CC BY
35
THE INFLUENCE OF THE PERCHLOZONE AND ITS LIPOSOME FORM ON THE STATE OF IMMUNE SYSTEM OF ORGANISM
V.B.Khobrakova, S.M. Nikolaev, I.A. Pavlov, L.D. Radnayeva, E.S. Averina,
G.V. Dolgushin, N.A. Tykheyeva, B.B. Badmaev, B.G. Sukhov, G.N. Malkhanova (Institute of General and Experimental Biology of SD RAS, Baikal institute of use of nature SD RAS, Buryat State University, Institute of chemistry named after A.E. Favorsky SD RAS)
^e immune depressive effect of the perchlozone in a dose of 20 mg/kg has been established in experiments on the CBA and FI (CBAxC57/Bl/6) mice. ^e perkhlozone decreased mass and amount of cells of thymus and spleen as well as indices of the cellular, humoral and macrophagal chains of the immune response. ^e use of liposome form of perkhlozone changes no mass and cell amount of immune organs as well as indices of the immunity in intact animals.
ЛИТЕРАТУРА
1. Александрова A.E.. Виноградова Т.И. Иммунотропная активность противомикробных средств, используемых во фтизиатрии // Проблемы туберкулеза. — 1996. — № 2. — С. 43-45.
2. Гудз И.М. Иммунологическое обоснование эффективности сочетанного применения антибиотиков и иммуномодуляторов в клинической практике: Автореф. дисс... к.м.н. — Киев, 1998. — 21 с.
3. Инсанов А.Б. Иммунохимиотерапия хронического туберкулеза легких. — Баку, 1990. — 160 с.
4. Кноринг Б.Е. Особенности иммунного статуса больных туберкулезом и его роль в диагностике, прогнозировании течения и иммунокоррекции // Автореф. дисс.д.м.н. — СПб., 1996. — 42 с.
5. Кресс В.М. Туберкулез в Российской Федерации — проблема государственной значимости // Вестник РАМН. — 2000. — № 12. — С. 19-20.
6. Лакин Г.Ф. Биометрия. — М., 1990. — 352 с.
7. Медведев С.Ю.. Перельман М.И. Туберкулез в России // Бюллетень «Вакцинация. Новости вакцино-профилактики». — 2002. — № 1. — С. 9-13.
8. Петров Р.В.. Хаитов Р.М.. Чередеев А.Н. и др. Иммунофармакологические подходы к оценке иммуномодуляторов // Иммуномодуляторы. — М., 1987. — С. 9-10.
9. Пономарева Ю.Ю. Влияние антибактериальной терапии на эксперессию антигенов I и II классов HLA— системы у больных туберкулезом легких // Туберкулез и экология. — 1996. — № 2. — C. 21-24.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2000. — 398 с.
11. Тыхеева Н.А. Иммуномодулирующее действие липосомальных средств, полученных на основе жира байкальской нерпы: Автореф. дисс... к.м.н. — Улан-Удэ, 1999. — 22 с.
12. Фрейдлин И.С. Использование культуры мышиных перитонеальных макрофагов в качестве модели для изучения клеток мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их изменений под влиянием биологически активных веществ: Методические рекомендации. — Л., 1976. — C. 8-10.
13. Хоменко И.С. Течение деструктивного туберкулеза у больных с иммунодефицитом: Автореф. дисс. д.м.н. — М., 1993. — 39 с.
14. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. — 1965. — Vol. 207. — № 5001. — P. 1106-1107.
