Випробування та апробація тест-системи «Набір для діагностики авіаденовірусної інфекції курей першого серотипу в реакції імунодифузії»

Стегній Б.Т.; Ткаченко С.В.; Музика Д.В.; Борсук А.М.

УДК: 619:578.826.1:636.5

Стегнш1 Б.Т., док. вет. наук., академж Ткаченко1 С.В., наук. ствр., [email protected] Музика1 Д.В., канд. вет. наук., [email protected] Борсук2 А.М., наук. ствроб. © 1 Нацюнальний науковий центр «1нститут експериментальноХ i клгшчног ветеринарноï медицини», м. Хартв 2Державний науково-контрольний тститут бюлогп i штамiв мiкроорганiзмiв

м. Кшв

ВИПРОБУВАННЯ ТА АПРОБАЦ1Я ТЕСТ-СИСТЕМИ «НАБ1Р ДЛЯ Д1АГНОСТИКИ АВ1АДЕНОВ1РУСНО1' ЩФЕКЦП КУРЕЙ ПЕРШОГО СЕРОТИПУ В РЕАКЦП 1МУНОДИФУЗП»

Проведено розробку тест-системи «Набiр для дiагностики авiаденовiрусноï шфекцп курей першого серотипу в реакцИ' iмунодифузiï». Виготовлено декыька до^дних серт набору, проведено комшйм дослiдження та за ïxрезультатами набiр проходить реестрацт на територп Украти.

Ключовi слова: аденовiрусна тфекщя курей, тест-система, реакщя iмунодифузiï.

Вступ. Аденовiруси - група вiрусiв, як уражають людину, тварин багатьох видiв, в тому чи^ i птахiв.

Зараз в промисловому птахiвництвi аденовiрусна шфекщя набула особливого значення, що пов'язано з рядом причин. По-перше, у курей вони викликають гепатит з тшьцями-включенями, у iндикiв - геморагiчний ентерит, у фазашв - вiрусний гепатит та мармурову хворобу селезшки, у перепелiв -бронхiт. По-друге, аденовiруси дуже часто виступають в ролi вторинного фактору при iнших шфекцшних захворюваннях [5], особливо при шфекцшному бронхiтi, мiкоплазмозi та iнших хворобах дихально1 системи. По-трете, аденовiруси негативно впливають на несучiсть та якють яець. Також вони заважають в використанш ембрiонiв для репродукцiï шших вiрусiв, що пов'язано з вертикальною передачею аденовiрусiв. Аденовiруси дуже широко розповсюджеш в США, Канадi, Шмеччиш, Швецiï, Францiï, Угорщинi, Iталiï, Югослава, Чехiï, Пiвнiчнiй Iрландiï, Пiвденнiй 1рланди, Японiï, Кореï, Iндiï, Gгиптi, Австрали, Англiï.[1,2,3]

Зараз в родi Aviadenovirus розрiзняють 2 групи аденовiрусiв птаив. До першо1' групи входять 12 серотитв аденовiрусiв курей та шшох' птицi, якi мають загальний групоспецифiчний преципiтуючий антиген. До друго1' групи вщнесеш вiруси геморагiчного ентериту шдичок, хвороби мармурово1' селезiнки курей та фазашв iз групоспецифiчним антигеном, який вiдрiзняеться вiд таких першо1' групи.[4,1,2]

213

Серолопчш дослщження показали, що CELO-шфекщя може бути в шдиюв, фазашв, дроздiв, лебедiв, папуг, качок та iнших видiв диких rnaxÍB, але основний хазяш - кури. Bipyc CELO, iзольовaний вщ фaзaнiв, був ускладнюючим фактором при виникненш ресшраторно1 хвороби серед цих nraxiB. Також вiрус CELO iзольовaно вiд цесарок Í3 проявами панкреатиту.

Таким чином, проблема aденовiрусноl шфекци курей е актуальним питанням, що потребуе значно! уваги. Тому за мету нашо! роботи було поставлено провести комiсiйнi випробування та апробацш розроблено! нами тест-системи для дiaгностики aденовiрусноl шфекци курей.

Матер1али i методи. Комiсiйнi випробування тест-системи проводили згщно наказу Голови Державного ком^ету ветеринарно! медицини Укра!ни №97 вщ 9 серпня 2008 року та методики комiсiйних виробничих випробувань на бaзi лаборатори етзоотологи хвороб птищ Нaцiонaльного наукового центру «1нститут експериментально1 i кшшчно1 ветеринарно1 медицини» (м. Харюв) та Державного науково-контрольного шституту бюлоги i штaмiв мiкрооргaнiзмiв (м. Кшв). Для проведення мiжвiдомчих комiсiйних виробничих випробувань була призначена комiсiя на чолi з директором Державного науково-контрольного шституту бютехнологп i штaмiв мiкрооргaнiзмiв Ушкаловим В.О. у склaдi Бaбкiнa М.В., Борсук А.М., Клименок О.М., Музика Д.В. та Ткаченко С.В. Випробування проводили за наступними параметрами та наступними методами:

О визначення зовшшнього вигляду, кольору, нaявностi стороннiх домiшок та трщин флaконiв.

