CC BY
16
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
85
Заключение. При значительных передозировках нано-сомальной лекарственной формы доксорубицина вспомогательные вещества и растворитель могут вносить вклад в развитие гепато- и нефротоксичности, а также в возникновение атрофических изменений в слизистой оболочке желудка.
Э.Р. Переверзева1, И.Д. Трещалин1, Е.В. Возняковская1, Т. Б. Переверзева1, Д. Г. Козлов2, С. В. Яроцкий2 ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ КРОЛИКОВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ РЕКОМБИНАНТНОЙ БИОМОДИФИЦИРОВАННОЙ Ь-АСПАРАГИНАЗЫ
ФГБНУ«НИИНА им. Г.Ф. Гаузе», Москва; 2ФГУПГосНИИгенетика, Москва
Введение. Ь-аспарагиназы широко используются в химиотерапии лейкозов. Однако побочное действие этих препаратов значительно ограничивает возможности их клинического применения. Это определяет необходимость создания новых препаратов Ь-аспарагиназы, обладающих сниженной токсичностью за счет невысокой Ь-глутаминазной активности. В ГосНИИгенетика был сконструирован химерный вариант ""^79 модифицированной Ь-аспарагина-зы Wolinella succinogenes, который имеет пониженный уровень глутаминазной активности.
Цель исследования — изучение морфологических проявлений токсического действия Ь-аспарагиназы "№^79 на кроликах в субхроническом эксперименте.
Материалы и методы. Исследование проведено на 60 кроликах породы шиншилла. Препарат вводили внутривенно ежедневно в течение 15 дней с интервалом 24 ч в разовых дозах, составляющих 1 и 5 терапевтических. На 1-е и 15-е сутки по окончании курса введений по 5 животных из группы подвергали эвтаназии. Участки внутренних органов фиксировали в 10 % нейтральном формалине, заливали в парафин, срезы окрашивали гематоксилином и эозином.
Результаты. При применении Ь-аспарагиназы в дозе, составляющей 1 терапевтическую, возникают умеренные морфологические изменения в печени, почках, селезенке и поджелудочной железе. Структура печени, селезенки и поджелудочной железы полностью восстанавливается к концу эксперимента. При введении Ь-аспарагиназы в дозе, пятикратно превышающей терапевтическую, гепатотокси-ческие свойства препарата морфологически проявляются сразу после курса введений в виде некроза гепатоцитов вокруг портальных трактов и центральных вен печеночных долек и сохраняются в течение 2 нед по его окончании. Превышение терапевтической дозы в 5 раз приводит к возникновению дистрофических, атрофических и деструктивных изменений во всех зонах почек, вызывает глубокие атрофические изменения лимфоидной ткани селезенки, тимуса и лимфатических узлов. В течение месяца происходит частичная репарация структуры этих органов. Морфологические изменения слизистой оболочки желудка носят очаговый характер и проявляются в изменении соотношения клеточных элементов в железах и повреждении покров-но-ямочного эпителия. Повреждающее действие препарата на ткань поджелудочной железы проявляется не у всех жи-
вотных. У отдельных особей его применение в высокой дозе вызывает некроз ацинусов, кровоизлияние и гибель отдельных клеток в островках Лангерганса.
Заключение. Изменения структуры внутренних органов крыс зависят от величины примененной дозы. При применении высоких доз препарата следует учитывать возможность возникновения деструктивных изменений в печени, почках, поджелудочной железе и желудочно-кишечном канале, а также гипоплазии лимфоидной ткани.
