CC BY
24
DOI 10.24411/2311-6447-2020-10065
Влияние ферментной обработки бузины, произрастающей в Республике Беларусь на антиоксидантную активность сока
The effect of enzymatic treatment of elderberry growing in the Republic of Belarus on the antioxidant activity of juice
Директор Л.Ч. Бурак, (Общество с ограниченной ответственностью «БЕАРОСАКВА») E-mail: [email protected]
А.П. Зав алей
(Совместное общество с ограниченной ответственностью «Ароматик») E-mail: [email protected]
Director L.Ch. Burak, (BELROSAKVA Limited Liability Company) E-mail: [email protected]
A.P. Zavaley (JLLC «Aromatic») E-mail: [email protected]
Реферат. Изучено влияние иектолитических ферментов (Pectinex BE XXL и Fructozym P) на изменение содержания фенолов, антоцианов и антиоксидантную активность бузины (Sambucus nigra L.) во время переработки ее на сок. До прессования плодов бузины после дробления в мезгу вносили два различных фермента пектолитического действия с целью оценки их влияния в концентрациях на биологически активные вещества сока бузины. Контрольный образец приготовили без внесения фермента. После обработки ферментными препаратами, прессования и осветления проводили микрофильтрацию через керамическую мембрану. Влияние этой технологии на антиоксидантную активность, общее содержание полифенолов и общее содержание антоцианов в очищенных соках бузины было оценено в образцах фильтрата сока и ретентата (концентрата), рассчитаны потери на мембране. В контрольном образце была установлена значительно более низкая антиоксидантная способность, чем при использовании соков, обработанных ферментами. Снижение антиоксидантов в соке после прохождения через мембрану было значительно меньше в образцах, обработанных ферментными препаратами. Более высокое содержание полифенолов и антоцианов в соке бузины установлено в образе, в который вносили фермент Fructozym Р по сравнению с образцом, обработанным ферментом Pectinex BE XXL.
Summary. The effect of pectolytic enzymes (Pectinex BE XXL and Fructozym P) on changes in the content of phenols, anthocyanins and the antioxidant activity of elderberry (Sambucus nigra L.) during its processing into juice was studied. Before pressing the elderberry fruit, after crushing, two different pectolytic enzymes were added to the pulp in order to assess their effect in different concentrations on the biologically active substances of elderberry juice. The control sample was prepared without adding the enzyme. After treatment with enzyme preparations, pressing and clarification, microfiltration was carried out through a ceramic membrane. The influence of this technology on antioxidant activity, total polyphenols and total anthocyanins in purified elderberry juices was evaluated in the juice filtrate and retentate (concentrate) samples, and membrane losses were calculated. In the control sample, a significantly lower antioxidant capacity was found than when using juices treated with the enzyme. The decrease in antioxidants in the juice after passing through the membrane was significantly less in the samples treated with enzyme preparations. A higher content of polyphenols and anthocyanins in elderberry juice was found in the sample in which the Fructozym P enzyme was added compared to the sample treated with the Pectinex BE XXL enzyme.
УДК 664
© Л.Ч. Бурак, А.П. Завалей, 2020
Ключевые слова: бузина, фенолы, антоцианы антиоксидантная активность, ферментная обработка, микрофильтрация.
Keywords: elderberry, phenols, anthocyanins, antioxidant activity, enzymatic treatment, microfiltration.
В последние годы отмечен стабильный спрос на дикорастущую продукцию на европейском рынке, активно растет спрос на ягодную и плодовую продукцию во многих отраслях [1]. Для разработки новых пищевых продуктов, в том числе соко-содержагцей продукции, по рекомендации таких ученых, как Т. Андрушкевич, Л. Исаченко, Е. Тюрина, во внимание пищевой промышленности Беларуси была принята бузина черная, плоды которой можно перерабатывать в сок, содержащий биологически активные вещества, и использовать в качестве основы других различных продуктов и напитков [2].