Дослiдження проводили вiзуaльно в пронизуючому свiтлi.

Дослщження з визначення герметичност упаковки проводили вiзуaльно при перевертанш флaконiв. Нaявнiсть вакууму в флаконах визначали згiдно з ГОСТ 28083 за допомогою апарату Д'Арсонваля.

Дослщження проводили згщно з ГОСТ 24061.

Дослщження проводили шляхом розчинення вмюту флaконiв рщиною для розчинення сухих компонентiв набору об'емом, вказаним на етикетщ.

Дослщження стерильност компоненив набору визначали згiдно з ДСТУ 4483.

Дослщжуваний позитивний антиген вводили в аланто1сну порожнину по 0,2 см3 8-10-ти курячим ембрiонaм 9-10-ти добово1 шкубаци. Трьом ембрiонaм, яю використовують як контрольнi, вводили аналопчну дозу стерильного фiзiологiчного розчину. Ембрюни iнкубувaли за температури +37,50С. Кожну добу ембрiони овоскопували, вiдбирaли мертва Смерть ембрiонiв у першу добу тсля зараження вважали неспецифiчною. Через 5 дiб шкубаци ембрiони охолоджували за температури +40С, пiсля чого !х

214

розтинали. Для наступного пасажу використовували об'еднану аланто!сну рщину вiд 3-5 ембрiонiв. Нею заражали ембрюни 2-го пасажу так саме, як було описано вище. Третш пасаж проводили аналогiчно.

Дослiдження активностi антигешв проводили в реакци iмунодифузп (Р1Д). Постановку реакцiй проводили згiдно рекомендацш Мiжнародного епiзоотичного бюро (МЕБ).

Дослщження специфiчностi проводили в Р1Д, постановку здшснювали згiдно вимогам МЕБ.

Дослщження проводили в Р1Д, постановку яких здшснювали згщно з вимогами МЕБ. Результати дослщження.

Накопичення авiаденовiрусу проводили на курячих ембрюнах. У якост позитивного антигену використовували хорюн-аланто!сну рiдину, вiдiбрану вщ iнфiкованих ембрiонiв. Iнактивацiю iнфекцiйних властивостей вiрусу проводили формальдегiдом за розробленою нами методикою.

При проведеннi комiсiйних випробувань були отриманi нижченаведенi результати.

Ус флакони з набору мали вiдповiдне маркування, на них було зазначено: назву пщприемства-виготовлювача, адресу та його товарний знак, найменування тест-системи, назву компоненту, номер сери та контролю, термш збер^ання, позначення ТУ. Стороншх домiшок, трiщин флаконiв не виявлено, що вiдповiдаe ТУ У.

У флаконах шд дieю апарату Д'Арсонваль з'являлося фiолетово-синe свтння, яке супроводжувалося характерним потрккуванням. Масова частка вологи була в межах 2-3%.

Повна розчиншсть сухих компонентiв спостер^алася за 3 хвилини. При дослщженш виявили, що усi компоненти були стерильними.

При перевiрцi повноти шактивацп вiрусу було вiдмiчено вiдсутнiсть патологоанатомiчних змiн i загибелi ембрiонiв протягом 3-х пасажiв, а також вщсутшсть у аланто!снiй рiдинi преципiтинiв (негативна реакщя iмунодифузi! з позитивною сироваткою) на кожному з трьох пасажiв.

Результати визначення активностi та специфiчностi позитивного та негативного антигенiв наведено в таблицях 1, 2 та 3.

215

Таблиця1

Дослщження активного та специфiчностi в Р1Д позитивного та негативного антигенiв ав1аденов1русу курей першого серотипу_

Використанi сироватки позитивний антиген виробництва ННЦ «1ЕКВМ» негативний антиген виробництва ННЦ «1ЕКВМ»

Референтна сироватка KpoBi, позитивна до шфекцшно! бурсально! хвороби (виробництво GD R&D Diagnostics, Нщерланди) 0 0

Референтна сироватка кров^ позитивна до авiаденовiрусно! шфекцп курей першого серотипу (виробництва GD R&D Diagnostics, Нiдерланди) 1:2 0

Сироватка кровi курей, позитивна до вiрусу ньюкаслсько! хвороби (виробництва Дншропетровсько! бiофабрики) 0 0

Сироватка кровi курей, позитивна до авiаденовiрусу курей першого серотипу (виробництва ННЦ «1ЕКВМ») 1:16 0

Сироватка кровi курей, негативна до авiаденовiрусу курей першого серотипу (виробництва ННЦ «1ЕКВМ») 0 0

Як видно з таблиц 1, актившсть позитивного антигену авiаденовiрусу курей першого серотипу склала 1:16 (4 ^2). Реакцiя з референтною сироваткою до авiаденовiрусу курей характеризувалася наявнiстю смуг преципiтацiй у розведеннi 1:2 (1 log2). З позитивними сироватками до шфекцшно! бурсально! хвороби та ньюкаслсько! хвороби, а також iз негативною сироваткою до авiаденовiрусу курей реакщя була негативною. Також не вiдмiчали наявностi специфiчних лiнiй прециштацп мiж негативним антигеном та дослiджуваними сироватками.

