CC BY
35
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
УДК 611.018.63:616-001.31:611.08
УЛЬТРАСТРУКТУРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИОКАРДА ПРИ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЕ СЕРДЦА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Владимир Павлович НОВОСЕЛОВ1, Сергей Владимирович САВЧЕНКО1, Александр Николаевич ПОРВИН1, Дмитрий Алексеевич КОШЛЯК1, Владимир Эдуардович ЯНКОВСКИЙ2, Александр Петрович НАДЕЕВ1, Татьяна Августовна АГЕЕВА1, Юрий Владимирович ЧИКИНЕВ1, Алексей Станиславович ПОЛЯКЕВИЧ1
1 Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России 630091, г. Новосибирск, Красный просп., 52
2 Алтайский государственный медицинский университет Минздрава России 656038, г. Барнаул, просп. Ленина, 40
Проведено исследование, целью которого явилось выявление изменений ультраструктуры кардиомиоцитов и эндотелиоцитов кровеносных капилляров миокарда желудочков сердца при его механическом повреждении различной степени тяжести. Выполнено экспериментальное моделирование закрытого механического повреждения сердца на крысах породы Вистар с использованием оригинальной методики. Исследование показало, что при повреждении сердца в виде его ушиба в кардиомиоцитах происходит увеличение объемной плотности митохондрий, саркоплазматического ретикулума, лизосом и снижение объемной плотности рибосом и гликогена. В эндотелиоцитах миокарда наблюдается увеличение объемной плотности митохондрий и микропиноцитозных везикул, снижение объемной плотности рибосом. Выраженность этих изменений зависит от степени тяжести механического повреждения миокарда. Данные нарушения, по нашему мнению, играют определенную роль в развитии острой сократительной недостаточности миокарда при механическом повреждении сердца.
Ключевые слова: ушиб сердца, эксперимент, электронная микроскопия, кардиомиоцит, эндотелиоцит.
Травматизм и его последствия остаются актуальной проблемой в современной медицине. К одним из самых тяжелых видов травмы относятся открытые и закрытые повреждения грудной клетки, которые сопровождаются высокой летальностью. Наиболее тяжелыми при травме грудной клетки являются повреждения сердца, которые чаще образуются при дорожно-транспортных происшествиях, падениях с большой высоты и ударах тупыми твердыми предметами по передней поверхности грудной клетки в проекции расположения сердца [1-3]. Закрытая травма груди с ушибом сердца сопровождается нарушениями ритма сердечной деятельности с последующим
развитием острой сердечной недостаточности [5]. Исследования по морфологической диагностике механического повреждения миокарда продолжают оставаться немногочисленными, большая часть их выполнена на светооптическом уровне [4, 6-9]. Уточнение механизмов развития острой сократительной недостаточности миокарда позволит понять основы танатогенеза при травме сердца. Учитывая вышеизложенное, целью исследования явилась оценка ультраструктурных характеристик изменений кардиомиоцитов и эн-дотелиоцитов кровеносных капилляров миокарда при механическом повреждении сердца в виде его ушиба, так как именно электронно-микро-
Новоселов В.П. - д.м.н., зав. кафедрой судебной медицины, e-mail: [email protected] Савченко С.В. - д.м.н., проф. кафедры судебной медицины, e-mail: [email protected] Порвин А.Н. - ассистент кафедры судебной медицины, e-mail: [email protected] Кошляк Д.А. - к.м.н., ассистент кафедры судебной медицины, e-mail: [email protected] Янковский В.Э. - д.м.н., проф. кафедры судебной медицины и права с курсом ФПК и ППВ, e-mail: [email protected]
Надеев А.П. - д.м.н., зав. кафедрой патологической анатомии, e-mail: [email protected] Агеева Т.А. - д.м.н., проф. кафедры патологической анатомии, e-mail: [email protected] Чикинев Ю.В. - д.м.н., зав. кафедрой госпитальной и детской хирургии, e-mail: [email protected] Полякевич А.С. - д.м.н., доцент кафедры госпитальной и детской хирургии, e-mail: [email protected]
