CC BY
53
УДК 618.145-077.21-02.
Е.Л. Харенкова 1, Н.В. Артымук 1, Л.Ф. Гуляева 2
ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ МЕТАБОЛИЗМА ЭСТРОГЕНОВ НА РАЗВИТИЕ ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ И РАКА ЭНДОМЕТРИЯ
1 ГОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия Росздрава» (Кемерово) 2 НИИ Молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск)
Исследован генетический полиморфизм ферментов метаболизма эстрогенов CYP1A1, CYP1A2, CYP19 и SULT1A1 у 105женщин с гиперпластическими процессами, эндометрия, 132женщин с раком, эндометрия и. у 152 здоровых пациенток. Получены, результаты., свидетельствующие о возможном вовлечении ферментов CYP1A1 и. SULT1A1 в патогенез пролиферативных процессов эндометрия.
Ключевые слова: ферменты метаболизма эстрогенов, полиморфизм генов, гиперплазия эндометрия, рак эндометрия
THE INFLUENCE OF THE POLYMORPHISM OF ENZYMES IN WOMEN WITH ENDOMETRIAL HYPERPLASIA AND ENDOMETRIAL CANCER
E. Kcharenkova 1, N. Artymuk 1, L. Gulyaeva 2
1 Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo
2 Novosibirsk State University, Novosibirsk
Genetic polymorphism, of estrogen metabolizing enzymes CYP1A1, CYP1A2, CYP19 and SULT1A1 was estimated in 105 women with, endometrial hyperplasia, 132 women with, endometrial cancer and in 152 healthy women. The results of this research, showed the possibility of drawing of the enzymes CYP1A1 and SULT1A1 in the pathogenesis of endometrial proliferative diseases.
Key words: enzymes of the estrogen metabolizing, genes polymorphisms, endometrial hyperplasia, endometrial cancer
Многочисленные исследования на протяжении многих лет показали, что опухоли женской репродуктивной сферы, в том числе рак эндометрия (РЭ), в большинстве случаев являются гормонозависимыми [1, 3, 4]. Особое место в этом процессе занимают эстрогены, играющие важную роль в стимуляции клеточной пролиферации в органах-мишенях [2, 5]. В большинстве случаев ферменты синтеза и метаболизма эстрогена находятся в основе развития гиперпластических процессов эндометрия (ГПЭ), а также в процессах инициации и поддержании роста злокачественных опухолей эндометрия [1, 6, 7, 8]. Поэтому можно предполагать, что полиморфные варианты генов, кодирующие ферменты метаболизма эстрогенов могут быть ассоциированы с риском гормонозависимых опухолей женских половых органов. Определение таких ДНК в группах риска позволит дифференцировано подходить к формированию групп риска и проводить профилактические мероприятия.
Цель исследования — определение аллельных и генотипических частот генов, кодирующих ферменты метаболизма эстрогенов (CYP1A1, CYP1A2I CYP19 и SULT1A1) у женщин с ГПЭ, РЭ и здоровых пациенток, и связи вариантных частот аллелей и генотипов с риском развития ГПЭ и РЭ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В I группу исследования вошли 105 пациенток с гистологически подтвержденными ГПЭ. II группа исследования состояла из 138 пациенток с РЭ (аденокарцинома). Диагноз устанавливали на осно-
вании общепринятых методов. В III (контрольную) группу вошло 218 женщин без патологии эндометрия. В качестве объекта исследования использованы клетки буккального эпителия. Все клинические исследования проводились с информированного согласия больных и протоколировались по стандартам этического комитета РФ. Всем проведено клиническое и гинекологическое обследования, ультрасо-нография органов малого таза аппаратом «PICUS» фирмы PAI MEDICAL (2002), гистероскопическое обследование с помощью гистероскопа фирмы «Scholly» с раздельным лечебно-диагностическим выскабливанием. Геномную ДНК из буккального эпителия выделяли методом высоко-солевого осаждения белков [7]. Амплификацию специфических участков исследуемых генов проводили методом ПЦР. Генотипирование проводили методом ПДРФ-анализа (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов) продуктов ПЦР-специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции («Сибэнзим», Россия). Статистическую обработку результатов проводили с помощью SISA. Работа частично поддержана грантом Президента РФ МД-3802.2007.7.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
При анализе полиморфных вариантов гена CYP1A2 у больных с ГПЭ были выявлены достоверные различия по частоте встречаемости мутантного аллеля А (76 %) по сравнению с группой контроля (65,4 %) (ОШ = 1,68, р = 0,018) (табл. 1). Данный
факт может свидетельствовать о возможном участии цитохрома CYP1A2 в патогенезе ГПЭ. Для гена SULT1A1 наблюдалось достоверное увеличение частоты встречаемости гетерозиготного генотипа G/A у женщин с ГПЭ (51,4 %) по сравнению с контролем — 24,8 % (ОШ = 3,56, р < 0,0001), что предполагает возможное вовлечение SULT1A1 в процессы пролиферации.
