лающаяся в том, что каждый препарат в отдельности с высокой степенью достоверности снижал морфологические показатели, но не мог нормализовать полностью. Максимальное же снижение морфологических показателей воспалительного повреждения тканей опытного сустава у крыс с адьювантным артритом произошло при совместном использовании всех трёх применённых препаратов - полифермента, хондропротектора и антигипоксанта.
Заключение. Одновременное воздействие на разные патологические звенья аутоиммунного артрита комплекса препаратов с разнонаправленным действием (полиферментный препарат «Вобэнзим» подавлял развитие аутоиммунной воспалительной реакции, хондропротектор «Дона» стимулировал синтез протеог-ликанов, антигипоксант «Оксибутират натрия» повышал устойчивость тканей к кислородной недостаточности) является оптимальной профилактикой деструкции суставных тканей.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии. М.: Медицина, 1984.
2. Зборовская И.А. и др. // Актуальные проблемы современной ревматологии. Волгоград: ООО «ЦПК», 2005. Вып. XXII. С. 54.
3. Зборовский А.Б. // Научно-практическая ревматология, 2003. № 1.
С. 64-68.
4. Копьёва Т.Н. // Патология ревматоидного артрита. М.: Медицина,
1980.
5. Петрова Н.Н, Ильина Т.Н. // Реабилитология: сборник научных трудов. М., 2003. С. 297-299.
6. Сучков С.В. и др. // Тер. архив. 2004, № 12. С. 83-87.
7. Шехтер А.Б. и др. Оценка морфологических проявлений синовита у больных ревматоидным артритом: Метод. рекомендации. М., 1985.
8. Colombo C. // Arthr. Reum, 1983. Vol.26, № 7. Р. 875-886.
INFLUENCE OF PREPARATIONS OF POLYFERMENTNAL, CHONDROPROTEKTIVE AND ANTIHYPOXIC ACTIONS ON MORPHOLOGICAL CHANGES IN JOINTS OF THE RATS WITH EXSPERIMEN-TAL AUTOIMMUNE ARTHRITIS
V.A. MITROFANOV, D.M. PUCHINIYAN, M.V.FEDOTOVA Saratov Scientific Research Institute of Traumatology and Orthopedy
Influence of preparations of polyfermental, chondroprotective and anti-hypoxic actions was studied at their separate and associated use on a morphological changes in synovial capsule and an articulate cartilage of rats with experimental autoimmune arthritis for a choice of an optimum regulatory influences.
Key words: autoimmune arthritis, influence of preparations
УДК 617.753.2:615.8(045)
ДИНАМИЧЕСКАЯ ЭЛЕКТРОНЕЙРОСТИМУЛЯЦИЯ КАК МЕТОД ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ НАРУШЕНИЙ РЕФРАКЦИИ И АККОМОДАЦИИ
В. Ф. КИРИЧУК, Э. В. КУЗНЕЦОВА*
Изучали эффективность воздействия неинвазивной динамической электронейростимуляции на цилиарную мышцу глаза. Показано, что наибольший эффект получен при лечении спазмов аккомодации и миопии слабой и средней степеней. Эффект от лечения сохранялся в течение 3 - 6 месяцев. В условиях эксперимента на гладкой мышце желудка лягушки выявлена оптимальная частота воздействия, которая находится в диапазоне 70-100 Гц (в среднем 77 Гц). Полученные экспериментально-клинические результаты позволяют рекомендовать метод динамической электронейростимуляции для профилактики и лечения пациентов с нарушениями аккомодации и предъявляющих астенопические жалобы.
Ключевые слова: миопия, спазм аккомодации, электростимуляция
По данным [5], в России около 85 % людей в возрасте от 14 до 45 лет, деятельность которых связана со зрительным напряжением, в той или иной степени пренебрегают правилами зрительной эргономики, вследствие чего 55 % из них имеют приобретенные патологии зрения (близорукость, дальнозоркость, спазм аккомодации). При этом прирост миопии высокой степени практически не изменился. Чаще всего встречается миопия слабой и средней степеней без значительных изменений в сетчатке, что свидетельствует о функциональных нарушениях аккомодационного аппарата глаза. Формирование приобретенной миопии и ее прогрессирование, несмотря на пристальное внимание специалистов, остается большой социальной проблемой.
* Каф. норм. физиологии ГОУ ВПО Саратовский государственный меди-
цинский университет им. В. И. Разумовского Росздрава 410012 Саратов ул. Большая Казачья, 112