Наступним етапом дослiджень була перевiрка активностi та специфiчностi позитивно! та негативно! сироваток. Результати наведет в таблицях 2 та 3.

Таблиця 2

Дослщження активност та специфiчностi в Р1Д позитивно*! до

авiаденовiрусу курей першого серотипу сироватки

Використаш антигени Актившсть позитивно? сироватки з набору в Р1Д

Антиген позитивний вiрусу ньюкаслсько! хвороби 0

Антиген позитивний авiаденовiрусу курей 1:16

216

Таблиця 3

Дослвдження активност та специфiчностi в Р1Д негативно'' до _авiаденовiрусу курей першого серотипу сироватки_

Використаш антигени Актившсть негативно'' сироватки з набору в Р1Д

Антиген позитивний вiрусу ньюкаслсько! хвороби 0

Антиген позитивний авiаденовiрусу курей першого серотипу 0

Як видно з таблиць 2 та 3, лише позитивна до аденовiрусу сироватка володша актившстю в Р1Д в кiнцевому розведенш 1:16.

Апробацiю тест-системи проводили шляхом дослщження сироваток кровi з рiзних регiонiв Укра!ни за допомогою компонент набору згiдно з iнструкцieю до набору.

Таблиця 4

Кшьккть позитивних сироваток при проведенш дослщженш в реакци

iмунодифузi'l'

РеНон, з якого над1йшли проби сироваток Кшьккть позитивних сироваток, %

Хмельницька область 8

Луганська область 20

АР Крим 76

АР Крим 34

Ки!вська область 27

У двох випадках (АР Крим) циркуляцш в птахогосподарствi аденовiрусу пiдтверджено проведенням полiмеразно-ланцюгово! реакци та виявленням геному аденовiрусу.

Таким чином, за результатами проведених комiсiйних випробувань було встановлено, що компоненти випробовувано! тест-системи повнiстю вiдповiдають вимогам ТУ У 24.4-00497087-038.

Висновки:

1. Сшвроб^никами ННЦ «1ЕКВМ» розроблено технологш виготовлення тест-системи «Набiр для дiагностики авiаденовiрусно! iнфекцi! курей першого серотипу в реакци iмунодифузi!».

2.Тест-система «Набiр для дiагностики авiаденовiрусно! iнфекцi! курей першого серотипу в реакци iмунодифузi!», виробництва ННЦ «1ЕКВМ» за показниками: зовшшнш вигляд, колiр, наявнiсть стороншх домiшок та трiщин флаконiв, герметичшсть упаковки, наявнiсть вакууму в флаконах, масова частка вологи, розчиншсть, стерильшсть, повнота iнактивацi! антигену, активнiсть та специфiчнiсть позитивного та негативного антигешв, активнiсть та специфiчнiсть позитивно! та негативно! сироваток повшстю вiдповiдаe вимогами ТУ У 24.4-00497087-038.

217

З.Позитивш компоненти тест-системи специфiчнi та активш, що дозволяе виявляти антитша до авiаденовiрусу курей першого серотипу.

Лггература

1. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных. / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина // Москва, ВНИТИБП, С. 928.

2. Коровин, Р.Н. Аденовирусные инфекции сельскохозяйственной птицы. / Р.Н. Коровин, И.К. Рождественский // Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1990.- С.79.

3. Справочник ветеринарного врача птицеводческого предприятия / Н. В. Кожемяка, Ф.С. Кудрявцев, Г.А. Грошева // М.: Колос, 1982.- 303 с.

4. Бакулин, В.А. Патоморфогенез и дифференциальная диагностика болезни Гамборо, аденовирусной инфекции и других иммунодепрессивных болезней птиц. / В. А. Бакулин // (приложение к т. 1(48) «Архив ветеринарных наук»), Санкт-Петербург, Ломоносов, 1998, С. 322.

5. Dottori, M. Su alcuni episodi di adenovirosi in piccioni viaggiatori / M. Dottori. D. Gelmetti; A. Lavazza; S. Perini; C. Gambetti // Selez.veter., 1999. N 8/9, - P. 647651

Summary Stegniy1 B., DVM Tkachenko1 S., researcher Muzyka1 D., Cand. Sc. (Vet) Borsuk2 A., researcher THE DEVELOPMENT OF TEST-SYSTEM «THE KIT FOR DIAGNOSIS FOWL ADENOVIRUS INFECTION 1 SEROTYPE IN AGID» The development of test-system «The kit for diagnosis of fowl adenovirus 1 serotype in reaction of AGID » are carried out. Several experimental series of the kit are prepared. Commission investigations are conducted. By their results, the kit registers on the territory of Ukraine.

Стаття надшшла до редакцИ 1.09.2010

218

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Стегній Б. Т., Ткаченко С. В., Музика Д. В., Борсук А. М.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Стегній Б. Т., Ткаченко С. В., Музика Д. В., Борсук А. М.