CC BY
33
УДК 615.254.3-322
А.Г. мондодоев1, л.н. Шантанова1, с.м. николаев1, с.в. лемза1, и.с. Бутуханова2
влияние «фитоуросепта» на функциональное состояние почек у белых крыс при постишемической нефропатии
1 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ) 2 Бурятский государственный университет (Улан-Удэ)
В статье приведены данные по влиянию «фитоуросепта» на функциональное состояние почек белых крыс при постишемической нефропатии. Установлено, что курсовое введение исследуемого средства лабораторным, животным, в экспериментально-терапевтической дозе оказывает, нефропротекторное действие.
Ключевые слова: ишемия, нефропатия, «фитоуросепт»
effect of «pHYTOuroSEpT» on THE FuNcTioNAL STATuS oF wHiTE RAT KiDNEYS iN poSTiSOHEMiO NEpHRopATHY
A.G. Mondodoyev1, L.N. Shantanova1, S.M. Nikolayev1, S.V. Lemza1, I.S. Butukhanova2
11nstitute of General and Experimental Biology SB RAS (Ulan-Ude)
2 Buryat State University (Ulan-Ude)
The influence of «phytourosept» on kidney function in postischemic nephropathy was studied. It has been shown that the course administration of the extract in question at an experimental-therapeutic dose produces a nephroprotective effect.
Key words: ischemia, nephropathy, «phytourosept»
Нарушения гемодинамики, приводящие к ишемии и гипоксии почечной ткани, наблюдаются практически при всех заболеваниях нефрологиче-ского профиля, а также при многих патологических состояниях организма (системные заболевания, сахарный диабет, шоковые состояния различной этиологии и т.д.). Ишемическое повреждение почек сопровождается снижением их функциональной состоятельности и в ряде случаев приводит к развитию острой почечной недостаточности. При этом, несмотря на использование современных методов лечения, включая гемодиализ и трансплантацию почки, смертность при данной патологии остается высокой [5].
Целью настоящей работы было оценить влияние «фитоуросепта», представляющего собой смесь сухих экстрактов из сырья лекарственных растений; побегов толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva- ursi L.), листа брусники обыкновенной (Vac-cinium vitis-idaea L.), травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.), цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.), листа крапивы двудомной (Urtica dioica L.) на функциональное состояние почек при постишемической нефропатии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 200 — 230 г в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Животные
получены из питомника г. Ангарска. Крысы были распределены на 4 группы: интактные, ложноо-перированные, контрольные (ишемия), опытные (ишемия + фитоуросепт). Двустороннюю ишемию почек воспроизводили путем выделения почек из жировой капсулы и окклюзии сосудистых пучков обеих почек на 60 минут [7]. Операцию производили под барбамиловым наркозом (в дозе 80 мг/кг внутрибрюшинно). По истечении 60 минут зажимы с почечных ножек снимали и рану ушивали послойно наглухо в асептических условиях. В качестве дополнительного контроля служили ложнооперированные животные. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор «фитоуросепта» в дозе 50 мг/кг в течение 3-х дней до операции и затем на протяжении всего эксперимента (в течение 7 дней 1 раз в сутки утром до кормления). Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество очищенной воды по аналогичной схеме. Через 1, 3, и 7 сутки после операции проводили исследование функционального состояния почек. Для этого определяли: диурез с водной нагрузкой за 3 часа [1], содержание мочевины, креатинина в сыворотке крови унифицированными методами с помощью наборов реактивов Био-Ла-Тест «Лахема» (Чехия), скорость клубочковой фильтрации (СКФ) по клиренсу эндогенного креатинина [2]; интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ): содержание диеновых коньюгатов, концентрацию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови [4] и в гомогенате почек [6], активность каталазы сыворотки крови [3]. Полученные данные приведены в таблицах 1—3.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Как следует из данных, приведенных в таблице
1, при двусторонней ишемии почек у животных развивается синдром гиперазотемии, о чем свидетельствует выраженное повышение уровня креатинина в 2,3 раза в сыворотке крови, а также снижение экскреции креатинина с мочой в 3,2 раза. При этом показатели у ложнооперированных крыс статистически не отличались от таковых у интактных животных.
Превентивно-курсовое введение «фитоуросепта» крысам в экспериментально-терапевтической дозе на фоне постишемической нефропатии оказывало гипоазотемическое действие: концентрация креатинина в сыворотке крови животных опытной группы снижалась по сравнению с показателями у крыс контрольной группы на 16 % и 40 %, в моче
повышалось на 34 % и 63 % соответственно к 1 и 2 срокам исследования. Через 7 суток наблюдения у животных опытной группы содержание креати-нина в крови и моче нормализовалось до уровня физиологической нормы, тогда как у крыс контрольной группы концентрация креатинина в моче оставалась ниже физиологического уровня.