Свежие плоды бузины редко употребляются в пищу в сыром виде; в большинстве случаев они обрабатываются для получения концентратов и соков. Отжатый сок плодов бузины содержит разнообразные сахара и органические кислоты, характеризуется высокими концентрациями антоцианов. Современные требования к сокосодержащей продукции, предназначенной для профилактического назначения, определяются качественным и количественным содержанием биологически активных веществ [3].
Плоды бузины являются богатым источником органических кислот (яблочной, уксусной т. д.), витаминов (А, С), микроэлементов, аминокислот, Сахаров, а также эфирных масел. Bern'ath (2000); St'egern'e (2010), Sidor и Gramza-Michalowska (2014) [7] установили, что бузина содержит несколько биодоступных антиоксидант-ных компонентов: в основном полифенолы, антоцианы, флавонолы, фенольные кислоты и антоцианидины [7].
Ранее нами был изучен полный химический состав плодов бузины, , а также изменение содержания биофлавоноидов, антоцианов в процессе хранения сырья. Содержание основного антоциана во всех плодах бузины данных сортов - циани-дин 3-самбубиозида - составляет больше половины от всех обнаруженных антоцианов. Суммарная концентрация кверцетинов была наименьшей в дикой 56,44 мг 100 г, а наибольшей в бузине садовой 73,4 мг /100 г [8].
Полученные результаты химического состава плодов бузины садовой, произрастающей в РБ, незначительно отличаются от данных, указанных в научной литературе [9,10], что подтверждает ценность плодов бузины как источника биологически активных веществ. Общее содержание сухих веществ составляет 20,46 %, общая кислотность - 1,29 %, суммарное содержание Сахаров - 7,64 %, восстанавливающих Сахаров - 7,06 % и величина рН - 4,19.
По мнению V. Kislichenko, V. Vel'ma, биологически активные вещества ягод бузины черной при переработке подвергаются различным преобразованиям. Особенно это касается антоцианов. По своей химической природе антоцианы ягод крайне неустойчивые соединения и подвергаются изменениям под действием кислорода воздуха, рН среды, температуры, тяжелых металлов [11].
Бузина употребляется только в переработанном виде. Поэтому производители продуктов питания стремятся сохранить биологически ценные вещества при переработке продуктов питания. Полуфабрикаты из ягод бузины производятся двумя способами: фруктовый концентрат и мякоть для приготовления из них обычных напитков, соков, сиропов, желе и джема. Во время обработки применяется технология фильтрации для осветления сока, но этот шаг может снизить стабильность ценных компонентов [12]. Одним из этапов технологического процесса производства соков является расщепление молекул пектина с помощью пектолитических ферментов ,с целью высвобождения полезных молекул. Таким образом, технология прессования становится проще и эффективнее благодаря ферментной обработке.
Пектин, гетерополисахарид, содержится в клеточных стенках всех высших растений. В пищевой промышленности основной целью использования пектолити-ческих ферментов является стабилизация качества и упрощение технологической обработки [13].
Цель исследования - изучение влияния пектолитических ферментов (Pectinex BE XXL, и Fructozym Р) на фенольную, антоциановую и антиоксидантную активность бузины (Sambucus nigra L.) при получении и обработке сока.
Были отобраны сорта бузины садовой (Sambucus nigra L.) РУП «Институт плодоводства», собранные в августе 2019 г. в сезон их созревания. Исследования проводили в лабораториях компании по переработке плодов и ягод. Все плоды были созревшими и произрастали в обычных условиях. Они были набраны с запасам для проведения всех необходимых экспериментов. Плоды бузины упаковывались в полиэтиленовые мешки и хранились в морозильнике при - 18 °С.
Замороженные плоды размораживали,, нагревая острым паром до 45-55 °С, измельчали (размер частиц мезги 3-6 мм) и после нагревали до 80 0 С с целью инактивации ферментов плодов, затем о хлаждали до 30 0 С. Сок бузины получали путем обработки ферментными препаратами, прессованием и микрофильтрацией (МФ). Влияние ферментов изучалось в ходе экспериментов. Перед прессованием мезгу обрабатывали двумя пектолитическими ферментами (Pectinex BE XXL, который используется в промышленности, и Fructozym Р). Кроме этого, контрольный образец готовили без какого-либо фермента. Ферменты добавляли к измельченным плодам и оставляли на 1 ч. Количество фермента вносили в соответствии с технологической инструкцией по их применению (табл.). После первой обработки мезгу сжимали путем ручного прессования с последующей второй ферментной обработкой с половиной количества ранее примененных ферментов в течение 30 мин, чтобы повысить эффективность операции прессования и облегчить процесс микрофильтр ации.
