CC BY
6DOI 10.53980/24131997_2023_4_33
С.В. Цырендоржиева, канд. техн. наук, доц., e-mail: [email protected]
А.В. Степанова, студент Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления, г. Улан-Удэ
УДК 582.711.11:547.9
ВЛИЯНИЕ ФАЗЫ РАЗВИТИЯ ЛИСТЬЕВ НА НАКОПЛЕНИЕ АРБУТИНА И ДРУГИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ БАДАНА ТОЛСТОЛИСТНОГО
Бадан толстолистный Вв^вта crassifolia (L.) Fitsch - одно из немногих растений, листья которого содержат значительное количество фенольных соединений. Установлено высокое содержание в листьях бадана галлотаннинов, дубильных веществ. Максимальное суммарное содержание гал-лотаннинов отмечено в зеленых листьях - 29,49±0,32 %. Наибольшим количеством дубильных веществ отличаются красные листья (24,1±0,03 %).
Содержание арбутина в листьях разной фазы вегетации варьируется в течение сезонного развития в диапазоне от 10 до 18 % с максимумом накопления в зеленых листьях - 18,01±0,26 %. На протяжении вегетационного периода отмечено постепенное снижение арбутина. Так, к концу вегетации в черных листьях установлено минимальное значение арбутина, равное 10,54±0,35 %. Очевидно, что содержание арбутина выше в листьях в фазу массового цветения, чем в красных и черных листьях, что позволяет определить оптимальное время для заготовки арбутинсодержащего сырья.
Ключевые слова: зеленые, красные, черные листья бадана толстолистного, фазы развития, фе-нольные соединения, арбутин, арбутинсодержащее сырье.
S.V. Tsyrendorzhieva, Cand. Sc. Engineering, Assoc. Prof.
A.V. Stepanova, student
INFLUENCE OF THE LEAF DEVELOPMENT PHASE ON THE ACCUMULATION OF ARBUTIN AND OTHER BIOLOGICALLY ACTIVE COMPOUNDS IN ABOVE-GROUND PART OF LEATHER BERGENIA
Leather Bergenia (Bergenia crassifolia (L.) Fitsch) is one of the few plants that contain a significant amount of phenolic compounds in its leaves. The present research identified high content of gallotannins and tannins in Bergenia leaves. The maximum total content of gallotannins is found in green leaves - 29,49±0,32 %. Red leaves have the highest amount of tannins (24,1±0,03 %).
The content of arbutin in leaves varied during seasonal development in the range from 10 to 18 % with a maximum accumulation in green leaves - 18,01±0,26 %. Throughout the growing season, a gradual decrease in arbutin is observed. By the end of the growing season, black leaves had a minimum arbutin value of10.54 0.35%.0bviously, the arbutin content is higher in leaves during the mass flowering phase than in red and black leaves. It allows to determine the optimal time for harvesting arbutin-containing raw materials.
Key words: green, red, black leaves of Bergenia, phases of development, phenolic compounds, arbutin, arbutin-containing raw materials.
Введение
Рассматривая пищу как источник питательных веществ, нельзя не учитывать и того важнейшего факта, что она в то же время является и источником веществ, оказывающих активное регулирующее влияние на функции отдельных органов и систем, к которым относят (биологически активные вещества, физиологически или фармакологически активные вещества) - витамины, гликозиды, алкалоиды, сапонины, эфирные масла, полиненасыщенные жирные кислоты, макро-и микроэлементы, незаменимые аминокислоты и др. Внедрение в повседневное питание больных и здоровых людей биологически активных веществ растительного происхождения как важнейшего защитного фактора имеет огромное значение.
Перспективность использования природных комплексов биологически активных веществ дикорастущих растений в составе пищевых продуктов объясняется их высокой биологической активностью и исключением вредного воздействия на организм человека, в отличие от веществ с искусственно созданной структурой.