© НАРДИНА И.В., НАРДИН Д.Б., ВИТКОВСКИЙ Ю.А. — 2007
ВЛИЯНИЕ КВЧ-ТЕРАПИИ НА ЛИМФОЦИТАРНО-ТРОМБОЦИТАРНУЮ АДГЕЗИЮ И СОДЕРЖАНИЕ ИЛ-1 В, ФНОА И ИЛ-4 У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ ВЕНОЗНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ
И.В. Нардина, Д.Б. Нардин, Ю.А. Витковский (Читинская государственная медицинская академия, (ректор — д.м.н. проф. A.B. Говорин) кафедра нормальной физиологии зав. — д.м.н., проф. Ю.А. Витковский;
Центр восстановительного лечения «Феникс», гл. врач — Г.В. Муравьева,
Читинская Областная клиническая больница гл. врач — к.м.н. И.Д. Лиханов
Резюме. Целью явилось изучение функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и содержания некоторых цитокинов у больных хронической венозной недостаточностью. Исследование проведено на 66 больных, которые разделены на 2 группы. Основная группа получала 10 сеансов КВЧ-терапии, контрольная — только консервативное лечение. Установлено, что у больных хронической венозной недостаточностью снижается способность лимфоцитов к образованию контактов с кровяными пластинками, повышается концентрация ИЛ-lß, ФНОа, ИЛ-4. Сеансы КВЧ-терапии у больных хронической венозной недостаточностью способствуют усилению лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, уменьшению продукции провоспалительных цитокинов ИЛ-lß, ФНОа и нарастанию содержания противовоспалительного ИЛ-4.
Ключевые слова: лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия, цитокины, КВЧ терапия, хроническая венозная недостаточность.
К настоящему времени показано, КВЧ-терапия ладает выраженным корригирующим действием
(крайне высокочастотная терапия, микрорезо- на реологические свойства крови и гемостаз у
нансная терапия, миллиметровая терапия), об- больных с разными нозологическими формами,
такими как стенокардия, гипертоническая болезнь, ишемический инсульт [5]. Однако работ, свидетельствующих о применении и эффективности КВЧ-терапии у больных с хронической венозной недостаточностью, не найдено. Учитывая то, что в патогенезе заболевания одним из ведущих звеньев являются иммунологические реакции, целью нашей работы явилось исследование функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и содержания некоторых цитокинов у больных хронической венозной недостаточностью.
Материалы и методы
В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Médical Association Déclaration of Helsinki (1964).
Мы обследовали 66 пациентов с хронической венозной недостаточностью 17 мужчин (25,7 %), 49 женщин (74,3 %) в возрасте от 20 до 50 лет. Больные были разделены на две сопоставимые группы. Основная состояла из 35 человек, которым наряду с компрессионным лечением и фармакотерапией проводилась терапия электромагнитными излучениями миллиметрового диапазона (КВЧ-терапия), группа сравнения состояла из 31 пациента, получившего традиционную консервативную терапию.
Пациентам основной группы наряду с консервативным проводили лечение электромагнитными излучениями (ЭМИ) миллиметрового диапазона. Источником ЭМИ служил аппарат «Амфит-0,2/ 10-01» работающий в «шумовом» режиме (диапазон частот 53,57-78,33 ГГц). Воздействие было направлено непосредственно на очаг (местное), на область поясницы (сегментарное рефлекторное влияние) и дополнительно на точки акупунктуры общего воздействия биологически активные точки: GI-4, Е— 36 симметрично. Курс составлял 1012 процедур.
Большинство пациентов имели ХВН III степени (61 %) в стадии выраженных трофических расстройств, средняя площадь язвенного дефекта составляла 2240 мм2. Длительность существования трофических язв колебалась от 2 месяцев до 10 лет.
Лабораторные исследования проводили до процедур и после 10 сеансов КВЧ терапии.
Контрольную группу составили практически здоровые волонтеры того же возраста.
Оценка лимфоцитарно-тром-боцитарной адгезии проводили по методу, предложенному Ю.А.Витковским и соавт. (1999).
Свежую гепаринизированную кровь обследуемых больных наслаивали на градиент урографин-фи-кол (плотность 1,077) и выделяли лимфоциты как описано выше.
