CC BY
16
УДК 616.284.7-089.874
ВЛИЯНИЕ ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА НА ПРЕОБРАЗОВАНИЯ ЭПИТЕЛИЯ В ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЙ ПОЛОСТИ ВИСОЧНОЙ КОСТИ, ПОЛУЧЕННОЙ В ХОДЕ САНИРУЮЩЕЙ ОПЕРАЦИИ НА СРЕДНЕМ УХЕ ПО ОТКРЫТОМУ ТИПУ.
Огнетов С.Ю., Кирьянов Н.А.
ФГБОУВО "Ижевская государственная медицинская академия"МЗРФ, г. Ижевск, Российская Федерация.
Аннотация: Цель. Определить, как влияет эпидермальный фактор роста на преобразования эпителия в послеоперационной полости височной кости, полученной в ходе санирующей операции на среднем ухе по открытому типу. Методы. Приведены данные литературы. В исследовании участвовал 70 пациентов. Всем участникам статистического наблюдения была произведена общеполостная санирующая операция на среднем ухе (санирующая операция по открытому типу, canal wall-down). На 7 день после операции тампон удалялся из уха. Затем пациенты были разделены на 2 группы по 35 человек. В первой группе (основная) в послеоперационном периоде использовался эпидермальный фактор роста. Вторая группа была контрольной или группой сравнения. Во второй группе местное лечение не использовалось. На 15 день в основной группе и в группе сравнения производили биопсию мягких тканей послеоперационной полости. Использовались окраска гематоксилином и эозином и иммуногистохимическое выявления ядерного антигена Ki-67.
Выводы. 1) Использование эпидермального фактора роста в послеоперационном периоде санирующей операции на среднем ухе по открытому типу значительно увеличивает количество слоев клеток в эпителии. 2) Количество клеток, экспрессирую-щих Ki 67 в основной группе (с использованием эпидермального фактора роста) значительно больше, чем в группе сравнения. 3) Преобразования эпителия в основной группе указывают на выраженную митогенную активность эпидермального фактора роста.
Ключевые слова: санирующая операция на среднем ухе по открытому типу, эпидермальный фактор роста.
Большинство отохирургов считает, что лечение хронического гнойного среднего отита с холестеато-мой может быть только хирургическим. Используется санирующая операция, направленная на полноценное удаление холестеатомы. В ходе операции на месте санированных кариозных участков среднего уха формируется трепанационная полость. Если используется закрытая методика (canal wall up), то есть задняя (костная) стенка наружного слухового прохода сохраняется, то полость остается закрытой. Если применяется открытая методика (сапа1 wall-down), то послеоперационная полость получается открытой. Последняя (полость) при нормальном ранозаживлении покрывается сначала грануляционной тканью, а потом эпидермисом. И вот тут могут возникнуть проблемы. Полноценная эпидермизация раневой поверхности в трепанаци-онной полости височной костинаступает лишь в 65— 87% случаев [1]. Некоторые авторы дают еще более печальные цифры. По данным Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи полная эпидермизация послеоперационной полости после санирующей операции на ухе наступает только в 46,5% случаев, то есть меньше чем в половине случаев! [2]
Так почему же проблема ранозаживления в хирургии уха до сих пор актуальна? Особенно эта проблема актуальна для пациентов, перенесших общеполостную санирующую операцию на среднем ухе. Причин для этого - множество.
Показанием для санирующей операции на среднем ухе является наличие хронического заболевания (хронический мезотимпанит или эпитимпанит) [3]. Значит, операция проходит на инфицированных тканях, в условиях нарушенного местного иммунитета [4]. Если в основе патологии лежит хронический гнойный эпи-тимпанит с холестеатомой, то к осложняющим факторам добавляется кариес височной кости. В ходе общеполостной санирующей операции на ухе (открытая тимпанопластика, консервативно-радикальная операция, консервативно-радикальная мастоидэктомия, canal wall-down [5]) из эпитимпанума, антрума и ячеек сосцевидного отростка создается единая послеоперационная полость, которая должна подвергнуться эпи-дермизации. Тот факт, что эти структуры (эпитимпа-нум, антрум и ячейки сосцевидного отростка) изначально покрыты слизистой оболочкой (однослойный плоский эпителий), создает дополнительные проблемы
—--—
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
для регенерации эпидермальных тканей. Послеоперационная полость должна полностью покрыться многослойным плоским ороговевающим эпителием, иначе, в будущем, не избежать обострений хронического процесса. Процесс репарации эпидермиса в костной полости является нетипичным и малоизученным. Например, в костной ране отсутствует феномен раневой контракции - планомерного концентрического стягивания краев и стенок раны, способствующий ранозаживле-нию [6]. Низкий метаболизм в костной ране также снижает скорость регенерации [7]. Все вышеперечисленное заставляет научных сотрудников и практических врачей искать способы решения данной проблемы.
