CC BY
84
ю
ВЛИЯНИЕ МЕДА, МАТОЧНОГО МОЛОЧКА И ПРОПОЛИСА НА ТЕМПЫ ЗАЖИВЛЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ АЦЕТАТНЫХ ЯЗВ ЖЕЛУДКА У КРЫС
Белостоцкий Н.И., Касьяненко В.И., Дубцова Е.А., ЛазебникЛ.Б.
Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии, Москва
Белостоцкий Николай Игоревич 111123 Москва, шоссе Энтузиастов, д. 86 Тел.: 8(495)3050979 E-mail: [email protected]
РЕЗЮМЕ
Цель исследования: Изучение влияния растворов мёда, маточного молочка и прополиса на заживление экспериментальных ацетатных язв желудка у крыс на 7 сутки после стимуляции язвенного процесса. Материалы и методы: Опыты были проведены на 100 крысах самцах с массой тела 250-300 г. Ацетатная язва воспроизводилась по методу Окабе. Аппликация уксусной кислоты на серозную оболочку передней стенки желудка — 60 сек. Растворы исследованных препаратов вводились ежедневно, однократно, внутрижелу-дочно в объёме 1,0 мл. Мёд вводился из расчёта 1,5 мг/кг массы тела (МТ), маточное молочко — 10 мг/кг МТ, прополис — 1,0 мл 10%-ного водного раствора. Все растворы вводились в течение 7 суток, начиная с первого дня — с момента инициации формирования ацетатных язв в слизистой оболочке желудка. В контрольной группе в желудок вводился 1,0 мл растворителя — дистиллированной воды. После забоя животных (на седьмые сутки) проводилась оценка величины площади повреждения в мм2. В желудочном смыве подопытных животных проводилось определение рН. Также проводилось определение активности пепсина. Результаты: Показано ускорение заживления язв под воздействием ежедневного внутрижелудочного введения мёда, маточного молочка и прополиса в течение семи суток. Наиболее выраженным эффект стимуляции заживления наблюдался у прополиса и маточного молочка, несколько меньше — у мёда. Влияние мёда, прополиса и маточного молочка на качество и темп заживления проявлялось на фоне снижения секреции кислоты в полости желудка по сравнению с контрольной группой (ацетатная язва). Ключевые слова: экспериментальная ацетатная язва; мёд; маточное молочко; прополис; заживление язв
SUMMARY
This study examines gastric acetic ulcer healing in the rat after administration of honey, royal jelly and propolis into the stomach. Chronic gastric ulcers were induced in male Wistar rats by the application of 100% acetic acid to the serosal surface of the stomach on 60 sec. Bee-keeping products were administrated into the stomach from 2nd to 7th day after acetic ulcer induction. On 7th day animals were killed, and ulcer area was measured in mm2. In gastric juice pH and activity of pepsin were measured.
The healing of acetic ulcers is accelerated with the administration of honey, royal jelly or propolis during six days. The largest healing effect was demonstrated with propolis and royal jelly, smaller one with the honey.
It was revealed decrease of stomach acid secretion in the rats, which have received bee-keeping products versus the rats of control group.
Keywords: Experimental acetate ulcer, honey, royal jelly, propolis, ulcer healing
a\
©
Мед, маточное молочко и прополис оказывают воздействие на защитные и репарационные процессы в различных тканях [1]. Показано наличие профилактических свойств у растворов меда различной концентрации при острых повреждениях слизистой оболочки желудка, вызванных этанолом и другими повреждающими веществами [2; 3]. Значительно меньше работ
посвящено исследованию воздействия прополиса на формирование и заживление экспериментальных повреждений слизистой оболочки желудка и практически не исследовано воздействие маточного молочка на заживление экспериментальных язв.
