CC BY
56
Клещина Ю.В.
Гигиеническая оценка производственной практики подростков по профессии помощник машиниста подвижного состава железнодорожного транспорта......................................69
Романовская Л.М., Миронов А.Ю., Попова Л.Д., Романовская К.Е.
Опыт открытия новой бактериологической лаборатории в городе Люберцы Московской области...
...........................................75
ХРОНИКА
Костромина Т.А.
Всероссийская учебно-научно-методическая конференция "Научные и методические проблемы медицинской и фармацевтической терминологии" для заведующих кафедрами (курсами) латинского языка и основ терминологии с элементами повышения квалификации (2-7 октября 2006 г., Курск).....................................81
НЕКРОЛОГ
Александр Васильевич Завьялов..............84
Kleshchina Yu.V.
The hygienic estimation of industrial practice of the teenagers as the engine-driver assistant of the railway
rolling-stock........................................
...................................................69
Romanovskaya L.M., Mironov A. Yu., Popova L.D., Romanovskaya K.E.
Experience of establishing new bacteriological laboratory in town of Lyubertsy of Moscow region..........
...................................................75
REVIEW
Kostromina T.A.
The all-Russian educational-scientific-methodic conference "The scientific and methodic problems of medical and pharmaceutical terminology" for heads of the Latin language and principles of terminology chairs (courses) with the elements of raising professional skills (2-7 October, 2006, Kursk).............
...................................................81
OBITUARY NOTICE
Alexander Vassilievich Zavyalov....................84
ВЛИЯНИЕ АНАЛОГА ГОНАДОТРОПИН-РИЛИЗИНГ ГОРМОНА СУРФАГОНА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНОВ ИММУННОЙ И ЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМ МЫШЕЙ
© Бобынцев И.И., Должиков А.А., Северьянова Л.А.
Кафедра патофизиологии Курского государственного медицинского университета;
*
кафедра анатомии и гистологии человека Белгородского государственного университета,
Белгород
Высокоактивный синтетический аналог гонадотропин-рилизинг гормона сурфагон в дозе 0,1 мкг/кг вызывал у мышей-самцов линии СВА усиление миграции лимфоцитов из В-зон селезенки, умеренное уменьшение толщины коры тимуса, увеличение ширины пучковой зоны коры надпочечников с признаками активизации кортикоцитов. При дозе 5 мкг/кг изменялись Т-зоны селезенки, толщина коры тимуса резко уменьшалась, а в надпочечниках увеличивалась ширина клубочковой зоны. Сохранение эффектов пептида после кастрации свидетельствует о стероидонезависимом характере выявленных морфофункциональных изменений в органах иммунной и эндокринной систем.
Ключевые слова: аналог гонадотропин-рилизинг гормона, тимус, селезенка, надпочечники, кастрация, морфологические изменения.
INFLUENCE OF SYNTHETIC ANALOGUE OF GONADOTROPIN-RELEASING HORMONE (SURFAGON) ON MORPHOFUNCTIONAL STATE OF IMMUNE AND ENDOCRINE
SYSTEMS' ORGANS IN MICE Bobyntsev I.I., Dolzhikov A.A., Severyanova L.A.
Pathophysiology Department of the Kursk State Medical University;
The Department of Human Anatomy and Histology of the Belgorod State University, Belgorod;
The synthetic analogue of Gonadotropin-releasing hormone Surfagon was administered in mice-male of CBA line in dose of 0.1 mkg/kg and caused intensification of lymphocytes migration from B-zones of spleen, moderate decrease in thymus cortex thickness, increase in reticular zone width of adrenal cortex with the signs of cortico-cytes activation. In dose 5 mkg/kg T-zones of spleen were changed, thymus cortex thickness was significantly decreased, but in adrenal glands the increase in glomerular zone width was determined. The preservation of peptide effects after castration was evidence of steroid independent character of the revealed morphofunctional changes in organs of immune and endocrine systems.
