CC BY
78
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК' 616-006.44.04-07:616.438-008.1
ВЛИЯНИЕ КЛИНИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ПОКАЗАТЕЛИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ТИМУСА У БОЛЬНЫХ ГЕМОБЛАСТОЗАМИ
Баторов Е.В., Блинова Е.А., Тихонова М.А., Лопатникова Ю.А., Крючкова И.В., Баторова Д.С., Сергеевичева В.В., Сизикова С.А., Гилевич А.В., Ушакова Г.Ю., Останин А.А., Черных Е.Р.
ФГБУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск
Резюме. Цель работы - исследовать показатели, отражающие активность тимуса у больных гемобластозами, изучить связь с клиническими факторами. В исследование вошли 42 пациента с лимфопролиферативными заболеваниями. Методом проточной цитометрии оценивали количество CD4+CD45RA+CD3PT-KnemoK, методом полимеразной цепной реакции определяли количество молекул TREC в С04+-клетках. Больные гемобластозами характеризуются выраженным снижением CD4+CD45RA+CD31+-wemoK и молекул TREC в С04+Т-клетках и возрастанием С04+Т-клеток памяти, экс-прессирующих молекулу CD31. Выявлены обратная корреляционная зависимость между содержанием TREC и количеством курсов химиотерапии 1-й линии и снижение их количества в зависимости от возраста. Не обнаружено связи между количеством CD4+CD45RA+CD3 Р-клеток и клиническими факторами. В условиях лимфопении наиболее чувствительным параметром активности тимуса, коррелирующим с предлеченностью и возрастом, является оценка количества TREC в С04+Т-клетках. Гомеостатическая пролиферация снижает ценность определения количества CD4+CD45RA+CD3 РТ-клеток как маркера «недавних мигрантов из тимуса».
Ключевые слова: тимопоэз;CD3P,TREC;лимфомы;множественнаямиелома.
RELATIONSHIP BETWEEN CLINICAL FACTORS AND FUNCTIONAL ACTIVITY OF THETHYMUS IN PATIENTS
WITH HEMATOLOGICAL MALIGNANCIES
BatorovE.V., Blinova E.A., Tikhonova M.A., Lopatnikova Yu.A., Kryuchkova I.V., Batorova D.S., Sergeevicheva V.V., Sizikova
S.A., Ushakova G.Yu., Ostanin A.A., Chernykh E.R.
Institute of Clinical Immunology, 630090, Novosibirsk, Russia
Summary. The parameters reflecting the activity of the thymus in patients with hematological malignancies were studied and their relationship with the clinical factors was analyzed. The study was carried out in 42 patients with lymphoproliferative diseases. The counts ofCD4+CD45RA+CD3P T-cells were evaluated by flow cytometry and the content of TREC molecules in CD4+ cells was evaluated byPCR. The patients were characterized by a pronounced reduction of the counts ofCD4+CD45RA+CD3P cells and of TREC molecules in CD4+ T-cells and increased counts ofCD4+ memory T-cells expressing CD31 molecule. Inverse correlation between TREC content and number of first-line chemotherapy courses and age-associated reduction of their content were detected. No relationship between CD4+CD45RA+CD3 P cells counts and clinical factors was detected. In lymphopenia the most sensitive parameter of thymic activity was TREC in CD4+ T-cells. There was negative correlation between TREC and patients age, between TREC and previous therapy. Homeostatic proliferation reduced the significance of evaluation ofCD4+CD45RA+CD3P cells as a marker of «recent migrants from the thymus».
Key words: thymopoiesis, CD31, TREC, lymphoma, multiple myeloma
Тимус является центральным органом иммунной системы, в котором происходит созревание и селекция Т-лимфоцитов. Созревание по тимусзави-симому пути обеспечивает разнообразие репертуара Т-клеток, необходимого для иммунного ответа на большое число антигенов. Благодаря тимопоэзу и гомеостатической пролиферации количество и суб-популяционный состав Т-лимфоцитов периферической крови (ПК) в отсутствие патологии поддерживаются на относительно постоянном уровне [1,2].
