CC BY
62
Известия Тихоокеанского научно-исследовательского рыбохозяйственного центра 200Г Том 129
Н.Д.Татаркина, Н.Н.Жилкова; Т.Н.Пивненко, Н.Б.Аюшин
(Владивостокский государственный медицинский университет; ТИНРО-центр)
ВЛИЯНИЕ МОЛЛЮСКАМА НА ПРОЦЕССЫ КРОВЕТВОРЕНИЯ
В последние годы в лаборатории прикладной биохимии ТИНРО-центра проводился поиск источников биологически активных веществ, которые могли бы использоваться в качестве лечебно-профилактических препаратов направленного антиоксидантного действия. Так, весьма перспективными с этой точки зрения были признаны некоторые виды моллюсков, обитающие в водах Японского моря (Аюшин и др., 1997). Их отличительной особенностью является высокое содержание свободных аминокислот и особенно таурина - весьма важной в физиологическом отношении аминокислоты, участвующей в регуляции деятельности сердечно-сосудистой системы, обмене жирорастворимых витаминов и осуществляющей антиоксидантные функции (Гуревич, 1986). Антиоксидан-тное действие аминокислот является опосредованным, в нем задействован целый ряд защитных механизмов (Кения и др., 1993; Меньщикова, Зенков, 1993). В настоящее время показана антигликилирующая функция аминокислот и пептидов, обеспечивающая замедление старения на молекулярном уровне (Хипкис, 2000). Предлагаемый нами препарат “Моллюскам” содержит 60-80 % свободных аминокислот (в том числе 4-8 % таурина) и может быть использован в медицинской практике при лечении заболеваний, сопровождающихся нарушением антиоксидан-тной защиты и цитостабилизирующих функций.
Одним из распространенных гемобластических заболеваний (особенно у лиц пожилого возраста), характеризующихся снижением анти-оксидантной защиты, является множественная миелома (ММ). В последние годы частота этой патологии на территории Приморского края неуклонно растет. При ММ изменения происходят на уровне самых ранних предшественников В-лимфоцитов, которые сохраняют способность к дифференцировке до конечного этапа - плазматических клеток, секре-тирующих иммуноглобулины. В результате неуправляемой гиперплазии плазматических клеток в костном мозге происходит угнетение нормального кроветворения. Отмечается снижение уровня эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Проведение стандартных схем лечения ММ с использованием цитостатических препаратов способствует еще большему угнетению процессов кроветворения. Анемия, наряду с костно-деструктивным синдромом и синдромом белковой патологии, считается одним из основных проявлений заболевания (Абелев и др., 2001). Исходя из литературных и собственных данных о наличии защитных - цитоста-
68
билизирующих (Wright et al., 1986) и антиоксидантных - свойств таурина и других аминокислот мы предположили, что препарат “Моллюскам” сможет оказать положительное воздействие на состояние больных ММ. Тем более что этот препарат не имеет каких-либо противопоказаний в отличие от стандартных цитостатических препаратов, применяемых при традиционной химиотерапии.
Материалы и методы
Моллюскам, использованный в настоящей работе, вырабатывался путем ферментативного гидролиза мантии приморского гребешка с использованием ферментного препарата “Пилорин” с активностью 180 Е/г. Способ получения защищен (Пат. РФ № 200107166/13 (007382)). Состав свободных аминокислот приведен в табл. 1.
В условиях in vitro опреде-
1
Таблица
Состав свободных аминокислот в препарате “Моллюскам” из мантии приморского гребешка
Table
Free amino acids in mantle of Mizuhopecten yessoensis
ляли количество малонового диальдегида, накопленное за сутки инкубации в присутствии 0,25 М ^е2+^е3+] (катализатор ускоренного окисления) в нормальной антирезусной сыворотке крови человека при концентрации препарата 2 мг/л сыворотки. В качестве контроля использовалась сыворотка с добавлением катализатора окисления.