Использование эпидермального фактора роста, на наш взгляд, позволяет решить эту проблему. [8]. Эпи-дермальный фактор роста (ЭФР) был первым ростовым фактором, обнаруженным еще в 1962 г. и до сих пор рассматривается как классический представитель этих биологически активных веществ. Он состоит из 53 аминокислот, соединенных тремя дисульфидными связями, имеет молекулярный вес 6 кДа. [9] Эпи-дермальный фактор роста стимулирует миграцию и пролиферацию фибробластов, кератиноцитов, эндоте-лиальных и других клеток, активно участвующих в ранозаживлении, способствуя эпидермизации. Реком-бинантный эпидермальный фактор роста входит в состав мази «Эбермин» (Эбер Биотек С.А., Куба; номер регистрации П N012569/01, от 01.10.2007).
Цель исследования. Определить как влияет эпи-дермальный фактор роста на преобразования эпителия в послеоперационной полости височной кости, полученной в ходе санирующей операции на среднем ухе по открытому типу.
Пациенты и методы исследования. В исследовании участвовал 70 пациентов, из них 37 мужчин и 33 женщины, в возрасте от 15 до 64 лет. Исследование проводилось в отделении оториноларингологии БУЗ УР "Первая республиканская клиническая больница МЗ УР". В группу исследования отбирались пациенты с диагнозом: хронический гнойный средний отит с хо-лестеатомой, кариесом кости. Всем участникам статистического наблюдения была произведена общеполостная санирующая операция на среднем ухе (санирующая операция по открытому типу, canal wall-down). Все операции выполнял один хирург, применяя стандартные методы. В ходе операции бором удалялась задняя костная стенка наружного слухового похода и латеральная стенка аттика, а также производилась ревизия барабанной полости (тимпанотомия). Холестеа-тома, грануляции и другие патологические ткани уда-
лялись. Тимпанопластика проводилась либо одномоментно, либо вторым этапом через 6 месяцев. Из костных структур (эпитимпанум, антрум и ячейки сосцевидного отростка) формировалась единая послеоперационная полость. Затем кожа задней стенки наружного слухового прохода рассекалась и укладывалась нижним лоскутом в послеоперационную полость. После этого полость выкладывалась силиконовой пленкой и тампонировалась комочками гемостатической губки. На 7 день после операции тампон удалялся из уха. Затем пациенты были разделены на 2 группы по 35 человек. В первой группе в послеоперационном периоде использовался эпидермальный фактор роста (мазь «Эбермин»). Препарат наносился в послеоперационную полость на седьмые сутки после операции на ватнике слоем 1 мм. Вторая группа (35 человек) была контрольной или группой сравнения. Во второй группе местное лечение не использовалось. На 15 день в основной группе и в группе сравнения производили биопсию мягких тканей послеоперационной полости. Материал фиксировали в 10% нейтральном забуферен-ном формалине (pH 7,4), осуществляли проводку на ги-стопроцессоре и заливали в парафин. Для гистологических и иммуногистохимических исследований изготавливали срезы толщиной 3-4 мкм. Для гистологических исследований срезы депарафинировали, регидра-тировали и окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизону. Для иммуногистохи-мических исследований использовался непрямой двух-шаговый метод, основанный на использовании немеченых первичных антител, которые после связывания с антигеном тканей выступают в роли антигена для вторичных, конъюгированных с ферментом (перокси-дазой хрена), антител. На начальном этапе срезы депа-рафинировали и регидратировали. Затем производилось температурное восстановление эпитопа (демаскировка антигена, HIER) в модуле предобработки Dako PTLink с помощью буферов FLEX Target Retrieval Solution, High pH и FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (Dako) при t°97°C в течение 20мин. Иммуногисто-химические реакции проводили в автоматизированном режиме на иммуногистостейнере AutostainerLink48 фирмы Dako
Результаты и их обсуждение. При гистологическом исследовании пласт многослойного плоского эпителия имел хорошо выраженную базальную мембрану и сохранную дифференцировку всех слоев - ба-зальный, шиповатый, промежуточный и поверхностный. Однако, в группе сравнения количество слоев в эпителии невелико и составляет не более 6-7 слоев (рис.1).