Одним из перспективных объектов изучения является бадан толстолистный Bergenia crassifolia (L.) Fitsch - травянистый вечнозеленый многолетник семейства камнеломковых. Благодаря наличию широкого спектра химических соединений бадан толстолистный очень давно известен и популярен в народной медицине Сибири, а также в тибетской и монгольской медицине [1]. Установлено, что препараты, полученные из бадана, обладают противовоспалительными, вяжущими, кровоостанавливающими свойствами, укрепляют стенки капилляров, оказывают местное сосудосуживающее действие [2]. Известно также, что экстракт бадана понижает артериальное давление и увеличивает частоту сердечных сокращений [3]. Между тем авторами доказаны антимикробные, мочегонные и противовоспалительные свойства дико-роса, которые обусловливают его применение при воспалительных процессах в мочевыдели-тельных путях, при почечной недостаточности с нарушением водного и минерального обмена [4-6]. Важно отметить, что в тибетской медицинской практике бадан используют при туберкулезе легких, болезнях почек, связанных с ушибами, суставном ревматизме, желудочно-кишечных заболеваниях; в монгольской медицине - при тошноте и рвоте [2, 7].
К настоящему времени оздоровительные свойства настоев и экстрактов из листьев бадана связывают прежде всего с наличием в них фенольных соединений (кверцетин и кемпфе-рол; лейкоантоцианы; антоцианы: пелларгонидин и цианидин), обладающих антиоксидант-ными свойствами. По мнению авторов [8], фенольные вещества содержатся и в листьях, и в корнях растения, причем их количество растет с возрастом растения.
Среди огромного числа биологически активных веществ, синтезируемых дикоросами, особого внимания заслуживает арбутин (гидрохинон-Р-Д-гликозид), который накапливается в растениях семейства камнеломковых и вересковых [9]. К настоящему времени в медицинской практике арбутин применяют для лечения заболеваний мочевыводящих путей, которые, как показывает медицинская статистика, отмечаются практически у каждого человека в разные периоды жизни.
Несомненный интерес представляют данные, указывающие на то, что в наибольших количествах гликозид фенольного типа (арбутин) накапливается в холодоустойчивых растениях. Благодаря своим мембраностабилизирующим свойствам он защищает клеточные мембраны от разрушения под влиянием низких температур, продолжительной дегидратации и других факторов. В наибольшей мере протективное действие арбутина проявляется в отношении мембран, не имеющих бислойной структуры [10]. Под влиянием фермента арбутазы (фе-нолгликозидазы) арбутин расщепляется на глюкозу и свободный гидрохинон, а метиларбутин - на глюкозу и монометиловый эфир гидрохинона. Мочегонные и уроантисептические свойства бадана связаны в первую очередь с фенольными гликозидами - арбутином и метиларбу-тином, а также с гидрохиноном и его метиловым эфиром, которые обладают противомикроб-ным и местнораздражающим действием, угнетающим рост распространенных возбудителей урологических инфекций [4].
Заслуживает внимания тот факт, что арбутин угнетает активность фосфолипазы А2, благодаря структурной схожести с ее известными ингибиторами [11]. Ведь за счет антифос-фолипазной активности арбутин может угнетать высвобождение арахидоновой кислоты из фосфолипидов клеточных мембран и, таким образом, противодействовать образованию ли-пидных медиаторов воспаления - простагландинов и лейкотриенов. Нельзя не сказать, что с арбутином связаны и его антиоксидантные свойства, позволяющие задерживать перекисное окисление линолевой кислоты и обладающие способностью нейтрализовывать свободные радикалы в бесклеточных системах in vitro [12].
Имеются данные о противокашлевых свойствах арбутина [1]. Арбутин понижает пока-
затель глюкозы в крови. Тест на метаболический процесс, вызывающий химические изменения в органических субстратах под действием фермента арбутазы с образованием глюкозы является важным биохимическим признаком, который используется в микробиологической практике при распознавании бактерий и грибов [13]. В целом приведенные сведения подтверждают широкую биологическую активность арбутина, а также перспективность исследований, сориентированных на поиск нового арбутинсодержащего сырья.