Для оценки лимфопоэтической функции тимуса используются 2 метода: определение содержащихся
Для корреспонденции:
Баторов Егор Васильевич (Batorov E.V.), кандидат медицинских наук, младший научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии ФГБУ Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН.
Адрес: 630090, Новосибирск, ул. Ядринцевская, д. 14. Телефон: +7(383)228-21-01 E-mail: [email protected]
Corresponding author:
Batorov Egor, PhD, junior researcher ([email protected]).
в цитоплазме Т-клеток кольцевых молекул ДНК, состоящих из фрагментов генов Т-клеточного рецептора (Т cell receptor excision circles, TREC) [3, 4], и оценка экспрессии маркера CD31 на поверхности CD4+CD45RA+ наивных Т-клеток (так называемые недавние мигранты из тимуса) [5, 6].
Мигрирующие на периферию из тимуса наивные Т-клетки играют основную роль в обновлении и расширении разнообразия Т-клеточных рецепторов, обеспечивая полноценный иммунный ответ на новые антигены, в том числе опухолевые.
Лучевая и/или химиотерапия (XT), используемая в лечении онкологических больных, дает повреждающий эффект в отношении зрелых лимфоцитов, эпителиальных клеток тимуса и лимфоидных предшественников, мигрирующих из костного мозга. Наиболее подвержены цитотоксическому действию химиотерапии С04+-клетки [7, 8]. При этом CD4+-лимфопения является независимым фактором риска развития фебрильной нейтропении и смерти в течение 1-го месяца после XT [9]. Восстановление
Т-клеток за счет тимопоэза приобретает особое значение в случаях гематологических заболеваний, при которых повторные курсы XT являются основным (часто единственным) методом лечения.
Несмотря на возрастзависимую (ежегодная убыль клеточной массы 1-3%) [10] и индуцированную повреждениями (в том числе XT) инволюцию, тимус сохраняет способность к регенерации и вносит вклад в количественное и качественное восстановление пула периферических Т-клеток. У молодых больных онкологическими заболеваниями, в том числе лим-фомами, описано увеличение размеров тимуса после XT, коррелирующее с увеличением числа наивных С04+-клеток [11, 12]. При этом в ряде исследований показано, что низкое количество TREC у гематологических больных ассоциировано с ухудшением показателей выживаемости [13, 14].
Цель исследования - оценка количества CD4+CD45RA+CD31+-клеток и молекул TREC в С04+Т-клетках у больных гемобластозами перед трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) и анализ влияния различных клинических факторов на указанные параметры.
Материалы и методы
Основная группа состояла из 42 больных (18 мужчин и 24 женщины) в возрасте от 19 до 55 лет (медиана возраста 37 лет), которым в период с декабря 2010 г. по октябрь 2013 г. проводили ауто-ТГСК на базе гематологического отделения клиники иммунопатологии НИИ клинической иммунологии СО РАМН. Неходжкинские лимфомы (HXJ1) диагностированы у 13 больных, лимфома Ходжкина (J1X) - у 13, множественная миелома (ММ) - у 16 больных (табл. 1). Период наблюдения после ауто-ТГСК с клинической оценкой течения посттрансплантационного периода составил 4,2-38,3 мес (медиана 25 мес). Забор крови и все иммунологические исследования проводили после получения письменного информированного согласия больного. В качестве группы сравнения было обследовано 15 здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту.
Исследование субпопуляции CD4+CD45RA+CD3 Г Т-клеток проводили до ауто-ТГСК (перед началом кондиционирования). Общий анализ крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе Нета-Screen 18 («Hospitex Diagnostics», Италия). Относительное содержание CD45RA CD31 Т-клсток оценивали в лейковзвеси в гейте С04+-лимфоцитов методом проточной цитометрии, используя анти-С04 (РегСР), анти-CD45RA (FITC), анти-С031 (РЕ) моноклональные антитела («Becton Dickinson», США). Цитометрию проводили по общепринятой методике с использованием параметров прямого и бокового светорассеяния и флюоресценции по каналам FL-3 (РегСР), FL-1 (FITC), FL-2 (PE) («BD FACS Calibur», США).