Под нашим наблюдением находилось 89 больных ММ в возрасте от 45 до 75 лет. У 33 больных имелась 11А стадия заболевания, 9 - ПБ, 30 - ША и у 17 больных - ШБ стадии ММ. Нами были проведены исследования показателей периферической крови (гемоглобина, лейкоцитов, тромбоцитов). Активность калликреин-кининовой системы (ККС) оценивали по уровню калликреина (К), прекалликреина (ПК), ^-ингибитора протеаз и а2-макроглобули-на. Содержание К и ПК в плазме определяли хроматографическим методом (Пасхина и др., 1984), а1-ИП и а2-МГ - унифицированным энзиматическим методом (Нартикова, Пас-хина, 1979). Контрольное исследование показателей гемограммы проводили через 2 нед, учитывая сроки созревания стволовой клетки, вставшей на путь дифференциации. Измерение содержания малонового диальдегида в сыворотке крови больных осуществляли спектрофотометрически модифицированным методом, основанным на реакции с тиобарбитуро-вой кислотой (Чумак и др., 1992). Больные были обследованы как до лечения, так и после проведения курсов полихимиотерапии (ПХТ). 12 больных ММ, кроме стандартного курса ПХТ, получали также препарат “Моллюскам” по 1,0 г в сутки утром.
69
Аминокислота , Содержание, % сухой массы
Таурин 3,93
Аспарагиновая кислота 3,01
Треонин 3,23
Серин 1,60
Глутаминовая кислота 4,26
Пролин -
Глицин 15,19
Аланин 3,17
Валин 2,54
Метионин 2,09
Изолейцин 2,41
Лейцин 4,41
Тирозин 1,29
Фенилаланин 3,24
Гистидин 0,88
Лизин 4,94
Аргинин 4,86
Триптофан 3,9
Всего 64,86
При исследовании показателей периферической крови у больных ММ до лечения было выявлено достоверное снижение уровня гемоглобина, лейкоцитов и тромбоцитов. Через 2 нед было выявлено, что проведенная ПХТ способствовала еще большему снижению уровней лейкоцитов и тромбоцитов. Содержание гемоглобина осталось практически на прежнем уровне. Применение Моллюскама способствовало нормализации уровня лейкоцитов в период лечения, предотвращало нарастание тромбоцитопении, повышало уровень гемоглобина в крови (табл. 2).
Таблица 2
Показатели периферической крови у больных ММ при использовании Моллюскама
Table 2
Datas of peripherial blood at the multiple mieloma by the Molluscam using
Показатели гемограммы и их норма До лечения, n - 89 После Без “Моллюскама”, n - 77 лечения С “Моллюскамом”, n - 12
Лейкоциты, 3,67±0,19, 1 0, ± ,0 со 5,63 ±0,34,
LO о +1 г- to р<0,001 р<0,001, p>0,05,
г/л р1<0,05 p1<0,001, р2<0,001
Тромбоциты, 114,44±6,52, 101,25±7,68, 112,86±10,47,
292,81±20,53 р<0,001 р<0,001, р<0,001,
г/л p1>0,05 р1>0,05, p2>0,05
Гемоглобин, 89,06±2,16, 92,00±4,83, 100,5±4,58,
142,17±4,55 р<0,001 р<0,001, р<0,001,
г/л р, >0,05 р. <0,05, p2>0,05
Примечание. р - достоверность различия с контрольными показателями; р1 - достоверность различия с показателями до лечения; р2 - достоверности различия с показателями без применения Моллюскама.
Калликреин-кининовая система (ККС) является одной из важнейших физиологических адаптационных систем организма, активно участвующих в снабжении органов и тканей кислородом при гипоксичес-ких состояниях. Важным фактором активации ККС является ишемия тканей. Возникающий при ишемии недостаток АТФ и других энергетических метаболитов приводит к нарушению целостности мембран клеток и активации лизосомальных ферментов. С ишемией связан выход активаторов плазминогена с последующим изменением гемостатичес-кого баланса. Основными плазменными ингибиторами являются а1-инги-битор протеиназ (а1-ИП) и а2-макроглобулин (а2-МГ). Ингибиторы про-теиназ влияют на скорость образования биологически активных веществ, активацию ККС, систем комплемента и свертывания крови, фибринолиз. Состояние ККС является хорошим показателем при наблюдении за больными ММ (Абелев и др., 2001).