Следует подчеркнуть, что особый интерес к бадану в качестве перспективного растения для создания лекарственных препаратов с заданными фармакологическими свойствами, напитков, бальзамов, сиропов, драже, травяных напитков, а также биологически активных добавок к пище обусловлен широким спектром его биологической активности. Однако для использования в медицинских целях в основном изучаются только корневища растения, хотя содержание фармакологически активных соединений в листьях бадана значительно больше [5, 6], в отличие от корневищ. При этом в большинстве случаев исследуется химический состав зеленых листьев бадана, в то время как содержание биологически активных соединений может быть не меньше в красных или черных листьях растения. Поэтому основной целью работы было исследование содержания арбутина в листьях бадана толстолистного Bergenia crassifolia (L.) Fitsch, собранного в разные периоды вегетации.
Материалы и методы исследования
Для проведения экспериментов сбор листьев бадана толстолистного осуществляли в мае-июне 2021-2023 гг., в это время года Bergenia crassifolia (L.) Fitsch характеризуется одновременным присутствием на растении зеленых, красных и черных листьев в силу особенностей циклического развития. Собранные листья разных фаз развития сушили в естественных условиях до воздушно-сухого состояния, упаковывали в бумажные пакеты и хранили в темном месте. Выделение биологически активных веществ из листьев бадана проводили в сырье, измельченном до размера частиц не более 1 мм.
Содержание комплекса фенольных соединений определяли спектрофотометрическим методом с реактивом Фолина - Чокалтеу. Фенолы легко окисляются в основной среде с образованием радикала О2'2, который реагирует с молибдатом с образованием оксида молибдена MoO4+, имеющего максимум поглощения при длине волны 700-750 нм. Из анализируемого сырья были получены водно-этанольные экстракты при различных соотношениях «сырье:эта-нол» (50%-ный). Экстракт смешивали с вышеуказанным реактивом, насыщенным раствором карбоната натрия в соотношении 1:1:2, и в конечной смеси измеряли коэффициент поглощения при длине волны 725 нм.
Для идентификации арбутина 2,0 г измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 50 мл, заливали 20 мл 60%-ного этанола, экстрагировали при слабом нагревании на водяной бане в течение 1 ч. Полученное извлечение фильтровали. 1 мл фильтрата наносили на колонку с 2,0 г окиси алюминия безводного, элюировали 20 мл 60%-ного этанола, после чего элюат хроматографировали на пластинке «Силуфол». Хроматограмму обрабатывали 10%-ним спиртовым раствором едкого натрия в реактиве Паули. Распознавали арбутин по параметру Rf, который является аналогией времени удерживания и зависит как от свойств разделяемых веществ, состава подвижной фазы и сорбента, так и от физических параметров. Определение значения Rf проводили как отношение расстояния, которое прошло вещество, к расстоянию, которое прошел фронт растворителя. Идентифицировали арбутин в листьях бадана со значением Rf = 0,68±0,03.
Результаты экспериментальных исследований 3-5-кратной повторности обрабатывали методами математической статистики с помощью стандартных программных пакетов.
Экспериментальная часть работы проведена в специализированных лабораториях Восточно-Сибирского государственного университета технологий и управления.
Результаты исследований и их обсуждение
Бадан толстолистный (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch.) (рис. 1) относится к семейству камнеломковых (Saxifragaceae). Это вечнозеленый травянистый многолетник с мощным мясистым густо ветвящимся корневищем, покрытым остатками старых прилистников и черешков розеточных листьев [14].
Рисунок 1 - Бадан толстолистный (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch)
Поскольку бадан развивается несколько лет, фазы развития надземной части бадана характеризуются цветом листьев: зеленые листья, это листья, которые формируются в первый или второй год, красные - на третий или четвертый, черные - на четвертый-пятый год. Бадан может расти на одном месте долго - до 10 лет и более [2]. В среднем на территории Бурятии с 1 км2 можно получить до 140 т воздушно-сухого сырья, плотность запаса корневищ бадана достигает 2500-4700 кг/га [14].