Выделение CD4+T-лимфоцитов проводили из монону-клеарных клеток (МНК) ПК (2-4 ■ 106 клеток на одну пробу). МНК метили анти-СОЗ-FITC и анти-С04-РЕ (ЗАО «Сорбент-сервис», Москва). Сортировку клеток проводили на сортере FACS Aria («Becton Dickinson», США). По
параметрам прямого и бокового светорассеяния выделяли лимфоцитарную область. По каналу флюоресценции соответствующего флюорохрома определяли гейты отдельных субпопуляций клеток, которые подвергали сортировке. Чистота выделенных субпопуляций Т-лимфоцитов составляла 90-98%.
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили на приборе IQ Cycler 5 («Bio-Rad») с детекцией результатов амплификации в режиме реального времени (методика TaqMan). Геномную ДНК выделяли из субпопуляций С04+-лимфоцитов с использованием набора Проба-ГС («ДНК технология», Россия).
Реакционная смесь в объеме 25 мкл содержала 5 мкл элюата с ДНК, 2 ед. Hot Start Taq ДНК-полимеразы. Концентрация dNTP составляла 200 мкМ, MgCl2 - 3 мМ, концентрация праймеров и зонда - 0,2 мкМ каждого.
Последовательность прямого прайме-
ра для TREC 5REC-V|/Ja имела следующий вид: 5 '-СССТТТС ААСС ATGCTGAC АС-3', обратного
праймера - 5'-GGGTGCAGGTGCCTATGC-3', флюоресцентного зонда - FAM-TCTGGTTTTTGTA AAGGTGCCCACTCCTG-BHQ1 [15]. В качестве референтного гена использовали ген CCR5, кодирующий один из рецепторов ß-хемокинов, преимущественно экспрессирующийся на Т-клетках. Специфические праймеры и флюоресцентный зонд для гена CCR5-. 5'-TACCTGCTCAACCTGGCCAT-3' (прямой), 5 '-TTCCAAAGTCCCACTGGGC-3' (обратный), FAM-TTTCCTTCTTACTGTCCCCTTCTGGGCTC-BHQ1 [ 16].
Для определения количества молекул TREC и количества клеток (половина от вносимого количества ДНК) использовали серию разведений стандартов Ю'-Ю5 с теми же праймерами и зондами, а также условиями амплификации. Значение определяли в прилагавшейся к прибору программе по пороговому циклу Ct и калибровочной прямой, полученной с помощью серии разведений стандарта. Результаты представляли в виде количества молекул TREC на 106 С04+-клеток (относительное количество) и С04+Т11ЕС+-клеток в 1 мкл (абсолютное количество).
Таблица 1
Характеристика больных по диагнозам
Диагноз
Число больных
Неходжкинские лимфомы 13
• диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома 2 II стадия 6
• диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома 3 IV стадия 2
• анапластическая Т-клеточная лимфома IV стадия
• мантийноклеточная лимфома III стадия
Лимфома Ходжкина 13
• смешанно-клеточный вариант II стадия 2
• смешанно-клеточный вариант III стадия 2
• нодулярный склероз II стадия 2
• нодулярный склероз Ш-1У стадия 6
• лимфоидное истощение II стадия 1
Множественная миелома 16
• I стадия 1
• II стадия 8
• III стадия 7
Таблица 2
Клиническая характеристика больных
Показатель на момент анализа
Значение*
Статус:
• 1-я полная ремиссия (ПР)
• 1-я частичная ремиссия (ЧР)
• 2-я ПР/ЧР
• более 2 ПР/ЧР
• прогрессия, резистентное течение
Продолжительность болезни (время от постановки диагноза), мес
Количество курсов ХТ
Время от последнего курса ХТ, мес
Поражение лимфатических узлов средостения
Лучевая терапия на область средостения Суммарная очаговая доза, Гр (и = 7) Время от окончания лучевой терапии, мес
18 4 2 10
21.7 ±2.7 (5.6-87)
8.7 ±0.5 (4-18) 1.7 ±0.2 (0,5-4,2)
20
35,1 ±3,8(16-46) 26.3 ± 7.4 (4.3-55.9)
Примечание. 4 М ± SE (min-max).