Целью настоящей работы является исследование влияния растворов меда, маточного молочка
Таблица 1
ИЗМЕНЕНИЯ ПЛОЩАДИ ПОРАЖЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА НА СЕДЬМЫЕ СУТКИ В КОНТРОЛЬНОЙ И ОПЫТНЫХ ГРУППАХ
Показатели Группа
АцЯ 7 (К), п = 20 АцЯ 7 + Мед п = 20 АцЯ 7 + маточное молочко, п = 20 АцЯ 7 + прополис, п = 20
S, мм2 26,8 ± 2,1 10,6 ± 1,8 7,8 ± 1,1 5,85 ± 1,2
А% к К 100 40 29 22
р — < 0,005 < 0,001 < 0,001
и прополиса на заживление экспериментальных ацетатных язв желудка у крыс на седьмые сутки после стимуляции язвенного процесса.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Опыты были проведены на 100 крысах самцах с массой тела 250-300 г. Ацетатная язва воспроизводилась по методу [4; 5]. Аппликация уксусной кислоты на серозную оболочку передней стенки желудка — 60 с. Растворы исследованных препаратов вводились ежедневно, однократно, внутрижелудочно в объеме 1,0 мл. Мед вводился из расчета 1,5 мг/кг массы тела (МТ), маточное молочко — 10 мг/кг МТ, прополис — 1,0 мл 10%-ного водного раствора. Все растворы вводились в течение 7 суток, начиная с первого дня — с момента инициации формирования ацетатных язв в слизистой оболочке желудка. В контрольной группе в желудок вводился 1,0 мл растворителя — дистиллированной воды. После забоя животных (на седьмые сутки) проводилась оценка величины площади повреждения в мм2.
В желудочном смыве подопытных животных проводилось определение рН при доведении объема смыва до постоянной величины — 3,0 мл. Измерения проводились с использованием рН-метра Наппа-9024
Таблица 2
(Германия). Также проводилось определение активности кислых протеиназ в соответствии с методом [6]. Статистическая обработка проводилась с использованием программы Statistica 7.0, оценка достоверности различий в группах проводилась с использованием непараметрического критерия статистики Колмогорова — Смирнова.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Установлено, что в опытной группе (с введением меда) по сравнению с контрольной размер экспериментальных язв снизился (рис. 1,2; табл. 1).
При исследовании рН желудочного смыва было найдено, что в группе с введением меда по сравнению с контролем рН желудочного смыва возрос (табл. 2). Эти изменения были достоверны с уровнем значимости р < 0,001.
При исследовании активности секреторных протеиназ в полости желудка (рН 1,5) было найдено, что активность пепсина у животных с ацетатной язвой на седьмые сутки введения меда превышала уровень активности у животных контрольной группы, р < 0,05 (рис. 5).
Б > а
5 О
I- с
<а
О £ р
Щ а
Н1Ё п Е
н ч
и
га
I.
Б
га
х
л
<
га
I-
х
ш
2
а
ш
с
У
т
ИЗМЕНЕНИЕ рН ЖЕЛУДОЧНОГО СМЫВА У ЖИВОТНЫХ С АЦЯ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ПРОДУКТОВ ПЧЕЛОВОДСТВА
Показатели Группа
Контроль, п = 20 АцЯ 7, п = 20 АцЯ 7+ мед, п = 20 АцЯ 7 + маточное молочко, п = 20 АцЯ 7 + прополис, п = 20
рН 3,1 ± 0,15 3,8 ± 0,2 4,6 ± 0,24 4,94 ± 0,18 4,8 ± 0,17
А% к К 100 122 148 159 155
Р - > 0,1 < 0,001 < 0,001 < 0,001
[Н+], тМ/1 1,47 ± 0,3 0,56 ± 0,1 0,12 ± 0,05 0,05 ± 0,01 0,06 ± 0,02
А% к К 100 38 8 3,5 4
Р — > 0,1 < 0,001 < 0,001 < 0,001
■■■ ф ■ ■ ■
Рис. 1. Ацетатная язва, 7 дней без лечения
Рис. 2. Ацетатная язва, 7 дней, воздействие мёда
Рис. 3. Ацетатная язва, 7 дней, воздействие маточного молочка
Таким образом, введение меда в течение 7 суток с момента стимуляции язвенного процесса в СОЖ приводит к существенному и достоверному снижению размера ацетатных язв по сравнению с размером у животных контрольной группы (спонтанное заживление). Заживляющее действие (ускоряющее заживление) меда проявлялось на фоне снижения секреции кислоты в желудке и тенденции к увеличению активности кислых протеиназ в полости желудка по сравнению с контрольной группой.