Собирали интерфазное кольцо, содержащие клетки и кровяные пластинки, однократно промывали фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) и центрифугировали при
1000 об/мин в течение 3-4 мин. Надосадочную жидкость удаляли, осадок микроскопировали в камере Горяева. Подсчитывали число лимфоци-тарно-тромбоцитарных коагрегатов на 100 клеток (показатель ЛТА) и среднее число кровяных пластинок, адгезированных на поверхности одного лимфоцита (степень адгезии).
Определение концентрации цитокинов выполняли с помощью твердофазного иммуно-ферментного метода наборами реактивов ТОО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) для выявления ИЛ-ip, ООО «Вектор-Бест» для определения ИЛ-4 и ФНОа.
Статистическая обработка проведена пакетом Microsoft Exel с использованием t-критерия Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р<0,05.
Результаты и обсуждение
Установлено, что функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у всех пациентов с венозной недостаточностью уменьшалась (табл. 1). Так у здоровых волонтеров показатель ЛТА составил 13,1 ± 0,4%, тогда как у больных — 6,2 ± 0,3% и 6,8 ± 0,4% (р1 < 0,001). Одновременно у них степень адгезии также оказалась низкой — 1,4 ± 0,1 и 1,3 ± 0,1 против 2,1 ± 0,1 в контроле (р1< 0,001).
Использование КВЧ-терапии приводило к возрастанию функциональной активности имму-нокомпетентных клеток и процент лимфоцитов, адгезировавших тромбоциты, возрос до 11,2 ±
0,5% (р2 < 0,001), существенно не отличаясь от аналогичного показателя здоровых лиц (р1 > 0,05). При этом возрастала степень адгезии до 2,3 ± 0,2 (р1 > 0,05). В то же время у больных, не получав-ши1 х КВЧ-терапию, на низком уровне оставались показатель ЛТА — 8,1 ± 0,5% (р2 > 0,05), и степень адгезии — 1,7 ± 0,2 (р2 > 0,05).
Таким образом, вк2лючение в комплексное лечение электромагнитных излучений миллиметрового диапазона способствует повышению функциональной активности иммунокомпетентных клеток у людей, повышая число лимфоцитов, способных присоединять тромбоциты.
Обнаружено, что у наблюдаемых пациентов исходный уровень про— и противовоспалительных цитокинов оказался выше, чем в контроле (табл.
Таблица 1
Влияние КВЧ-терапии на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию (М ±
т)
Наблюдаемые группы п Число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов. % Степень адгезии
До лечения После лечения До лечения После лечения
Здоровые волонтеры 12 13.1 ± 0.4 2.1 ± 0.1
Пациенты, получавшие КВЧ-терапию 35 6.2 ± 0.3 Pi < 0.001 11.2 ± 0.5 р1 > 0.05 P2 < 0.001 1.4 ± 0.1 р1< 0.001 2.3 ± 0.2 р1 > 0.05 р2 < 0.0201
Пациенты, не получавшие КВЧ-терапию 31 6.8 ± 0.4 P1 < 0.001 8.1 ± 0.5 р1 < 0.001 р > 0.05 1.3 ± 0.1 р1< 0.001 1.7 ± 0.2 р1 < 0.05 р21 > 0.05
р2 — достоверность различий по сравнению со здоровыми;
р2 — достоверность различий по сравнению исходным уровнем до лечения.
2). Так, концентрация ИЛ-ф составила 94,3 ± 8,9 пкг/мл и 85,1 ± 10,1 пкг/мл против 6,4 ± 1,1 пкг/мл у здоровых волонтеров (р1 < 0,001). Повышенным оказалось также содержание ФНОа и ИЛ-4 по сравнению со здоровыми лицами (р1 < 0,001).
У пациентов после 10 процедур КВЧ-терапии выявилась тенденция к снижению уровня провоспа-лительных цитокинов. Так, к этому времени концентрация ИЛ-1^ уменьшилась с 94,3 ± 8,9 пкг/мл до 38,3 ± 6,2 пкг/мл (р2 < 0,05), ФНОа — с 45,2 ± 6,7 пкг/мл до 12,6 ± 4,6 пкг/мл, а ИЛ-4 наоборот, повысилась с 28,5 ± 7,2 пкг/мл до 48,3 ± 5,1 пкг/мл (р2 < 0,05).