указано количество больных, либо значения
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета программ Statistica 6.0 (StatSoft). Для оценки значимости различий между группами больных использовали не параметрический ^/-критерий Ман-на-Уитни и //-критерий Краскела-Уоллиса. Для исследования корреляционных взаимосвязей использовали коэффициент корреляции Спирмена. В тексте данные представлены в виде среднее ± стандартная ошибка среднего (М ± Ж), в таблицах дополнительно представлены максимальное и минимальное значения (min-max). Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты
Общая клиническая характеристика больных с учетом указанных факторов представлена в табл. 2.
10,08 %
щШШш* в щ
CD4 - РегСР
Рис. 1. Цитометрическая характеристика СВ4+СВ45РА+СБ31+ Т-клеток.
Показана экспрессия СЭ31 на наивных Т-клетках в области СЭ4+-лимфоцитов при исследовании методом проточной цитометрии. Представлены данные случайно выбранного больного.
Лимфопоэтическую функцию тимуса оценивали по содержанию в ПК больных (п = 42) субпопуляции наивных СБ4+Т-лимфоцитов, экспрессирующих С03 1 (рис. 1). У 17 больных определяли количество молекул ТЯЕС на 106 С 04 Т-клеток.
Относительное содержание С 04 С 045 Я А С 031+-клеток и количества ТЯЕС в С04+-клетках у больных было значимо снижено по сравнению с контролем (табл. 3), что соответствовало данным литературы [5, 13, 17] и свидетельствовало о глубоком угнетении функции тимуса на фоне ХТ. При этом мы не выявили статистически значимой прямой корреляционной связи между содержанием этих популяций (г3 = 0,41; р = 0,1; и = 17). В то же время мы обнаружили значительное повышение содержания С04+С045ЯА СОЗ 1+-клеток в ПК больных по сравнению с донорами: 20,8 ± 2,2 против 8,3 ± 0,7% (ри= 0,0003). Вероятно, данная субпопуляция представляет Т-клетки памяти, сохранившие экспрессию С031 в процессе их трансформации из наивных Т-клеток.
Абсолютное количество С 04 С 045 Я А С 031+-лимфоцитов в единице объема ПК больных гемо-бластозами было в среднем почти в 88 раз выше, чем С04+ТКЕС+-клеток: 51 ± 8,8 против 0,58 ± 0,26/мкл {п = П,р = 0,0003). Это может свидетельствовать об интенсивной экспансии на периферии С04+С045ЯА+ наивных Т-клеток без потери экспрессии СОЗ1.
Изучение показателей функциональной активности тимуса в возрастных группах моложе и старше 36,5 года (значение медианы) показало, что в группе более молодых больных количество молекул ТКЕС на 106 С04+ Т-клеток было выше, чем в группе больных старшего возраста (2800 ± 900 против 500 ± 200 ТКЕС/Ю6 С04+-клеток; рх = 0,036). В то же время количество СОЗ 1+наивных Т-клеток было более высоким в группе старше 36,5 года (90 ± 20 против 50 ± 10 С04+С045ЯА С031+-клеток/мкл; р = 0,021).
Кроме того, относительное содер-жание С04+С045ЯА+С031+-клеток и количество ТКЕС в С04+-клетках различались в зависимости от нозологической формы заболевания. Оба показателя в группе больных НХЛ были выше, чем у больных ЛХ (рис. 2). В группе больных ММ количество ТКЕС-содержащих клеток было значимо ниже, чем у больных НХЛ (1,05 ± 0,5 против 0,07 ± 0,03/мкл; рх= 0,009), тогда как содержание СОЗ 1+ наивных С04 Т-клеток не различалось (95 ± 20 против 77 ± 10/мкл; р = 0,79) (см. рис. 2). Таким образом, различия показателей функции тимуса в группе больных ММ повторяли таковые в группе больных старшего возраста. При этом медиана
rf id CD45RA- FITC
Таблица 3
Относительное содержание (])4(])45к\ (1)31 Г-клсгок и молекул ГК1Х у больных лимфоиролиферативными заболеваниями
перед ауто-ТГСК и здоровых доноров; I/ ± .V/:" (шт-шах)
Показатель Доноры Больные Ри
CD4+CD45RA+CD31+, % 28,9 ±2,3 (18^14) 16,7 ± 1,7 (3^18) 0,00016
TREC/106 С04+-клеток 11576,9 ± 1667 (1100-32200) 1570,6 ± 531 (100-8000) 0,00014
возраста у больных ММ составила 47 лет, что было значимо выше, чем при HXJ1 (32 года; pt = 0,0002) и ЛХ (30 лет;ри= 0,00001).