При анализе полиморфных вариантов гена CYP1A2 у больных с РЭ наблюдалось достоверно значимое увеличение частоты дикого генотипа С/С и снижение частоты генотипа С/А по сравнению с группой контроля (табл. 2). Похожие результаты были получены и для мутантного генотипа А/А. Наличие этого генотипа также статистически достоверно снижает риск возникновения РЭ (ОШ = 0,265; p = 0,011). Анализ генов CYP1A1 и CYP19, SULT1A1 не показал достоверных отличий
аллельных и генотипических частот у больных с РЭ и здоровых.
Важные результаты получены при выявлении риска возникновения РЭ, ассоциированного с частотами аллелей и генотипов изучаемых генов в группах больных с РЭ, разделенных по значениям ИМТ (табл. 3).
Как видно из результатов анализа, представленных в таблице 3, в группе больных женщин с ИМТ < 30 кг/м2 наблюдается статистически значимое увеличение частоты мутантного аллеля А (70,6 %) по сравнению с группой контроля (45 %) (ОШ = 2,93; р = 0,001). Аналогичная картина наблюдается в случае генотипов G/A и А/А (ОШ = 22,4; р = 0,0005 и ОШ = 10,18; р = 0,0025 соответственно). Следовательно, можно предположить, что ген SULT1A1 вовлечен в процесс роста опухоли у женщин с нормальной массой тела.
Таблица 1
Частоты аллелей и генотипов диких и полиморфных вариантов генов CYP1A1, CYP1A2, CYP19 и SULT1A1
Ген Женщины с ГПЭ Здоровые лица ОШ (95 % ДИ) Р
СУР1Л1:
Т 179 (85,2 %) 267 (87,8 %)
С 31 (14,8 %) 37 (12,2 %) 1,25 (0,75-2,09) 0,471
Т/Т 77 (73,3 %) 115 (75,6 %)
Т/С 25 (23,8 %) 37 (24,3 %) 1,01 (0,56-1,81) 0,905
С/С 3 (2,9 %) 0 (0 %) 0,999
Всего (п): 105 152
СУР1Л2:
С 47 (24,0 %) 92 (34,6 %)
А 149 (76,0 %) 174 (35,4 %) 1,68 (1,11-2,54) 0,018
С/С 8 (7,7 %) 9 (6,8 %)
С/А 45 (42,8 %) 74 (55,6 %) 0,68 (0,24-1,90) 0,641
А/А 52 (49,5 %) 50 (37,6 %) 1,17 (0,42-3,27) 0,970
Всего (п): 105 133
СУР19:
С 198 (94,3 %) 266 (94,3 %)
Т 12 (5,7 %) 16 (5,7 %) 1,01 (0,46-2,18) 0,859
С/С 93 (88,6 %) 126 (89,4 %)
С/Т 12 (11,4 %) 14 (9,9 %) 1,16 (0,51-2,62) 0,881
Т/Т 0 (0 %) 1 (0,7 %) 0,577
Всего (п): 105 141
ЗиИ1Л1:
в 108 (51,4 %) 164 (56,5 %)
А 102 (48,6 %) 126 (43,5 %) 1,23 (0,86-1,76) 0,296
в/в 27 (25,7 %) 64 (44,2 %)
в/А 54 (51,4 %) 36 (24,8 %) 3,56 (1,92-6,59) 0,000004
А/А 24 (22,9 %) 45 (31,0 %) 1,26 (0,65-2,47) 0,605
Всего (п): 105 145
Примечание: ОШ - отношение шансов; ДИ - доверительный интервал.
Таблица 2
Частоты аллелей и генотипов диких и полиморфных вариантов генов CYP1A1, CYP1A2, CYP19 и SULT1A1
Ген Женщины с РЭ Здоровые лица ОШ (95 % ДИ) Р
СУР1Л1
т 248 (89,8 %) 346 (89,2 %)
с 28 (10,2 %) 42 (10,8 %) 0,93 (0,56-1,54) 0,878
т/т 110 (79,7 %) 162 (79,4 %)
т/с 28 (20,3 %) 42 (20,6 %)
с/с 0 (0 %) 0 (0 %) 0,98 (0,57-1,67) 0,944
Всего 138 204 1,000
СУР1А2
с 72 (26,1 %) 92 (21,4 %)
А 204 (73,9%) 338 (78,6 %) 0,77 (0,54-1,09) 0,177
с/с 14 (10,1 %) 6 (2,8 %)
с/А 44 (31,9 %) 80 (37,2 %) 0,23 (0,08-0,65) 0,007
А/А 80 (58 %) 129 (60,0 %) 0,26 (0,09-0,72) 0,011
Всего 138 215
СУР19
с 260 (94,2 %) 413 (94,5 %)
т 16 (5,8 %) 24 (5,5 %) 1,06 (0,55-2,03) 0,995
с/с 122 (88,4 %) 195 (89,4 %)
с/т 16 (11,6 %) 22 (10,1 %) 1,16 (0,58-2,30) 0,797
т/т 0 (0 %) 1 (0,5 %) 1,000
Всего 138 218
ЭиЬТ1А1
в 154 (55,8 %) 223 (53,1 %)
А 122 (44,2 %) 197 (46,9 %) 0,89 (0,66-1,2) 0,534
в/в 60 (43,5 %) 77 (36,7 %)
в/А 34 (24,6 %) 69 (32,8 %) 0,63 (0,37-1,07) 0,118
А/А 44 (31,9 %) 64 (30,5 %) 0,88 (0,53-1,47) 0,726
Всего 138 210
Примечание: ОШ - отношение шансов; ДИ - доверительный интервал.
