CC BY
57
УДК [612.015.348 + 613.863]: [612.172 + 612.32] - 092.9:599.323.4 Е.Ю. Самарина, O.A. Лебедько, М.И. Радивоз, С.С. Тимошин
ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДНОГО ПРЕПАРАТА "СЕДАТИН" НА ПРОЦЕССЫ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В ТКАНЯХ МИОКАРДА И ЖЕЛУДКА БЕЛЫХ КРЫС В УСЛОВИЯХ ИММОБИЛИЗАЦИОННОГО СТРЕССА
Дальневосточный государственный медицинский университет; Хабаровский филиал ДНЦ физиологии и патологии дыхания СО РАМН Институт охраны материнства и детства, г. Хабаровск
Независимо от этиологии стресса первичным молекулярным механизмом, опосредующим реализацию постстрессорных структурно-метаболических нарушений, является декомпенсированная активация сво-боднорадикального окисления [6]. Органами-мише-нями при стрессе являются сердце и желудок. Несмотря на значительный арсенал средств, предлагаемых в качестве стресс-протекторов, проблема коррекции и профилактики постстрессорных повреждений этих органов по-прежнему остается актуальной, о чем свидетельствует высокий уровень заболеваемости и смертности от соответствующей органной патологии. Известно, что эндогенная опиоидная система и, в частности ее 5-/ц-составляющая, является одной из основных стресс-лимитирующих систем организма [3, 4]. Препарат "Седатин", или Н-Аг^-Туг-П-АЬ-РЬе-СЛу-ОН, представляет собой синтетический аналог опио-ндного пептида дерморфина и является смешанным агонистом периферических 8-/ц- рецепторов, широко представленных в тканях сердечно-сосудистой и пищеварительной систем организма [5].
Цель настоящей работы состояла в исследовании влияния седатина на процессы свободнорадикально-го окисления в тканях миокарда и желудка белых крыс в условиях иммобилизационного стресса.
Материалы и методы
Эксперименты проводили на 40 белых половозрелых крысах-самцах. Опыты осуществляли в течение 5 сут. Иммобилизационный стресс проводили путем фиксации животных на спине на станках в течение 4 ч с 10-00 до 14-00. Животные были разделены на 4 экспериментальные группы. Крысы 1 группы ежедневно, в 9-30 утра, получали седатин в режиме в/брюшинного введения, в дозе 100 мкг/кг. Крысы 2 группы подвергались воздействию иммобилизационного стресса. За 30 мин до фиксации животным вводили эквиобъемное количество изотонического раствора КаС1. Крысы 3 группы также подвергались воздействию стресса, но с предварительным введением седатина в вышеобозначенном режиме. Животным 4 группы — группы "контроль" в аналогичном режиме инъецировали изотонический раствор №С1.
Животных декапитировали спустя 24 ч после заключительного воздействия. Для интегральной
Резюме
Моделировали состояние иммобилизационного стресса у белых половозрелых крыс-самцов путем ежедневной 4-часовой фиксации в течение 5 дн. Введение седатина ( внутрибрюшинно, в дозе 100 мкг/кг массы, за 30 мин до фиксации ) корригировало постстрессорные нарушения свободнорадикального статуса миокарда и желудка крыс.
E.Y. Samarina, О.А. Lebedko, M.I. Radivoz, S.S. Timoshin
EFFECTS OF PEPTIDE PREPARATION "SEDATIN" ON THE PROCESSES OF FREE RADICALS OXIDATION IN MYOCARDIUM AND STOMACH OF WHITE RATS UNDER IMMOBILIZING STRESS
Far Eastern State Medical University; Khabarovsk; Khabarovsk affiliate of the Far-Eastern Research Center of Respiratory Pathology and Physiology SB RAMS -Scientific research institute of Mother and Child Care
Summary
We have been modeling immobilizing stress condition for sexually mature white male rats by creating everyday four-hour fixation for five days. "Sedatin" administration (intraabdominally at the dose of 100 mkg/kg of mass, 30 minutes before fixation) corrected post stress disorders of free radicals status in rats myocardium and stomach.
оценки процессов свободнорадикального окисления (СРО) гомогенатов тканей миокарда и желудка использовали метод хемилюминесценции (ХЛ). Регистрацию XJI осуществляли на люминесцентном спектрометре LS 50В "PERKIN ELMER". Спонтанную и индуцированную Fe2+ ХЛ исследовали по методу Ю.А. Владимирова и др. [2]. Определяли светосумму за 1 мин спонтанной ХЛ (Ssp), величина которой коррелирует с интенсивностью генерации свободных радикалов; максимум быстрой вспышки (HI) индуцированной ХЛ, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов, светосумму (Sind-1) за 2 мин после "быстрой" вспышки, отражающую скорость накопления перекисных
Таблица 1
Влияние седатина на показатели спонтанной и Ре5* -индуцированной ХЛ гомогенатов тканей миокарда и желудка белых крыс, подвергнутых иммобилизационному стрессу (М±т)
Показатель Ssp (отн. ед.) Инд. ХМЛ (Fe2*)
Hl (отн. сд.) Sind-1 (отн. ед.)
