CC BY
18
Пробл. особо опасных инф. 2017; 4:50-55. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-4-50-55
УДК 616.932:579.25
Е.В.монахова, р.В.Писанов, с.В.Титова, м.и.Ежова, с.А.иванов
вариабельность генов cef токсигенных и нетоксигенных штаммов
vibrio cholerae о1
ФКУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт», Ростов-на-Дону,
Российская Федерация
целью исследования явился сравнительный биоинформационный анализ генов и белков Cef (CHO cell elongating factor) холерных вибрионов 01 серогруппы. материалы и методы. В работе использовано 36 штаммов Vibrio cholerae 01 из коллекции Ростовского противочумного института. Секвенирование ДНК проводили на платформе MiSeq (Illumina), для идентифицации генов и анализа использовали программы BioEdit 7.2.5, BLASTN 2.2.29, BLASTP, MEGA 7, Vector NTI Advance 11. результаты и выводы. Полученные данные подтвердили достаточно высокую консервативность Cef у холерогенных штаммов (несущих гены холерного токсина ctxAB в составе интегрированного в геном профага CTX): все они содержали близкородственные прототипные аллели cefc или cefe1. Аллель Е1 обнаружена также у ctxAB- штаммов, содержащих профаг pre-CTX, и всего у одного лишенного обоих профагов. У остальных CTX/pre-CTX- вибрионов идентифицировано четыре новых, ранее не описанных варианта Cef, два из которых (Е2 и Е3), принадлежащие штаммам, выделенным в России, оказались уникальными, тогда как для двух других (Е4 и Е5) в NCBI были найдены полные гомологи. При этом в группу носителей се/Е4 попали несколько штаммов, вызывавших у людей тяжелые холероподобные заболевания. Поскольку Cef является одним из факторов патогенности/персистенции холерных вибрионов, мы полагаем, что сохранение в процессе естественного отбора его измененных вариантов несет определенный биологический смысл с точки зрения возможного приобретения ими свойств, существенных для реализации возбудителями как патогенетического, так и персистентного потенциала.
Ключевые слова: Vibrio cholera, CHO cell elongating factor, биоинформационный анализ, аллели гена cef, патогенетический потенциал, персистенция.
Корреспондирующий автор: Монахова Елена Владимировна, e-mail: monakhova_ev@antiplague.ru.
E.V.Monakhova, R.V.Pisanov, S.V.Titova, M.I.Ezhova, S.A.Ivanov
Variability of cef Genes in Toxigenic and Non-Toxigenic Vibrio cholerae O1 Strains
Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute, Rostov-on-Don, Russian Federation
Objective of the investigation was a comparative bioinformatics analysis of Vibrio cholerae 01 Cef (CHO cell elongating factor) genes and proteins. Materials and methods. 36 Vibrio cholerae 01 strains from the Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute collection have been utilized. DNA sequencing was conducted on the MiSeq platform (Illumina); gene identification and analysis was carried out by means of BioEdit 7.2.5, BLASTN 2.2.29, BLASTP, MEGA 7, Vector NTI Advance 11 software programs. Results and conclusions. The data obtained confirmed Cef to be rather conserved in choleragenic strains (carrying cholera toxin genes ctxAB as a part of genome-integrated CTX prophage): all of them shared closely related prototype alleles cefC or cefЕ1. The Е1 allele was also revealed in ctxAB- strains carrying the pre-CTX prophage and in a single strain lacking both prophages. In the rest of CTX-/pre-CTX-V. cholerae four novel cef variants, that were not previously described, have been identified, two of which (E2 and E3), belonging to the Russian isolates, appeared to be unique, while for the two others absolute homologues were found in NCBI. In this connection several strains which caused severe cholera-like diseases in humans were placed in the group of cefЕ4 host strains. Since Cef is one of pathogenicity/persistence factors of cholera vibrios, we presume that conservation of its altered variants in the course of natural selection embodies a certain biological sense in respect of possible acquisition of qualities, significant for realization of both pathogenic and persistence potential.
Key words: Vibrio cholerae, CHO cell elongating factor, bioinformatics analysis, gene alleles, pathogenic potential, persistence.
Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest.
Funding: The authors received no specific funding for this work.
Corresponding author: Elena V. Monakhova, e-mail: monakhova_ev@antiplague.ru.