Таблица
Параметры ферментной обработки
1-я обработка 2-я обработка
Фермент Доза фермента, мл/кг Доза фермента, мл/кг
Pectinex BE XXL 0,20 0,10
Fructozym P 0,06 0,03
После обработки ферментами для достоверности и чистоты эксперимента проводили осветление сока, для чего вносили специальный кизельзоль Klar Sol Super (0,35 мг/л), образцы оставляли стоять в течение 20 мин, а затем добавляли желатин ErbiGel (0,1 мг/л) и оставляли стоять в течение 10 минут.
Последним этапом приготовления сока была фильтрация. Процесс мико-офильтрации проводили в лабораторном блоке (рис. 1).
Рис.1. Лабораторный блок МФ: 1-мембрана, 2- емкость, З^ротаметр, 4-насос, 5- клапан, б- запорный вентиль, 7- термометр, 8- монометр, 9- фильтрат, 10-подача охлаждающей воды, 11- выход охлаждающей воды 80
Фильтрацию обработанного ферментом сока проводили с помощью керамической трубчатой мембраны со средним размером пор 0,8 мкм и проницаемой площадью поверхноси 0,005 м 2. Внутри мембраны трубки был установлен статический смеситель для усиления потока фильтрата.
Обработанный ферментом сок рециркулировал насосом на поверхность мембраны, где система перекрестного потока обеспечивала уменьшенное количество слоя обрастания. Ретентат (точка 6) рециркулировал в загрузочный резервуар, а фильтрат (точка 9) собирали в химический стакан. В процессе микрофильтрации скорость потока была постоянной и составляла 140 л/ч, приложенное трансмембранное давление составляло 3,5 бар, а температура - 30 °С.
Антиоксидантные свойства были определены методом фотосенсибилизирую-щей хемилюминесценции на приборе Photochem (Аналитик Иена, Германия), который предназначен для количественного определения антиоксидантов в водорастворимых и липидорастворимых веществах. В качестве стандарта для расчета содержания водорастворимых антиоксидантов была использована аскорбиновая кислота.
Суммарное содержание фенолов, флавоноидов и нефлавоноидных соединений было определено с помощью колориметрического метода Фолина-Чикальтэу (поглощение, измеряемое при 765 нм). Фенольные соединения плодов бузины были извлечены из образцов с использованием 40 мл 80 % водного раствора этанола. Смесь экстрагировали в течение 20 мин в инертной атмосфере и отфильтровывали через бумажный фильтр с использованием воронки Бюхнера. Экстракция остаточного количества была повторена при тех же условиях. Фильтраты были смешаны и разбавлены 80 %-ным водным раствором этанола до объема 100 мл в мерной колбе. Полученные экстракты использовались для определения суммарного содержания фенолов, флавоноидов и нефлавоноидных соединений. Осаждение формальдегидом применялось для определения флавоноидов в образцах плодов. Суммарное содержание фенолов и флавоноидов было измерено следующим образом: 0,5 мл разбавленного экстракта или эталонный раствор галловой кислоты (20500 мг/л) были добавлены в мерную колбу с объемом 50 мл, содержащую 30 мл дистиллированной воды; затем к смеси был добавлен реагент Фолина-Чикальтэу объемом 2,5 мл и после этого колба со смесью подверглась встряхиванию. Через 5 мин, 7,5 мл 7 %-го раствора Na 2 СО 3 было добавлено к смеси, и сразу после этого смесь была разбавлена водой до объема 50 мл. По истечении 2 часового хранения при комнатной температуре была измерена оптическая плотность раствора при 765 нм. Результаты были выражены как соотношение мг-экв галловой кислоты на литр.