У всех больных ММ уровень К оказался повышенным по сравнению с нормой в три раза (табл. 3), причем имелась тенденция к его увеличению по мере утяжеления заболевания. Наиболее высокий уровень К оказался у больных с ШБ стадией процесса. Величина ПК, являющегося предшественником активного калликреина, также превышала контрольные цифры примерно в три раза. Однако заметить различия в его уровне от выраженности заболевания не удалось. Активность а1-ИП у всех больных ММ превышала нормальные величины, причем его уро-
70
вень при ПБ и ШБ стадиях оказался достоверно выше, чем при IIA и IIIA. Величина а2-МГ была повышенна у больных со II стадией заболевания, однако различий между показателями IIA и 11Б стадиями выявлено не было. При III стадии заболевания уровень а2-МГ оказался в пределах нормы.
Таблица 3
Активность калликреин-кининовой системы у больных множественной миеломой до и после лечения
Table 3
The kallicrein-kinin actuvity in the multiple mieloma ills , before and after
Molluscam therapy
Показатель и его норма IIA стадия ПБ стадия IIIA стадия ШБ стадия
Калликреин, 227,749±21,227, 225,697±29,249, 0, 2 4, 2 ± 8 6 ,3 6, 5 2 5, 7 ,6 5, 3 ± 3 3 ,2 7, 6 2
79,261±2,542 р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001
нмоль, БАЭЭ/
мин/мл
ПХТ LO СП ±1 сс сч 9 СО 10 <5 2 ± 5 3 LО со 21 228,300±29,311, 7, 7 ,8 21 ± 6 3 ,5 9, 8
р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001
ПХТ+”Моллюс- 223,223±22,874, 209,442±20,725, 180,00±9,110,
кам” р<0,001 р<0,001 р<0,001
Прекалликреин, 968,000±67,893, 614,200±38,316, 908,708±64,352, 945,275±113,588,
373,698±28,459 р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001
нмоль, БАЭЭ/
мин/мл
ПХТ 994,291±49,165, 983,425±80,736, 905,509±71,769, 931,529±108,877,
р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001
ПХТ+”Моллюс- 1253,00± 109,75, 896,629±78,573, 7, 9 ,5 9, 3 ± 0 0 ,6 9, 2 9
кам” р<0,001 р<0,001 р<0,001
3 +1 О* 50,945±2,646, 60,904±4,185, 45,562±2,455, 67,842±2,319,
р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001
МЕ/мл
ПХТ 41,463±2,214, 35,475±2,636, 42,800±3,886, 63,218±4,223,
р<0,001 р<0,05 р<0,001 р<0,001
ПХТ+”Моллюс- 48,139±4,00, 36,972±2,925, 59,651±5,435,
кам” р<0,001 р<0,001 р<0,001
а2-МГ, 4,335±0,317, 4,825±0,310, 3,723±0,337, 4,600±0,459,
3,241±0,182 р<0,01 р<0,001 р>0,05 р<0,02
МЕ/мл
ПХТ 4,695±0,279, 3,096±0,258, 3,877±0,353, 3,709±0,238,
р<0,001 р<0,01 р>0,05 р>0,05
ПХТ+”Моллюс- 4,735±0,472, 3,619±0,325, 3,577±0,275,
кам” р<0,01 р>0,05 р>0,05
Примечание. р - достоверность различия с контрольными показателями.
Лечение ММ с использованием стандартных программ ПХТ не привело к нормализации активности ККС. Имелась тенденция к снижению уровня К плазмы, что оказалось более выраженно при ШБ стадии ММ. Отмечена также тенденция к снижению а1-ИП, особенно при II стадии заболевания. При лечении у больных со ПА стадией величина а2-МГ оставалась повышенной, у больных со 11Б стадией ММ произошла его нормализация. Изменений уровня ПК в процессе лечения больных не отмечено. Включение в схему лечения больных ММ Моллюскама неодинаково отразилось на состоянии калликреин-кининовой системы при различных стадиях заболевания (табл. 3). При 11А стадии актив-
71
ность К и aj-ИП осталась практически на том же уровне, что и до лечения, отмечалось повышение уровня ПК и a-МГ. У больных со IIIA и ШБ стадиями ММ отмечено достоверное снижение активности всех параметров ККС по сравнению с таковыми до лечения и после лечения с использованием только стандартных схем полихимиотерапии.