Маточное молочко в дозе 10,0 мг/кг МТ при ежедневном введении привело к снижению размеров ацетатных язв по сравнению с размерами язв у животных контрольной группы (рис. 1, 3; табл. 1), р < 0,001. Исследование рН в ЖС показало увеличение рН желудочного смыва в опытной группе (табл. 2).
Исследование активности кислых протеиназ желудочного сока показало тенденцию к увеличению активности пепсина у крыс с ацетатной язвой под влиянием введения маточного молочка, р = 0,05 (рис. 5).
Таким образом, маточное молочко оказывает заживляющее действие на ацетатные язвы с ингибированием секреции кислоты и стимулирует (по сравнению с контролем) секрецию кислых проте-иназ в полости желудка.
Введение 10%-ного водного раствора прополиса привело к снижению размера язв в опытной группе
Рис. 4. Ацетатная язва, 7 дней, воздействие прополиса
по сравнению с контрольной, р < 0,001 (рис. 1, 4; табл. 1). Исследование рН желудочного сока показало снижение рН у животных опытной группы, р < 0,001 (табл. 2).
Исследование активности кислых протеиназ в желудочном соке под воздействием прополиса показало снижение активности, р < 0,05 (рис. 5).
Таким образом, прополис обладает выраженным заживляющим действием на ацетатную язву. Этот эффект прополиса происходит с одновременным ингибирующим воздействием на секрецию кислоты в полости желудка и снижением активности кислых протеиназ.
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Исследованные продукты пчеловодства являются многокомпонентными смесями, влияющими на многие функции желудка в норме и при язвенной патологии.
При рассмотрении экспериментальных работ, связанных с воздействием меда на профилактику и заживление повреждений слизистой желудка, следует отметить, что в основном это воздействие на дефекты слизистой, вызванные повреждающими веществами [7], не отличающиеся глубиной и тяжестью, как это наблюдается в случае ацетатной
О!
о
о
і
Рис. 5. Изменения активности протеиназ в контрольной и опытных группах
язвы [4; 5]. Многие авторы считают, что защитное действие меда может быть связано со способностью углеводных смесей определенной концентрации стимулировать механизм цитопротекции в слизистой желудка. Существенную роль в реализации этого механизма могут выполнять капсаицинчув-ствительные нервные волокна [8; 9]. Важными элементами повреждения слизистой желудка могут быть процесс генерации активных кислородных радикалов, перекисное окисление липидов, повреждение белков и нуклеиновых кислот, которые резко усиливаются в слизистой оболочке желудка при язвообразовании. Одним из механизмов нейтрализации активных кислородных радикалов являются небелковые сульфгидрильные компоненты [10-12]. Активация этого защитного механизма наблюдается у животных с повреждениями слизистой желудка при введении им растворов меда [3]. Нельзя забывать о стимулирующем влиянии меда на общий метаболизм, который значительно нарушается при стимуляции язвенного процесса в желудке. Профилактическое и лечебное действие меда на заживление экспериментальных язв может быть связано с возрастанием объема секреции в желудке, то есть зависит от эффекта разведения при введении в желудок растворов углеводов или меда с осмо-ляльностью 1800 мОсм [2]. Во всех случаях введения меда или смеси сахаров наблюдался отчетливый профилактический эффект на развитие этаноловых или индометациновых повреждений слизистой [7].