Более низкие показатели функции тимуса при ЛХ, чем при НХЛ, могли быть связаны с большей предлеченностью больных ЛХ. Продолжительность болезни (от даты постановки диагноза до взятия крови на анализ исследуемых субпопуляций) и соответственно предлеченность (общее количество проведенных курсов ХТ) были выше в группе больных ЛХ (табл. 4).
Относительное и абсолютное количество TREC CD4 -клеток обратно коррелировало с количеством курсов ХТ 1-й линии (но не 2-й и количеством курсов ХТ в целом): rg = -0,58;р = 0,014 и rg = -0,54; р = 0,025 (п = 17) соответственно.
В то же время мы не выявили сопряженности между содержанием СD4 СD45 RA СD3 1 -клеток и количеством TREC в С04+-клетках со статусом заболевания (//-критерий Краскела-Уоллиса; р = 0,39 и р = 0,86 соответственно). Наличие поражения лимфатических узлов средостения опухолевым процессом также значимо не сказывалось на содержании CD4 CD45RA CD3 1 -клеток и количестве TREC в С04+-клетках (ри = 0,94 и р = 0,44 соответственно).
Телегамма-терапия (ТГТ) на область средостения была проведена у 7 больных. Ввиду небольшой численности группы и длительного периода от окончания лучевой терапии (медиана 20,9 мес) исследуемые показатели также не отличались от значений больных, не получавших ТГТ. У 2 больных, которым лучевая терапия была проведена за 4,3 и 9,4 мес до настоящего анализа, отмечалось более низкое относительное и абсолютное содержание CD4+CD45RA+CD31+ Т-клеток по сравнению с показателями больных в целом: 7 ± 1 против 17,2 ± 1,7% (ри= ОД 9) и 1,7 ±0,6 против 76 ± 10/мкл ipv= 0,067).
Анализ исходов ауто-ТГСК в группе 39 больных показал, что неблагоприятные исходы (рецидив или прогрессия заболевания) за период наблюдения (медиана 12,6 мес, максимум 25,3 мес) отмечались у 6 (15%) больных. Среди них рецидивы в 1-й год наблюдались у 4 больных. Сравнение количества CD31+ наивных С04+-лимфоцитов и С04+ТЯЕС+-клеток перед ауто-ТГСК у больных с оппозитными исходами не выявило значимых раз-
личий в относительном (табл. 5) и абсолютном их содержании.
Обсуждение
Основное внимание в настоящем исследовании было сконцентрировано на оценке функционального состояния тимуса у больных лимфопролифера-тивными заболеваниями перед ауто-ТГСК и анализе влияния на тимопоэз различных клинических факторов, таких как возраст, диагноз, статус и продолжительность заболевания, предлеченность, время от окончания последней ХТ и ТГТ.
Ко времени проведения ауто-ТГСК - после нескольких курсов ХТ и, часто, лучевой терапии - у больных гемобластозами значительно угнетена активность тимуса, оцениваемая по количеству СБЗ1+ наивных С 04 лимфоцитов и ТИЕС-содержащих С04 -клеток. Снижение количества этих субпопуляций, отвечающих за разнообразие репертуара Т-клеточных рецепторов, способно отрицательно сказаться на противоинфекционном и противоопухолевом иммунном ответе.
Ранее было описано [18] возрастное уменьшение количества С04+ТКЕС+-лимфоцитов, в том числе и относительно СБЗ 1+Т-клеток, однако отмеченное в настоящем исследовании более высокое содержание последних в старшей возрастной группе больных не
CD4 CD45RA CD31
150-1
100-
5 50-
ри=0,086
CD3CD4TREC ри=0,009
Ри=0,044
НХЛ ЛХ
ММ
Рис. 2. Абсолютное содержание СВ4+СВ45КА+СБ31+Т-клеток и ТЯЕС+ СБ4+-клеток у больных лимфопролиферативными заболеваниями.
