CC BY
26
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2017 - V. 24, № 3 - P. 53-59
Раздел II
КЛИНИКА И МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И ИНСТРУМЕНТАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА. НОВЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ
УДК: 616-092.4 DOI: 10.12737/artide_59c49f935dc671.92341270
ВКЛАД ц-ОПИОИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ В ПОВЫШЕНИЕ ТОЛЕРАНТНОСТИ МИТОХОНДРИЙ
МИОКАРДА К ИШЕМИИ И РЕПЕРФУЗИИ ПОСЛЕ ХРОНИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ
Е.С. ПРОКУДИНА*, Ю.В. БУШОВ**
'Научно-исследовательский институт кардиологии, Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук, пер. Кооперативный, д. 5., г. Томск, 634009, Россия,
e-mail: [email protected] ''Томский государственный университет, пр. Ленина, 36, Томск, Томская обл., 634050, Россия,
e-mail: [email protected]
Аннотация. Исследовали участие кардиальных р-опиоидных рецепторов (ОР) в повышении толерантности миокардиальных митохондрий к действию глобальной ишемии и реперфузии на изолированные сердца у крыс, адаптированных к хронической непрерывной нормобарической гипоксии. Крыс адаптировали к хронической нормобарической гипоксии непрерывно в течение 21 дня при 12% О2. Изолированные сердца животных контрольных групп подвергали нормоксической перфузии в течение 95 минут; на изолированных сердцах у крыс экспериментальных групп моделировали глобальную ишемию (45 минут) и реперфузию (30 минут). Адаптация к хронической непрерывной нор-мобарической гипоксии препятствовала снижению постишемических значений параметров дыхания митохондрий, трансмембранного потенциала и содержания АТФ в миокарде левого желудочка. Кроме того, после курса хронической непрерывной нормобарической гипоксии увеличивалась устойчивость МРТ-пор изолированных митохондрий к ишемии-реперфузии. Перфузия изолированных сердец адаптированных крыс раствором пептида СТАР (100 нМ/л, селективный р-ОР-антагонист) устраняла кардиопротекторное действие хронической непрерывной нормобарической гипоксии. Полученные данные свидетельствуют, что кардиальные р-опиоидные рецепторы вносят существенный вклад в повышение толерантности митохондрий миокарда к ишемии-реперфузии после адаптации крыс к хронической непрерывной нормобарической гипоксии.
Ключевые слова: миокард, митохондрии, хроническая гипоксия, р-опиоидные рецепторы, ишемия-реперфузия.
CONTRIBUTION OF ц-OPIOID RECEPTORS IN THE INCREASED TOLERANCE OF MYOCARDIAL MITOCHONDRIA TO ISCHEMIA AND REPERFUSION AFTER CHRONIC
HYPOXIA
E.S. PROKUDINA*, U.V. BUSHOV**
' Research Institute of Cardiology, Tomsk National Research Medical Center, Russian Academy of Sciences, Per.
Co-operative, 5, Tomsk, 634009, Russia, E-mail: [email protected] '' Tomsk State University, Lenin Ave., 36, Tomsk, Tomsk region, 634050, Russia,E-mail: [email protected]
Abstract. It was investigated the involvement of cardiac p-opioid receptor (OR) in improving myocardial mitochondrial tolerance to the action of the global ischemia and reperfusion on the isolated hearts in rats adapted to chronic continuous normobaric hypoxia (CCNH). Rats were subjected to chronic continuous normobaric hypoxia for 21 days at 12% O2. Isolated hearts of control animals were subjected to normoxic perfusion for 95 minutes; on isolated hearts of rats from experimental groups was simulated global ischemia
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2017 - V. 24, № 3 - P. 53-59
(45 min) and reperfusion (30 minutes). Adaptation to chronic continuous normobaric hypoxia prevented the reduction in post-ischemic values of the parameters of mitochondrial respiratory, membrane potential and ATP content in the myocardium of the left ventricle. In addition, after the course CCNH increased stability MRT-pore of isolated mitochondria to ischemia-reperfusion. Perfusion of isolated hearts of adapted rats with CTAP (100 nM/l, selective p-OR-antagonist) eliminated the cardioprotective effects of chronic continuous normobaric hypoxia. This data suggest that cardiac p-opioid receptors contribute significantly to improving the tolerance of myocardial mitochondria to ischemia-reperfusion in rats adapted to chronic continuous normobaric hypoxia.
