CC BY
10
конкретной молекулярной мишени. Известно, что scFv части отдельных химерных рецепторов CAR часто стремятся к агрегации, в частности посредством «обмена доменами» (domain-swapping). Агрегация химерных рецепторов CAR приводит к тонической активации CAR Т-клеток, снижая специфичность цитотоксической активности CAR Т-клеток, а также приводя к более быстрому истощению пролиферативного потенциала (снижению персистенции) CAR T-клеток. Тенденция к агрегации является характеристикой каждой конкретной последовательности scFv. Подбор оптимальной последовательности внеклеточной части рецептора CAR является трудоемкой и времязатратной процедурой.
В данной работе в качестве внеклеточной части химерного рецептора использовалась полноразмерная последовательность Flt3-лиганда — естественного агониста тирозикиназного рецептора Flt3. Flt3-лиганд с высокой аффинностью взаимодействует с рецептором Flt3. Рецептор Flt3 представлен в повышенном количестве на поверхности бластных клеток в большинстве случаев острого миелоидного лейкоза. В примерно трети случаев рецептор Flt3 несет активирующую мутацию, что связывают с плохим прогнозом. Таким образом, безантительные Flt3-CAR Т-клетки могут более специфично элиминировать бластные клетки при остром миелоидном лейкозе.
В ходе работы была получена генетическая конструкция, кодирующая безантительный химерный рецептор Flt3-CAR, содержащая полноразмерную последовательность неизмененного Flt3-лиганда. С помощью лентиви-русной трансдукции донорских CD3-позитивных клеток были получены Flt3-CAR T-клетки. Было показано, что Flt3-CAR T-клетки специфически элиминируют Flt3-позитивные клетки THP-1 и не мешают пролиферации Flt3-негативным клеткам U937. Используя клетки Flt3-CAR Jurkat как модель Flt3-CAR T-клеток, неспособную к Т-клеточной активации, было показано, что химерный белок Flt3-CAR не цитотоксичен по отношению к Flt3-позитивным клеткам THP-1. Киллинг Flt3-позитивных клеток THP-1 дозозависимо ингибировался растворенным рекомбинантным Flt3-лигандом.
Таким образом, полученные Flt3-CAR T-клетки специфически убивают Flt3-позитивные клетки in vitro. Для элиминирования клеток-мишеней безантительным Flt3-CAR T-клеткам необходим функциональный механизм Т-клеточной активации. Безантительные Flt3-CAR T-клетки взаимодействуют с клетками-мишенями через сайт связывания Flt3-ligand:Flt3 рецептора Flt3 на поверхности THP-1.
БИОСОВМЕСТИМОЕ УСТРОЙСТВО ДЛЯ
УКРЫТИЯ ДЕФЕКТА ФИБРОЗНОГО КОЛЬЦА
В ПОЯСНИЧНОМ ОТДЕЛЕ ПОЗВОНОЧНИКА
ПОСЛЕ СЕКВЕСТРЭКТОМИИ
С.А. Макаров1, А.Г. Аганесов1, М.М. Алексанян1,
В.А. Демина2, О.А. Спирин1
1 ФГБНУ Российский научный центр хирургии им. акад. Б.В. Петровского, Москва, Россия
2 НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: грыжа межпозвонкового диска, дискэкто-
мия, секвестрэктомия, дефект фиброзного кольца.
Дегенеративно-дистрофические изменения поясничного отдела позвоночника занимают 5 место среди
причин госпитализации и 3 место среди причин хирургического лечения. В настоящее время золотым стандартом хирургического лечения при грыжах межпозвонкового диска в поясничном отделе позвоночника является микрохирургическая или эндоскопическая секвестр- или дискэктомия. При этом риск развития рецидива заболевания при эндоскопическом методе достигает 30%, а при микрохирургическом — 10%. Рецидивы грыж межпозвонковых дисков часты, так как при классическом исполнении операции остаётся дефект в фиброзном кольце и задней продольной связке. Для снижения риска развития рецидива на мировом рынке в настоящее время существует единственный импортный (США) биосовместимый имплант, который не получил распространения в связи с высокой стоимостью, а также остаточным высоким риском рецидива. На отечественном рынке аналогов не существует. При использовании меж-теловых кейджей после дискэктомии с последующей фиксацией позвонков с целью создания спондилодеза после операции возникают следующие осложнения: синдром смежного уровня, миграция фиксаторов, что требует проведения повторных оперативных вмешательств. Кроме того, при проведении таких операций многократно возрастает её продолжительность, объём кровопотери, увеличивается срок пребывания на постельном режиме. При использовании нашего устройства в позвоночно-двигательном сегменте сохранится полная амплитуда движений, что, в свою очередь, является профилактикой и синдрома смежного уровня.