Citation: Monakhova E.V., Pisanov R.V., Titova S.V., Ezhova M.I., Ivanov S.A. Variability of cef Genes in Toxigenic and Non-Toxigenic Vibrio cholerae O1 Strains. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2017; 4:50-55. (In Russ.). DOI: 10.21055/0370-1069-2017-4-50-55
Как известно, возбудителями эпидемических вспышек холеры являются холерогенные штаммы Vibrio cholerae 01 и 0139, содержащие гены холерного токсина (CT) ctxAB в составе интегрированного в геном профага CTX. Клиническая картина типичной холеры обусловлена главным образом CT, но в ее развитии участвует и ряд других фак-
торов [1]. Также существуют штаммы, лишенные ctxAB, но способные вызывать у людей заболевания различной степени тяжести - от слабой и умеренной диареи до тяжелых форм, клинически неотличимых от холеры [1, 8, 9]; они также часто выделяются и из объектов окружающей среды (ООС) [4, 10]. Их патогенетический потенциал зависит от
экспрессии детерминант других токсических субстанций, наборы которых различаются у разных штаммов [1]. Поскольку передача инфекции осуществляется водным либо пищевым путем, вибрионы должны обладать и достаточным персистент-ным потенциалом, позволяющим выживать в ООС, конкурируя за источники питания с другими микроорганизмами [10]. Они способны усваивать многие органические соединения за счет экспрессии детерминант различных гидролаз (протеаз, липаз, эстераз, нуклеаз и др.), причем некоторые одновременно служат факторами патогенности [1, 4]. К числу таких факторов относится, в частности, Cef (CHO cell elongating factor) - белок с молекулярной массой около 84 кДа, состоящий из 796 аминокислотных остатков (аа), кодируемый геном в составе малой хромосомы. помимо давшей название этому фактору цитотонической активности по отношению к культурам клеток и диареегенной на модели мышей-сосунков, сопровождающимися серьезными нарушениями ультраструктуры клеток, он способен гидролизовать р-нитрофениловые эфиры жирных кислот, твины и трибутирин [1, 2, 3, 6, 7]. В молекуле Cef идентифицировано несколько функциональных доменов: домен Куница, свойственный ингибиторам протеаз; лейциновая молния, обеспечивающая формирование димерной структуры белков; домен альфа-бета-гидролаз (а/bH) с входящим в его состав консервативным субстрат-связывающим мотивом GHSLG; перекрывающийся с а/bH домен LIP. GHSLG отвечает за биохимическую, но не биологическую активность Cef [2]. Ранее нами проведен биоинформационный анализ генов и белков Cef нескольких холерогенных штаммов о1 и о139 се-рогрупп и показана его высокая консервативность. вместе с тем установлено, что даже единственная нуклеотидная замена (SNP) в гене cef V. cholerae O139 привела к изменению спектра субстратной специфичности его продукта [3]. Поскольку CTX-штаммам свойственна значительно большая генетическая изменчивость по сравнению с CTX+, мы допускали, что в их геномах могут присутствовать и измененные гены cef, продукты которых могли приобрести свойства, существенные для реализации как патогенетического, так и персистентного потенциала. Поэтому представляло интерес проведение более подробного анализа с привлечением других штаммов, в том числе нехолерогенных.
Цель настоящего исследования состояла в сравнительном биоинформационном анализе генов и белков Cef холерных вибрионов О1 серогруппы.
Материалы и методы
Объектами исследования служили 36 штаммов V. cholerae о1 различного происхождения из коллекции Музея живых культур Ростовского противочумного института. Гены cef идентифицировали с помощью программ BioEdit 7.2.5 (http://www.mbio.
ncsu.edu/bioedit) и BLASTN 2.2.29 (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov) в «черновых» полных геномах этих штаммов, секвенированных нами на платформе MiSeq (Illumina) согласно прилагаемому протоколу. Анализ генов и их продуктов осуществляли с использованием программ Blastp (http://blast.ncbi.nlm. nih.gov), AlignX (Vector NTI Advance 11, Invitrogen) и MEGA 7 (http://www.megasoftware.net). Список штаммов и номера (ID) нуклеотидных последовательностей генов cef, депонированных нами в NCBI GenBank, представлены в таблице. Для сравнения в анализ включили прототипные гены cef V. cholerae Эль Тор JBK70 (AY7772384) и двух штаммов классического биовара - CVD103HgR (AY7772385) и 0395 (VC0395_0373 в CP000626.1) - и их продукты.