Содержание антоцианов определяли фотоколориметрическим методом в пересчете на цианидин-3-галактозид с помощью метода рН-дифференциальной спек-трофотометрии, основанного на измерении поглощения света при длине волны 510 и 700 нм, при изменении кислотности растворов от 1,0 до рН 4,4. Результаты выражали в (мг/л). Значение антиоксидантной активности, общего содержания полифенолов (ОСП) и общего содержания антоцианинов (ОСА) рассчитывали для одного и того же содержания сухого вещества. Массовую долю растворимых сухих веществ находили рефрактометрическим методом по ГОСТ Р 51433-2007. Все измерения проводились дважды. Линейная регрессия и вычисления стандартной погрешности были выполнены с помощью Microsoft Office Excel.
Статистический анализ был проведен с помощью Microsoft Excel 2013. ANOVA и t-критерий Стьюдента использовались для определения различий между рези-стентностями двух обработанных ферментами образцов во время микрофильтрации, а также для определения того, вызывали ли ферменты значительные изменения в содержании антиоксидантов. Значение Р <0,05 считалось значимым.
Во время процесса микрофильтрации суспендированные твердые частицы были удалены из сока бузины. МФ свежевыжатого сока бузины осуществляли до получения 200 мл фильтрата. Время и содержание сухих веществ измеряли в каждых 10 мл фильтрата. Собрав 200 мл фильтрата, фильтрацию прекращали и фильтрат переливали из резервуара. Ретентат, фильтрат и образцы перед фильтрацией хранили в холодильнике при -18 ° С до проведения аналитических измерений. Поток фильтрата образцов, обработанных различными ферментными препаратами, рассчитывали по следующему уравнению (рис. 2):
V
л = А-t
Л - поток [л / м 2 ч], V - объем [л], А - поверхность мембраны [м 2], t - время [ч].
Во всех случаях наблюдалось типичное поведение кривой процесса микрофильтрации. После резкого начального потока он уменьшился из-за поляризации мембраны, затем происходила стабилизация потока. Согласно данным ферменты влияли на процесс очистки, а также на скорость потока фильтрата и время фильтрации.
а- 50 "п 40 I 30
о
о. 20
о
* 10 о
ё о
с
■
■
» ■ ■
'а
• ■ • • • • ■ • ■ • •
♦ - Без фермента
• - Fructozym Р
■ - Pectinex BE XXL
0 1 2 3 4 5 6 Время, ч
Рис.2. Влияние обработки ферментом на скорость потока фильтрата во время фильтрации
Сравнивая значения исходного потока, наилучший результат (42,2 л/м 2, ч) был получен при использовании фермента Pectinex BE XXL, тогда как самый низкий результат составил 29,3 л/м 2, ч, полученного фильтрации контрольного образца, который не обрабатывался ферментами.
Значение потока фильтрации образца с ферментом Pectinex BE XXL было около 10 л/м 2, ч, в то время как значение потока фильтрации образца без ферментов составляло 11 л/м 2, ч, а постоянный поток сока, обработанного ферментом Fructozym Р, был самый низкий, около 6 л/м 2,ч следовательно, использование этого ферментного препарата нецелесообразно по причине неэкономичности по сравнению с другой предварительной ферментной обработкой.
После проведения микрофильтрации антиоксидантные свойства сока бузины измеряли спектрофотометрическим методом. Были оценены различия между анти-оксидантной способностью, содержанием полифенолов и антоцианов в предварительно отфильтрованных образцах свежевыжатого сока, фильтрате и ретентате, чтобы оценить влияние обработки пектолитическими ферментами и микрофильтрации. На рис. 3 показана антиоксидантная активность образцов. Значения АОА находились в интервале от 22,56 до 52,31мг/л. Подготовленный контрольный образец из плодов бузины, в который не вносили ферментные препараты, показал самое низкое содержание антиоксидантов по сравнению с образцами, обработанными ферментами, в то время как наиболее эффективная экстракция антиоксидантов наблюдалась с использованием фермента Fructozym Р.
я
L.