Наряду с этим, курсовое введение животным «фитоуросепта» способствовало повышению водовыделительной функции почек, диурез у животных опытной группы на 1 и 3 сутки эксперимента был в среднем на 80 — 90 % выше такового у крыс контрольной группы (табл. 2).
Установлено также, что угнетение экскреторной функции почек белых крыс на фоне постишемической нефропатии сопровождается резким снижением скорости клубочковой фильтрации
Таблица 1
Влияние «фитоуросепта» на депурационную функцию почек белых крыс при постишемической нефропатии
Группы животных Креатинин в крови, мкмоль/л Креатинин в моче, ммоль/л
1 сутки
Интактная 97,3 ± 7,08 11,3 ± 1,11
Ложнооперированная 95,6 ± 2,45 9,9 ± 0,71
Контрольная (ишемия) 230,9 ± 8,36 3,5 ± 0,40
Опытная (ишемия + фитоуросепт) 194,1 ± 8,36* 4,7 ± 0,18*
3 сутки
Интактная 97,3 ± 7,08 11,3 ± 1,11
Ложнооперированная 95,6 ± 2,45 9,9 ± 0,71
Контрольная (ишемия) 189,2 ± 18,30 4,1 ± 0,60
Опытная (ишемия + фитоуросепт) 114,1 ± 9,73* 6,7 ± 0,50*
7 сутки
Интактная 97,3 ± 7,08 11,3 ± 1,11
Ложнооперированная 95,6 ± 2,45 9,9 ± 0,71
Контрольная (ишемия) 109,8 ±15,71 8,6 ± 0,33
Опытная (ишемия + фитоуросепт) 101,7 ± 14,28 10,1 ± 0,85
Примечание: здесь и далее * - различия достоверны между контрольной и опытной группами при p < 0,05.
Таблица 2
Влияние «фитоуросепта» на водовыделительную функцию почек и скорость клубочковой фильтрации у белых
крыс при постишемической нефропатии
Показатели Группы животных
Интактная Контрольная (ишемия) Опытная (ишемия + фитоуросепт)
1 сутки
Диурез мл/100 г/ч 0,37 ± 0,037 0,15 ± 0,027 0,23 ± 0,02*
СКФ, мкп/100г/ч 713,9 ± 98,32 38,12 ± 6,64 93,87 ± 17,80*
3 сутки
Диурез мл/100 г/ч 0,39 ± 0,03 0,26 ± 0,007 0,33 ± 0,023*
СКФ, мкп/100г/ч 713,9 ± 98,32 93,30 ± 12,36 324,55 ± 43,25*
7 сутки
Диурез мл/100 г/ч 0,43 ± 0,03 0,35 ± 0,01 0,40 ± 0,037
СКФ, мкп/100г/ч 823,84 ± 78,05 528,64 ± 64,30 729,12 ± 67,45*
(СКФ). Превентивно-курсовое введение испытуемого средства в дозе 50 мг/кг способствовало сохранению СКФ на 1 и 3 сутки эксперимента на более высоком уровне, чем в контроле и нормализации этого показателя к 3 сроку исследования, тогда как у животных контрольной группы СКФ оставалась на 36 % ниже, чем у интактных животных.
Как следует из данных, приведенных в таблице 3, двусторонняя ишемия почек животных сопровождается индукцией процессов свободнорадикального окисления, о чем свидетельствовало существенное повышение уровня продуктов пероксидации липидов: диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА), а также снижение активности одного из ключевых ферментов антиокислительной системы — каталазы. При этом установлено, что операционное вмешательство способствовало активации перекисного окисления липидов: содержание МДА в сыворотке крови ложнооперированных крыс было на 24 % выше, чем у интактных. У животных контрольной группы этот показатель превышал таковой в группе ложнооперированных на 50 %. Установлено, что превентивно-курсовое введение «фитоуросепта» на фоне постишемической почечной недостаточности оказывало выраженное антиоксидантное действие, снижая концентрацию продуктов пе-роксидации липидов как в сыворотке крови, так и в гомогенате почек животных опытной группы. Так, на 1 сутки эксперимента концентрация ДК и МДА в крови, а также МДА в гомогенате почек крыс, получавших испытуемый фитоэкстракт, была соответственно на 31; 28 и 33 % меньше по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной
группы. На 3 сутки опыта концентрация ДК и МДА в сыворотке у животных опытной группы были соответственно на 48, 15 % ниже по отношению к контролю. Уровень МДА в гомогенате почек во всех группах на 3 и 7 сутки наблюдения приближался к физиологическому.