Key words: myocardium, mitochondria, chronic hypoxia, p-opioid receptors, ischemia-reperfusion.
Введение. Ишемическая болезнь сердца и острый инфаркт миокарда являются основными причинами смертности и инвалидицазии населения в России [2]. В основе патогенеза этих заболеваний лежит ишемическое-реперфузионное повреждение миокарда. Этот тип повреждения сердца характеризуется возникновением реперфузионных аритмий, нарушением функции эндотелия, сократительной дисфункцией миокарда (феномен «оглушенного миокарда») и некротической гибелью кар-диомиоцитов [6]. Несмотря на многолетний накопленный опыт лечения инфаркта миокарда, эффективность принимаемых мер остается недостаточной. Например, до сих пор не разработано высокоэффективных патогенетически обоснованных методов терапии и профилактики ишемических-реперфузионных повреждений сердца. Определенный успех в этом направлении достигается при адаптации организма к таким экстремальным воздействиям, таким как гипоксия, стресс, холод [12]. Внутриклеточные механизмы формирования повышенной устойчивости сердца к ишемии и ре-перфузии после длительного гипоксического воздействия остаются мало изученными. Принято считать, что ключевую роль в этом играет перестройка энергетического метаболизма в митохондриях [1]. Известно, что индукция апоптоза и некроза кардиомиоцитов во многом определяется состоянием митохондриальных пор переменной проницаемости, mitochondrial permeability transition pore (МРТ-пор). Вместе с тем, остается неясной взаимосвязь функционального состояния митохондрий с механизмами повышения толерантности кардиомио-цитов к ишемии и реперфузии, и какой вклад в этот процесс вносят различные субтипы карди-альных опиоидных рецепторов. Ранее было продемонстрировано, что опиоидные рецепторы принимают участие в реализации инфаркт-лимитирующего и цитопротекторного эффек-
тов при адаптации к хронической непрерывной нормобарической гипкосии [3,10].
Цель исследования - оценить вклад ц-опиоидных рецепторов (ОР) в повышение устойчивости дыхания, трансмембранного потенциала, синтеза АТФ и МРТ-пор митохондрий к открытию при моделировании глобальной ишемии и реперфузии изолированного сердца после адаптации крыс к хронической непрерывной нормобарической гипоксии (ХННГ).
Материалы и методы исследования. Исследование проведено на самцах крыс линии Вистар массой 200-250 г. Все эксперименты выполнялись в соответствии с рекомендациями, изложенными в Приказе МЗ СССР за № 755 от 12 августа 1977 г., а также принятыми в Хельсинской декларации 1975 г. и дополненными в 1983 г. Болезненные процедуры выполнялись на животных под эфирным наркозом. Было сформировано 6 групп животных, по 12 особей в каждой группе (всего 72). Крысы из неадаптированных групп содержались в стандартных условиях вивария с постоянным доступом к воде и пище. Животных адаптированных к гипоксии групп подвергали непрерывному воздействию в течение 21 дня хронической гипоксии при 12% О2, 0,03% СО2 и нормальном атмосферном давлении [10]. Давление О2 и СО2 внутри гипоксической камеры регулировалось системой «Био-нова-204С4#1» (НТО «Био-нова»). У крыс, наркотизированных ди-этиловым эфиром, извлекали сердца и помещали в охлажденный до 4°С раствор Кребса-Хензелайта. Аорту канюлировали и перфузиро-вали сердце по методу Лангендорфа буфером Кребса-Хензелайта. Изолированные сердца ин-тактных неадаптированных и адаптированных к ХНГ особей подвергались нормотермической перфузии в течение 95 минут. Глобальную ишемию моделировали с помощью полного прекращения подачи буферного раствора на 45 минут с последующей 30-минутной репер-
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2017 - V. 24, № 3 - P. 53-59
фузией. Для оценки участия р-опиоидных рецепторов в реализации защитного эффекта ХННГ за 10 минут до моделирования глобальной ишемии изолированные сердца перфузи-ровали раствором селективного антагониста р-ОР пептида СТАР в концентрации 100 нМ/л [9].