В то же время у больных, которым не применяли КВЧ-лечение к концу наблюдения концентрация ИЛ-lß и ФНОа, хотя и снижалась, но статистически не отличалась от исходного уровня, также, как и противовоспалительного ИЛ-4 не имела значимого повышения (р2 > 0,05).
Полученные результаты убеждают нас в том, что КВЧ-терапия способствует снижению провос-палительных цитокинов ИЛ-lß и ФНОа и повышению ИЛ-4 у больных с хронической венозной недостаточностью.
Таким образом, КВЧ-терапия стимулирует клеточные реакции иммунной системы. В пользу этого свидетельствует повышение лимфоцитарно-тром-боцитарной адгезии у здоровых людей и больных хронической венозной недостаточностью.
Как установлено Ю.А.Витковским и соавт. (1999-2006) и А.В. Солповым (2002-2006) лимфоциты образуют коагрегаты с тромбоцитами. Т-хелперы (CD4+) способны к спонтанному розеткообразованию с интактными тромбоцита-ми[1,4,8]. Интерлейкин-2 и ИЛ-lß стимулируют розеткообразующую способность хелперно-индуцирующих клеток с интактными тромбоцитами и индуцируют ее у натуральных киллеров (CD16+). Ингибиторами лимфоцитарно-тромбо-цитарной адгезии являются ИЛ-4, ИЛ-10 и IFNy. ИЛ-8 и TNFa не оказывают влияния на лимфоцитарно-пластиночные контакты. Степень лим-фоцитарно-тромбоцитарной адгезии зависит от функционального состояния кровяных пластинок. Коллаген, ADP и адреналин наиболее выражено повышают лимфоцитарно-тромбоцитарную адге-
зию. Лигандом лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии выступают молекулы межклеточной адгезии-1 (ICAM-1). Механизм лимфоцитарно-тром-боцитарного взаимодействия включает в себя образование интегриновых и неинтегриновых мостов, таких как aIIb/P3— и ^-связанные инте-грины, Р-селектин-PSGL и CD40-CD40L, ICAM-1 [11,12,13,14]
Установлено, что тромбоциты способствуют миграции лимфоцитов и их фиксации на поврежденной поверхности сосудистой стенки, что позволяет им противостоять силе сдвига протекающей жидкости. Феномен лимфо-цитарно-тромбо-цитарной адгезии занимает важное место в развитии репаративных процессов [1,2,3,4]. КВЧ-терапия способствует увеличению способности лимфоцитов адге-зировать с тромбоцитами, в связи с чем ускоряется процесс заживления ран при хронической венозной недостаточности. Известно, что кровяные пластинки осуществляет трофическую и репаративную функции, секрети-руя в окружающую среду ряд ростковых факторов. К таким соединениям относятся фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), фактор роста гепатоцитов (HGF), ангиопоэтин-1, эпидермальный фактора роста (EGF), инсулиноподобный фактор роста -1 (IGF-1), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), модулятор иммунного ответа — трансформирующий фактор роста бета (TGF beta) [10]
Как известно, затухание воспалительных реакций связано с повышением содержания в окружающей среде противовоспалительных цитокинов, которыми являются ИЛ-4 и ИЛ-10[9]. Повышение их уровня сопровождается уменьшением лим-фоцитарно-тромбоцитарной адгезии и, следовательно, миграции иммуноцитов в очаг поврежде-ния[2,3,6,7.]. В свою очередь ИЛ-4 и ИЛ-10 тормозят функции Т-хелперов 1-го клона, являющихся продуцентами ИЛ-2. Их действие позволяет регулировать, а в финале и разорвать миграционный поток лимфоцитов в очаг воспаления.