а - абсолютное содержание СВ4+СВ45КА+СВ31+Т-клеток в периферической крови больных НХЛ (и = 13), ЛХ (и = 13), ММ (и = 16); б - абсолютное содержание ТИЕС+ СВ4+-клеток в периферической
крови больных НХЛ (и = 5), ЛХ (и = 7), ММ (и = 5). Значимость различий: [/-критерий Манна-Уитни. Значения в виде М + Ж.
Клиническая характеристика больных по диагнозам (М± Л'/:)
Таблица 4
Показатель НХЛ (и = 13) ЛХ (и = 13) ММ (и = 16) •^нхл-лх •^мм-лх
Продолжительность болезни, мес 15,6 ±2,5 34,4 ± 7,0 16,3 ± 1,8 0,015 0,020
Количество курсов ХТ 8,6 ± 0,9 10,7 ±0,8 7,1 ± 0,6 0,058 0,0017
Время от последнего курса ХТ, мес 1,5 ± 0,2 1,3 ± 0,2 2,1 ± 0,3 0,76 0,11
Примечание. Показатели в группах НХЛ и ММ статистически значимо не различались.
Таблица 5
Относительное содержание (1)4(1)45 к\(])31 Т-к. югок и молекул ГКК( у больных лимфопролиферативными заболеваниями
в зависимости от исходов ауто-ТГСК в течение 1-го года (М±8Е)
Показатель
Ремиссия
Рецидив
С04+С045КА+С031+, % TR.EC/106 С04+- клеток
17,1 ± 1,9 (и = 35) 1666,7 ± 595 (п= 15)
13,3 ±3,4 (и = 4) 850,0 ±750 (и = 2)
0,78 0,65
согласуется с данными предшествующих публикаций. Отчасти это может объясняться экспансией на периферии С 04 С 045 Я А Т-клеток без потери экспрессии С 03 1. что возможно в отсутствие стимуляции через Т-клеточный рецептор. Ранее М. Река^Ы и соавт. [19] описали субпопуляцию С03 1 наивных Т-хелперов, которые экспрессировали С О 25. лучше отвечали на стимуляцию интерлейкином-2 и проходили больше циклов пролиферации без изменений фенотипа. При этом известно, что экспрессия С025 на лимфоцитах повышается с возрастом и особенно при онкологических заболеваниях (обычно это связывали с увеличением регуляторных Т-клеток) [20]. В нашем исследовании абсолютное количество С04С025 -лимфоцитов также коррелировало с содержанием СВ4+СВ45КА+СБ31+-клеток (г5 = 0,46; р = 0,014).
Нами также описано выраженное увеличение субпопуляции С04 X 04511А С 031+-лимфоцитов у больных по сравнению со здоровыми донорами. В норме содержание этих клеток невелико и составляет, по результатам наших исследований и данным литературы [5, 21], 5-10%. Можно предположить, что при переходе наивных Т-клеток в Т-клетки памяти в процессе гомеостатической пролиферации последние могут сохранять экспрессию С03 1.
Более низкое содержание СБ4+СВ45КА+СБЗ1+ Т-клеток у больных ЛХ, чем у больных НХЛ и ММ (см. рис. 2), могло быть обусловлено продолжительностью болезни и соответственно более длительным химиотерапевтическим воздействием. Это также подтверждалось наличием обратной корреляционной связи между содержащими ТЯЕС С04 -лимфоцитами и количеством курсов ХТ 1-й линии. При этом отсутствие значимых различий по исследуемым параметрам между основной группой и больными, получавшими в прошлом лучевую терапию на область средостения, свидетельствует о регенераторном потенциале тимуса, что согласуется с ранее опубликованными данными [22, 23].