Нами планируется создание биосовместимого устройства для укрытия дефекта фиброзного кольца для предотвращения рецидивов после поясничной се-вестрэктомии. Разработка биосовместимого устройства для укрытия дефекта фиброзного кольца при малоинва-зивных операциях на поясничном отделе позвоночника позволит улучшить результаты хирургического лечения дегенеративных заболеваний поясничного отдела позвоночника и улучшить качество жизни данной группы пациентов, которые в основном являются людьми трудоспособного возраста.
В настоящее время разработан эскиз устройства; совместно с НИЦ «Курчатовский институт» проводятся комплексные испытания для изучения свойств материалов для выбора наиболее подходящего.
ВКЛАД РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЫ
В ТЕРАПИЮ АУТОИММУННЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ
С.В. Макаров1, Н.Х. Муселимян2
1 Институт интегративной медицины, Москва, Россия
2 The George Washington University, Washington, DC, USA
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: стволовые клетки, рассеянный склероз,
миастения.
Памяти нашего учителя, одного из основоположников регенеративной медицины в Поволжье, профессора СамГМУ М.В. Угловой посвящается
В последнее десятилетие отмечается рост заболеваемости аутоиммунной патологией во всем мире. Это касается также хронических прогрессирующих аутоиммунных заболеваний нервной системы: рассеянного
склероза (РС) , миастении (МА)- приводящих к ранней инвалидизации. По данным различных авторов в настоящее время в мире насчитывается более двух миллионов больных РС. Показатель распространенности миастении достигает 38 на 100 тыс. населения в зависимости от региона. Несмотря на раннюю диагностику аутоиммунных заболеваний нервной системы (АИЗН), успехи фармакотерапии, остаются проблемы, нуждающиеся в других терапевтических стратегиях для контроля активности заболевания (Smith JA., et al.2021), предотвращения прогрессирования инвалидности, преодоления резистентности к стандартной терапии.
Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) используются в терапии РС около 20 лет в протоколах низко, средне и высокодозной иммуносупрессивной терапии (ВИСТ) с последующей аутотрансплантацией стволовых кроветворных клеток (АТСКК). Иммуноаблация позволяет элиминировать аутореактивные клоны Т-лимфоцитов, нивелировать иное влияние иммунных механизмов при РС. АТСКК приводит к реконституции иммунной системы без иммунопатологических звеньев, формирующих заболевание, где воспалительный и нейродегенеративный процессы соседствуют. Пациенты с РС в целом хорошо переносят АТСКК, риск смертельных осложнений близок к 0,3 %. В Европейском регистре по трансплантации костного мозга (ЕВМТ) на 2021 год находится 1875 больных РС после АТСКК с различными типами заболевания [1]. На ранних стадиях заболевания с ремиттирующим течением, где преобладает воспалительный процесс в ЦНС, отмечается высокая эффективность лечения с регрессом неврологических симптомов по шкале EDSS и последующей стабилизацией состояния в течении 3-5 лет по разным данным у 70-90 % больных РС. Эти результаты в целом соответствуют нашим наблюдениям 49 пациентов (Макаров С.В. и др.2016), при этом пятилетняя выживаемость без прогрессирования составила в группе 45%. Полагаем, что быстро прогрессирующее течение РС, резистентные к стандартной фармакотерапии формы, являются показанием к АТСКК. Было отмечено (Sharrck B. et al.,2020), что АТСКК, по-видимому, дает явное преимущество с точки зрения NEDA (отсутствие признаков активности заболевания), демонстрируя показатели 66-93% по сравнению с отдельными препаратами второй линии терапии — моноклональными антителами.