S <
О <
60
40
20
Без фермента Fructozym Р Pectinex BE XXL
Рис. 3. Средние результаты АОА: а, Ъ, с различаются при Р <0,05
и т. д. - разные буквы значительно
Концентрация антиоксидантной активности снижалась в процессе микрофильтрации; во всех образцах, обработанных ферментными препаратами, значения АОА в образцах фильтрата были выше, чем в ретентате (концентрате).
Общее содержание полифенолов в мг-экв галловой кислоты на литр показано на рис. 4.
40
20
с
о
Си
ю с
Без фермента Fructozym Р Pectinex BE XXL
Рис. 4. Средние результаты общего содержания полифенолов: а, Ь, с и т. д. буквы значительно различаются при Р <0,05.
разные
Больше полифенольных веществ содержали образцы, в которые были внесены ферментные препараты. Это обусловлено тем, что ферментные препараты пекто-литического действия активно воздействуют на пектиновые вещества, что приводит к его разрушению. Наиболее эффективная экстракция была получена в образцах, обработанных ферментом Рги^огут Р, где была обнаружена значительная разница (значение Р> 0,05). Содержание полифенолов в ретентате составляло 53-72 % от свежевыжатого сока, поэтому значения общего содержания полифенолов ОСП в фильтрате были еще ниже.
200
150
<
о о
ё
В
сх ю о
о
ЩЦ| ШйЯ!»
Без (фермента Ргис1о^ут Р
Ресгтсх ВЕ XXЬ
Рис. 5. Средние результаты общего содержания антоцианое а, Ъ, с и т. д. - разные буквы значительно различаются при Р <0,05
Общее содержание антодианов в образцах сока бузины показано на рис. 5. Содержание антодианов варьировалось от 2,05 до 184,78 мг/л. Максимальное содержание антодианов установлено в образце, обработанном ферментом Ргис1;огут Р, минимальное содержание установлено в отфильтрованном контрольном образце. Содержание антоцианина на 30 % ниже, чем в образце , для обработки которого использовали фермент Ргис1;огут Р. В результате процесса фильтрации наибольшее снижение значений антоцианов было обнаружено в контрольном образце без ферментов - в фильтрате снижение составило 93,4%, а в случае ретентата - 66,3 %.
Мембрана блока микрофильтрации удаляет взвешенные компоненты сока в различной степени. Коэффициент удержания рассчитывали по следующему уравнению:
И= ( 1- Ср /Ск)*100,
где И - удержание, % Ср - концентрация фильтрата: С и - концентрация ретентата.
Рис. 6. Степень удержания антиоксидантных компонентов на мембране МФ, АОА-антиоксидантная способность, ОСП- общее содержание полифенолов; ОСА- общее содержание антоцианов, а, Ъ, си т. д. -разные буквы значительно различаются при Р <0,05
На рис. 6 показана степень удержания молекул антиоксиданта. Мембрана удерживала антиоксидантные компоненты с наибольшей скоростью в случае контрольного образца, приготовленного без ферментативной обработки. Затем была проведена энзимная обработка, и удержание мембраны значительно уменьшилось. Принимая во внимание сохранение антиоксидантной активности и содержание полифенолов в контрольном образце, не содержащем ферментов, этот показатель удерживания был значительно выше, чем в случае использования ферментов Fruc-tozym Р и Pectinex BE XXL.
Результаты показывают, что обработка дробленых плодов бузины перед прессованием ферментными препаратами пектолитического действия ,приводила к получению сока с более высоким и антиоксидантными свойствами, по сравнению с образцом, который не обрабатывался вышеуказанными ферментами. Ферментный препарат перктолитического действия Fructozym Р показал большую эффективность в процессе разрушения пектиновых веществ в соке бузины в сравнении с Pectinex BE XXL, который используется в промышленности. Наибольшая антиокси-дантная активность, содержание полифенолов и антоцианов были также установлены в этом образце хотя время МФ в данном случае также было больше. Следует отметить, что значительные потери происходили после процесса очищения МФ из-за загрязнения мембранных пор, которое можно уменьшить используя обработку сока ферментными препаратами пектолитического действия Fructozym Р и Pectinex BE XXL.
