CC BY
24
УДК: 616.12 - 008: 615.45-084
В.Й. Мамчур, А. С. Шаламай, М.Г. Старченко, К. О. Кравченко, €.О. Чернов
ВИКОРИСТАННЯ НОВИХ Л1КАРСЬКИХ ФОРМ КВЕРЦЕТИНУ ДЛЯ ПРОФ1ЛАКТИКИ ДОКСОРУБIЦИНОВОÏ КАРДЮМЮПАТП В ЕКСПЕРИМЕНТ1
Дтпропетровська державна медична академiя кафедра фармакологи та клiнiчноi фармакологи (зав. - д. мед. наук, проф. В.Й. Мамчур)
Ключовi слова: Корвтин таблетки кверцетину для розжовування, перекисне окиснення лiпiдiв, лактатдегiдрогеназа, експериментальна доксорубщинова кардюмюпатiя, кардiопротекцiя Key words: corvitin, quercitin chewing tablets, peroxide oxidation of lipids, lactatdehydrogenase, experimental doxorubicin-induced cardiomyopathy, cardioprotection
Резюме. В эксперименте изучено влияние препаратов кверцетина - Ко-рвитина® и таблеток кверцетина для разжевывания на уровень пере-кисного окисления липидов в печени и миокарде, на активность лакта-тдегидрогеназы в сыворотке крови крыс при моделировании хронической кардиомиопатии с помощью доксорубицина. Показано наличие кардиопротекторных свойств препаратов кверцетина. Маркерами ан-тиоксидантной системы были СОД и каталаза, маркером угнетения перекисного окисления липидов было снижение накопления МДА в го-могенатах сердца, головного мозга и печени. Повышение активности ферментов антиоксидантной системы и снижение накопления МДА в сыворотке и гомогенатах печени, головного мозга и сердца свидетельствовало о кардиопротекторных свойствах Корвитина® и таблеток кверцетина, так как антрациклиновые антибиотики являются индукторами свободнорадикального окисления, которое играет немаловажную роль в патогенезе антрациклиновых кардиомиопатий. Фермент ЛДГ, а также его сердечная фракция ЛДГ 1, являющиеся поздним маркером повреждения миокарда, использовались нами как показатели эффективности профилактики и комплексной терапии Корвитином® и таблетками кверцетина антрациклиновой кардиомиопатии. Summary. In the experiment an impact of quercetin preparations - corvitin and corvitin chewing tablets on peroxide oxidation of lipids (POL) level in the liver and myocardium, on lactatdehydrogenase activity in blood serum of rats while modeling chronic cardiomyopathy through doxorubicin was studied. The availability of cardioprotective properties of quercitin preparations was shown. COD and katalasa were the markers of antioxidant systems, decrease of MDA accumulation in cardiac, brain and liver homogenates were the markers of POL depression. Increase of activity of antioxidant system ferments and decrease of MDA accumulation in the serum and cardiac, liver and brain homogenates testified to the cardioprotective properties of corvitin and corvitin chewing tablets, as antracyclin antibiotics are the inductors of free-radical oxidation which plays an important role in antracyclin cardiomyopathies pathogenesis. LDG ferment and its cardiac fraction LDG 1 - the late markers of myocard lesion were used as indices both of prophylaxis efficacy and complex therapy of antracyclin cardiomyopathy with corvitin and quercitin tablets.
Антрациклiновi антибютики е компонентами бшьшосп схем roлiхiмютераml, яю використо-вуються в онкологи. Основш ускладнення вщ !хнього застосування пов'язаш з токсичним впливом на серце. Внаслщок кардютоксично! ди антрациклшових антибютиюв застшна серцева недостатшсть (СН) е тяжким патолопчним станом, единим способом лшування якого часто бувае тшьки трансплантащя серця. Смертшсть вщ кардiальних причин серед пащеипв, яю отри-мують антрациклши, складае 0,6-1%, а у випадку розвитку в них застшно! СН - 60-79% [6], що й
зумовлюе необхщшсть розробки ефективних ме-тодiв терапи ще1 патологи.