АТСКК имеет ограниченную эффективность при прогрессирующих формах РС [2], отсутствует влияние на нейродегенеративный процесс (Muraro et al., 2017). Предполагалось, что аутотрансплантация мезенхималь-ных стволовых клеток (МСК) или нейральных стволовых клеток (НСК) может справиться с такой задачей. Обладая нейропротективным и нейротрофическим влиянием, МСК секретируют факторы, индуцирующие рост аксонов и увеличивающие выживаемость клеток in vitro (Kim et al., 2010). Так же МСК проявляют иммуносупрессив-ную активность путем модуляции регуляторной функции Т-клеток. В работе Karussis etal. (2010) у пациентов с ре-миттирующим и прогрессирующим РС отмечались имму-номодулирующие эффекты после аутотрансплантации МСК и статистически значимое улучшение показателей EDSS в течение 6 месяцев наблюдения. В то же время в группе с прогрессирующим течением РС во второй фазе исследования по введению МСК не отмечалось стойких улучшений (Bonab et al., 2012). На животных моделях РС было установлено, что трансплантация НСК ингибирует периферическую и периваскулярную активацию провоспалительных Т-клеток и увеличивает количество противовоспалительных Т-reg. (Pluchino et al., 2005). Использование НСК на животных моделях
РС выявило их паракринные функции, ограничивающие развитие нейродегенеративного процесса, что открывает в будущем перспективу применения клеток в клинической практике.
Авторами [3] были проанализированы результаты публикаций в базах данных: PubMed/Medline, EMBASE, Web of Science Cochrane Library до сентября 2021. Описано 10 больных с рефрактерной к стандартному лечению МА, которым была проведена АТСКК. У всех наблюдалось клиническое улучшение и ремиссия заболевания. У нас имеется собственный опыт наблюдения двух пациентов с МА после ВИСТ АТСКК. В первом случае после трансплантации отмечался стойкий регресс большинства признаков заболевания с многолетней ремиссией; второй случай без клинического эффекта указывает на то, что больные с МА с длительными сроками заболевания и сопутствующей патологией в стадии декомпенсации имеют ограничения для проведения такой терапии. Просматриваются перспективы персонифицированной терапии МА с использованием гуманизированной докли-нической модели предварительно кондиционированных МСК (Sudres M., et al.2017), что позволяет включать механизмы ингибирования клеточной пролиферации и связанных с В-клетками костимули-рующих молекул, а также активировать регулятор комплемента DAF/CD55.
По поводу применения аллогенной трансплантации при АИЗН не существует единого мнения из-за высокого риска посттрансплантационных осложнений. Дальнейшая разработка терапевтических стратегий на основе достижений регенеративной медицины, изучения стволовых клеток может оказать значительное влияние на качество жизни пациентов с АИЗН.
Литература:
1. Alexander T.., Greco R. Bone Marrow Transplantation (2022) 57:1055-1062.
2. Makarov S., Nikolaeva A. et al. Journal of the Neurological Sciences (2021) 429: 118195.
3. Jaime-Pérez JC, Meléndez-Flores JD, Ramos-Davila EM. et al. Cytotherapy (2022), 24: 676-685.
ПОДХОД К ГЕНОТЕРАПИИ АУТОИММУННЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ
О.Г. Макеев1, 2, С.В. Костюкова1, 2,
А.В. Коротков1, 2, С.Б. Антонова1
1 ФГБОУ ВО Уральский государственный медицинский университет МЗ РФ, Екатеринбург, Россия
2 ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия.
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: аутоиммунные заболевания, мультипо-
тентные мезенхимальные стромальные клетки, ген CD 86,
экзосомы.
Необходимость поиска новых путей терапии аутоиммунных заболеваний обусловлена ограниченным арсеналом средств с минимальными числом побочными проявлениями.
Известно, что белок CD 86 в физиологической концентрации индуцирует иммунный ответ организма посредством связывания со стимулирующим рецептором CD 28 Th клеток. Также показано, что избыточная концентрация белка CD 86 в результате активации генов,