Как показал обзор литературы, химический состав и ценность бадана представляют интерес для ученых разных отраслей (биологической, фармацевтической, пищевой и др.). В зависимости от цели исследований изучаются надземная, подземная части бадана в разных стадиях развития. Малоизученным остается вопрос сравнительной количественной оценки содержания фармакологически активных соединений листьев бадана толстолистного bergenia crassifolia (L.) Fitsch в зависимости от фазы вегетации.
Исследования последних лет показали, что основными доминирующими веществами бадана, как листьев, так и корневищ, являются дубильные вещества (25 % в корнях и 15-20 % в листьях), преимущественно относящиеся к группе галлотаннинов, в составе которых таннин находится на уровне 8-10 %. Известен тот факт, что экстракт сухой листьев бадана на четверть состоит из гликозидов (до 20 % арбутина и около 2-4 % свободного гидрохинона), благодаря чему обладает кровоостанавливающим и антимикробным действием. Другим важным открытием, с точки зрения ряда ученых [15], было подтверждение информации о том, что листья дикороса являются источником фенолкарбоновых кислот - галловой кислоты до 0,22 %, содержат дигаллоилглюкозу (0,27 %), тригаллоилглюкозу (0,49 %), пентагаллоилглюкозу (0,35 %), а также изокумарин и бергенин. А катехины представлены галлокатехином и кате-хингаллатом (1,46 %). По мнению ряда авторов [14], количественное содержание катехинов в листе бадана такое же, что и в зеленом чае.
На первом этапе было изучено влияние фазы развития листьев бадана толстолистного на содержание фенольных соединений (рис. 2).
Количественное определение содержания биологически активных веществ в листьях бадана разной фазы развития показало, что содержание дубильных веществ в листьях бадана толстолистного примерно одинаковое и составляло в зеленых листьях - 22,16±0,07 %, красных - 24,1±0,03 %, черных - 17,48±0,34 %. Можно отметить достоверно более низкое содержание простых фенолов в черных листьях (8,24±0,03 %) по сравнению с его содержанием в зеленых в 1,9 раза и красных - в 2,2 раза.
Дубильные вещества
Галлотаннины
Флавоноиды, в пересчете на рутин
I
Черные листья Красные листья Зеленые листья
Простые фенолы
0 5 10 15 20 25 30 35 Содержание фенольных соединений, %
Рисунок 2 - Влияние фазы развития листьев бадана толстолистного на содержание фенольных компонентов
Содержание галлотаннинов, относящихся к гидролизуемым дубильным веществам, составило в зеленых листьях - 29,49±0,32 %, в красных - 25,6±0,1 %, в черных - 16,88±0,24 %.
Динамика содержания растительных полифенолов, в частности флавонодов (в пересчете на рутин) аналогична изменениям в содержании простых фенолов. В красных листьях их значение выше (2,54±0,04 %), чем в зеленых (1,3±0,02 %) и красных (2,18±0,04 %) листьях.
Полученные данные согласуются с литературными источниками, в которых значительную часть фенольного комплекса листьев бадана составляют дубильные вещества [17]. Известно основное свойство дубильных веществ - оказывать вяжущее, бактерицидное действие, способность уменьшать воспалительный процесс и боль, а также гасить цепные свободно радикальные реакции [10]. Антиоксидантная активность галлотаннинов зависит от числа ОН-групп в их молекуле. По данным авторов [12], полифенолы эффективно ингибируют перекис-ное окисление липидов, сохраняя свою активность и при высоких температурах. Галловая кислота подавляет окисление на 22 %, но этерификация карбоксильной группы приводила к резкому повышению антиоксидантной активности [13]. Эпигаллокатехингаллат, эпикатехингал-лат проявляют в эксперименте антиоксидантные свойства с такой же эффективностью, как а-токоферол [18].
Одними из широко распространенных метаболитов растений считаются фенольные гликозиды: арбутин (арбутозид или эриколин), метиларбутин, пирозид (6-ацетиларбутин), а также гидрохинон [11, 19]. По данным работ авторов, содержание данных соединений в листьях бадана может варьироваться в пределах от 3,3 до 25 % [7]. Следует отметить, что соотношение между арбутином и метиларбутином разное, в зависимости от вида растительного сырья.