Результаты и обсуждение
По данным AlignX-анализа нуклеотидных последовательностей была построена дендрограмма, на которой cef V. cholerae эль тор образовали пять ветвей, каждая включала идентичные гены (рис. 1). Мы обозначили эти аллели как Е1-Е5 в соответствии с уровнем сходства с прототипным геном AY772384 (E1). Аллель Е1 длиной 2391 п.н. обнаружена у всех CTX+ штаммов, у ctxAB-/pre-CTX+ и у одного CTX/pre-CTX- штамма (14157). Результаты Blast-поиска в имеющихся на сегодняшний день в NCBI завершенных и «черновых» геномах показали, что данная аллель наиболее распространена среди штаммов Эль Тор. Следует отметить, что Е1 почти полностью идентична cefC классических штаммов: как показано ранее, разница между ними состояла в единственной SNP G/A-2014, приведшей к синонимичной замене остатка изолейцина (I) в CefC на остаток валина (V) в CefE1 в позиции 672, однако это никак не повлияло на биохимическую и биологическую активность продукта [3, 7]. Такую же аллель содержали классические штаммы, найденные в NCBI: ATCC 14035 (JHXR01000002), М-29 (Астрахань, 1942, JFGR01000001), RC27 (Индонезия, 1991, ADAI01000039), 95412 (Мексика, 1997, APFM01000042). Кроме того, в cef классического штамма 569В выявлена дополнительная SNP -А/С-2267 с соответствующей несинонимичной заменой гистидина (Н) на пролин (Р) в позиции 756. по-видимому, эта SNP не является значимой, поскольку активность продукта клонированного гена cef 569В ничем не отличалась от таковой cefE1 [3]. Кроме того, аллель cefC присутствовала и у отдельных штаммов, обозначенных как Эль Тор: ATCC 11629 (LOSM01000001) и 5/66 (Пакистан, 1966, JREO01000002).
Аллель Е2 имела нормальную длину 2391 п.н. и обладала 96,5 % сходства с Е1. Она идентифицирована в геноме всего одного из изученных нами штаммов (Р-18904), а в базах NCBI не найдено ее полных гомологов.
Аллель Е3 выявлена у двух штаммов из разных
Штаммы V. еНоЫгае и гены, использованные в сравнительном анализе
Наличие профагов Штамм Место выделения Год Источник выделения ГО гена се/
Р-5879 Ростовская обл. 1972 Труп КМ588824
17290 Дагестан 1994 Больной КМ522861
16228 Дагестан 1994 Больной КТ779266
17261 Дагестан 1994 Больной КТ779267
17296 Дагестан 1994 Больной КТ779268
18329 Казань 2001 Больной КТ779269
3265 Москва 2014 Больной КМ522864
СТХ+ Р-17917 Ростов-на-Дону 1999 Речная вода КЯ827238
Р-18252 Ростов-на-Дону 2000 Сточные воды КЯ827239
Р-18367 Ростов-на-Дону 2001 Речная вода КЯ827240
Р-18368 Ростов-на-Дону 2001 Речная вода КЯ827241
Р-18369 Ростов-на-Дону 2001 Речная вода КЯ827242
Р-18588 Ростов-на-Дону 2002 Речная вода КЯ827243
81 Ростов-на-Дону 2014 Речная вода КМ522865
569В неизвестно 1948 Больной КТ188942
9961 Москва 1977 Речная вода КТ728924
рге-СТХ+ Р-13169 Ростов-на-Дону 1987 Речная вода КТ728925
15500 Крым 1991 Сточные воды КМ522863
14157 Азербайджан 1989 Больной КМ522866
14863 Украина 1991 Больной КМ456178
14873 Молдова 1991 Больной КМ456179
15031 Украина 1991 Больной КМ456180
9339 Краснодарский край 1975 Речная вода КХ640094
11739 Краснодарский край 1980 Речная вода КХ640095
12026 Краснодарский край 1981 Речная вода КХ640096
17920 Краснодарский край 1999 Больной КХ640097
СТХ-/рге-СТХ- 18748 Краснодарский край 2004 Больной КХ640098
18984 Краснодарский край 2007 Речная вода КТ728926
434 Краснодарский край 2015 Речная вода КХ640099
Р-18904 Ростовская обл. 2006 Речная вода КМ522860
Р-18973 Ростов-на-Дону 2007 Речная вода КМ456181
Р-19051 Ростов-на-Дону 2008 Речная вода КХ640100
19308 Астраханская обл. 2012 Речная вода КХ640101
19758 Псковская обл. 2014 Речная вода КХ640102
19710 Иркутская обл. 2014 Речная вода КХ640104
Р-19430 Ростов-на-Дону 2013 Речная вода КХ640105