А.Д. Перенков, Д.В. Новиков, А. В., В.В. Новиков УРОВЕНЬ МАТРИЧНОЙ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ГЕНА СВ38 В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ТОЛСТОЙ КИШКИ С МЕТАСТАЗАМИ
ФГАОУВО «ННГУ им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород
Введение. Белок, кодируемый геном CD38, обладает НАД-гидролазной активностью, является маркером активации лимфоцитов и участвует в клеточной адгезии. Для гена CD38 описано 2 формы матричной рибонуклеиновой кислоты (мРНК) — полноразмерная и усеченная (альтернативная) с делецией 3-го экзона. мРНК альтернативной формы CD38 кодирует полипептид-антагонист полноценного белка СБ38. Его присутствие может снижать вероятность диапедеза клеток иммунной системы и передачи внутриклеточных сигналов, что в конечном итоге приводит к снижению их функциональной активности. Экспрессия молекулы СБ38 на мембране клеток используется в качестве прогностического и диагностического маркера при онкогематологических заболеваниях. Однако в литературе недостаточно представлены данные об уровне мРНК гена CD38 в периферической крови больных раком толстой кишки (РТК).
Цель исследования — изучить уровень обеих форм мРНК гена CD38 в периферической крови больных РТК, у которых обнаружены метастазы и у больных РТК без метастазов.
Материалы и методы. В работе использовали 47 образцов периферической крови от больных РТК, у которых не обнаружены метастазы, 25 образцов периферической крови больных РТК с метастазами и 86 образцов периферической крови здоровых доноров. Дезоксирибонуклеи-новую кислоту выделяли методом фенол-хлороформной экстракции. Уровень мРНК гена CD38 исследовали с помощью мультиплексного «ТадМап» варианта полимераз-ной цепной реакции в реальном времени. Измерение уровня мРНК гена CD38 проводили относительно референтного гена UBC.
Результаты. Уровень полноразмерной формы мРНК СБ38 в крови больных РТК с метастазами был в 1,5 раза (р < 0,05), а альтернативной — в 2 раза (р < 0,05) выше, чем у больных без метастазов. Повышение уровня альтернативной формы мРНК СБ38 у больных с метастазами может показывать изменения в регуляции активированных лимфоцитов. При этом уровень полноразмерной формы мРНК в крови больных РТК без метастазов был в 1,3 раза (р < 0,05) выше, а альтернативной — в 1,5 раза (р < 0,05) ниже, чем у здоровых доноров. Однако уровень альтернативной формы мРНК в крови больных с метастазами статистически
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
86
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
не отличался от нормы, в то время как уровень полноразмерной формы был повышен в 1,9 раза (р < 0,05).
Заключение. Уровень обеих форм мРНК гена CD38 в периферической крови больных РТК с метастазами выше, чем в периферической крови больных без метастазов. Таким образом, уровень мРНК гена CD38 может быть использован в качестве дополнительного прогностического маркера при РТК. Кроме того, мРНК гена CD38 может стать индикатором наличия метастатических клеток в организме больного.
А.А. Петкевич, С.А. Кузнецов, И.Ж. Шубина, М.В. Киселевский
НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ АДЪЮВАНТНОЙ АДАПТИВНОЙ ИММУНОТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Современные методы адаптивной иммунотерапии рака основаны на использовании лимфоцитов, активированных интерлейкином-2 или другими цитоки-нами, а также вакцин, разработанных, с применением дендритных клеток. Особое внимание в последнее время привлекают иммунные чекпоинты — молекулы, участвующие в качестве триггерных механизмов активации лимфоцитов. В настоящее время проходят клинические испытания препараты ипилимумаб (блокатор гена CTLA4) и ниволумаб (блокатор рецептора PD1). В процессе применения новых средств иммунотерапии необходимо проводить постоянный контроль за показателями гуморального и клеточного иммунитета. На 1-м этапе мы ограничились изучением характеристики субпопуляций лимфоцитов периферической крови и лимфатических узлов (ЛУ) больных раком яичника, меланомой и немелкоклеточным раком легкого.
Цель исследования — определение иммунофенотипа мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови и ЛУ больных раком яичника, меланомой и немелкокле-точного рака легкого.
Материалы и методы. Определение иммунофенотипа МНК проводили с помощью моноклональных антител против соответствующих антигенов, конъюгированных с флуоресцентными красителями FITC, PE или PAC: CD3, CD8, CD4, CD56, CD25, CD16. Цитометрические измерения осуществляли на проточном цитофлуориметре.