К механизмам цитопротекции авторы относят повышенный синтез простагландинов [13]. В меньшей степени действие меда на заживление экспериментальных повреждений слизистой желудка связывают с ингибированием секреции. Данные по этому вопросу носят противоречивый характер. Так, под воздействием меда в норме и при повреждении слизистой секреция может как снижаться [2],
так и значительно возрастать [14]. В большой степени это зависит от функционального состояния секретирующих элементов и от стадии язвенного процесса. В наших исследованиях были получены данные о стимулирующем влиянии раствора меда на секреторный процесс в желудке, но репаративный процесс при этом осуществлялся достаточно эффективно [15; 16]. В настоящей работе показано, что для всех исследованных веществ получен эффект ингибирования секреции кислоты в желудке по сравнению с контролем и при ацетатной язве на седьмые сутки язвенного процесса. При этом наблюдается умеренная стимуляция секреции пепсина под воздействием меда и ингибирование секреции пепсина под воздействием прополиса, то есть имеется разобщение воздействия меда и прополиса на различные субпопуляции клеток слизистой желудка. Наличие увеличения способности слизистой желудка к секреции пепсина под воздействием меда может отражать факт более быстрого восстановления функциональных возможностей субпопуляции главных клеток под воздействием гипертонического раствора меда.
При рассмотрении воздействия прополиса на заживление экспериментальных язв следует отметить, что заживляющее действие может быть связано с противовоспалительным антиоксидантным иммуностимулирующим действием, что связано с присутствием селена и флавоноидов [17; 18]. Воздействие маточного молочка на заживление ацетатной язвы достаточно ярко выражено. Прежде всего, исходя из состава маточного молочка, эта смесь обладает выраженными антиоксидантными свойствами [19; 20], что определяется большим количеством свободных сульфгидрильных групп и глутатиона, то есть желудок и организм в целом получают антиоксиданты непосредственно из маточного молочка [19]. Таким образом, суммируя полученные результаты, можно отметить наличие у меда, маточного молочка и прополиса общего конечного функционального вектора воздействия на экспериментально вызванный язвенный процесс, а именно репарационного заживляющего вектора, который выражается в ускорении заживления язвенного дефекта. При этом конечный репарационный вектор является для различных исследованных продуктов результирующей различных по составу и интенсивности внутренних процессов, определяемых их функциональным воздействием на различные звенья патогенеза язвенного процесса.
Так, для меда можно выделить несколько элементов воздействия: стимуляция эндогенных антиок-сидантных систем, общее анаболическое действие, стимуляция цитопротекции. То есть функциональные векторы действия меда в большей степени
Б > а
5 о
I- С
оь
О £ р
Щ ст
Н1Ё
п Е
I- ч
и
га
I.
Б
га
х
л
<
га
I-
х
ш
2
а
ш
с
У
т
о
ю
а\
о
связаны с активациеи эндогенных защитных систем самой слизистоИ оболочки, сдерживающих интенсивность язвенного процесса, что наглядно показано при использовании меда на моделях, связанных с воздействием повреждающих веществ на слизистую оболочку [2]. Действие прополиса основано на его противовоспалительных и анти-оксидантных свойствах [18], то есть на снижении
интенсивности язвенного процесса и уменьшении времени заживления. Маточное молочко, обладая антиоксидантными свойствами за счет антиоксидантов самого маточного молочка, наличия у него сосудорасширяющих свойств и воздействия на все виды метаболизма [19; 20], так же как мед и прополис, обладает выраженной способностью к ускорению заживления ацетатных язв.
ЛИТЕРАТУРА
1. ЛудянскийЛ.А. Апитерапия. — Вологда, 1994.
2. GharzouliK., GharzouliA., AmiraS. etal. Prevention of ethanol-induced gastric lesions in rats by natural honey and glucose-fructose-sucrose-maltose mixture // Pharmacol. Res. — 1999. — Vol. 39, № 2. — P. 151-156.
3. Mobarok K., Ali A.T., Al-Swayeh O.A. Natural honey prevents ethanol induced vascular permeability changes in the rat stomach // J. Ethnopharmacol. — 1997. — Vol. 55, № 3. — P. 231-238.