Контроль Миокард 0,11 ±0,011 0,82 ±0,075 0,64 ±0,056
Желудок 0,12 ±0,007 1,03 ±0,060 1,20 ±0,042
Седатин Миокард 0,10 ±0,007 0,63 ±0,047 0,55 +0,513
Желудок 0,07 ±0,007* 0,80 ±0,050* 0,88 ±0,616*
Стресс Миокард 0,35 ±0,023* 2,26 ±0,202* 2,06 ±0,166*
Желудок 0,27 ±0,016* 3,49 ±0,163* 4,74 ±0,288*
Седатин+ стресс Миокард 0,27 ±0,019*** 1,73 ±0,158*** 1,25 ±0,108***
Желудок 0,19 ±0,013*** 1,88 ±0,177*** 3,01 ±0,272***
Примечания. * — р<0,05 по отношению к группе "контроль"; ** — р<0,05 по отношению к группе "стресс".
Таблица 2
Влияние седатина на показатели Н20,-индуцированной люминол-зависимой ХЛ гомогенатов тканей миокарда и желудка белых крыс, подвергнутых иммобилизационному стрессу (М±ш)
радикалов липидной природы. Кинетику ХЛ, инициированную Н202 в присутствии люминола, анализировали по двум параметрам [ 1 ]: максимуму свечения (Н2), указывающему на потенциальную способность биологического объекта к перекисному окислению, и светосумме за 2 мин ХЛ (5тс1-2), величина которой свидетельствует об активности ан-тиоксидантной антирадикальной защиты. Интенсивность ХЛ, измеренную в милливольтах, рассчитывали на 1 г влажной ткани и выражали в относительных единицах. Полученные данные обрабатывались статистически с использованием 1-критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Анализ ХЛ-показателей продемонстрировал (табл. 1,2), что в тканях миокарда и желудка крыс, подвергнутых иммобилизационному стрессу, имело место
повышение продукции свободных радикалов (СР): величина Бзр возросла на 218 и 125% соответственно. При этом активизировался первичный этап перекис-ного окисления липидов: повысилась концентрация гидроперекисей липидов (амплитуда Н1 увеличилась на 175 и 238% соответственно). Возросла скорость образования перекисных радикалов липидной природы (БтсИ увеличилась на 221 и 295% соответственно). При этом выявлено ослабление антиоксидантной антирадикальной защиты в целом (8т<}-2 возросла на 225 и 73% соответственно), в том числе снижение резистентности к перекисному окислению (Н2 увеличилась на 144 и 106% соответственно). Подобные изменения показателей хемилюминограмм указывают на смешение баланса в системе "генерация СР — де-токсикация СР" в сторону гиперпродукции и деком-пенсированного накопления свободных радикалов в тканях сердца и желудка крыс, перенесших иммобилизацию.
Седатин, введенный крысам, не подвергавшимся иммобилизации, проявил выраженные антиоксидан-тные антирадикальные свойства только в отношении свободнорадикального статуса тканей желудка, о чем свидетельствует снижение величин 5тс1-2 и Н2 на 62 и 60% соответственно. Данное обстоятельство способствовало угнетению продукции СР в целом (Бвр) на 71%, снижению содержания гидроперекисей липидов (Н1) на 28% и торможению процессов образования и накопления перекисных радикалов (БикМ) на 36%. В отношении величин аналогичных показателей, характеризующих свободнорадикальное окисление в миокарде, статистически значимых отличий от контроля отмечено не было.
Тем не менее, на фоне иммобилизационного стресса седатин обладал выраженным ингибирующим эффектом в отношении свободнорадикального окисления и стимулирующим — в отношении систем антиоксидантной и антирадикальной защиты в тканях обоих органов. Хотя ни один из исследуемых показателей ХЛ миокарда и желудка не достиг контрольного уровня, но все они значительно приблизились к нему, достоверно снизившись в сравнении с показателями группы животных, перенесших иммобилизационный стресс без коррекции. Так, величины Бэр, Н1, БтсЫ, Н2,8тс1-2 уменьшились в миокарде на 29; 30; 64; 45 и 46% соответственно, в желудке — на 42; 85; 57; 66 и 54% соответственно.
Результаты наших исследований свидетельствуют, что седатин способен корригировать свободноради-кальный статус тканей миокарда и желудка белых крыс в условиях иммобилизационного стресса, и это открывает перспективу использования данного препарата в качестве стресс-протектора.