Key words: Gonadotropin-releasing hormone analogue, thymus, spleen, adrenal glands, castration, morphological changes.
В предыдущих исследованиях нами были установлены выраженные нейротропные [1, 4] и иммунные [2, 3] эффекты высокоактивного аналога гонадотропин-рилизинг гормона (Гн-РГ) сурфагона. Учитывая высокую биологическую активность сурфагона в отношении регуляторных систем организма, представлялось целесообразным выявление возможных структурных изменений в органах иммунной и эндокринной систем после введения пептида. Актуальность работы обусловлена также и все более широким использованием аналогов Гн-РГ в клинической практике. Целью настоящего исследования являлось изучение морфологических измене-
ний в тимусе, селезенке и надпочечниках мышей после многократного введения сурфа-гона.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты выполнены на мышах-самцах линии СВА массой 20-22 г, разделенных на группы по 10 животных. Сурфагон (пГ лю-Гис-Трп-Сер-Тир-Б-Ала-Лей-Арг-Про -этиламид) синтезирован в Кардиологическом научном центре РАМН. Пептид вводили внутрибрюшинно в дозах 0,1 и 5 мкг/кг 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней. Контроль-
б
ные группы получали эквивалентный объем физиологического раствора.
Мышей забивали путем передозировки эфирного наркоза и рассчитывали индекс массы тимуса, селезенки и надпочечников (отношение массы органа к массе тела животного в мг/г). Для дальнейшего исследования органы фиксировали иммерсионным способом в 10% формалине, материал заливали в парафин по стандартной методике, окраску срезов производили гематоксилином и эозином. Серийные срезы надпочечников и тимуса изготавливали во фронтальной плоскости, селезенки - через среднюю часть пульпы тангенциально к поверхности. Морфометрическое исследование выполняли на цифровых изображениях микроструктур, полученных с помощью микроскопа "Биомед-2" со стандартным адаптером и цифровых фотокамер "NikonCoolpix 4500" и "RowerShot-515z". Для обработки полученных данных использовали пакет программ для компьютерного анализа "WCIF Image J-1.341" (National Institutes of Health, USA). Измеряли диаметры фолликулов селезенки, толщину зон коры надпочечников, толщину коркового вещества тимуса, диаметры тимических телец (телец Гассаля). Суммарно в каждой серии производили не менее 30 измерений каждого объекта. Для морфометрии надпочечников выбирали строго срединные срезы, фолликулы селезенки измеряли только при наличии в них строго поперечных срезов артерий.
Опыты были поставлены на интактных и кастрированных животных. Кастрацию выполняли под гексеналовым наркозом через срединный разрез мошонки. Животные поступали в опыт через 12 дней после операции.
Достоверность полученных результатов определяли по t-критерию Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Установленные в подопытных группах интактным животным морфологические изменения зависели от дозы препарата после введения сурфагона. Так, в меньшей дозе пептид вызывал сдвиги основных морфометрических параметров во всех исследованных органах, в большей же дозе они проявлялись только в тимусе.
При использовании пептида в дозе 0,1 мкг/кг в селезенке наблюдалось достоверное уменьшение диаметров фолликулов (на 17%) наряду с изменением их структуры в виде лимфоцитарного опустошения мантийной и центральной зон. Пульпа селезенки приобретала за счет этого более однородное строение с наличием в достаточной степени различимых лимфоидных скоплений только в окружности артерий (рис. 1, а). В совокупности с уменьшением массы органа (табл. 1) данные сдвиги являются свидетельством усиления миграции лимфоидных элементов, прежде всего из В-зон.