ЛИТЕРАТУРА
1. Рамазанова Л. А. Совершенствование технологии получения биологически активных соединений и пищевых красителей из плодов дикорастущего сырья : дис. канд. техн. наук : 05.18.01 / Л. А. Рамазанова. - М., 2005. - 160
2. Андрушкевич Т. М. Калина. Рябина. Бузина. Арония / Т. М. Андрушкевич,
A. М. Исаченко, Е. Н. Тюрина. - Минск : Красико-Принт, 2006. - 63 е..
3. Позняковский В. М. Экспертиза напитков. Качество и безопасность : учебно-справочное пособие / В. М. Позняковский [и др.]; под общ. ред.
B. М. Позняковского. - 6-е изд., испр. и доп. - Неб. : Сиб. унив. изд-во, 2005. - 407
4. Barak V., Т. Halperin, and I. Kalickman. 2001. The effect of Sambucol, a black elderberry-based, natural product, on the production of human cytokines: I. Inflammatory cytokines. Eur. Cytokine Netw. 2:290-296.
5. Kaack K., Frette X. C., Christensen L. P., Landbo A.-K., & Meyer A. S. (2008). Selection of elderberry genotypes best suited for the preparation of juice. European Food Research and Technology, 226, 843-855.
6. Lee J., Finn С. E. Anthocyanins and other polyphenolics in American elderberry (Sambucus canadensis) and European elderberry (S.nigra) cultivars. J Sci Food Agric. 2007;87:2665-75; Matejicek A., Kaplan J. and Vespalcova M. 2012. Investigation of fruit chemical composition and vegetative propagation of cultivated and wild elderberry. Acta Hort. (ISHS) 926:353-356; Mustafa Akbulut, Sezai Ercisli, Murat Tosun. Physico-chemical characteristics of some wild grown European elderberry (Sambucus nigra L.) genotypes // Pharmacogosy Magazine. - 2009. - Volume: 5. - Issue: 20. - P. 320-323
7. Lee J., Finn С. E. Anthocyanins and other polyphenolics in American elderberry (Sambucus canadensis) and European elderberry (S.nigra) cultivars. J Sci Food Agric. 2007;87:2665-75; Matejicek A., Kaplan J. and Vespalcova M. 2012. Investigation of fruit chemical composition and vegetative propagation of cultivated and wild elderberry. Acta Hort. (ISHS) 926:353-356; Mustafa Akbulut, Sezai Ercisli, Murat Tosun. Physico-chemical characteristics of some wild grown European elderberry (Sambucus nigra L.) genotypes // Pharmacogosy Magazine. - 2009. - Volume: 5. - Issue: 20. - P. 320-323.
8. Бурак Л. Ч. Исследование химического состава ягод бузины, произрастающей на территории Республики Беларусь / Л. Ч. Бурак, В. Н. Тимофеева, М. Л. Зенькова, А. В. Черепанова / / Вестник Могилевского государственного университета продовольствия. - Могилев, 2012. - №1. - С. 3-7.
9. Charlebois D. Elderberry as a Medicinal Plant / / Issues in new crops and new uses. ASHS Press, Alexandria, VA., 2007. - P. 284-292.
10. Roschek B. Jr., Fink R. C., McMichael M. D., Li D., Alberte R. S. - (2009) Elderberry flavonoids bind to and prevent H1N1 infection in vitro, Phytochemistry, 70 (10):1255-1261.
11. Kislichenko V. S., Vel'ma V. V. - (2006) Amino-acid composition of flowers, leaves, and extract of Sambucus nigra flowers, Chem Nat Compounds, 42(1): 125-126.
12. A. Sidor, A. Gramza-Michalowska, Advanced research on the antioxidant and health benefit of elderberry (Sambucus nigra) in food - a review. Journal of Functional Foods, 18. (2015) 941-958.
13. J. Barta, I., K"ormendy, ISTov'enyi nyersanyagok feldolgoz'astechnol'ogiai m 'uveletei. Budapest, Mez'ogazda Kiad'o, (2007).