Процедуру изоляции митохондрий проводили из миокарда желудочков методом дифференциального центрифугирования согласно методике, описанной ранее [4]. Содержание белка в суспензии митохондрий определяли по методу Брэдфорд [5].
Оценку параметров дыхания митохондрий проводили по уровню поглощения ими кислорода методом полярографии с использованием электрода ДКТП-02.4 и оксиметра «Эксперт-001» (Эконикс-эксперт, Москва, Россия) в тер-мостатируемой камере при температуре 25° С [13]. Среда инкубации митохондрий имела следующий состав: 180 мМ сахарозы, 70 мМ ман-нитола, 5 мМ КН2РО4, 5 мМ MgCb, 10 мМ Hepes, рН 7,37. Скорость поглощения кислорода измеряли в присутствии НАДН-зависимых субстратов - 3 мМ малата и 3 мМ пирувата (состояние 2, V2) - и после добавления 200 нМ АДФ (состояние 3, АДФ-стимулированное дыхание, V3), а также в момент завершения синтеза АТФ (состояние 4, V4). Эффективность дыхания вычисляли по соотношению количественных величин добавленного АДФ и поглощенного в течение состояния 3 кислорода (коэффициент АДФ/О).
Измерение трансмембранного потенциала митохондрий (Ду) проводили с использованием катионного флюоресцентного зонда TMRE (tetramethylrhodamine ethyl ester) на спектроф-люориметре «Shimadzu RF-5301-PC» при длинах волн возбуждения 550 нм и излучения 575 нм [11] в буфере, содержащем 200 мМ сахарозы, 10 мМ трис-HCl, 1 мМ КН2РО4, 10 мкМ EGTA, 0,3 мМ пирувата, 0,3 мМ малата, рН 7,4 при 25 °С. Конечная концентрация TMRE составляла 150 нмоль/л, содержание митохондрий -1 мг/мл [13]. При добавлении 0,1 мкМ разобщителя FCCP - Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone наблюдалось падение значения Ду. Величину трансмембранного потенциала оценивали по падение флюоресценции при добавлении FCCP.
Синтез АТФ митохондриями оценивали по измерению содержания АТФ в миокарде левого желудочка сердца крысы. Анализ проводили
хемилюминисцентным методом с использованием наборов «ATP Bioluminescent Assay Kit» (Sigma-Aldrich, США) на хемилюминометре Lucy-2 (Anthos Labtec Instruments, Salzburg, Austria). Фрагменты миокарда левого желудочка массой 80-100 мг замораживали в жидком азоте, затем гомогенизировали с 2 мл 3% три-хлоруксусной кислоты, охлажденной до 2 еС. Гомогенат центрифугировали 10 минут при 3000 g. Супернатант нейтрализовали 1M Trizma base [7], и определяли в ней концентрацию АТФ. Интенсивность люминесценции образца прямо пропорциональна содержанию в нем АТФ [14].
Показателем оценки состояния МРТ-поры служила кальций-связывающая способность (КСС) митохондрий, которую определяли с помощью флюоресцентного кальций-чувствительного зонда Calcium Green-SN («Invitrogen, Molecular Probes Inc.») при длинах волн возбуждения 506 нм и излучения 532 нм [13] на спектрофлюориметре «Shimadzu RF-S301-PC». Среда инкубации содержала (в мМ): 200 сахароза, 10 трис-HCl, 1 КН2РО4, 0,01 M EGTA, 0,3 пирувата, 0,3 малата, рН 7,4 (25 °С, объем 3 мл), при концентрации Calcium Green-SN 100 нМ и митохондрий 1 мг/мл. К суспензии митохондрий дробно добавляли по 100 нМ CaCl2. КСС митохондрий вычисляли по максимальному количеству аккумулированного митохондриями Са2+ в пересчете на 1 мг митохон-дриального белка [4].
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы «Statistica 8.0». Рассчитывали среднее арифметическое (М) и стандартную ошибку среднего (SEM). Достоверность различий между группами оценивали с помощью критерия Манна-Уитни. Критическим принимался уровень значимости р<0,05.
