Уровень экспрессии циклооксигеназы-2 и выраженность воспаления в стенке желчного пузыря у больных хроническим калькулезным холециститом

Голубев Сергей Степанович; Козлова Наталья Михайловна; Тюрюмин Я.Л.; Раевская Л.Ю.; Нестеров Н.Г.

ЛИТЕРАТУРА

1. Клеменков С.В., Левицкий Е.Ф., Давыдова О.Б. Физиотерапия больных коронарной болезнью сердца с нарушением ритма. — Красноярск-Томск-М.: Сибирь, 2002.

— 336 с.

2. Клеменков С.В., Разумов А.Н., Давыдова О.Б. и др. Бальнеотерапия и физические тренировки в восстановительном лечении больных коронарной болезнью сердца с нарушением ритма и проводимости. — Красно-Ярск-Томск-М.: Сибирь, 2002. — 296 с.

3. Клеменков С.В., Явися А.М., Разумов А.Н. и др. Оптимизация восстановительного лечения больных коронарной болезнью сердца с нарушением ритма и проводимости длительным комбинированным применением бальнеотерапии и физических тренировок. — Красно-ярск-М.: Сибирь, 2002. — 125 с.

4. Клеменков С.В., Каспаров Э.В., Разумов А.Н. и др. Восстановительное лечение больных коронарной болезнью сердца с нарушением ритма и проводимости с помощью физических факторов. Т.1. — Красноярск-М.-Томск-Пятигарск: Кларетианум, 2003. — 332 с.

5. Клеменков С.В., Разумов А.Н., Левицкий Е.Ф., Клеменков А. С. Восстановительное лечение больных коронарной болезнью сердца с нарушением ритма и проводимости с помощью физических факторов. Т.2. — Крас-ноярск-М.-Томск-Пятигорск: Кларетианум, 2003. — 276 с.

Кубушко И.В., Каспаров Э.В., Клеменков С.В. и др. Оптимизация восстановительного лечения больных ишемической болезнью сердца с нарушением ритма комбинированным применением бальнеотерапии с электротерапией или физическими тренировками. — Крас-ноярск-М.: Сибирь, 2003. — 151 с.

7. Клеменков С.В., Каспаров Э.В., Петрова М.М. и др. Оптимизация восстановительного лечения больных коронарной болезнью сердца с нарушением ритма комбинированным применением электросна с психотерапией или углекислыми ваннами. — Красноярск: Кларетианум, 2004. — 144 с.

8. Клеменков С.В., Разумов А.Н., Каспаров Э.В. и др. Оптимизация восстановительного лечения больных ишемической болезнью сердца с нарушением ритма длительным применением бальнеотерапии в амбулаторных условиях. — Красноярск-М.: Кларетианум, 2004. — 120 с.

9. Мышенко О.А. Качество и эффективность укороченных сроков санаторно-курортного лечения больных ишемической болезнью сердца в сочетании с начальной дисциркуряторной энцефалопатией: Автореф. дисс. ...канд. мед. наук. — Томск, 2006. — 24 с.

10. Серебряков В.Г., Клеменков С.В., Клеменков А.С. и др. Оптимизация восстановительного лечения больных стабильной стенокардией с нарушением ритма (непосредственные и отдаленные результаты) разными методами бальнеотерапии в амбулаторных условиях. — Красноярск-М.: Кларетианум, 2005. — 124 с.

carbonic acid gas baths in combination with physical trainings on bicycle ergometer or curative gymnastics. Condition of physical efficiency was estimated with the help ofspiroergomentry, bicycle ergometry; influence ofphysical factors on rhythm disturbance and myocardial ischemia - monitoring of electrocardiogram per Holter. It’s proved, that the general carbonic acid gas baths with physical trainings on bicycle ergometer give authentically identical increase of the direct and follow up results of treatment of patients with coronary heart disease (CHD) and hypertonic illness on short (14 days) and usual (21 day) courses of sanatorium treatment.