скопическое исследование в значительной степени дополняет и расширяет возможности оценки патоморфологических изменений, полученных с помощью световой микроскопии. Проведено морфологическое исследование митохондрий, рибосом, саркоплазматического ретикулума, ли-зосом и гликогена кардиомиоцитов желудочков, а также митохондрий, рибосом, люминальных, свободных (цитоплазматических) и базальных микропиноцитозных везикул эндотелиоцитов кровеносных капилляров миокарда желудочков при механическом повреждении сердца различной степени тяжести в эксперименте.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для решения поставленной задачи, с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ ЕЕС) и Хельсинкской декларации, в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», мы осуществили экспериментальное моделирование механического повреждения сердца на 48 лабораторных животных - белых крысах-самцах породы Вистар, выращенных в стандартных условиях вивария на стандартном пищевом рационе, массой 180-200 г. Эксперимент проведен под общей анестезией, обезболивание обеспечивалось диэтиловым эфиром. Непосредственно перед экспериментом животных под легким эфирным наркозом фиксировали на специальном стенде в положении на спине и с помощью игольчатых электродов электрофизиологического комплекса LabLinc model V75-25A (Coulbourn instruments, США), которые накладывались в стандартных отведениях, регистрировали электрокардиограммы с последующей обработкой полученной информации с помощью компьютерной программы LabVIEW 5.1.
Механическое повреждение сердца воспроизводилось путем нанесения ударного травматического воздействия грузом массой 50 г при ускорении свободного падения с высоты 30 см и площади соударяющей поверхности 2 см2 в точку максимального проявления сердечной пульсации на передней поверхности грудной клетки. При помощи электрокардиографического контроля животные были разделены на две группы по степеням тяжести механического повреждения сердца. В группу с механическим повреждением сердца средней степени тяжести вошло 20 животных. У них электрокардиографические проявления механического повреждения складывались из одиночных и групповых желудочковых экстрасистолий и синусовой брадикардии с по-
степенным возвращением к нормальному ритму. После установления нормального сердечного ритма животных декапитировали. Группа с механическим повреждением сердца тяжелой степени также состояла из 20 животных, у которых через 15-20 мин от начала эксперимента, после вышеуказанных нарушений ритма сердца, наступала фибрилляции желудочков, переходящая в асистолию, после чего животных декапитировали. В качестве контрольной группы использовали 8 крыс, которых в состоянии глубокой анестезии декапитировали. У погибших животных производилось быстрое вскрытие грудной клетки с последующим отсечением сердца и забором кусочков миокарда правого и левого желудочков для исследования.
Забранные для исследования кусочки миокарда тщательно промывали охлажденным 0,9%-м раствором натрия хлорида и фиксировали в смеси 1%-го раствора параформа и 1%-го раствора глу-тарового альдегида, затем дважды по 5 мин промывали в дистиллированной воде. Далее кусочки миокарда фиксировали в смеси 1%-го раствора глутарового альдегида и 1%-го раствора парафор-ма на 0,04-0,05М фосфатном буфере в течение 1 суток, после чего отмывали в двух порциях дистиллированной воды по 5 минут и дополнительно фиксировали в 4%-м растворе четырехокиси осмия в течение 4 ч. Затем проводили последовательное обезвоживание образцов миокарда, при котором вода замещалась спиртами «восходящей батареи»: 30, 50, 70 и 100 %. После этого спирт замещали ацетоном в смеси по 50 % ацетона и спирта, затем в 100%-м ацетоне. Высушивание достигалось замещением ацетона газообразной углекислотой в оригинальной установке, использующей принцип замещения в критической точке перехода при давлении углекислоты 60 атмосфер и температуре 30 °С. Подготовленные образцы монтировали на латунные блоки с использованием электропроводного клея (эпона), покрывали в вакууме углеродом в течение 1 ч с последующим нанесением золота.