Результаты и их обсуждение. Оценка функционального состояния миокардиальных митохондрий показала отсутствие достоверных различий по исследуемым показателям дыхания, трансмембранного потенциала и содержания АТФ в миокарде левого желудочка между интактными неадаптированными и адаптированными особями (табл. 1, 2). Моделирование глобальной 45-минутной ишемии и 30-минутной реперфузии изолированного сердца приводило к значительному снижению АДФ-стимулированной скорости дыхания митохонд-
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2017 - V. 24, № 3 - P. 53-59
рий (Уз) по сравнению с таковым значением у интактных животных (табл. 1). Наряду с этим у неадаптированных животных после ишемии-реперфузии было зарегистрировано достоверное снижение коэффициента АДФ/О, что свидетельствует о разобщении процессов окисления и фосфорилирования в митохондриях (табл. 1). У адаптированных к ХННГ крыс моделирование ишемии и реперфузии изолированного сердца не приводило к столь выраженным изменениям - показатели НАДН-зависимого дыхания митохондрий значимо не отличались от таковых в группе интактных особей (табл. 1). Это свидетельствует о защитном действии адаптации к ХННГ, вероятно, связанным с синтезом компонентов дыхательной цепи, способных с большей эффективностью утилизировать кислород даже после воздействия на миокард ишемии и ре-перфузии [1]. Перфузия изолированных сердец неадаптированных крыс раствором антагониста СТАР не влияла на исследуемые показатели ми-тохондриального дыхания (табл. 1). Однако у адаптированных к ХННГ животных селективная блокада кардиальных р-опиоидных рецепторов пептидом СТАР устраняла защитный эффект адаптации - наблюдалось достоверное снижение АДФ-стимулированной скорости дыхания митохондрий (Уз), а также значимое снижение коэффициента АДФ/О (табл. 1). Это позволяет сделать вывод о том, что кардиальные р-опиоидные рецепторы участвуют в повышении устойчивости дыхания митохондрий при действии ишемии и реперфузии в условиях адаптации к хронической непрерывной нормобариче-ской гипоксии.
Значение трансмембранного потенциала (Ду) митохондрий, выделенных из миокарда неадаптированных животных после окончания ишемии-реперфузии, оказалось в 2,3 раза ниже, чем в сердцах интактных крыс (табл. 2). Такие изменения могут происходить в результате повреждения комплексов дыхательной цепи митохондрий активными формами кислорода, образующимися в период реперфузии, а также нарушения целостности внутренней мембраны митохондрий в результате образования в них неспецифических пор переменной проницаемости (МРТ-пор) [8]. У адаптированных к хронической гипоксии особей моделирование ишемии и реперфузии не приводило к такому падению значения Ду, трансмембранный потенциал оставался на том же уровне, что и в
группе интактных крыс (табл. 2). Однако селективная блокада кардиальных р-опиоидных рецепторов пептидом СТАР устраняла проявление кардиопротекторного эффекта ХННГ -значения трансмембранного потенциала снижались и были сопоставимы с таковыми у неадаптированных крыс после ишемии и репер-фузии сердца (табл. 2). Перфузия изолированных сердец неадаптированных крыс селективным антагонистом р-ОР не влияла на пости-шемические значения трансмембранного потенциала. Таким образом, активация карди-альных р-опиоидных рецепторов вносит существенный вклад в повышение устойчивости трансмембранного потенциала митохондрий к действию ишемии и реперфузии в условиях адаптации к хронической непрерывной нормо-барической гипоксии.