регионов России, которые были практически идентичными и по другим генетическим признакам. За счет вставки СТА между нуклеотидами 1630 и 1631 (относительно Е1) ген удлинился на три нуклеоти-да, а продукт - соответственно на 1 аа. Сходство с Е1 составило 93,7 %. В NCBI идентичных генов не найдено. Представляет интерес тот факт, что один из этих штаммов (434) является представителем клона, широко распространившегося в открытых водоемах Краснодарского края (в основном в реке Агура в Сочи и окрестностях) в 2015 г., где в течение двух месяцев выделено 83 штамма, идентичных по ПЦР- и VNTR-генотипам. Отличительной чертой их явилось наличие довольно редко встречающегося у V. с^1ете 01 гена ЛоПх-токсина (^хЛ), который относят к факторам колонизации, способствующим персистен-ции вибрионов в ассоциации с водными организмами [5]. Поэтому мы полагали, что такая длительная циркуляция данного клона могла быть отчасти или полностью обусловлена именно экспрессией ^хЛ. Обнаружение у штамма 434 новой аллели се/Е3 позволяет думать, что к этому мог быть причастен и
его продукт. второй штамм, идентичный первому, выделен тремя годами ранее в Астраханской области, что не исключает возможности его длительного сохранения с заносом на другие территории, где в определенный период сложились благоприятные условия для его размножения.
У 12 нехолерогенных штаммов разного происхождения выявлена аллель Е4, имеющая такую же вставку СТА, что и Е3, такую же длину (2394 п.н.) и 94,2 % сходства с Е1. В эту группу наряду с водными попали и клинические штаммы. Для трех из них (14863, 14873 и 15031) известно, что они явились этиологическими агентами тяжелых холероподобных заболеваний людей, на модели кроликов-сосунков вызывали эффект, близкий холерогенному, а их куль-туральные супернатанты - удлинение клеток СНО и L-929. Поскольку они не содержали генов других ци-тотонических токсинов (СТ и термостабильного), удлинение клеток скорее всего обусловлено действием Се£ Более того, ультраструктурные изменения в кишечнике животных, зараженных штаммом 14863, во многом напоминали таковые под действием рекомби-
Рис. 1. Дендрограмма, отражающая сходство и различия генов cef V. cholerae:
С - клинический штамм, Е - штамм из ООС
нантного белка Cef [1]. Эти данные позволяют предположить, что способность упомянутых штаммов вызывать тяжелые формы кишечных инфекций отчасти (или даже полностью) обусловлена продукцией CefE4, возможно, обладающего повышенной биологической активностью. В NCBI найден один СТХ- штамм VC35 с такой же аллелью (AMBR01000017, Contig017), выделенный в 2004 г. в Малайзии от больного с диагнозом «холера» [8]. Выявление аллели cefE4 у штаммов, не связанных общностью происхождения, указывает на его широкое распространение и необходимость дальнейшего изучения свойств его продукта для ответа на вопрос о том, является ли его присутствие в геномах возбудителей, выделяемых из ООС, показателем их высокого патогенетического потенциала и представляют ли они реальную угрозу. Не исключено также, что CefE4 обладает измененной эстеразной/ липазной активностью, что может повлиять на перси-стентный потенциал.
наименьшим уровнем сходства с прототипом (89,5 %) обладала аллель Е5 длиной 2403 п.н. Увеличение длины обусловлено, помимо уже упомянутой вставки CTA между нуклеотидами 1630 и 1631, наличием еще двух вставок: TTAAT между 946 и 947 и GTGT между 958 и 959 (относительно Е1). Первая привела к сдвигу рамки считывания, вторая -к восстановлению прежнего порядка кодонов. Кроме того, в последовательности «выше» данных вставок наблюдалось большое число 1-3-нуклеотидных замен. Все это привело к образованию в продукте ге-
терологичного 12 аа участка. Аллель Е5 обнаружена всего у двух штаммов, выделенных в разных регионах России в разные годы, но практически идентичных и по другим генетическим признакам. тем не менее, такая же аллель найдена в NCBI в сиквенсах двух СТХ/рге-СТХ- штаммов М1522 (Калмыкия, 2014, вода, LQCA01000002, contig00002) и 12129 (больной, 1985, ACFQ01000009, contig178). Мы полагаем, что продукт аллели се/Е5 также заслуживает дальнейшего изучения по причинам, изложенным применительно к се/Е4.