Морфологические изменения тимуса соответствовали 1 фазе акцидентальной трансформации, проявившейся как достоверным уменьшением массы на 21%, так и характерными микроскопическими признаками в виде истончения (на 46 %, р < 0,05) и неоднородности толщины коры с наличием в ней широких участков разряжения, относительным увеличением объема мозгового вещества (рис. 1, б). Существенных отличий ретикуло-эпителиальных элементов и телец Гассаля не наблюдалось. Отмеченное увеличение массы надпочечников (табл. 2), по данным микроскопического исследования связано как с неспецифическим усилением кровенаполнения коры и мозгового вещества (рис. 1, в), так и с изменениями структуры коры, более явными в ее пучковой зоне. Последние заключались в достоверном увеличении ширины данной зоны на 22% , сопровождавшемся признаками активизации кортикоцитов в виде их укрупнения за счет обильной интенсивно окрашенной цитоплазмы, в меньшей части клеток мелкопузырчатой и вакуолизированной.
После введения большей дозы сурфагона индекс массы селезенки существенно не изменялся, пульпа характеризовалась диффузным рисунком, высокой клеточной плотностью, но без формирования четко очерченных фолликулов (рис. 2, а). Кроме того, наблюдалось диспергирование периартериальных Т-зон. Закономерными и соответствующими картине акцидентальной трансформации лимфоидных органов явились прогрессировавшие в данной серии эксперимента изменения тимуса (рис. 2, б). Средняя толщина коры была уменьшена более чем в 3 раза, ее структура характеризовалась нечеткими граница-
Рис. 1. Морфологические изменения селезенки (а), тимуса (б) и надпочечников (в) после введения сурфагона в дозе 0,1 мкг/кг интактным животным: а - стертость структуры фолликулов, узкие периартериальные зоны, б - неравномерная ширина, лимфоидное опустошение коры тимуса, в - полнокровие мозгового вещества надпочечника. Окраска гематоксилином и эозином. x 200.
ми, обширными очагами лимфоцитарного опустошения, участками, создающими картину близкую к инверсии распределения лимфоидных элементов, что свойственно 2-3 стадии акцидентальной трансформации. В мозговом веществе сформированные тельца Гассаля не определялись. В надпочечниках отмечено небольшое, но достоверное увели-
чение ширины клубочковой зоны.
Таким образом, у интактных животных в подопытных группах наблюдались во многом различные морфологические изменения в исследованных органах. При меньшей дозе пептида в селезенке усиливалась миграция лимфоцитов из В-зон, в тимусе умеренно снижалась толщина коры, в надпочечниках увели-
S
Таблица 1
Морфологические изменения в тимусе и селезенке (М±т) после введения сурфагона
Серии, группы Показатели Контроль (п=10) Сурфагон 0,1 мкг/кг (п=10) Сурфагон 5 мкг/кг (п=10)
Интактные
Индекс массы тимуса 1,019±0,072 0,803+0,051* 0,633+0,105*
Индекс массы селезенки 3,25+0,14 3,06+0,11 3,26+0,05
Диаметр фолликулов селезенки 298,3±2,5 246,1+2,0* 302,1+1,8
Ширина коры тимуса 296,6+2,6 160,3+1,5* 94,3+1,1*
Кастрированн ые
Индекс массы тимуса 1,734±0,1251 1,307+0,157* 1,594+0,099
Индекс массы селезенки 3,81+0,111 3,57+0,15 3,28+0,16*
Диаметр фолликулов селезенки 299,2±2,4 254,9+1,4* 265,9+2,2*
Ширина коры тимуса 116,3+2,81 295,2+2,6* 187,6+2,7*
Примечание: * - р<0,05-0,001 в сравнении с показателями контрольной группы; 1 - в сравнении с показателями контрольной группы интактных животных.
чивалась ширина пучковой зоны с признаками активизации кортикоцитов. Напротив, при большей дозе в селезенке изменения происходили в Т-зонах, толщина тимуса резко уменьшалась, а в надпочечниках увеличивалась ширина клубочковой зоны.