Враховуючи, що провщним патогенетичним мехашзмом кардютоксично1 дп антрациклшв вважаеться активащя процешв вшьнорадикаль-ного окиснення, бшьшють дослщниюв вивчае ефективнють антиоксидаипв у запобпанш ви-кликаним цими цитостатиками кардiальним ускладненням. Однак не кожний антиоксидант виявляеться ефективним для профшактики антрациклшових ушкоджень серця. Кардюпро-тектори, яю використовуються з щею метою,
повинн вщповщати наступним вимогам:
- вводитися до або одночасно з цитостатич-ними препаратами;
- запобтати або знижувати !х токсичнiсть;
- не пошкоджувати нормальнi клiтини оргашзму;
- не знижувати протипухлинний ефект цито-статикiв [7].
Ми використали для дослiдження препарати кверцетину виробництва ЗАТ НВЦ „Борща-гiвський ХФЗ", Укра!на - Корвiтин® (iн'eкцiйна форма) i таблетки кверцетину для розжовування.
Тривалий час використання численних ко-рисних фармакологiчних властивостей кверцетину в ктшчнш практицi обмежувалось низькою бiодоступнiстю iснуючих лiкарських форм да-ного препарату. Низька бiодоступнiсть була зу-мовлена слабкою розчиннiстю цих лшарських форм у водi ^ вiдповiдно, у бiологiчних рiдинах органзму. Тому в рядi кра!н ^ перш за все, в Укра1ш проведена робота по створенню нових лшарських форм кверцетину. При цьому для тдвищення розчинностi, бюлопчно! доступносн та бюлопчно! активностi кверцетину вико-ристовувались рiзнi модифiкатори розчинностi. Корвпин® - лiофiлiзований порошок, який е комплексом кверцетину з полiвiнiлпiролiдоном. Ш-тературнi данi переконливо шдтверджують його позитивний ефект при гострому iнфарктi мю-карда та променевому ураженнi [2,9]. Потужний вплив на прооксидантно-антиоксидантний го-меостаз також е тдставою розглянути Корвiтин® як кардюпротекторний засiб при експе-риментальнiй антрациклшовш кардюмюпати.
Мета дослiдження - вивчення кардюпро-текторних властивостей препаратiв кверцетину при експериментальнш доксорубiциновiй кардюмюпати i розробка найбiльш оптимально! ступе-нево! схеми терапп та профшактики дано! патологи серцево-судинно! системи. В данш роботi розглянуто вплив препаранв кверцетину на стан ПОЛ (у головному мозку, мiокардi i печiнцi) i на активнiсть лактатдепдрогенази (у кровi), в iнших роботах, поданих до друку, ми аналiзували власнi результати дослiдiв: вплив препаранв на фiзичну працездатнiсть, рухово-дослiдницьку та емоцшну активнiсть щурiв, на фiзiологiчнi функци мiокарда i на стан серцевого м'язу за патоморфолопчними даними.
МАТЕР1АЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛ1ДЖЕНЬ
Дослщження проведено на 18 бiлих щурах-самцях масою 180±20 г, яких утримували на стандартному рацiонi вiварiю.
Тварин було роздшено на 3 групи. 1нтактш щури - I група. Модель серцево! патологи ство-
рювали внутрiшньочеревинним введенням док-сорубiцину 1 раз на тиждень протягом 36 дiб у дозi 10 мг/кг [4] (II група). Тваринам третьо! групи на тлi моделювання доксорубщиново! кардюмюпати щодня протягом 42 дiб вводили препарати кверцетину у дозi 5 мг/кг маси експе-риментальних тварин за розробленою нами схемою:
1-е введення доксорубiцину ^ 1-4 доба вну-трiшньочеревинне введення Корвпину® ^ 5-7 доба перехiд на внутршньошлункове введення таблеток кверцетину ^ 2, 3, 4, 5, 6-е введення доксорубщину ^ схема повторюеться.
Пiсля закiнчення дослiду тварин дека-пiтували. Об'ектами бiохiмiчних дослiджень були сироватка кровi, а також гомогенати головного мозку, мюкарда i печiнки щурiв. Гомоге-шзащю та центрифугування проводили в умовах холоду. В цитозольнш фракци визначали вмют одного з продуктiв перекисного окиснення лш-дiв (ПОЛ) - малонового дiальдегiду (МДА) [1] i активнiсть ферменту антиоксидантного захисту -супероксиддисмутази (СОД) [12].
Актившсть лактатдепдрогенази (ЛДГ) у сиро-ватцi кровi визначали за допомогою бiотестiв виробництва АТ «Реагент» (Укра!на).