6

УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ ЦИКЛООКСИГЕНАЗЫ-2 И ВЫРАЖЕННОСТЬ ВОСПАЛЕНИЯ В СТЕНКЕ ЖЕЛЧНОГО ПУЗЫРЯ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ КАЛЬКУЛЕЗНЫМ ХОЛЕЦИСТИТОМ

С.С. Голубев, Н.М. Козлова, Я.Л. Тюрюмин, Л.Ю. Раевская, Н.Г. Нестеров

(Иркутский областной клинический консультативно-диагностический центр, гл. врач — к.м.н. М.Л. Меньшиков; Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра факультетской терапии, зав. — д.м.н., проф. Ф.И. Белялов' Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения РАМН, директор — д.м.н., проф. Е.Г. Григорьев)

Резюме. Изучєн yрoвeнь экcnрeccии циклooкcигeназы-2 (ЦOГ-2) в завишмо^и om cmeneM выражeннocmи вocnалeния в cmєнкє жєлчньк щзь^й, получєнньк om больнък xрoничecким колькулєзньім xoлeциcmиmoм no^e xoлeциcmэкmo-мии. Пoвышeнная ж^рє^ш ЦOГ-2 быта onрeдeлeна в 81% в эnиmeлиальныx клemкаx, в 86%о — в гладкoмышeчныx, в 57% — в тромальнык ^em^x, в 71% — в cmeнкаx cocyдoв, в 37% — cинycаx Рoкиmанcкoгo-Aшoффа. Bыявлeна поло-жиmeльная кoррeляция мeждy выражeннocmью вocnалeния в cmerne жeлчнoгo нузыря и выражeннocmью экcnрeccии WOr-2 в гладкoмышeчныx клemкаx и cmeнкаx cocyдoв.

Ключевые слова. Экcnрeccия циклooкcигeназы-2, xрoничecкий калькyлeзный xoлeциcmиm, аcenmичecкoe вocnалeниe.

В настоящее время начало хронического некальку-лезного холецистита связывают с развитием асептического воспаления в слизистой оболочке желчного пузыря (ЖП) [2].

Не вызывает сомнения тот факт, что некалькулез-ный холецистит представляет собой начальную стадию калькулезного холецистита, то есть еще до развития камней в желчном пузыре уже обнаруживаются литогенные свойства желчи [1].

Циклооксигеназа-2 (ЦОГ-2) вовлечена в воспалительный ответ при хронических холециститах [10].

Повышение экспрессии ЦОГ-2 обнаружено в препаратах ЖП, полученных после холецистэктомии (ХЭ) при хронических холециститах, а также при экспериментальном остром холецистите [5,6,7,11]. Степень экспрессии циклооксигеназы-2 в строме ЖП при хроническом холецистите значительно выше, чем в норме [6].

При анализе современной литературы нам не встретилось исследований, посвященных уровню экспрес-

сии ЦОГ -2 в зависимости от выраженности воспаления при хронических холециститах.

Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования явилось изучить уровень экспрессии ЦОГ-2 в зависимости от степени выраженности воспаления в стенке желчного пузыря у больных хроническим каль-кулезным холециститом (ХКХ).

Материалы и методы Проводили гистологическое (п=52) и иммуноморфо-логическое исследования (п=21) препаратов стенки желчных пузырей, полученных во время холецистэктомии у больных ХКХ. Кроме того, была обследована контрольная группа препаратов желчных пузырей (гистологическое исследование), полученных при аутопсии умерших от заболеваний, не связанных с патологией органов пищеварения (без наличия камней и признаков воспаления в желчном пузыре) (п=21).