Таблица 1
Параметры дыхания изолированных митохондрий миокарда у неадаптированных и адаптированных к хронической непрерывной нормобарической гипоксии крыс (M±SEM)
Группа Неадаптированные Адаптированные
Уз У4 АДФ/О Уз У4 АДФ/О
Интактные 173±14 84±11 2,3±0,1 194±16 84±6 2,3±0,1
ИР 118±10 Р1=0,01 69±7 1,5±0,1 Р1=0,005 173±12 79±5 2,1±0,1 р2=0,003
СТАР + ИР 106±2 83±6 1,6±0,1 118±5 рз=0,002 88±5 1,7±0,1 рз=0,002
Примечание: интактные - группа крыс с нормокси-ческой перфузией изолированных сердец. ИР -группа крыс с моделированием глобальной 45-минутной ишемии и 30-минутной реперфузии изолированных сердец. СТАР - селективный антагонист р-ОР (100 нМ/л). Уз - скорость дыхания митохондрий в состоянии 3 (нМ О2/мг белка в минуту); У4 -скорость дыхания митохондрий в состоянии 4 (нМ 02/мг белка в минуту); АДФ/О - эффективность дыхания (нМ АДФ/нМ атом [О]). р1 - уровень значимости при сравнении с группой «Неадаптированные, Интактные»; р2 - уровень значимости при сравнении с группой «Неадаптированные, ИР»; рз - уровень значимости при сравнении с группой «Адаптированные, ИР». Количество особей (п) в каждой группе составило 12
Результатом снижения энергетического потенциала митохондрий из-за ишемического-реперфузионного повреждения кардиомиоци-тов является падение содержания АТФ в миокарде левого желудочка у неадаптированных крыс после ишемии-реперфузии по сравнению с интактными особями (табл. 2). У адаптиро-
ванных к хронической гипоксии крыс такого снижения не выявлено - реперфузионное содержание АТФ в миокарде левого желудочка поддерживалось на достаточно высоком уровне и не отличалось от значений в группе сравнения. Этот защитный эффект хронической гипоксии устранялся селективной блокадой кар-диальных р-ОР пептидом СТАР - наблюдалось выраженное снижение содержания АТФ в миокарде после ишемии-реперфузии. Перфузия изолированных сердец неадаптированных крыс раствором блокатора СТАР не влияла на постишемическое содержание АТФ в миокарде левого желудочка. В совокупности эти данные позволяют заключить, что активация карди-альных р-опиоидных рецепторов опосредует поддержание энергетического потенциала митохондрий в ответ на моделирование глобальной ишемии и реперфузии изолированного сердца у крыс, адаптированных к хронической непрерывной нормобарической гипоксии.
Таблица 2
Содержание АТФ (нМ/г ткани) в миокарде левого желудочка, трансмембранный потенциал (А у) и кальций-связывающая способность миокарди-альных митохондрий у неадаптированных и адаптированных к хронической непрерывной нормобарической гипоксии крыс (М±БЕМ)
Примечание: интактные - группа крыс с нормокси-ческой перфузией изолированных сердец. ИР -группа крыс с моделированием глобальной 45-минутной ишемии и 30-минутной реперфузии изолированных сердец. СТАР - селективный антагонист р-ОР (100 нМ/л). А у - трансмембранный потенциал
митохондрий (и/мг белка); КСС - кальций-связывающая способность митохондрий миокарда. р1 - уровень значимости при сравнении с группой «Неадаптированные, Интактные»; р2 - уровень значимости при сравнении с группой «Неадаптированные, ИР»; рз - уровень значимости при сравнении с группой «Адаптированные, ИР». Количество особей (п) в каждой группе составило 12
При оценке кальций-связывающей способности митохондрий миокарда достоверных различий между интактными неадаптированными и адаптированными крысами выявлено не было (табл. 2). Моделирование глобальной ишемии и реперфузии изолированного сердца приводило к снижению КСС митохондрий: у неадаптированных особей она падала на 39% по сравнению с исходным значением, тогда как у адаптированных животных - лишь на 13% (табл. 2). Это указывает на то, что защитный эффект ХННГ связан с повышением устойчивости МРТ-пор митохондрий миокарда к открытию. Перфузия изолированных сердец неадаптированных крыс раствором пептида СТАР не влияла на реперфузионные значения исследуемого показателя, однако у адаптированных к гипоксии особей значения КСС после ише-мии-реперфузии значительно снижались (табл. 2). Из этого следует, что в защитном эффекте хронической гипоксии, проявляющемся повышенной устойчивостью МРТ-пор митохондрий к открытию после ишемии и реперфу-зии, участвуют кардиальные р-опиоидные рецепторы.