Одержанi результати тддавали стандартнiй статистичнiй обробцi з використанням ^крите-рiю Стьюдента [8]. Щд час проведення дослiдiв дотримувалися правил роботи з лабораторними тваринами [10].
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ
Кверцетин не тшьки нейтралiзуе вiльнi ради-кали i стабiлiзуе клiтиннi мембрани, антиокси-дантний ефект його зумовлений i властивiстю активувати ферменти власного антиоксидан-тного захисту оргашзму (СОД, каталаза та iн.) [2, 13].
Нашi дослiдження показали, що моделювання хрошчно! серцево! недостатностi за допомогою доксорубщину спричиняе рiзку активацiю лшо-пероксидацi! як в головному мозку, так i в мю-кардi i в печiнцi щурiв, про що свщчить зни-ження синтезу СОД та тдвищення вмюту МДА (табл. 1).
Зпдно з нашими результатами, у штактних щурiв отримали наступнi показники активносп СОД: у головному мозку - 0, 0143, у мiокардi -0,011, у печшщ - 0,022 акт.од./мг бшка, що свщ-чить про нормальний стан ПОЛ в органiзмi тварин. Актившсть СОД рiзко пригнiчуеться в груш контролю (кардюмюпапя) у порiвняннi з штак-тними щурами. Значне зниження активносп СОД вiдбуваеться у мiокардi (на 42,73%), дещо менше у головному мозку (на 37,06%) i у печшщ (на 18,18%).
05/ Том X / 4
5
Таблиця 1
Дослщження штенсивносп процес1в ПОЛ при експериментальн1й антрациклшовш кардюмюпатй та корекцй препаратами кверцетину
Показ-ники ПОЛ Об'скт досл1дження Стат. показ-ник 1нтактн1 щури Кард1ом1опат1я (контроль) Кардюмюпат1я+ препарати кверцетину
СОД Головний мозок М ± т 0,0143±0,0027 0,009±0,0009 0,0205±0,0030*
М1окард М ± т 0,0110±0,0034 0,0063±0,0024 0,0113±0,0026*
Печшка М ± т 0,0220±0,0049 0,0180±0,0037 0,0260±0,0066
МДА Головний мозок М ± т 0,0195±0,0026 0,0246±0,0031 0,0213±0,0026
М1окард М ± т 0,0203±0,0025 0,0303±0,0037 0,0210±0,0016
Печ1нка М ± т 0,0116±0,0026 0,0091±0,0020 0,0070±0,0004
Прим1тка: * - р < 0,05 - пор1вняно з показниками контролю, СОД - акт.од./мг бшка; МДА - нМоль/мг бшка
На 42-у добу хрошчного експерименту у груш щурiв, яким на фон моделювання кардiомiопатi! вводили препарати кверцетину, актившсть СОД зростае найбiльше у головному мозку - на 127, 77% (р < 0,05), в мiокардi - на 79,36% (р < 0,05), у печшщ - на 44,44% вище контрольного значен-ня (табл. 1, рис.).
У штактних щурiв отримали наступнi по-казники кiлькостi МДА: у головному мозку - 0, 0195, у мiокардi - 0,0203, у печшщ - 0,0116 нМоль/мг бшка. Кшьюсть МДА зростае у груш контролю (кардюмюпапя) у порiвняннi з штакт-ними щурами. Значне зростання накопичення МДА саме в мiокардi (на 49%) можна пояснити
тропшстю доксорубщину до кардiолiпiну, який являе собою фосфолшд мiтохондрiальних мембран кардюмюципв. При цьому вважають, що мггохондри е тими органелами, в яких при акти-вацi! ПОЛ зароджуеться ланцюг подальших мо-лекулярних розладiв. Мiтохондрi! кардiомiоцитiв здатнi легко вщдавати неспаренi електрони док-сорубiцину, тобто вщбуваеться „несанкщоноване витiкання" електронiв iз дихального ланцюга, що спричиняе активний синтез синглетного кисню за участю екзогенно! НАДФ-дегiдрогенази, но-вий витш активацi! ланцюгових вшьнорадикаль-них процешв ПОЛ та пригнiчення енергетичного метаболiзму в мiокардi [1, 3].