Микроскопическое исследование стенки желчного пузыря проводилось после стандартной фиксации 10% нейтральным формалином и подготовки микропрепарата. Окраска гистологических препаратов проводилась гематоксилином-эозином и пикрофуксином по Ван-Гизону. Для количественного морфометрического изучения объек-

тов и их подсчета была использована система компьютерного анализа цветового изображения «ВидеоТест — Морфо 4,0». Количественные измерения проводились в 3-х препаратах (дно, тело, шейка желчного пузыря) в 5 репрезентативных полях со стандартной измерительной рамкой при увеличениях х50, х100, х200 и х400. При исследовании препаратов проводилась количественная оценка следующих параметров: 1) количество клеточных элементов воспаления в поле зрения; 2) лимфо-плазмацитарный индекс; 3) среднее число нейтрофилов в поле зрения; 4) среднее число эозинофилов в поле зрения; 5) среднее число плазматических клеток в поле зрения. Кроме того, полуколи-чественно определяли интенсивность воспалительного инфильтрата, наличие острого или хронического воспаления, метаплазии, воспаление в синусах Рокитанского-Ашоффа, наличие очаговой и диффузной лимфоцитарной инфильтрации стромы слизистой оболочки.

Иммуноморфологическое исследование проводили по протоколу DakoCytomation с первичным моноклональным антителом Cyclooxygenase-2 (Novocastra). Экспрессию ЦОГ-2 в стенке ЖП оценивали полуколичественно.

Статистическую обработку проводили, используя программу Statistica 5 for Windows. Достоверность различий определяли по критерию u-Манна-Уитни. Изучение статистических связей между показателями выборки проводили с помощью корреляционного анализа. Направление корреляционной связи оценивали по знаку коэффициента корреляции Спирмена (rS). Показатели считали значимыми при p<0,05.

Результаты и обсуждение

При гистологическом исследовании стенки желчного пузыря после холецистэктомии у больных ХКХ (n=52) преобладали: 1) слабо выраженные (52% в дне, 56% - в шейке, 46% - в теле) и умеренно выраженные признаки хронического воспаления (40% - в дне, 29% -шейке, 56% - в теле); 2) очаговая лимфоцитарная инфильтрация стромы слизистой оболочки желчного пузыря (79%); 3) диффузная лимфоцитарная инфильтрация стромы слизистой оболочки желчного пузыря (21%); 4) умеренно выраженная атрофия слизистой оболочки ЖП (44% - в дне, 52% - в шейке, 48% - в теле); 5) умеренно выраженный склероз стенки (54% - в дне, 52%

- в шейке, 58% - в теле); 6) умеренно выраженная гипертрофия мышечного слоя (44% - в дне, 56% - в шейке, 44% - в теле); 7) метаплазия по желудочному типу (29% - в дне, 25% - в шейке, 29% - в теле). Все приведенные гистологические изменения значимо различались по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Наши результаты согласуются с данными литературы [1,2,3,4].

Количество клеточных элементов в поле зрения: в дне — 32,0 (23,0-48,5) (р<0,05, по отношению к контролю), в шейке — 28,0 (15,5-50,0) (р<0,05), в теле — 33,0 (22,0-50,0) (р<0,05) (рис. 1). Лимфо-плазмацитарный индекс составил 9/1 (р<0,05).

Повышенная экспрессия ЦОГ-2 в стенке ЖП в препаратах, полученных после ХЭ от больных ХКХ (п=21) была определена в 81% в эпителиальных клетках, в 86%

— в гладкомышечных, в 57% — в стромальных клетках, в 71% — в стенках сосудов, в 37% — синусах Рокитанс-кого-Ашоффа (рис. 2). При интенсивности воспаления в стенке ЖП слабой степени (п=12) повышенная эксп-

Рис. 2. Экспрессия СОХ-2 в эпителии слизистой и мышечном слое. РАР-метод. DAB. Увеличение х200.