Одним из показателей окислительных процессов в организме является уровень малонового диальдегида в сыворотке крови пациентов. Введение Моллюскама оказало положительное действие на состояние антиоксидантной активности сыворотки крови in vitro и in vivo. В первом случае содержание малонового диальдегида в присутствии Мол-люскама составило 0,028-0,035 мг/мл сыворотки крови. В контрольном образце, в который был введен катализатор окисления, но отсутствовал Моллюскам, содержание малонового диальдегида составило 0,070-0,072 мг/мл. Таким образом, было обеспечено снижение содержания этого компонента на 40-49 %.
ПХТ, получаемая больными множественной миеломой, привела к накоплению в организме малонового диальдегида (0,244±0,019 мг/мл до лечения и 0,337±0,034 мг/мл после курса ПХТ, р<0,05). Включение в схему лечения Моллюскама предотвратило нарастание уровня этого вещества в сыворотке крови, и имелась тенденция к снижению его по сравнению с показателями до лечения (0,223±0,017 мг/мл).
Таким образом, у больных множественной миеломой имеются изменения в показателях гемограммы и активности калликреин-кининовой системы, нарушены окислительные процессы в организме. Изменения ККС особенно выражены при III стадии заболевания. Отсутствие же нарастания и даже нормализацию а2-МГ у больных с III стадией заболевания нельзя расценить как положительный признак. Это, возможно, свидетельствует о нарушении нормальной белковообразующей функции в организме за счет увеличения количества патологического пара-протеина. Лечение больных ММ не приводит к полной нормализации выявленных изменений, что, по-видимому, следует учитывать у данной категории больных.
Применение Моллюскама при лечении больных ММ положительно влияет на процессы кроветворения, особенно в отношении лейкопоэза и тромбоцитопоэза. Также этот препарат оказывает положительное действие на окислительные процессы в организме больных. Полученные данные позволяют рекомендовать включение Моллюскама не только в схемы лечения больных ММ, но при всех состояниях, сопровождающихся угнетением процессов кроветворения и явлениями гипоксии.
Литература
Абелев Г.И., Андреева Н.Е., Афанасьев В.В. и др. Клиническая гематология. - М: Медицина, 2001. - 576 с.
Аюшин Н.Б., Петрова И.Ю., Эпштейн Л.М. Таурин и карнозин в тканях тихоокеанских моллюсков // Вопр. питания. - 1997. - № 7. - С. 6-8.
Гуревич В.С. Таурин и функция возбудимых клеток. - Л.: Наука, 1986. -112 с.
Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи современной биологии.
- 1993. - Т. 113, № 4. - С. 456-470.
Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи современной биологии. - 1993.
- Т. 113, № 4. - С. 442-455.
^р^кова B.Ф., Пасхина T.C. Унифицированный метод определения активности a1-aнтитpипcинa и a2-мaкpoглoбyлинa в сыворотке (плазме) крови человека // Вопр. мед. химии. - 1979. - T. 24, № 4. - С. 494-499.
Пасхина T.C., Якубовская Р.И., Баженова Г.Е. Модифицированный хроматографический метод определения калликреина и прекалликреина в плазме (сыворотке) крови человека. Методические рекомендации. - М., 1984.
Пат. РФ № 200107166/13 (007382). Продукт, обогащенный свободными аминокислотами и способ его получения / ТН.Пивненко, В.В.Давидович, Ю.М.Позднякова, Л.М.Эпштейн (РФ). - Опубл. 22.03.2000.
Хипкис А.Р. Карнозин и карбонильные группы белка: возможная взаимосвязь // Биохимия. - 2000. - T. 65, № 7. - С. 907-915.
Чумак А.Д., Миленина ^И., Руцкая T.H. и др. Влияние различных добавок на окисление липидов и качество соленых лососевых // Изв. TOHPO. - 1992. - T. 114. - С. 167-174.
Wright C.E., Tallan H.H., Lyn Y.Y., Gaull G.E. Taurine: biological update // Annu. Rev. Biochem. (Palo Alto, Calif.). - 1986. - Vol. 55. - P. 427453.
Поступила в редакцию 18.05.2001 г.