Известно, что доминирующим источником арбутина являются фармакопейные растения - лист толокнянки и лист брусничника. Вместе с тем представляло интерес изучение содержания арбутина в листьях бадана толстолистного, произрастающего в Бурятии, поэтому на следующем этапе были проведены исследования по количественному определению арбутина в зеленых, красных и черных листьях бадана в зависимости от степени зрелости сырья на разных этапах сезонного развития (рис. 3).
0х
ей
И «
н
&
&
<и «
а
<и Ч О
О
20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
Зеленые листья Красные листья Черные листья
Рисунок 3 - Содержание арбутина в листьях бадана разных фаз вегетации
В результате проведенного количественного определения содержание арбутина в зеленых листьях составило 18,01±0,26 %, красных - 16,65±0,24, черных - 10,54±0,35 %.
По наличию арбутина проводится стандартизация листьев бадана толстолистного, его содержание регламентируется на уровне не менее 5 % [16]. При стандартизации лекарственного растительного сырья по количественному содержанию биологически активных веществ в нормативной документации указывается не «коридор» допустимых значений, как для большинства синтетических лекарственных средств и фармацевтических субстанций, а только нижняя граница содержания («не менее ...»). В прописях Государственной фармакопеи [16] представленными арбутиносодержащими растениями являются лист толокнянки (содержание в нем арбутина составляет 6 %) и лист брусничника (7 %).
Как видно из полученных данных, содержание арбутина в листьях варьировало в течение сезонного развития в диапазоне от 10 до 18 % с максимумом накопления в зеленых листьях. На протяжении вегетационного периода отмечено постепенное снижение арбутина. Так, к концу вегетации в черных листьях установлено минимальное значение арбутина. Очевидно, что содержание арбутина выше в листьях в фазу массового цветения, чем в красных и черных листьях, что позволяет определить оптимальное время для заготовки арбутинсодержа-щего сырья.
Заключение
В связи с тем что ХХ1 в. считается веком минорных микронутриентов, которые играют существенную роль в экзогенной регуляции метаболизма на уровне экспрессии генов ферментов, ответственных за метаболические процессы, в том числе за метаболизм ксенобиотиков и ферментов антиоксидантной защиты организма, стоит актуальная задача поиска источников минорных компонентов пищи.
Необходимо отметить, что использование природных растительных компонентов не оказывает отрицательного влияния на организм человека, особенно людей, страдающих аллергическими заболеваниями. А в связи с большим потенциалом природного сырья как компонентов функционального питания сегодня огромный интерес представляют не только сами растительные ингредиенты, но и созданные природой комплексы этих соединений, долгое время применявшиеся в народной медицине без тщательного изучения и научного подтверждения их достоинств.
Обладая информацией о содержании арбутина в листьях бадана толстолистного, собранного в разные периоды вегетации, можно выявить наиболее подходящее время для их заготовки с целью широкого использования арбутинсодержащего сырья, тем более что обеспеченность сырьевыми запасами бадана в Бурятии не вызывает сомнения.
В то же время следует заметить, что, несмотря на высокое содержание биологически активных веществ и перспективы использования в пищевой промышленности, листья бадана обладают вяжущим и горьким вкусом, обусловленным дубильными веществами и арбутином. Поэтому для использования в пищевых системах необходимо подбирать технологические режимы и оптимальную корреляцию рецептурных компонентов для получения продукта не только с приемлемыми органолептическими показателями, но и высокими антиоксидантной активностью и антимикробным действием.
Библиография
1. Куркин В.А. Основы фитотерапии. - Самара: ООО «Офорт»;Изд-во ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2020. - 963 с.
2. Лубсандоржиева П.Б. Серия: Лекарственные растения тибетской медицины. Бадан толстолистный. - Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2002. - 90 с.
3. Седунова Е.Г., Лебедева С.Н., Жамсаранова С.Д. Возможность использования черных листьев бадана толстолистного в качестве природного иммуномодулятора // Новые научные технологии в Дальневосточном регионе: материалы конф. - Благовещенск, 1999. - С. 51-52.