рессия ЦОГ-2 обнаружена в эпителии - 83%, в гладкомышечных клетках — 75%, в стромальных — 33%, в стенке сосудов — 78%, в синусах Рокитанского-Ашоффа — 17%. В группе, включающей более выраженную степень воспаления (умеренную и резкую, n=9), повышенная экспрессия ЦОГ-2 была определена в эпителиальных клетках - 78%, в гладкомышечных - 100%, в стромальных клетках - 78%, в стенках сосудов - 89%, в синусах Рокитанского-Ашоффа - 67%. Выявлена положительная корреляция между выраженностью воспаления в стенке ЖП и выраженностью экспрессии ЦОГ -2 в гладкомышечных клетках (rS= +0,71, p<0,001) и стенках сосудов (rS= +0,51, p<0,05) (рис. 3 и 4).

Рис.1. Хронический воспалительный инфильтрат. Лимфоциты (1), плазматические клетки (2), макрофаги (3), фибробласты (4). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение х400.

Экспрессия ЦОГ-2 в ГМ клетках

Рис. 3. Положительная взаимосвязь между выраженностью степени воспаления в стенке желчного пузыря и выраженностью экспрессии циклооксигеназы 2-го типа (ЦОГ-2) в гладкомышечных клетках (ГМ) у больных ХКХ (п=21).

В группе желчных пузырей, имеющих желудочную метаплазию слизистой оболочки (п=8), повышенная экспрессия ЦОГ-2 была определена: в эпителиальных клетках — 100%, в гладкомышечных — 87%, в стромаль-ных — 63%, в стенках сосудов — 75%, в синусах Роки-танского-Ашоффа — 37%.

4,5

1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8

Экспрессия ЦОГ-2 в стенках сосудов Рис. 4. Положительная взаимосвязь между выраженностью степени воспаления в стенке желчного пузыря и выраженностью экспрессии циклооксигеназы 2-го типа (ЦОГ-2) в стенках сосудов у больных ХКХ (п=21).

В этой группе обнаружена корреляция между интенсивностью воспаления и выраженностью экспрессии ЦОГ-2 в стромальных клетках (г5= +0,72, р<0,05).

1,5 2,0 2,5 3,0 3,5

Экспрессия ЦОГ-2 в ГМ клетках Рис. 5. Взаимосвязь между выраженностью степени воспаления в стенке желчного пузыря и выраженностью экспрессии циклооксигеназы 2-го типа (ЦОГ-2) в гладкомышечных клетках (ГМ) у (больных ХКХ (п=13, без метаплазии).

При исследовании желчных пузырей без метаплазии (п=13) повышенная экспрессия ЦОГ-2 обнаружена в эпителиальных клетках — 69%, в гладкомышечных

— 85%, в стромальных — 54%, в стенках сосудов — 69%, в синусах Рокитанского-Ашоффа — 38%.

Интенсивность воспаления в стенке ЖП зависела от экспрессии ЦОГ-2 в гладкомышечных клетках (г5= +0,82, р<0,001) в этой группе (рис. 5).

Повышение экспрессии ЦОГ-2 обнаружено также другими авторами в эпителиальных и стромальных клетках препаратов ЖП, полученных после ХЭ при острых и хронических холециститах, а также в гладкомышечных клетках при экспериментальном остром холецистите [6,7,8].

Мы не встретили указаний на повышенную экспрессию ЦОГ -2 в стенках сосудов и в синусах Рокитанс-кого-Ашоффа.

На модели острого и хронического холециститов продемонстрировано, что увеличение освобождения простагландинов РСЕ2, 6-ке1о-РСБ1-а1рЬа в мышечных клетках, вызванное увеличением синтеза ЦОГ-2, приводит к воспалению в желчном пузыре [8] и блокируется селективными ингибиторами ЦОГ-2 [10]. В эксперименте показано, что количество рецепторов к холе-цистокинину уменьшается, а к РСЕ2, напротив, повышается при остром холецистите [12]. Холецистокинин подавляет освобождение РСЕ2 [9].