Таблиця 2
Дослщження активности ЛДГ та ЛДГ1 у сироватц1 кров1 щур1в при антрацикл1нов1й кардюмюпатй та корекцй' препаратами кверцетину
Об'скт дослвдження Стат. показ-ник 1нтактт щури Кард1ом1опат1я (контроль) Кард1ом1опат1я+ препарати кверцетину
ЛДГ М ± т 7,20±0,28 4,51±0,18 6,35±0,26
ЛДГ1 М ± т 1,32±0,39 1,68±0,70 1,31±0,55
Доля ЛДГ1 % 18,33% 37,25% 20,63%
от ЛДГ (%) % откл. от К -44,62%
Прим1тка: * - р < 0,05 - пор1вняно з показниками контролю, ЛДГ, ЛДГ1 - мкмоль/годхмл
При призначеннi препарапв кверцетину вмiст 13,41% (рис.) у порiвняннi з контрольною гру-МДА в мiокардi тварин знижуеться на 30,69%, у пою (кардюмюпапя).
печшщ - на 23,49%, у головному мозку - на Зпдно з даними лнератури [5], актившсть
ЛДГ збшьшуеться при шфаркп мiокарда, некро-тичних ураженнях нирок, гепатитi, панкреатит^ злоякiсних новоутвореннях, лейкозах, гемоль тичнш та серпоподiбноклiтиннiй анемiях, шфек-цшному мононуклеозi, прогресуючiй м'язовiй дистрофи. Пщвищення загально! активностi ЛДГ при шфаркп мiокарда зумовлено збiльшенням активностi И iзоферменту ЛДГ]. Разом i3 тим, вщомо про випадки, коли загальна активнiсть
ЛДГ при iнфарктi мюкарда залишаеться в межах норми або незначно збшьшуеться за рахунок компенсаторного перерозподшу активностей шших И iзоферментiв у вiдповiдь на збiльшення активност ЛДГ]. Тому найбiльш показовими в дiагностицi патологи серця е методи, яю доз-воляють визначити активнють окремих iзофер-ментiв ЛДГ, до того ж вони мають орга-носпецифiчнiсть.
140
2 120
л
о р 100
1-
н о 80
X
Ч 60
в
л н 40
е
л 20
и
X 0
ч
в
S? -20
-40
127.77*
79.36*
44,44
СОД
МДА
J
-30,69
-23,49
-13,41
□ Мюкард ППечшка ПГоловний мозок
Порiвняльний вплив мрсмаратш кверцетину на штенсившсть мроцесш ПОЛ за умов доксорубщиновоТ кардюмюпатп
Тому у наших дослщженнях ми визначили рубiцину, мають виражеш антиоксидантнi вла-
активнiсть ЛДГ, ЛДГ1 (серцево! фракци) i частку ЛДГ1 вiд ЛДГ загально! (табл. 2). Зпдно з нашим дослiдженням, частка серцево! фракци ЛДГ1 вiд загально! ЛДГ зростае у щурiв iз кардiомiопатiею вдвiчi у порiвняннi з штактними щурами. У лiкувально-профiлактичнiй груш частка серцево! фракци ЛДГ] вщ загально! ЛДГ знижуеться у порiвняннi з контролем на 44,62%, тобто ток-сичний ефект доксорубiцину знижуеться при корекци Корвiтином® i таблетками кверцетину.
ВИСНОВКИ
1. Корв^ин® i таблетки кверцетину, якi за-стосовуються з першого дня введення доксо-
стивостi.
2. Зниження частки серцево! фракци ЛДГ] вiд загально! ЛДГ у лшувально-профшактичнш групi свiдчить про захисну дда препаратiв кверцетину.
3. Корвггин® i таблетки кверцетину можуть бути рекомендован у подальшому для клiнiч-ного застосування як антиоксиданти з власти-вiстю виявляти кардюпротекторш властивостi при кардiомiопатi!, зумовленiй протипухлинним антибiотиком антрациклiнового ряду.
СПИСОК Л1ТЕРАТУРИ
1. Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липи-дов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. дело. -1988. - №11. - С.41-46.
2. Використання нових лжарських форм кверцетину при iшемiчних та радiацiйних ушкодженнях: Метод. рекомендацп / Максютина Н. П., Мойбен-ко О.О., Пархоменко О. М. та ш. - К., 2000. - 13 с.
3. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. -
М.: Наука, 1972. - 252 с.
4. Вплив шкотинамщу на перекисне окисления лiпiдiв при моделюванш доксорубiциновоi хронiчноi кардiомiопатii / Нагорна О.О., Чекман 1.С., Горчакова Н.О. та ш. // Лши. - 2004. - №1-2. - С.116-119.
5. Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии. - Одесса: 1994. - 415 с.
6. Диагностика антрациклиновых повреждений сердца / Н.Т.Ватутин, Н.В.Калинкина, Е.В.Кетинг и др. // Укр.ревматол. журн. - 2001. - №1. - С.11-17.
05/ Том X / 4
7
7. Коваленко В.Н., Калинкина Н.В., Ватутин Н.Т. Повреждение сердца цитостатиками. - Донецк: УкрНТЭК, 2002. - 349с.
8. Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием EXCEL. - К.: Морион, 2001.- 408 с
9. Максютина Н. П., Мойбенко А. А., Пилипчук Л.Б. Корвитин для инъекций - кардиопротектор нового поколения // Материалы конф. «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармации». - С.Пб., 1999. - С. 130.
10. Науково-практичш рекомендаций з утримання лабораторних тварин та роботи з ними / Ю.М.
Кожем'яшн, О.С. Хромов, М.А. Фшоненко, Г.А. Сай-фетдшова.-К.: Вид. д1м "Авщена", 2002.-155с.
11. Повреждения сердца, вызванные применением антрациклинов. Новые данные / Ватутин Н.Т., Кетинг Е.В., Калинкина Н.В. и др. // Укр. мед. альманах. -2003. - Т.3, №4. - С.229-235.
12. Чевари С., Чаба И., Секей Й. Роль супер-оксиддисмутазы в окислительных процесах клетки и методы ее определения в биологическом материале // Лаб. дело. - 1988. - №11. - С. 678-681.
13. Hollman P., van Trijp J.M.P., Buysman M.N. Relative bioavailability of the antioxidant flavonoid quercitin from various foods in man // FEBS Lett. -1997. - Vol. 418, N 1-2. - Р. 152-156.
УДК 618.146-006:616-008.9:577.218-037-07
1.С. Шпонька*, О.В. Дорохова*, О.В.Шпонька**
ПРОГНОСТИЧНЕ ТА Д1АГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ ЕКСПРЕСП МАРКЕР1В Б1ОЛОГ1ЧНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ ТКАНИН ПРИ ДИСПЛАСТИЧНИХ ТА НЕОПЛАСТИЧНИХ ПРОЦЕСАХ ШИЙКИ МАТКИ
Дтпропетровська державна медична академiя кафедра патологiчноi анатома* (зав. - д. мед. н., проф. 1.С. Шпонька)
Полешка Днiпропетровськоi державно'1'медично'1' академИ**
Ключовi слова: рак шийки матки, дисплазИ шийки матки, iмуногiстохiмiя, тканинт маркери, eipym папшоми людини Key words: uterine cervix cancer, cervical intraepithelial dysphasia, immunohistochemistry, tissue markers, human papilloma viruses
Резюме. В работе рассматриваются актуальные вопросы использования маркеров биологических свойств тканей, таких как р16, р53, Ki-67, cyclin-D1, при диспластических и неопластических процессах шейки матки. Обсуждается диагностическая и прогностическая ценность каждого маркера и определена сфера их возможного использования. Рассматриваются теоретические вопросы онкогенеза при персисти-рующей инфекции вирусом папилломы человека высокой степени риска. Детально была рассмотрена клиническая ценность определения белка р16. Были определены 2 варианта окрашивания р16 - фокальный и диффузный - и была подчеркнута значимость именно диффузного варианта для ранней диагностики диспластических и неопластических процессов шейки матки. В аспекте практического использования им-муногистохимии в данной области подчеркнута важность исследования целого комплекса маркеров, таких как р16, р53, Ki-67, cyclin-D1, с обязательным изучением экспрессии р16, показывающего запуск он-когенного потенциала вирусов папилломы человека высокой степени риска в эпителии шейки матки и Ki-67, универсального маркера пролиферации.
Summary. The actual questions of usage of markers of biological tissue properties, such as p16, p53, Ki-67, cyclin-D1 in dysplastic and neoplastic processes of uterine cervixes are reviewed in this article. The diagnostic and prognostic value of each marker is discussed and the area of their possible usage is determined. Theoretical problems of oncogenesis in persistent infection with a high risk human papilloma viruses are discussed. Clinical value of determination of protein p16 staining is reviewed in detail. Two different types of p 16 staining - focal and diffuse were assessed, the significance