4. Волобой Н.Л., Смирнов И.В., Бондарев А.А. Особенности мочегонной активности арбутина и гидрохинона // Сибирский медицинский журнал. - 2012. - № 3 (27). - C. 131-134.
5. Патент RU 2093046 С1 A23L1/30. Лечебно-профилактическая пищевая композиция «Герба-марин» / Ю.Н. Лоенко, Э.П. Козловская, А.А. Артюков, В.В. Ковалев, А.С. Козловский, П.Г. Горовой, Ю.М. Гафуров, В.А. Рассказов, А.М. Попов, Г.Б. Еляков. Патентообладатель: Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН. - Заявка №96108185/13, заявл. 06.05.1996; опубл. 20.10.1997.
6. Bernardini S., OsorioM.S., Tiezzi A. Plants: an infinite source of molecules useful for pharmaceuticals // Current Traditional Medicine. - 2018. - Vol. 4, N 3. - P. 157-165.
7. Батомункуев А.Б., Анцупова Т.П., Лубсандоржиева П.Б. и др. Сравнительный анализ биологически активных веществ зеленых и ферментированных (черных) листьев бадана толстолистного // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - № 4 (86). - С. 18-20.
8. Чиркина Т. Ф., Доржиева В.В. Получение экстракта из красных листьев бадана толстолистного для пищевых целей // Вестник КрасГАУ. - 2008. - № 3. - С. 304-306.
9. Анищенко Л.В., Подольская Е.Н. Энциклопедия лекарственных растений. - М.: АСТ, 2017.
- 208 с.
10. Jenzer H., Sadeghi L. Phytochemicals: Sources and biological functions // Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. - 2016. - Vol. 5, N 5. - P. 339-341.
11. Shah B.N., Seth A.K. Textbook of pharmacognosy and phytochemistry. - 2nd edition. - Cbs., 2017. - 636 p.
12. Black H.S., Boehm F., Edge R. et al. The benefits and risks of certain dietary carotenoids that exhibit both anti- and pro-oxidative mechanisms-a comprehensive review // Antioxidants. - 2020. - Vol. 9, N 3. - P. 264.
13. Bagetta G., Cosentino M, Corasaniti M.T. et al. Herbal medicines: development and validation of plant-derived medicines for human health. - Boca Raton: CRC Press, 2012. - 520 p.
14. Уржинлхсш Ж., Федосеева Г.М., Оюунбат Б. и др. Сведения литературы о бадане толстолистном // Сибирский медицинский журнал. - 2004. - № 2. - С. 62-66.
15. Аверьянова Е.В., Школьникова М.Н., Еськова А.К. Листья бадана толстолистного как сырье для получения биологически активных веществ // Материалы XIV Междунар. науч.-практ. конф. «Пища. Экология. Качество». - Новосибирск, 2017. - Т. 1. - С. 13-17.
16. Государственная фармакопея СССР. - XI изд. - М.: Медицина, 1991. - 360 с.
17. Цырендоржиева С.В., Хамаганова И.В. Использование черных листьев бадана в производстве пищевых продуктов // Техника и технология пищевых производств. - 2017. - № 45 (2). - С. 81-86.
18. Tay P.Y., Tan C.P., Abas F. et al. Evaluation of extraction parameters for antioxidant capacity, polyphenol content, epigallocatechin gallate (EGCG), epicatechin gallate (ECG) and iriflophenone 3-C-P-glu-coside from young leaves of agarwood (Aquilaria crassna) // Molecules. - 2014. - N 19 (8): 12304-19.
19. Танганова Е.А. Биологически активные вещества лекарственных растений как природные компоненты, обладающие антимикробной активностью (обзор) // Вестник ВСГУТУ. - 2011. - № 4 (35). - С. 132-139.
Bibliography
1. Kurkin V.A. Basics of herbal medicine. - Samara: Publishing House «Ofort» of Samara State Medical University, 2020. - 963 p.
2. Lubsandorzhieva P.B. Series: Medicinal plants of Tibetan medicine.Leather Bergenia. - Ulan-Ude: Publishing house of the BSC SB RAS, 2002. - 90 p.