В ряде публикаций [14, 24] описана взаимосвязь между функциональной активностью тимуса в посттрансплантационном периоде и исходами ауто-ТГСК. Мы не выявили влияния состояния тимуса перед ауто-ТГСК на исходы трансплантации. Восстановление тимопоэза после высокодозной ХТ и ауто-ТГСК не связано с состоянием тимуса перед кондиционированием. Это представляется закономерным, учитывая интенсивное повреждающее действие миелоаблативных режимов, в значительной мере нивелирующее предсуществу-ющие различия в регенераторном потенциале тимуса.
Полученные данные позволяют сделать несколько заключений:
• Больные гемобластозами на этапе подготовки к ауто-ТГСК характеризуются сниженным количеством СБ4+СВ45КА+СБЗ 1+-клеток и молекул ТЯЕС в С04 -лимфоцитах, что свидетельствует о нарушениях функциональной активности тимуса.
• В условиях лимфопении, индуцирующей запуск периферической экспансии лимфоцитов, необходимо с осторожностью подходить к интерпретации результатов определения «недавних мигрантов из тимуса» по экспрессии СБ31 на наивных СБ4+ Т-клетках. Возрастание данной субпопуляции может служить маркером индуцированной цитопенией пролиферации наивных Т-клеток и не сопровождается увеличением количества молекул TR.EC в популяции СБ4+Т-клеток.
• Содержание ТЯЕС в С 04 Т-клетках (но не количества С 04 С 045 Я А С 031+-клеток) обратно коррелирует с количеством курсов ХТ 1-й линии и возрастом больных. Не выявлено взаимосвязи исследуемых показателей со статусом заболевания, поражением лимфатических узлов средостения, проводимой ТГТ и развитием рецидива в течение 1-го года после трансплантации.
ЛИТЕРАТУРА [REFERENCES]
1. Freitas А.А., Rocha В. Population biology of lymphocytes: the flight for survival. Annu. Rev. Immunol. 2000; 18: 83-111.
2. Goldrath A.W., BevanM.J. Selecting and maintaining a diverse T-cell repertoire. Nature. 1999; 402 (6759): 255-62.
3. Douek D.C., McFarland R.D., Keiser PH., Gage E.A., Massey J.M., Haynes B.F., et al. Changes in thymic function with age and during the treatment of HIV infection. Nature. 1998; 396 (6712): 690-5.
4. Livak F., Schatz D.G. T-cell receptor a locus V(D)J recombination by-products are abundant in thymocytes and mature T cells. Mol. Cell. Biol. 1996; 16 (2): 609-18.
5. Junge S., Kloeckener-Gruissem В., Zufferey R., Keisker A., Salgo В., Fauchere J.C., et al. Correlation between recent thymic emigrants and CD31+ (PECAM-1) CD4+ T cells in normal individuals during aging and in lymphopenic children. Eur. J. Immunol. 2007; 37(11): 3270-80.
6. Kohler S., Thiel A. Life after the thymus: CD31+ and CD31- human naive CD4+ T-cell subsets. Blood. 2009; 113(4): 769-74.
7. Шевела Е.Я., Сизикова C.A., Тихонова M.A., Останин А.А., Крючкова И.В., Кулагин А.Д. и др. Характеристика нарушений функциональной активности Т-клеток у больных лим-фомами при проведении программной полихимиотерапии. Гематология и трансфузиология. 2004; 1: 15-9.
[Shevela E.Ya., Sizikova S.A., Tikhonova M.A., Ostan-in A.A., Kryuchkova I.V., Kulagin A.D., et al. Characteristics of functional T-cell impairment in lymphoma patients during chemotherapy. Gematologiay i transfusiologiya. 2004; 1:15-9]. (in Russian)
8. Mackall C. T-cell immunodeficiency following cytotoxic antineoplastic therapy: a review. Oncologist. 2000; 18(1): 370-8.
9. Borg C., Ray-Coquard I., Philip I., Clapisson G., Bendriss-Vermare N., Menetrier-Caux C., et al. CD4 lymphopenia as a risk factor for febrile neutropenia and early death after cytotoxic chemotherapy in adult patients with cancer. Cancer. 2004; 101(11): 2675-80.