Проведенные исследования показали, что воздействие ишемии и реперфузии на сердце приводит к падению энергетической функции митохондрий миокарда: наблюдалось пости-шемическое снижение параметров дыхания, трансмембранного потенциала и содержания АТФ в миокарде левого желудочка, а также снижение устойчивости МРТ-пор митохондрий к открытию. Адаптация крыс к ХННГ повышала толерантность миокардиальных митохондрий к ишемии-реперфузии и способствовала сохранению значений исследуемых параметров на высоком уровне. Селективная блокада карди-альных р-опиоидных рецепторов пептидом СТАР устраняла проявления кардиопротектор-ного действия адаптации к хронической гипоксии. Это позволяет заключить, что активация кардиальных р-опиоидных рецепторов вносит существенный вклад в повышение толерантности митохондрий миокарда к ишемии и ре-перфузии в условиях адаптации к хронической непрерывной нормобарической гипоксии. Эти результаты согласуются с полученными нами ранее данными об участии р-ОР в реализации инфаркт-лимитирующего и цитопротекторно-го эффектов адаптации к ХННГ [3,10].
Группа ^адаптированные Адаптированные
Содержание АТФ Д у КСС Содержание АТФ Д у КСС
Интакт такт-ные 2,6±0,3 24,9±3,2 215±11 2,7±0,5 27,9±1,9 218±11
ИР 0,9±0,1 р1=0,001 10,7±0,5 р1=0,001 131±9 р1=0,00 1 2,3±0,2 р2=0,001 23,0±2,8 р2=0,002 190±14 р2=0,002
СТАР + ИР 0,9±0,2 8,5±0,6 133±9 0,9±0,1 р3=0,002 9,6±0,6 р3=0,001 125±9 р3=0,002
Выводы:
1. Адаптация к хронической непрерывной нормобарической гипоксии способствует повышению устойчивости митохондриального дыхания, трансмембранного потенциала и синтеза АТФ митохондриями к действию ишемии и реперфузии.
2. Адаптация к хронической непрерывной нормобарической гипоксии препятствует
Литература
1. Лукьянова Л.Д. Современные проблемы адаптации к гипоксии. Сигнальные механизмы и их роль в системной регуляции // Пат. физиол. и экспер. тер. 2011. № 1. С. 3-19.
2. Марков В.А., Рябов В.В., Максимов И.В. Вчера, сегодня, завтра в диагностике и лечении острого инфаркта миокарда // Сиб. мед. жур. (Томск). 2011. Т. 26, № 2, Вып.1. С. 8-13.
3. Нарыжная Н.В., Маслов Л.Н., Цепокина А.В. Значение опиоидных рецепторов в цитопротекторном действии хронической гипоксии при аноксии-реоксигенации кардиомиоцитов // Росс. физиол. жур. им. И. М. Сеченова. 2015. Т. 102, № 6. С. 688697.
4. Прокудина Е.С. Исследование устойчивости митохондрий миокарда к ишемическому-реперфузионному повреждению сердца у крыс, адаптированных к хронической гипоксии // Сиб. мед. журнал. 2016. Т. 31, № 2. С. 110-113.
5. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Bio-chem. 1976. Vol. 72. P. 248-254.
6. Braunwald E. Clinical efforts to reduce myocardial infarct size — the next step // J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 2011. Vol. 16, № 3-4. P. 349-353.
7. Chida J., Yamane K., Takei T. An efficient extraction method for quantitation of adenosine triphosphate in mammalian tissues and cells // Anal. Chim. Acta. 2012. Vol. 727. P. 8-12.
8. Halestrap A.P. A pore way to die: the role of mitochondria in reperfusion injury and cardioprotection // Biochem. Soc. Trans. 2010. Vol. 38, N 4. P. 841-860.
9. Hill-Pryor C., Lindsey D., Lapanowski K. The cardiovascular responses to mu opioid agonist and antagonist in conscious normal and obese rats // Peptides. 2006. Vol. 27, № 6. P. 1520-1526.
10. Maslov L.N., Naryzhnaya N.V., Tsibulnikov S.Yu. Role of endogenous opioid peptides in the infarct size-
преждевременному открытию МРТ-пор митохондрий в ответ на действие ишемии-реперфузии.
3. Защитный эффект хронической непрерывной нормобарической гипоксии реализуется с участием кардиальных р-опиоидных рецепторов.
References
Luk'yanova LD. Sovremennye problemy adaptatsii k gipoksii. Signal'nye mekhanizmy i ikh rol' v sistemnoy regulyatsii [Modern problems of adaptation to hypox-ia. Signaling mechanisms and their role in systemic regulation.]. Pat. fiziol. i eksper. ter. 2011;1:3-19. Russian.