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
,,»' v*" " * У * - ''»•»' У
У4: <
Рис.1. Тонкий слой эпителиального пласта, группа сравнения. Окраска гематоксилином и эозином, х 100
Применение эпидермального фактора роста (основная группа) существенно усиливает пролиферацию
эпителия и количество слоев клеток в эпителиальном
слое увеличивается, доходя до 15-20 (рис. 2.).
Рис.2. Широкий эпителиальный пласт, основная группа. Окраска гематоксилином и эозином, х 100
При этом следует отметить интенсивную пролиферацию эпителия в виде сосочковых выростов в подлежащую ткань (акантоз), что указывает на выраженную
пролиферацию клеток базального слоя эпителиального пласта.
Рис.3. Глубокое врастание эпителия в подлежащую ткань (акантоз), основная группа. Окраска гематоксилином и эозином, х 100.
Специфичным и оптимальным для широкого использования в патологоанатомической практике маркером пролиферации является антиген Кь67. Ядерный антиген К1-67 впервые описан Gerdes и соавторами в 1983 году, он состоит из двух полипептидных цепей с молекулярной массой 345 и 395 кДа. Это основная часть нуклеарного матрикса, в течение интерфазы ассоциированная с хромосомами фазы митоза. [10] Так вот, наиболее существенные отличия в пролифератив-
ной способности эпителия при использовании эпи-дермального фактора роста и без него были обнаружены при выявлении экспрессии ядерного антигена К 67. Результат иммуногистохимического выявления антигена Кь67 представлен в виде очень четко окрашенных в темно-коричневый цвет ядер клеток.
Оказалось что количество клеток, экспрессирую-щих К 67 в основной группе составило около 50% (2 балла) (рис.4), а в группе сравнения (без эпидермаль-ного фактора роста) - менее 15% (1 балл) (рис.5).
Л
fit
- - vi; * ж
t -
»r»
ф т , * '
*л$ V .»* >» * -J
Ц . * »'
i M
Рис. 4 Количество клеток, экспрессирующих К 67 в основной группе составило около 50%
- V'
.«.V '
f 4 I ь
• • л:*
м
* •
/ * ~ ■ ъ> .»V
> - ' г- fe.
»
* ' V
Рис. 5 Количество клеток, экспрессирующих К 67 в группе сравнения было менее 15%
Выводы.
1) Использование эпидермального фактора роста в послеоперационном периоде санирующей операции на среднем ухе по открытому типу значительно увеличивает количество слоев клеток в эпителии.
2) Количество клеток, экспрессирующих К 67 в основной группе (с использованием эпидермаль-ного фактора роста) значительно больше, чем в группе сравнения.
3) Преобразования эпителия в основной группе указывают на выраженную митогенную активность эпидермального фактора роста.
ЛИТЕРАТУРА
1. Семенов Ф.В., Ридненко В.А., Немцева С.В. Анализ некоторых причин рецидива хронического гнойного среднего отита в послеоперационном периоде. // Вестник оториноларингологии. 2005. №3. С.48-49
2. Янов Ю.К., Ситников В.П., Аникин И.А. [и др.] Болезнь оперированного уха: клиническая характеристика и па-томорфологическое обоснование // Российская оториноларингология. 2005. №. 4. С.149 -154
3. Пальчун В.Т. Оториноларингология: национальное руководство М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 960 с.
4. Ярилин А.А. Иммунология: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010, 752 с.
5. Тос Мирко Руководство по хирургии среднего уха. Т.2. Хирургия сосцевидного отростка и реконструктивные операции. Пер. с англ. А.В. Давыдова. под ред. А.В. Старохи Томск, Сибирский государственный медицинский университет, 2005, 436 с.
6. Кузин М.И. Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей. М.: Медицина, 1990. 592 с.
7. Белоусов А. Е. Пластическая, реконструктивная и эстетическая хирургия. СПб: Гиппократ, 1998. 744 с.