10. Steinmann G.G. Changes in the human thymus during aging. Curr. Top. Pathol. 1986; 75: 43-88.
11. Brink I., Reinhardt M.J., Hoegerle S., Altehoefer C., Moser E., Nitzsche E.U. Increased metabolic activity in the thymus gland studied with 18F-FDG PET: age dependency and frequency after chemotherapy. J. Nucl. Med. 2001; 42(4): 591-5.
12. Zhen Z., Sun X., Xia Y., Ling J., Cai Y., Wang J., et al. Clinical analysis of thymic regrowth following chemotherapy in children and adolescents with malignant lymphoma. Jpn. J. Clin. Oncol. 2010; 40(12): 1128-34.
13. Petridou E., Klimentopoulou A.E., Moustaki M., Kostrikis L.G., Hatzakis A., Trichopoulos D. Recent thymic emigrants and prognosis in T- and B-cell childhood hematopoietic malignancies. Int. J. Cancer. 2002; 101(1): 74-7.
14. Clave E., Lisini D., Douay C., Giorgiani G., Busson M., Zec-ca M., et al. Thymic function recovery after unrelated donor cord blood or T-cell depleted HLA-haploidentical stem cell transplantation correlates with leukemia relapse. Front. Immunol. 2013; 4: 54. http://journal.frontiersin.org/Journal/10.3389/fimmu. 2013.00054/full
15. Komanduri K.V., St. John L.S., de Lima M., McMannis J., Ros-inski S., McNiece I., et al. Delayed immune reconstitution after cord blood transplantation is characterized thymopoiesis and late memory T-cell skewing. Blood. 2007; 110(13): 4543-51.
16. Halnon N.J., Jamieson В., Plunkett M., Kitchen C.M., Pham T., Krogstad P. Thymic function and impaired maintenance of peripheral T cell populations in children with congenital heart disease and surgical thymectomy. Pediatr. Res. 2005; 57(1): 42-8.
17. Pratesi C., Simonelli C., Zanussi S., Talamini R., Bortolin M.T., Tedeschi R., et al. Recent thymic emigrants in lymphoma patients with and without human immunodeficiency virus infection candidates for autologous peripheral stem cell transplantation. Clin. Exp. Immunol. 2008; 151(1): 101-9.
18. Kohler S., Wagner U., Pierer M., Kimmig S., Oppmann В., Mô-wes В., et al. Post-thymic in vivo proliferation of naive CD4+ T cells constrains the TCR repertoire in healthy human adults. Eur. J. Immunol. 2005; 35(6): 1987-94.
19. Pekalski M.L., FerreiraR.C., CoulsonR.M., Cutler A. J., Guo H., Smyth D.J., et al. Postthymic expansion in human CD4 naive T cells defined by expression of functional high-alfinity IL-2 receptors. J. Immunol. 2013; 190(6): 2554-66.
20. Mougiakakos D., Choudhury A., Lladser A., Kiessling R., Johansson C.C. Regulatory T cells in cancer. Adv. Cancer Res. 2010; 107: 57-117.
21. Ruiz-Hernandez R., Jou A., Cabrera C., Noukwe F., de Haro J., Borras F., et al. Distribution of CD31 on CD4 T-Cells from cord blood, peripheral blood and tonsil at different stages of differentiation. Open Immunol. J. 2010; 3(1): 19-26.
22. Randle-Barrett E.S., Boyd R.L. Thymic microenvironment and lymphoid responses to sublethal irradiation. Dev. Immunol. 1995; 4(2): 101-16.
23. Malphettes M., Carcelain G., Saint-Mezard P., Leblond V., Altes H.K., Marolleau J.P, et al. Evidence for naive T-cell repopulation despite thymus irradiation after autologous transplantation in adults with multiple myeloma: role of ex vivo CD34+ selection and age. Blood. 2003; 101(5): 1891-7.
24. Brown J.A., Stevenson K., Kim H.T., Cutler C., Ballen K., McDonough S., et al. Clearance of CMV viremia and survival after double umbilical cord blood transplantation in adults depends on reconstitution of thymopoiesis. Blood. 2010; 115(20): 4111-9.
Поступила 03.04.14 Received 03.04.14