Результаты. В группе МНК распределение субпопуляций клеток было следующим: CD3+ — 18,8—74,9 % от общего пула исследуемых клеток; CD4+ — 9,4—64,0 %, CD3+/ CD8+ - 4-30 %, OT4+/CD25+ - 0-2 %, CD16+/ CD56+ -0-20 %. В ЛУ субпопуляции распределились следующим образом: CD16+/ CD56+ - 0-0,8 %, CD4+ - 13,4-55,3 %, CD3+/CD8+ - 3,8-14,1 %, CD4+/CD25+ - 0-12,9 %. Из представленных данных видно, что в ЛУ практически отсутствует субпопуляция клеток натуральных киллеров, среди МНК-пула эта субпопуляция также значительно снижена.
Заключение. Данные результаты позволяют предположить, что ЛУ могут служить источником эффекторных клеток, генерируемых для последующего использования в противоопухолевой иммунотерапии. Возможно, именно эти популяции лимфоцитов следует рассматривать как наибо-
лее функционально активные источники для клеточной иммунотерапии.
Р. А. Петров, А. Г. Мажуга, Е.К. Белоглазкина,
С.A. Петров, Е.Э. Ондар, Н.В. Зык
ДИЗАЙН И СИНТЕЗ ЛИГАНДОВ ASGP-РЕЦЕПТОРА
НА ОСНОВЕ ПРОИЗВОДНЫХ N-АЦЕТИЛ-ГАЛАКТОЗЫ
Химический факультет ФГБОУВО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва
Введение. Гепатоцеллюлярная карцинома — наиболее распространенная опухоль печени, результат злокачественного перерождения гепатоцитов. Ежегодно в мире диагностируют более 600 тыс. случаев заболевания этим недугом. Перспективным направлением увеличения эффективности химиотерапии является адресная доставка лекарств в клетки печени при помощи ASGP-рецептора гепатоцитов, распознающего производные галактозы. Данный рецептор расположен только на поверхности клеток печени и селективно связывается с гидроксильными группами в 3-м и 4-м положениях галактозы. Внемембранная часть белка состоит из 3 субъединиц, каждая их которых связывается с галактозой.
Цель исследования — получение конъюгатов противоопухолевого лекарственного препарата доксорубицина с тканеспецифическими лигандами для направленной доставки препарата непосредственно в опухоль печени и их биологическое тестирование.
Материалы и методы. Все исходные реактивы являются коммерчески доступными. Полученные соединения охарактеризованы с помощью методов 'H и 13С ядерной магнитно-резонансной спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографии масс-спектрометрии.
Результаты. На данный момент нами были получены 8 новых высокоселективных лигандов, которые были исследованы на предмет связывания с рецептором. Выявлены наиболее активно связывающиеся соединения. Лиганды, показавшие наибольшую активность, планируется конъ-югировать с противоопухолевым препаратом доксоруби-цином, а также ввести флуоресцентные метки для дальнейших исследований in vitro.
Заключение. Таким образом, нами был предложен перспективный метод оптимизации противоопухолевого соединения за счет его конъюгирования с высокоселективным лигандом. В результате работы были оптимизированы синтетические подходы к созданию лигандов ASGP-рецепто-ра на основе производных N-ацетил-галактозы. На основе полученных данных об активности исследуемых соединений была установлена зависимость структура — активность; разработана процедура, позволяющая в экспериментах in vitro исследовать новые лиганды асиалогликопротеино-вого рецептора и конъюгаты на их основе.
Работа выполнена при поддержке РНФ (грант № 14-34-00017).
А.А. Пискунов, М.С. Аксенова, М.В. Лыков, Д.А. Потеряев МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, АНТАГОНИСТ ХЕМОКИНОВОГО РЕЦЕПТОРА CXCR4, СНИЖАЕТ МЕТАСТАЗИРОВАНИЕ ОПУХОЛИ И ПОВЫШАЕТ ИНФИЛЬТРАЦИЮ В ОПУХОЛЬ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ Т-ЛИМФОЦИТОВ IN VIVO
№1 I том 15 I 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