Markov VA, Ryabov VV, Maksimov IV. Vchera, segod-nya, zavtra v diagnostike i lechenii ostrogo infarkta miokarda [Yesterday, today, tomorrow in the diagnosis and treatment of acute myocardial infarction]. Sib. med. zhur. (Tomsk). 2011;26(2-1):8-13. Russian. Naryzhnaya NV, Maslov LN, Tsepokina AV. Znachenie opioidnykh retseptorov v tsitoprotektornom deystvii khronicheskoy gipoksii pri anoksii-reoksigenatsii kar-diomiotsitov [The importance of opioid receptors in the cytoprotective action of chronic hypoxia in the anoxia-reoxygenation of cardiomyocytes]. Ross. fiziol. zhur. im. I. M. Sechenova. 2015;102(6):688-97. Russian.
Prokudina ES. Issledovanie ustoychivosti mitokhon-driy miokarda k ishemicheskomu-reperfuzionnomu povrezhdeniyu serdtsa u krys, adaptirovannykh k khronicheskoy gipoksii [Investigation of myocardial mitochondrial resistance to ischemic-reperfusion injury of the heart in rats adapted to chronic hypoxia]. Sib. med. zhurnal. 2016;31(2):110-3. Russian. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976;72:248-54.
Braunwald E. Clinical efforts to reduce myocardial infarct size — the next step. J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 2011;16(3-4):349-53.
Chida J, Yamane K, Takei T. An efficient extraction method for quantitation of adenosine triphosphate in mammalian tissues and cells. Anal. Chim. Acta. 2012;727:8-12.
Halestrap AP. A pore way to die: the role of mitochondria in reperfusion injury and cardioprotection. Biochem. Soc. Trans. 2010;38(4):841-60. Hill-Pryor C, Lindsey D, Lapanowski K. The cardiovascular responses to mu opioid agonist and antagonist in conscious normal and obese rats. Peptides. 2006;27(6):1520-6.
Maslov LN, Naryzhnaya NV, Tsibulnikov SYu. Role of endogenous opioid peptides in the infarct size-limiting
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2017 - V. 24, № 3 - P. 53-59
limiting effect of adaptation to chronic continuous hypoxia // Life Sci. 2013. Vol. 93, № 9-11. P. 373-379.
11. Scaduto R.C., Grotyohann L.W. Measurement of mitochondrial membrane potential using fluorescent rhodamine derivatives // Biophys. J. 1999. Vol. 76, N 1. Pt. 1. P. 469-477.
12. Selye H. The Story Of the Adaptation Syndrome // Montreal. 1952.
13. Singh I.N., Sullivan P.G., Deng Y. Time course of post-traumatic mitochondrial oxidative damage and dysfunction in a mouse model of focal traumatic brain injury: implications for neuroprotective therapy // J. Cereb. Blood Flow Metab. 2006. Vol. 26, N 11. P. 14071418.
14. Strehler B.L., Bergmeyer H.U. Adenosine-5'-triphosphate and Creatine Phosphate: Determination with Luciferase. Methods of Enzymatic Analysis. 2nd Ed. // New York. Acad. Press. 1974. Vol. 4. P. 21122115.
effect of adaptation to chronic continuous hypoxia. Life Sci. 2013;93(9-11):373-9.
Scaduto RC, Grotyohann LW. Measurement of mitochondrial membrane potential using fluorescent rhodamine derivatives. Biophys. J. 1999;76(1-1):469-77.
Selye H. The Story Of the Adaptation Syndrome. Montreal. 1952.
Singh IN, Sullivan PG, Deng Y. Time course of post-traumatic mitochondrial oxidative damage and dysfunction in a mouse model of focal traumatic brain injury: implications for neuroprotective therapy. J. Cereb. Blood Flow Metab. 2006;26(11):1407-18.
Strehler BL, Bergmeyer HU. Adenosine-5'-triphosphate and Creatine Phosphate: Determination with Luciferase. Methods of Enzymatic Analysis. 2nd Ed. New York. Acad. Press. 1974;4:2112-5.