14. Singleton, V.L., Orthofer, R., Lamuela-Raventos, R.M., Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent / / Methods in Enzymolog. - 1999. -Volume 299 - P. 152-178
REFERENCES
1. Ramazanova L. A. Improving the technology for producing biologically active compounds and food dyes from fruits of wild raw materials: dis. edging, техн. sciences: 05.18.01/L. A. Ramazanova. - M., 2005. - 160
2. Andrushkevich Т. M. Kalina. Rowan. Elder. Aronia/T. M. Andrushkevich, L. M. Isachenko, E. N. Tyurina. - Minsk: Krasiko-Print, 2006. - 63 s..
3. Poznyakovsky V. M. Examination of drinks. Quality and safety: training manual/ V. M. Poznyakovsky [etc.]; under the general ed. V. M. Poznyakovsky. - 6th ed., Correct and additional - Nsb.: Sib. унив. Publishing House, 2005. - 407 p.
4. Barak V., T. Halperin, and I. Kalickman. 2001. The effect of Sambucol, a black elderberry-based, natural product, on the production of human cytokines: I. Inflammatory cytokines. Eur. Cytokine Netw. 2:290-296.
5. Kaack K., Frette X. C., Christensen L. P., Landbo A.-K., & Meyer A. S. (2008). Selection of elderberry genotypes best suited for the preparation of juice. European Food Research and Technology, 226, 843-855.
6. Lee J., Finn С. E. Anthocyanins and other polyphenolics in American elderberry (Sambucus canadensis) and European elderberry (S.nigra) cultivars. J Sci Food Agric. 2007;87:2665-75; Matejicek A, Kaplan J. and Vespalcova M. 2012. Investigation of fruit chemical composition and vegetative propagation of cultivated and wild elderberry. Acta Hort. (ISHS) 926:353-356; Mustafa Akbulut, Sezai Ercisli, Murat Tosun. Physico-chemical characteristics of some wild grown European elderberry (Sambucus nigra L.) genotypes / / Pharmacogosy Magazine. - 2009. - Volume: 5. - Issue: 20. - P. 320-323
7. Lee J., Finn С. E. Anthocyanins and other polyphenolics in American elderberry (Sambucus canadensis) and European elderberry (S.nigra) cultivars. J Sci Food Agric. 2007;87:2665-75; Matejicek A, Kaplan J. and Vespalcova M. 2012. Investigation of fruit chemical composition and vegetative propagation of cultivated and wild elderberry. Acta Hort. (ISHS) 926:353-356; Mustafa Akbulut, Sezai Ercisli, Murat Tosun. Physico-chemical characteristics of some wild grown European elderberry (Sambucus nigra L.) genotypes / / Pharmacogosy Magazine. - 2009. - Volume: 5. - Issue: 20. - P. 320-323.
8. Burak L. C. Study of the chemical composition of buzin berries growing on the territory of the Republic of Belarus/L. C. Burak, V. N. Timofeev, M. L. Zenkova, A. V. Cherepanova//Bulletin of Mogilev State University of Food. - Mogilev, 2012. - No. 1. -S. 3-7.
9. Charlebois D. Elderberry as a Medicinal Plant // Issues in new crops and new uses. ASHS Press, Alexandria, VA., 2007. - P. 284-292.
10. Roschek B. Jr., Fink R. C., McMichael M. D., Li D., Alberte R. S. - (2009) Elderberry flavonoids bind to and prevent H1N1 infection in vitro, Phytochemistry, 70(10):1255-1261.
11. Kislichenko V. S., Vel'ma V. V. - (2006) Amino-acid composition of flowers, leaves, and extract of Sambucus nigra flowers, Chem Nat Compounds, 42(1): 125-126.
12. A. Sidor, A. Gramza-Michalowska, Advanced research on the antioxidant and health benefit of elderberry (Sambucus nigra) in food - a review. Journal of Functional Foods, 18. (2015) 941-958.
13. J. Barta, I., K'ormendy, N"ov'enyi nyersanyagok feldolgoz'astechnol'ogiai m 'uveletei. Budapest, Mez 'ogazda Kiad'o, (2007).
14. Singleton, V.L., Orthofer, R., Lamuela-Raventos, R.M., Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent / / Methods in Enzymolog. - 1999. -Volume 299 - P. 152-178.