К 7 суткам эксперимента у животных опытной группы наблюдалось снижение всех исследованных показателей ПОЛ до уровня физиологической нормы, тогда как у крыс контрольной группы МДА и ДК в сыворотке крови к указанному сроку оставались достоверно повышенными по сравнению с данными у интактных крыс. Наряду с этим, у животных опытной группы отмечалось повышение активности антиоксидантной системы организма, на что указывает увеличение каталазной активности сыворотки крови в среднем на 40 % по сравнению с показателями крыс контрольной группы на 1 сутки исследования и нормализация этого показателя на
3 сутки опыта.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, курсовое введение белым крысам «фитоуросепта» в экспериментальнотерапевтической дозе при ишемических повреждениях почек оказывает выраженное фар-макотерапевтическое влияние, снижая тяжесть проявлений патологического процесса и повышая функциональную активность почек животных. Так на фоне введения испытуемого средства у животных опытной группы повышался диурез, скорость клубочковой фильтрации, уменьшался уровень азотемии, а также под влиянием фитосредства снижалась интенсивность процессов ПОЛ и со-
Таблица 3
Влияние «фитоуросепта» на содержание продуктов ПОЛ и активность каталазы при постишемической
нефропатии
Показатели Группы животных
Интактная Л/оперир. Контрольная (ишемия) Опытная (ишемия + фитоуросепт)
1 сутки
ДК, ед. ОП 1,4 ± 0,05 2,5 ± 0,38 4,5 ± 0,38 3,1 ± 0,12*
МДА в сыворотке, мкмоль/мл 2,1 ± 0,17 2,6 ± 0,05 3,9 ± 0,16 2,8 ± 0,07*
МДА в почках, нмоль/г 10,7 ± 1,31 11,1 ± 1,03 18,5 ± 0,90 14,3 ± 1,01*
Каталаза, мкат/л 0,41 ± 0,03 0,36 ± 0,03 0,21 ± 0,01 0,33 ± 0,02*
3 сутки
ДК, ед. ОП 1,3 ± 0,06 2,1 ± 0,18 4,6 ± 0,56 2,4 ± 0,09*
МДА в сыворотке мкмоль/мл 2,1 ± 0,17 2,6 ± 0,05 4,0 ± 0,05 3,4 ± 0,32*
МДА в почках, нмоль/г ткани 10,7 ± 1,31 11,2 ± 1,24 12,3 ± 1,10 11,1 ± 0,73
Каталаза, мкат/л 0,41 ± 0,03 0,44 ± 0,03 0,24 ± 0,01 0,38 ± 0,03*
7 сутки
ДК, ед. ОП 1,3 ± 0,06 1,5 ± 0,09 2,6 ± 0,18 1,6 ± 0,09*
МДА в сыворотке, мкмоль/мл 2,1 ± 0,17 2,6 ± 0,05 3,7 ± 0,32 2,4 ± 0,08*
МДА в почках, нмоль/г ткани 10,7 ± 1,31 11,2 ± 0,94 12,5 ± 1,12 10,8 ± 0,61
Каталаза, мкат/л 0,41 ± 0,03 0,36 ± 0,03 0,32 ± 0,03 0,40 ± 0,02*
хранялась активность ферментов антиоксидантной защиты организма. Полученные данные аргументируют целесообразность клинического испытания «фитоуросепта».
литература
1. Берхин Е.Б. Методы экспериментального исследования почек и водно-солевого обмена I Е.Б. Берхин, Ю.И. Иванов. — Барнаул, 1972. — 56 с.
2. Вандер A. Физиология почек I A. Вандер. — СПб., 2000. - 256 с.
3. Методы определения активности ката-лазы I МА Королюк [и др.] II Лабораторное дело. -1988. - № 1. - С. 16-19.
4. Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой
кислоты / И.Д. Стальная, Т.Д. Гаришвили // Современные методы в биохимии. — М., 1977. — С.66 — 68.
5. Тареева И.Е. Нефрология / И.Е. Тареева (ред.) - М., 2000. - 688 с.
6. Темирбулатов Р.А. Метод определения повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение / Р.А. Темирбулатов, Е.И. Селезнев // Лабораторное дело. -1981. - № 4. - С. 209-211.
7. Функционально-биохимические изменения и их фармакологическая коррекция пирроксаном при ишемии почек / В.И. Шепотиновский [и др.] // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1989. - № 4. - С. 24-27.
Сведения об авторах:
МондодоевА.Г. - к.м.н., ст.н.с. лаборатории экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН. Р тел. 8 (3012) 433713 E-mail: [email protected]
ШантановаЛ.Н. - д.б.н., зав. лаб. безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН Николаев С.М. - д.м.н., зав. лаб. экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН Лемза С.В. - к.б.н., ст.н.с. лаборатории экспериментальной фармакологии Бутуханова И.С. - к.м.н., ст. преподаватель кафедры терапии №1 мед. фак. БГУ