Таблица 3
Частоты аллелей и генотипов диких и полиморфных вариантов генов CYP1A1, CYP1A2, CYP19 и SULT1A1
при разных ИМТ
ИМТ > 30 кг/м2 ИМТ < 30 кг/м2
Рак эндометрия 1а Контр. группа 11а ОШ (95 % ДИ) Р Рак эндометрия 1Ь Контр. группа 11Ь ОШ (95 % ДИ) Р
5ШТ1А1
в 90 (56,3 %) 64 (58 %) 1,08 (0,66-1,76) 0,849 20 (29,4 %) 66 (55 %) 2,93 (1,55-5,52) 0,001
А 70 (43,7 %) 46 (42 %) 48 (70,6 %) 54 (45 %)
в/в 38 (47,5 %) 24 (43,7 %) 0,55 (0,22-1,33) 0,270 2 (6 %) 28 (46,6 %) 22,40 (4,35-115,2) 0,0005
в/А 14 (17,5 %) 16 (29 %) 1,17 (0,52-2,64) 0,846 16 (47 %) 10 (16,7 %) 10,18 (2,11-49,06) 0,0025
А/А 28 (35 %) 15 (27,3 %) 16 (47 %) 22 (36,7 %)
Всего 80 55 34 60
Примечание: ОШ - отношение шансов; ДИ - доверительный интервал.
ВЫВОДЫ
В результате нашего исследования было определено, что женщины при наличии мутантного аллеля А гена СYР1А2 и/или гетерозиготного генотипа G/A гена SULT1A1 имеют повышенный риск развития ГПЭ, а лица с диким аллелем С и генотипом С/С гена СYР1А2 имеют повышенный риск развития рака эндометрия. Также обнаружено, что для пациенток с ИМТ менее 29 кг/м2 мутантный аллель А и генотипы G/А и А/А гена SULT1A1 являются факторами риска развития рака эндометрия. Таким образом, в процессах возникновения ГПЭ и РЭ задействованы гены СYР1А2 и SULT1A1, однако полиморфизмы, а значит механизмы возникновения пролифераций при данных заболеваниях разные. Целесообразным является проведение дальнейших исследований с увеличенной выборкой для выявления дополнительных диагностических маркеров.
ЛИТЕРАТУРА
1. Вихляева Е.М. Руководство по эндокринной гинекологии. — М. : Медицинское информационное агентство, 2006. — 783 с.
2. Гуляева Л.Ф. Молекулярно-генетические маркеры опухолей матки // Решенные вопросы и
Сведения об авторах
установленные факты в акушерстве и гинекологии : материалы XII Рос. науч.-практ. конф., г. Кемерово, 22 — 2З апр. 2010 г. — Кемерово, 2010. — С. 48 — 49.
3. Пашов А.И., Цхай В.Б., Сивова Е.Н. Первый опыт органосохраняющего лечения женщин репродуктивного возраста с начальными формами рака эндометрия // Решенные вопросы и установленные факты в акушерстве и гинекологии : материалы XII Рос. науч.-практ. конф., г. Кемерово, 22 — 2З апр. 2010 г. — Кемерово, 2010. — С. 1З2 — 1З4.
4. Сметник В.П. Медицина климактерия. — М., 2006. - 150 с.
5. Aidoo-Gyamfi K. et al. Estrone silfatase and its inhibitors // Anticancer Agents Med. Chem. -2009. - Vol. 9 (6). - P. 599-612.
6. Badawi A.F. Role Human cytochrome P4501A1. 1A2, 1B1, and 3A4 in the 2-,4- and 16a-hydroxylation of 17p-estradiol // Metab. Clin. Exp. - 2004. -Vol. 50. - P. 1001 -100З.
7. Bedaiwy M.A., Mousa N.A., Casper R.F. Aro-matase inhibitors: potential reproductive implications // J. Min. Invasive Gynecol. - 2009. - Vol. 16 (5). -P. 5ЗЗ-5З9.
8. Santen R.J. et al. History of aromatase: saga of an important biological mediator and therapeutic target // Endocr. Rev. - 2009. - Vol. З0 (4) - P. З4З-З75.
Харенкова Екатерина Леонидовна - аспирант кафедры акушерства и гинекологии N 2 ГОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Росздрава
Артымук Наталья Владимировна - д.м.н., профессор, зав. кафедрой акушерства и гинекологии N 2 ГОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия Росздрава», адрес: г. Кемерово, ул. Ворошилова, 22а, тел.: 3842-5285226, E-mail: roddom_kkokb@ mail.ru
Гуляева Людмила Федоровна - д.б.н., руководитель лаборатории молекулярных механизмов канцерогенеза, НИИ Молекулярной биологии и биофизики СО РаМн, Новосибирск