Учитывая выше сказанное, повышение экспрессии ЦОГ-2 в эпителиальных клетках может быть причиной нарушения абсорбционной функции, в гладкомышечных клетках — снижения моторики ЖП, то есть повышенная экспрессия в указанных клетках может быть причиной хронического «мягкого» внутрипузырного холестаза. Повышенная экспрессия в гладкомышечных клетках, эпителиальных клетках и стенках сосудов может быть причиной развития хронического асептического воспаления стенки желчного пузыря.

Таким образом, повышенная экспрессия ЦОГ-2 в гладкомышечных клетках, эпителиальных клетках и стенках сосудов может быть причиной хронического асептического воспаления, хронического «мягкого» внутрипузырного холестаза и гипомоторной дисфункции ЖП. Избыточная экспрессия ЦОГ-2 в эпителиальных клетках может быть важным патогенетическим звеном воспалительно-метапластического процесса.

THE LEVEL OF THE CYCLOOXYGENASE-2 EXPRESSION AND THE DEGREE OF INFLAMMATION IN THE GALLBLADDER WALL OF PATIENTS WITH CHRONIC

CALCULOSIS CHOLECYSTITIS

S.S. Golubev, N.M. Kozlova, J.L. Turumin, L.Ju. Raevskaja, N.G. Nesterov (Irkutsk Regional Diagnostic Centre, Irkutsk State Medical University, Scientific Center of Reconstructive and

Restorative Surgery, ESSC SB RAMS)

The level of COX-2 expression in the gallbladder wall was studied depending on the degree of inflammation in the pts with CCC. The increase of COX-2 expression in the gallbladder wall (n=2l) was determined in 86% of the smooth muscle cells, in 8l% of the epithelial cells, in /1% of the vascular smooth muscle cells, in 57% of the stromal cells and in 37% of the Rokitansky-Aschoff sinuses. Positive correlations were revealed between the degree of inflammation in the gallbladder wall and the degree of COX-2 expression in the smooth muscle cells and in the vascular smooth muscle cells.

ЛИТЕРАТУРА

1. Галкин B.A. Хронический некалькулезный холецистит. 3. ТюрюминЯ.Л. Закономерности морфофункциональных

— М.: Медицина, 1986. — 128 с. нарушений в желчном пузыре и печени в патогенезе хо-

2. Ильченко A.A. Хронический бескаменный холецистит // лестеринового холелитиаза: Дисс. ...д-ра мед. наук. —

Consilium medicum. — 2005. — Т. 7, № 6. — С.456-459. Иркутск, 2000. — 258 с.

4. Шапочников А.В. Холецистит. Патогенез,диагностика и хирургическое лечение. — Ростов-на-Дону: Изд-во Ростовского ун-та, 1984. — 224 с.

5. Fumino S., Tokiwa К., Опо S. et al. Cyclooxygenase-2 expression in the gallbladder of patients with anomalous arrangement of pancreatobiliary duct // J. Pediatr. Surg. — 2003. — Vol. 38, № 4. — P.585-589.

6. Ghosh M, Kawamoto T, Koike N. et al. Cyclooxygenase expression in the gallbladder // Int. J. Mol. Med. — 2000. — Vol. 6, № 5. — PI527-532.

7. Longo W.E., Panesar N., Mazuski J.E. et al. Synthetic pathways of gallbladder mucosal prostanoids: the role of cycloox-ygenase-1 and 2 // Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. — 1999. — Vol. 60, № 2. — P77-85.

8. Myers S I., Bartula L.J., Colvin M.P. et al. Bile duct ligation induced acute inflammation up-regulates cyclooxygenase-2 content and PG E2 release in guinea pig gallbladder smooth muscle cell cultures // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty

Acids. — 2005. — Vol. 72, № 5. — P.327-333.