Изменения лимфоидных органов и надпочечников у кастрированных животных характеризовались как уже отмеченным увеличением относительных масс, так и соответствующими им морфометрическими сдвигами. В селезенке в сравнении с интактным контролем не произошло достоверных изменений диаметров фолликулов, однако их структура характеризовалась компактным расположением лимфоидных элементов, отсутствием зональности, наблюдалась умеренная лимфоидная инфильтрация прилежащих зон красной пульпы - зон миграции. Красная пульпа характеризовалась преимущественно миелоидным клеточным составом, что наряду с охарактеризованными особенностями фолликулов привело к усилению рисунка паренхимы органа. Толщина коры тимуса уменьшилась более чем вдвое, отмечены признаки ранних стадий акцидентальной трансформации. В надпочечниках существенно уменьшалась ширина клубочковой зоны (в 2,5 раза) при увеличении пучковой с общей стертостью рисунка коркового вещества, в мозговом веществе наблюдалось диффузное веноз-
ное полнокровие с очагами периваскулярного отека.
Введение сурфагона кастрированным животным наиболее существенно отразилось на структуре тимуса и селезенки. При этом в зависимости от дозы выявлена в определенной степени противоположная динамика изменений морфометрических параметров лимфоидных структур этих органов: в селезенке диаметры фолликулов были более приближены к интактным при использовании большей дозы пептида, параметры же лимфоидной ткани тимуса - при меньшей. В надпочечниках в целом сохранялся комплекс неспецифических изменений, однако при введении сур-фагона в дозе 5 мкг/кг в большей степени восстанавливалась зональность строения коры, ширина клубочковой зоны соответствовала таковой в интактном контроле. При этом ширина пучковой зоны достоверно уменьшалась, а клубочковой возрастала в 2,5 раза. Сохранение эффектов сурфагона в исследованных органах после кастрации свидетельствует о возможности их реализации без участия половых стероидов.
Таким образом, многократное введение высокоактивного аналога Гн-РГ сурфагона вызывало существенные морфологические изменения в тимусе, селезенке и надпочечниках. Установленные выраженные структурные сдвиги в тимусе после введения сурфа-
Рис. 2. Морфологические изменения селезенки (а) и тимуса (б) после введения сурфагона в дозе 5 мкг/кг интактным животным. Окраска гематоксилином и эозином. x 200.
Таблица 2
Морфологические изменения в надпочечниках ^±m) после введения сурфагона
' '——Показатели Серии, группы ' ■—— Индекс массы Ширина клубочковой зоны Ширина пучковой зоны
Интактные
Контроль (n=10) G,225±G,G16 34,6±G,4 129,9±G,9
Сурфагон G,1 мкг/кг (п=10) G,28G±G,G2* 34,9±G,5 158,6±1,4*
Сурфагон 5 мкг/кг (n=10) G,281±G,G17* 37,2±G,3* 131,6±G,8
Кастрированные
Контроль (n=10) G,263±G,G2 12,6±G,5i 198,2±1,Gi
Сурфагон G,1 мкг/кг (n=10) G,367±G,G13* 13,8±G,4 196,8±3,1
Gурфагон 5 мкг/кг (n=10) G,357±G,018* 34,8±1,1* 186,G±2,4*
Примечание: * - р<0,05-0,001 в сравнении с показателями контрольной группы; 1 - в сравнении с показателями контрольной группы интактных животных.
гона и кастрации являются подтверждением тесных взаимоотношений между данным органом и гипоталамо-гипофизарно-гонадаль-ной системой (ГГГС) [10, 11, 13]. В частности, специфическое связывание с рецепторами в тимусе установлено как для природной молекулы Гн-РГ, так и для высокоактивных аналогов. Длительное введение агонистов Гн-РГ восстанавливает связанное с возрастом
снижение массы тимуса, количество рецепторов к Гн-РГ и пролиферативную способность Т-лимфоцитов у крыс [7]. Кроме того, Гн-РГ и его аналоги оказывают влияние на продукцию пептидных факторов тимоцитами [6] и повышают их пролиферативный ответ на ми-тоген конканавалин-А [8]. В свою очередь установлено, что тимоциты крыс продуцируют Гн-РГ, идентичный по аминокислотному