Таким образом, у больных хронической венозной недостаточностью снижается способность лимфоцитов к образованию контактов с кровяными пластинками, повышается концентрация ИЛ-1^, ФНОа, ИЛ-4. Сеансы КВЧ-терапии у больных хронической венозной недостаточностью способствуют усилению лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, уменьшению продукции провоспалитель-ных цитокинов ИЛ-1^, ФНОа и нарастанию содержания противовоспалительного ИЛ-4.
Таблииа 2
Влияние КВЧ-терапии на содержание цитокинов у больных хронической венозной недостаточностью, пкг/мл (М ± т)
Показатели Здоровые волонтеры Пациенты, получавшие КВЧ-терапию Пациенты, не получавшие КВЧ-терапию
п 12 35 31
До лечения После лечения До лечения После лечения
ИЛ-lß 6,4 ± 1,1 94,3 ± 8,9 р1 < 0,001 38,3 ± 6,2 р1 < 0,001 р, < 0,001 85,1 ± 10,1 р1 < 0,001 70,5 ± 9,1 р1 < 0,001 р2 > 0,05
ФНОа 6,1 ± 1,1 45,2 ± 6,7 р1 < 0,001 12,6 ± 4,6 р1 < 0,001 р, < 0,001 41,5 ± 5,3 р1 < 0,001 28,1 ± 4,6 р1 < 0,001 р2 > 0,05
ИЛ-4 3,6 ± 0,9 28,5 ± 7,2 р1 < 0,001 48,3 ± 5,1 р1 < 0,001 р2< 0,05 24,6 ± 4,7 р1 < 0,001 30,2 ± 6,3 р1 < 0,001 р2 > 0,05
р1 — достоверность различий по сравнению со здоровыми;
р2 — достоверность различий по сравнению исходным уровнем до лечения.
EFFECTS OF UHF THERAPY ON LYMPHOCYTE-PLATELET ADHESION AND IL-1B, TNFA, IL-4 CONTENTS IN PATIENTS WITH CHRONIC VEIN INSUFFICIENCY
I. V Nardina, D.B. Nardin, Yu.A. Vitkovsky (Chita State Medical Academy)
^e aim was to study the lymphocyte-platelet adhesion in patients with chronic vein insufficiency, ^e study was performed in 66 patients, who were divided in 2 groups, 35 patients received 10 procedures of Ultra High Frequency (UHF) therapy, 31 — conservative therapy only, It was established that lymphocytes’ ability to form contacts with platelets decreased in patients with chronic vein insufficiency and IL-1 p, TNFa, IL-4 concentrations increased. UHF therapy stimulated the lymphocyte-platelet adhesion, IL-4 production and decreased the IL-1 p, TNFa levels,
ЛИТЕРАТУРА
1. Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов A.B. Феномен лимфоцитарно-тромбоцитарного розетко-образования // Иммунология. — 1999. — № 4. — С. 35 — 37.
2. Витковский Ю.А., Солпов A.B., Кузник Б.И. Влияние цитокинов на лимфоцитарно-тромбоцитар-ную адгезию // Медицинская иммунология. — 2002.-Т.4, № 2. — С. 135-136.
3. Витковский Ю.А., Солпов A.B., Шенкман Б.З., Кузник Б.И. Влияние интерлейкинов 1ß, 2, 10 и 16 на взаимодействие лимфоцитарно-тромбоцитар-ных агрегатов с экстрацеллюлярным матриксом // Иммунология. — 2006. — № 3. — С. 141-143.
4. Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов A.B. Патогенетическое значение лимфоцитарно-тромбо-цитарной адгезии // Медицинская иммунология. — 2006. — Т. 8. — № 5 — 6. — С. 745 — 753.