интересно, что во всех случаях наличия вставок общее число «лишних» нуклеотидов было кратно трем, поэтому в продуктах измененных генов появлялись «лишние» аа, но в целом они сохраняли достаточно высокий уровень сходства друг с другом, как и сами гены.
Поскольку в связи с вырожденностью генетического кода не все SNP приводят к заменам аа, далее мы провели А^пХ-анализ продуктов разных аллелей гена се/ вибрионов Эль Тор (рис. 2). В соответствии с длиной генов их продукты также имели разные размеры: Е1 и Е2 - 786, Е3 и Е4 - 797, Е5 - 800 аа.
Несмотря на различия по первичной структуре, все белки Cef сохранили активные домены. Домен куница у всех находился в одной и той же позиции 179-196 и остался в неизменном виде. Локализация остальных доменов в Е3, Е4 и Е5 отличалась от таковой в Е1 и Е2 вследствие сдвига за счет вставок дополнительных аа. Лейциновая молния была одинаковой
Рис. 2. Аминокислотные последовательности белков CefE1-E5. Все домены подчеркнуты, a/bH выделен рамкой, жирной чертой подчеркнута область его перекрытия с LIP. SBS - субстрат-связывающий мотив, выделен заливкой. Звездочкой (*) обозначены аминокислотные остатки: валина-672, на месте которого в CefC находится остаток изолейцина; гистидина-756, который замещен остатком пролина в CefC штамма V. cholerae 569В
во всех аллелях, тогда как а/bH и LIP характеризовались значительной вариабельностью, не затрагивающей GHSLG. Как видно из рис. 2, некоторые замены аа присутствовали во всех новых вариантах, другие повторялись в 2-3 аллелях либо были уникальными.
Таким образом, в результате проведенного анализа установлено, что гены cef нехолерогенных штаммов V. cholerae O1 значительно отличаются от таковых холерогенных вибрионов. Среди них выявлено четыре новых, ранее не описанных аллели, две из которых оказались уникальными. Принимая во внимание установленный нами ранее факт изменения субстратной специфичности Cef V. cholerae O139 вследствие единственной точковой мутации в его гене [3], мы не исключаем, что продукты разных аллелей cefE также могут различаться по биохимической и биологической активностям, с которыми связана способность вибрионов как к персистенции
в разных экологических нишах, так и к проявлению патогенных свойств, что требует экспериментальной проверки, которая покажет, представляют ли штаммы с той или иной аллелью этого гена реальную угрозу здоровью населения.
конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Монахова Е.В. Стратегия вирулентности холерных вибрионов и пути ее реализации. Пробл. особо опасных инф. 2013; 4:60-8.
2. Монахова Е.В., Писанов Р.В., Мазрухо А.Б., Маркина О.В., Алексеева Л.П. Свойства Cef (Сне cell elongating factor) холерных вибрионов: биоинформационный анализ и экспериментальные данные. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2012; 2:10-4.
3. Писанов Р.В., Монахова Е.В Шалу О.А. Точковая мутация в гене cef (CHO cell elongating factor) Vibrio cholerae O139 приводит к изменению субстратной специфичности его продук-
та. Генетика. 2012; 48(2):275-9.
4. Islam A., Labbate M., Djordjevic S.P., Alam M., Darling A., Melvold J., Holmes A.J., Johura ET., Cravioto A., Charles I.G., Stokes H.W. Indigenous Vibrio cholerae strains from a non-endemic region are pathogenic. Open Biol. 2013; 3:120181. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3603452. DOI: 10.1098/rsob.120181.
5. Lugo M.R., Merrill A.R. The father, son and cholix toxin: the third member of the DT group mono-ADP-ribosyltransferase toxin family. Toxins (Basel). 2015; 7(8):2757-72. DOI: 10.3390/tox-ins7082757.
6. McCardell B.A., Kothary M.H., Hall R.N., Sathyamoorthy V. Identification of a CHO-elongating factor produced by Vibrio cholerae O1. Microb. Pathog. 2000; 29(1):1-8. DOI: 10.1006/ mpat.2000.0361.
7. McCardell B.A., Sathyamoorthy V., Michalski J., Lavu S Kothary M., Livezey J., Kaper expression and characterization of the CHO cell elongating factor (Cef) from Vibrio cholerae O1. Microb. Pathog. 2002; 32(4):165-72. DOI: 10.1006/ mpat.2001.0492.