9. Myers S.I., Bartula L.L., Colvin M.P. et al. Cholecystokinin (CCK) down regulates PGE2 and PGI2 release in inflamed Guinea pig gallbladder smooth muscle cell cultures // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. — 2005. — Vol. 73, № 2. — P.121-126.

10. Nilsson B, Delboro D, Hedin L. et al. Role of cyclooxygen-ase-2 for fluid secretion by the inflamed gallbladder mucosa //J. Gastrointest Surg. — 1998. — Vol. 2,*№ 3. — P269-277.

11. Orellana M, Rodrig R., Thielemann L. et al. Bile duct ligation and oxidative stress in the rat effects in liver and kidney // ^mp. Biochem. Physiol. Toxicol. Pharmacol. — 2000.

— Vol. 126, № 2. — P. 105-111.

12. Xiao Z.-L, Chen Q., Biancani P. et al. Abnormalities ofgall-bladder muscle associated with acute inflammation in guin-eanigs // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. — 2001.

— Vol. 281. — PG490-497.

ЗДОРОВЬЕ, ВОПРОСЫ ОРГАНИЗАЦИИ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ______________

АНАЛИЗ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ В ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ

Т.С. Капорская, И.В. Киселев, А.П. Силин, О.М. Сендерова, Е.В. Романова, Д.В. Капорская

(ГУЗ «Иркутская областная клиническая больница», гл. врач — к.м.н. П.Е. Дудин, Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра госпитальной терапии, зав. — д.м.н., проф.

Г.М. Орлова)

Резюме. Представлены результаты наблюдения с 1986 по 2005 гг. 373 больных с морфологически и иммунохимически подтвержденным диагнозом множественной миеломы. В структуре заболеваемости гемобластозами множественная миелома стойко занимает третье место. Заболеваемость множественной миеломой за анализируемый период выросла с 0,62 в 1992 г. до 1,37в 2004 г. Накопление больных происходило в основном, за счет проживающих в промышленных районах области, что свидетельствует о повышении онкологической настороженности врачей.

Ключевые слова. Множественная миелома, гемобластоз, заболеваемость.

Множественная миелома (ММ) — клональный В-лимфопролиферативный процесс, представляющий собой опухоль, возникающую на уровне самых ранних предшественников В-лимфоцитов. Моноклональный пул потомков первично-трансформированной клетки сохраняет способность к дифференцировке до конечного этапа — плазматических клеток, секретирующих иммуноглобулины [1,2]. Основной морфологический субстрат ММ представлен плазмоцитами той или иной степени зрелости, часто с чертами атипии, хотя в состав опухолевого пула входят и моноклональные лимфоциты — предшественники в периферической крови и костном мозге [1,3].

Характерными чертами ММ является поражение костного мозга (диффузное, диффузно-очаговое, реже

— очаговое), сопровождающееся костно-деструктивными изменениями (остеопороз, остеолиз), и развитие моноклональной иммуноглобулинопатии (сывороточ-

ный М-компонент и/или белок Бенс-Джонса в моче) [1]. ММ — широко распространенное тяжелое заболевание, частота которого неуклонно растет [1,2,3]. Болезнь отличается чрезвычайным разнообразием форм и вариантов, многоликостью клинической симптоматики, которая определяется, с одной стороны, поражением костного мозга и костей (миелодепрессия, синдром остеодеструкции — боли, патологические переломы, костные опухоли, гиперкальциемия), с другой — наличием моноклональной иммуноглобулинопатии (синдром белковой патологии — нефропатия, амилои-доз; полинейропатия; синдром повышенной вязкости, нарушение гемостаза) и вторичным гуморальным иммунодефицитом за счет снижения уровней нормальных иммуноглобулинов (рецидивирующие бактериальные инфекции, синдром недостаточности антител) [9,10]. Висцеральные поражения редки. Все это затрудняет своевременную диагностику заболевания и его лечение.

The level of the cyclooxygenase-2 expression and the degree of inflammation in the gallbladder wall of patients with chronic calculosis cholecystitis