4. Okabe S., Pfeiffer C.J. The acetic ulcer model — a procedure for chronic duodenal or gastric ulcer // Peptic ulcer (ed. C.J. Pfeiffer). — 1971. — P. 13-20.
5. Okabe S., Roth J.L.A., Pfeiffer C.J. A method for experimental penetrating gastric and duodenal ulcer in rats // Am. J. Dig. Dis. — 1971. — Vol. 16. — P. 277-284.
6. Anson M.L., Mirsky A.E. The estimation of pepsin with hemoglobin // J. Gen. Physiol. — 1932. — Vol. 16. — P. 59-63.
7. Gharzouli K., Amira S., Gharzouli A. et al. Gastroprotective effect of honey and glucose-fructose-sucrose-maltose mixture against
ethanol-, indometacin- and acidified aspirin-induced lesions in the rat // Exp. Toxicol. Pathol. — 2002. — Vol. 54, № 3. — P. 217-221.
8. Al-Swayeh O.A., Ali A.T. Effect of ablation of capsaicin-sensitive neurons of gastric protection by honey and sucralfate // Hepatogastroenterology. — 1998. — Vol. 45, № 19. — P. 297-302.
9. Takeuchi K., Kato S., Takeda M. et al. Facilitation by endogenous prostaglandins of capsaicin induced gastric protection in rodents through
EP2 and IP receptors // J. Pharmacol. Exp. Ther. — 2003. — Vol. 304, № 3. — P. 1055-1062.
10. Karmeli F., Okon E., Rachmilewitz D. Sulphydryl blocker induced gastric damage is ameliorated by scavenging of free radicals // Gut. — 1996. — Vol. 38. — P. 826-831.
11. Szabo S., Trier J.S., Brown A. et al. Sulphydryl blockers induce severe inflammatory gastritis in rats // Gastroenterology. — 1984. — Vol. 86. — P. 1271.
12. Szabo S., Trier J.S., FrankelP.W. Sulphydryl compounds may mediate gastric citoprotection // Science. — 1981. — Vol. 214. — P. 220-222.
13. Gharzouli K., Balint G.A., Galfi M. et al. The effect of osmolality changes on gastric mucosal endogenous prostacyclin levels in drug-induced experimental ulcer model of rat // Exp. Toxicol. Pathol. — 2001. — Vol. 53, № 5. — P. 409-411.
14. Gharzouli K., Gharzouli A., Amira S. et al. Protective effect of mannitol, glucose-fructose-sucrose-maltose mixture and natural honey hyperosmolal solutions against ethanol-induced gastric mucosal damage in rats // Exp. Toxicol. Pathol. — 2001. — Vol. 53, № 2-3. — P. 175-180.
15. Белостоцкий Н.И., Касьяненко В.И., ДубцоваЕ.А. и др. Влияние продуктов пчеловодства на формирование и тяжесть экспериментальных язв: Тезисы докл. 6-го съезда Научного общества гастроэнтерологов России. — 2005. — С. 4.
16. Сельцовский А.П., Лазебник Л.Б., Касьяненко В.И. и др. Лечение медом, другими продуктами пчеловодства и лекарственными травами. — М.: Анахарсис, 2007.
17. Гречану А., Йешицу В. Антитоксический эффект прополиса, пыльцы и меда. — Бухарест: Апимондия, 1982. — С. 37-40.
18. Макарова В.Г., Якушева Е.Н., Киселева В.А. Влияние продуктов пчеловодства на перекисное окисление липидов: Материалы международной научной конференции «Пчеловодство XXI век». — С. 68-70.
19. Вавилов Ю.Л. Биохимические компоненты маточного молочка медоносной пчелы и морфологическое действие: автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Горький, 1971.
20. Овощников В.Н. Биологические свойства компонентов маточного молочка. Биологически активные продукты пчеловодства и их
использование. — Горький, 1990. — С. 60-71.