8. Osama A., Gan H.M., The C.S., Yap K.P., Thong K.L. Genome sequence and comparative genomics analysis of a Vibrio cholerae O1 strain isolated from a cholera patient in Malaysia. J. Bacteriol. 2012; 194(24):6933. DOI: 10.1128/JB.01832-12.
9. Saha P.K., Koley H., Mukhopadhyay A.K., Bhattacharya S.R., Nair G.B., RamaKrishnan S.T., Takeda Y. Nontoxigenic Vibrio cholerae O1 serotype Inaba biotype El Tor associated with a cluster of cases of cholera in Southern India. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(5):1114-7.
10. Vezzulli L., Pruzzo C., Huq A., Colwell R.R. Environmental reservoirs of Vibrio cholerae and their role in cholera. Environ. Microbiol. Rep. 2010; 2(1):27-3. DOI: 10.1111/j.1758-2229.2009.00128.x.
References
1. Monakhova E.V. [Cholera vibrio virulence strategy and ways of its realization]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2013; 4:60-8.
2. Monakhova E.V., Pisanov R.V., Mazrukho A.B., Markina O.V., Alekseeva L.P. [Characterization of Vibrio cholerae Cef (CHO cell elongating factor): bioinformatics analysis and experimental data]. Mol. Genet.
Mikrobiol. Virusol. 2012; 2:10-4.
3. Pisanov R.V., Monakhova E.V., Shalu O.A. [Point mutation in Vibrio cholerae O139 cef (CHO cell elongating factor) gene alters the substrate specificity of its product]. Genetika. 2012; 48(2):245-8.
4. Islam A., Labbate M., Djordjevic S.P., Alam M., Darling A., Melvold J., Holmes A.J., Johura F.T., Cravioto A., Charles I.G., Stokes H.W. Indigenous Vibrio cholerae strains from a non-endemic region are pathogenic. Open Biol. 2013; 3:120181. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/ PMC3603452. DOI: 10.1098/rsob.120181.
5. Lugo M.R., Merrill A.R. The father, son and cholix toxin: the third member of the DT group mono-ADP-ribosyltransferase toxin family. Toxins (Basel). 2015; 7(8):2757-72. DOI: 10.3390/toxins7082757.
6. McCardell B.A., Kothary M.H., Hall R.N., Sathyamoorthy V. Identification of a CHO-elongating factor produced by Vibrio cholerae O1. Microb. Pathog. 2000; 29(1):1-8. DOI: 10.1006/mpat.2000.0361.
7. McCardell B.A., Sathyamoorthy V., Michalski J., Lavu S., Kothary M., Livezey J., Kaper J.B., Hall R. Cloning, expression and characterization of the CHO cell elongating factor (Cef) from Vibrio cholerae O1. Microb. Pathog. 2002; 32(4):165-72. DOI: 10.1006/mpat.2001.0492.
8. Osama A., Gan H.M., The C.S., Yap K.P., Thong K.L. Genome sequence and comparative genomics analysis of a Vibrio cholerae O1 strain isolated from a cholera patient in Malaysia. J. Bacteriol. 2012; 194(24):6933. DOI: 10.1128/JB.01832-12.
9. Saha P.K., Koley H., Mukhopadhyay A.K., Bhattacharya S.R., Nair G.B., RamaKrishnan S.T., Takeda Y. Nontoxigenic Vibrio cholerae O1 serotype Inaba biotype El Tor associated with a cluster of cases of cholera in Southern India. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(5):1114-7.
10. Vezzulli L., Pruzzo C., Huq A., Colwell R.R. Environmental reservoirs of Vibrio cholerae and their role in cholera. Environ. Microbiol. Rep. 2010; 2(1):27-3. DOI: 10.1111/j.1758-2229.2009.00128.x.
Authors:
Monakhova E.V., Pisanov R.V., Titova S.V., Ezhova M.I., Ivanov S.A. Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute. 117/40, M.Gor'kogo St., Rostov-on-Don, 344002, Russian Federation. E-mail: plague@aaanet.ru.
об авторах:
Монахова Е.В., Писанов Р.В., Титова С.В., Ежова М.И., Иванов С.А. Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт. Российская Федерация, 344002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117/40. E-mail: plague@aaanet.ru.
Поступила 03.11.17.