8. Огнетов С.Ю., Кравчук А.П. Способ эпидермизации послеоперационной полости у пациентов, перенесших общеполостную санирующую операцию на среднем ухе // «Здоровье и образование в XXI веке». 2017. Т.19, №2. С.36-40
9. Никитина З.К. Научно-методические основы комплексной технологии получения биологически активных веществ из рекомбинантных штаммов - продуцентов эпи-дермального фактора роста.: дис. ... д-р биол.наук Москва, 2000. 299 с.
10. Иммуногистохимические методы: руководство. Пер. с англ. под ред. Г.А. Франка и П.Г. Малькова // М., 2011. 224 с.
INFLUENCE OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR ON THE TRANSFORMATION OF EPITHELIUM IN THE POSTOPERATIVE CAVITY OF THE TEMPORAL BONE OBTAINED IN THE COURSE OF A CANAL WALL DOWN MASTOIDECTOMY.
Ognetov S. Y., Kiryanov N.A.
Izhevsk State Medical Academy, Izhevsk, Russian Federation.
Annotation: Objective. Determine how the epidermal growth factor affects the epithelial transformation in the postoperative cavity of the temporal bone obtained during canal wall down mastoidectomy.
Methods. The literature data are presented. The study involved 70 patients. All participants in the statistical observation were subjected to a canal wall down mastoidectomy. On the 7th day after the operation, the swab was removed from the ear. Then the patients were divided into 2 groups of 35 people each. In the first group (main group), the epidermal growth factor was used in the postoperative period. The second group was a control group or a comparison group. In the second group, no local treatment was used. On day 15 in the main group and in the comparison group, a soft tissue biopsy of the postoperative cavity was performed. The staining with hematoxylin and eosin and immunohistochemical detection of the nuclear antigen Ki-67 were used.
Conclusions. 1) The use of epidermal growth factor in the postoperative period of canal wall down mastoidectomy significantly increases the number of cell layers in the epithelium. 2) The number of cells expressing Ki 67 in the main group (using epidermal growth factor) is significantly higher than in the comparison group. 3) Transformation of the epithelium in the main group indicates a pronounced mitogenic activity of the epidermal growth factor. Key words: canal wall down mastoidectomy, epidermal growth factor
REFERENCES
1 Semenov F.V., Ridnenko V.A., Nemceva S.V. Analiz nekotoryh prichin recidiva hronicheskogo gnojnogo srednego otita v posleoperacionnom periode. // Vestnik otorinolaringologii. 2005. №3. S.48-49
2 Janov Ju.K., Sitnikov V.P., Anikin I.A. [i dr.] Bolezn' operirovannogo uha: klinicheskaja harakteristika i patomorfolo-gicheskoe obosnovanie // Rossijskaja otorinolaringologija. 2005. №. 4. S.149-154
3 Pal'chun V.T. Otorinolaringologija: nacional'noe rukovodstvo M.:GJeOTAR-Media, 2008.- 960 s.
4 Jarilin A.A. Immunologija: uchebnik. M.: GJeOTAR-Media, 2010, 752 s.
5 Tos Mirko Rukovodstvo po hirurgii srednego uha. T.2. Hirurgija soscevidnogo otrostka i rekonstruktivnye operacii. Per. s angl. A.V. Davydova. pod red. A.V. Starohi Tomsk, Sibirskij gosudarstvennyj medicinskij universitet, 2005, 436 s.
6 Kuzin M.I. Rany i ranevaja infekcija: Rukovodstvo dlja vrachej. M.: Medicina, 1990. 592 s.
7 Belousov A. E. Plasticheskaja, rekonstruktivnaja i jestet-icheskaja hirurgija. SPb: Gippokrat, 1998. 744 s.
8 Ognetov S.Ju., Kravchuk A.P. Sposob jepidermizacii posleoperacionnoj polosti u pacientov, perenesshih obshhepo-lostnuju sanirujushhuju operaciju na srednem uhe // «Zdorov'e i obrazovanie v XXI veke». 2017. T.19, №2. S.36-40
9 Nikitina Z.K. Nauchno-metodicheskie osnovy kom-pleksnoj tehnologii poluchenija biologicheski aktivnyh veshhestv iz rekombinantnyh shtammov - producentov jepidermal'nogo faktora rosta.: dis. ... d-r biol.nauk Moskva, 2000. 299 s.
10 Immunogistohimicheskie metody: rukovodstvo. Per. s angl. pod red. G.A. Franka i P.G. Mal'kova // M., 2011. 224 s.