3. Sedunova E.G., Lebedeva S.N., Zhamsaranova S.D. Possibility of using black leaves of Leather Bergenia as a natural immunomodulator // New scientific technologies in the Far Eastern region: materials of the conference. - Blagoveshchensk, 1999. - P. 51-52.
4. VoloboyN.L., SmirnovI.V., BondarevA.A. Features of the diuretic activity of arbutin and hydroqui-none // Siberian Medical Journal. - 2012. - N 3 (27). - P. 131-134.
5. Patent RU 2093046 C1 A23L1/30. Therapeutic and prophylactic food composition «Gerbamarin» / Yu.N. Loenko, E.P. Kozlovskaya, A.A. Artyukov, V.V. Kovalev, A.S. Kozlovsky, P.G. Gorovoy, Yu.M. Ga-furov, V.A. Rasskazov, A.M. Popov, G.B. Elyakov; Patent holders: Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Far Eastern Branch of the Russian Academy of Sciences. - Application N 96108185/13; application date 05.06.1996; publ. 10.20.1997.
6. Bernardini S., Osorio M.S., Tiezzi A. Plants: an infinite source of molecules useful for pharmaceuticals // Current Traditional Medicine. - 2018. -- Vol. 4, N 3. - P. 157-165.
7. Batomunkuev A.B., Antsupova T.P., Lubsandorzhieva P.B. et al. Comparative analysis of biologically active substances of green and fermented (black) leaves of Bergenia // Bulletin of the All-Russian Scientific Center of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2012. - N 4 (86). - P. 18-20.
8. Chirkina T.F., Dorzhieva V.V. Preparation of an extract from the red leaves of Bergenia for food purposes // Bulletin of KrasGAU. - 2008. - N 3. - P. 304-306.
9. AnishchenkoL.V., PodolskayaE.N. Encyclopedia of medicinal plants. - M.: AST Publishing House, 2017. - 208 p.
10. Jenzer H., Sadeghi L. Phytochemicals: Sources and biological functions // Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. - 2016. - Vol. 5, N 5. - P. 339-341.
11. Shah B., Kalia A.N. Textbook of Pharmacognosy and Phytochemistry. - 2nd edition. - CBS Publishers & Distributors, 2019. - 636 p.
12. Black H.S., Boehm F., Edge R. et al. The benefits and risks of certain dietary carotenoids that exhibit both anti- and pro-oxidative mechanisms - a comprehensive review // Antioxidants. - 2020. - Vol. 9, N 3. - P. 264.
13. Bagetta G., CosentinoM, Corasaniti M.T. et al. Herbal medicines: development and validation of plant-derived medicines for human health. - Boca Raton: CRC Press, 2012.-520 p.
14. Urzhinlkhssh Zh., Fedoseeva G.M., Oyuunbat B. et al. Literature information about Bergenia // Siberian Medical Journal. - 2004.-N 2. - P. 62-66.
15. Averyanova E.V., Shkolnikova M.N., Eskova A.K. Badan leaves as a raw material for production of biologically active substances // Materials of the XIV International scientific-practical conference «Food. Ecology. Quality». - Novosibirsk, 2017. - Vol. 1. - P. 13-17.
16. State Pharmacopoeia of the USSR. XI edition. - M.: Publishing House «Medicine», 1991. - 360 p.
17. Tsyrendorzhieva S.V., Khamaganova I.V. The use of black Bergenia leaves in food production // Food Processing: Techniques and Technology. - 2017. - N 45 (2). - P. 81-86.
18. Tay P.Y., Tan C.P., Abas F et al. Evaluation of extraction parameters for antioxidant capacity, polyphenol content, epigallocatechin gallate (EGCG), epicatechin gallate (ECG) and iriflophenone 3-C-P-glu-coside from young leaves of agarwood (Aquilaria crassna) // Molecules. - 2014. - N 19 (8): 12304-19.
19. Tanganova E.A. Biologically active substances of medicinal plants as natural components with antimicrobial activity (review) // Bulletin of the ESSTUM.- 2011. - N 4 (35). - P. 132-139.