Литература
1. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. // Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. СПб., 2000. С. 198.
2. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. // Итоги науки и техники. 1991. Т. 29. С. 147.
3. Лишманов Ю.Б., Нарыжная Н.В., Маслов Л.Н. // Вопр. мед. химии. 1999. Т. 45, №3. С. 227-231.
Показатель Инд. ХМЛ (люминол-Н202)
Н2 (отн. ед.) Sind-2 (отн. сд.)
Контроль Миокард 4,03±0,И 2,42±0,172
Желудок 8,82±0,51 9,85±0,429
Седатин Миокард 3,62±0,104 2,18±0,186
Желудок 5,51 ±0,299* 6,05+0,263*
Стресс Миокард 9,86±0,425* 7,86±0,485*
Желудок 18,27± 1,277* 17,09± 1,423*
Седатин+ стресс Миокард 6,77±0,393*** 5,37±0,456***
Желудок 11,00±0,903** 11,09±0,697**
Примечания. * — р<0,05 но отношению к группе "контроль"; ** — р<0,05 по отношению к группе "стресс".
4. Маслов Л.Н., Лишманов Ю.Б., Гросс Г.Д. и др. 6. Меньшикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К. и // Вестник аритмологии. 2002. № 28. С. 67-78. др. // Окислительный стресс. Прооксиданты и анти-
5. Маслов Л.Н., Лишманов Ю.Б., Смагин Г.Н. // оксиданты. М.: Слово, 2006. 556 с.
Эксперим. и клинич. фармакология. 2002. №2. С. 70-75.
□ □□
УДК 615.451.16.001.8
П.Б. Цыдендамбаев, A.A. Дутов, Б.С. Хышиктуев, С.М. Николаев, A.B. Савин
ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В ЭКСТРАКТАХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ МЕТОДОМ ВЭЖХ
Читинская государственная медицинская академия, г. Чита
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в настоящее время является чрезвычайно перспективным методом, позволяющим в достаточной степени надежно исследовать закономерности удерживания труднолетучих и термолабильных соединений. Такие исследования приобретают особое значение при анализе биологических объектов и биологически активных веществ. К последним относятся флавоноиды, содержащиеся в лекарственных растениях, такие как дигидрокверцетин (ДКВ) и дигид-рокемпферол (ДКФ). Эти соединения обладают широким спектром биологической активности, включая антиоксидантную, противоопухолевую, противоаллергическую, противовоспалительную, капилляроук-репляющую, гепатопротекторную [4,6,7,10-13] и др. Оценка содержания флавоноидов в экстрактах лекарственных растений позволяет получить ценную информацию относительно перспектив использования растительного сырья в Фарминдустрии.
Цель работы — оптимизация условий анализа флавоноидов ДКВ и ДКФ с помощью ВЭЖХ и количественная оценка их содержания в экстрактах лекарственных растений.
Материалы и методы
Объектами изучения служили экстракты лекарственных растений, входящих в прописи препаратов тибетской медицины [5]: пятилистника кустарникового (ПК) (Penthaphylloides fruticosa), бадана толстолистного (БТ) (Bergenia crassifolia), горечавника бородатого (ГБ) (Gentianopsis barbata), шлемника байкальского (ШБ) (Scutellaria baicalensis), зопника клубненосного (ЗК) (Phlomis tuberosa), девясила высокого (ДВ) (Inula helenium), шиповника даурского (ШД) (Rosa dahurica Pall), облепихи крушиновидной
Резюме
В работе предлагается методика одновременного количественного определения флавоноидов дигидрокверце-тина и дигидрокемпферола с помощью обращено-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии в экстрактах лекарственных растений. Показано преимущество метода по сравнению с описанными в литературе.
Р.В. Tsydendambaev, А.А. Dutov, B.S. Khyshiktuev, S.M. Nikolaev, A.V. Savin
HPLC ANALYSIS OF THE FLAVONOIDS IN EXTRACTS OF MEDICINAL PLANTS
Chita State Medical Academy, Chita Summary
The objective of the paper is to show synchronous quantitative determination technique of dihydroquercetin and dihydrokempferol flavonoids in the extracts of medicinal plants with reversed-phase high-performance liquid chromatography. The advantages of this technique compared with all previously described ones are presented in the paper.
(ОК) (ШррорЬае rhanmoides) и подорожника большого (ПБ) (Plantago пгарпв).
Стандарт ДКВ (массовая доля не менее 99,0%, сопутствующего флавоноида дигидрокемпферола не более 5,7%) предоставлен ООО НЦПИ "Биотехпром", (г. Москва). Базовый раствор стандарта (10 мг/мл) готовили на 0,01 М фосфатном буфере (рН 7,45), рабочий получали разбавлением базового до концентрации