5. Киричук В.Ф., Семенова С.В., Паршина С.С. и др Влияние сочетанного воздействия лазера и ЭМИ КВЧ диапазона на некоторые показатели системы свертываемости крови у больных острым инфарктом миокарда // Миллиметровые волны в медицине. Сборник статей. Под ред. Н.Д. Девяткого, О.В. Бецкого. Т. 1. — М.,1991. — С. 225-228.
6. Кузник Б.И., Витковский Ю.А., Солпов А.В. Адгезивные молекулы и лейкоцитарно-тромбоцитар-ные взаимодействия // Вестник гематологии. — 2006. — т. II. — № 2. — С. 42 — 55.
7. Солпов А.В. Влияние про— и противовоспалительных цитокинов на лимфоцитарно-тромбоцитар-
ную адгезию // Забайкальский медицинский вестник — 2002. — №1. — С. 14-17.
8. Солпов А.В. Влияние цитокинов на лимфоцитар-но-тромбоцитарную адгезию // Тромбоз, гемостаз, реология. -2002.— № 1.-С. 34-36.
9. Черешнов В.А., Гусев Е.Ю. Иммунология воспаления: роль цитокинов // Мед. иммунология. — 2001. — Т.3. — С. 361 — 368.
10. Browder Т., Folkman J., Pirie-Shepherd S. ^е hemostatic system as a regularor of angiogenesis. // J. Biol. Chem. — 2000. — vol. 275. — P. 1521-1524.
11. Shenkman B., Brill G., Solpov A. CD4+ lymphocytes require platelet for adhesion to immobilized fibronectin in flow: Role of (CD29)-, P2 (CD18) related integrins and non-integrin receptors // Cellular Immunology. — 2006. — vol. 242 (1). — P. 52 — 59.
12. Solpov A., Shenkman B., Vitkovsky Yu., et al. Platelets enhance CD4+ lymphocyte adhesion to extracellular matrix under flow conditions: Role of platelet aggregation, integrins, and non-integrin receptors // Thrombosis and Haemostasis. — 2006. — vol. 95. — P. 815-821.
13. Solpov A. Platelets enhance CD4+ lymphocyte adhesion to extracellular matrix: role of CD40 ligand and P-selectin glycoprotein ligand / A. Solpov, B. Shenkman, Yu. Vitkovsky, B. Kuznik // Тромбоз, гемостаз и реология. — 2004. — № 4. — С. 25 — 27.
14. Verheul H.M.W., Hoekman К., Lukx-de Bakker S. et al. Platelet: Transporter of vascular endothelial growth factor // Clinical.Can.Res. — 1997. — vol. 3. — P. 2187 — 2190.
© ИЗАТУЛИН В.Г., БУЛАНКИНА И.А., АРСЕНТЬЕВА Н.И., ЛЕБЕДИНСКИЙ В.Ю., МАЛЫШЕВ В.В. — 2007
СОПОСТАВИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИЗМЕНЕНИЙ СТРУКТУР КОЖИ И ИХ БИОМЕХАНИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
В ДИНАМИКЕ ТЕРМИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ
В.Г. Изатулин, И.А. Буланкина, Н.И. Арсентьева, В.Ю. Лебединский, В.В. Малышев (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии, зав. — д.б.н., проф. Л.С. Васильева, кафедра анатомии человека, зав. — к.м.н., доц. Т.И. Шалина; Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии ВСНЦ СО РАМН, директор — член-корр. РАМН, проф. Е.Г. Григорьев)
Резюме. Проведенное исследование показало, что динамика изменений морфофункциональных свойств и биомеханических характеристик структур кожи при термическом воспалении разной степени имеет как общие закономерности, так и особенности развития, определяемые интенсивностью воздействия альтерирующего фактора. Изучение напряженно-деформированных состояний структур кожи посредством измерения внутрикожного давления позволяет не только проследить динамику воспалительного процесса, но и является интегративным показателем различной степени повреждения её структур, что дает возможность, в последующем, своевременно корректировать тактику лечебных манипуляций.
Ключевые слова: термический ожог, морфология, биомеханика структур кожи.