Работа проводилась с соблюдением стандартных условий осуществления каждого из этапов. На первом этапе для ориентировки в изучаемом объекте изготавливали полутонкие срезы толщиной 2-3 мкм, окрашивали толуидиновым синим и рассматривали с помощью светового микроскопа для определения области, которая должна быть изучена на ультрамикроскопическом уровне, чтобы в дальнейшем с этого участка прицельно приготовить ультратонкие срезы. Миокард первоначально исследовали на малом увеличении - х100 (10 х 10), а затем при увеличении х 400 (10 х 40).
Рис. 1. Неравномерно окрашенные и волнообразно измененные мышечные волокна при ушибе сердца тяжелой степени (окраска толуидиновым синим, увеличение х 400)
При световой микроскопии препаратов миокарда наблюдалось неравномерное окрашивание мышцы сердца: часть мышечных волокон, а иногда отдельные их части, выглядели более интенсивно окрашенными. Мышечные волокна с интенсивной окраской выглядели набухшими и гомогенизированными, характерная поперечная исчерченность едва определялась или не определялась вообще. Были выявлены группы волнообразно измененных, извитых сердечных мышечных волокон (рис. 1). Отмечалось неравномерно выраженное кровенаполнение артериол: часть их находилась в дистоничном состоянии, у других имелись явления спазма. Наблюдалось паретиче-ское расширение и полнокровие венул и кровеносных капилляров, их просветы были заполнены конгломератами эритроцитов, агрегированных по типу «монетных столбиков». По вышеуказанным изменениям отобраны участки миокарда для углубленного изучения внутриклеточных нарушений, из этих областей миокарда были прицельно приготовлены ультратонкие срезы.
После отбора необходимых для дальнейшего исследования участков полутонких срезов миокарда получали ультратонкие срезы толщиной 35-45 нм на ультратоме LKB-8800 (LKB, Швеция), которые контрастировали насыщенным водным раствором уранилацетата. С помощью трансмиссионной электронной микроскопии (JEM 1010, Japan Electonic Materials, Япония) изучена ультраструктурная организация кардио-миоцитов, а также эндотелиоцитов кровеносных капилляров миокарда правого и левого желудочков сердца животных описанных выше групп.
На электронограммах точечным методом охарактеризована объемная плотность (Vv) ми-
тохондрий, рибосом, саркоплазматического ре-тикулума, лизосом и гликогена кардиомиоцитов, а также митохондрий, рибосом, люминальных, свободных (цитоплазматических) и базальных микропиноцитозных везикул эндотелиоцитов кровеносных капилляров миокарда желудочков. Ультраструктурный стереологический анализ образцов миокарда проводили на электронограммах срезов кардиомиоцитов и эндотелиоцитов при увеличении в 8000 раз. При этом площадь среза по микрофотографии составляла 33,28 мкм2 (6,4 х 5,2 мкм). На электронно-микроскопические изображения компьютерным способом накладывалась тестовая система в виде решетки, состоящей из пересекающихся параллельных вертикальных и горизонтальных линий, образующих множество квадратов. Тестовые точки (узлы) соответствовали местам пересечений этих линий. Расстояние между точками составляло 0,1 мкм, на одной микрофотографии размещалось 3328 точек (64 х 52 точки). Использованный метод основан на подсчете числа узлов тестовой системы, приходящихся на исследуемую внутриклеточную структуру. По числу тестовых точек на каждой внутриклеточной структуре делалось заключение об их относительном объеме. Объемная плотность структур рассчитывалась по формуле: Vv = Pi/Р, где Р, - количество точек тестовой системы, попавших на профиль исследуемой структуры; Р1 - общее число точек тестовой системы, попавших на профиль среза исследуемого объекта. Для статистической оценки результатов применялась общая линейная модель, реализованная в процедуре однофакторного дисперсионного анализа с фиксированными эффектами (ANOVA) (табл. 1 и 2).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В кардиомиоцитах при механическом повреждении сердца средней степени тяжести обнаружены очаговые уплотнения миофибрилл из-за их пересокращения - контрактурные полосы, наблюдалась слабо выраженная фрагментация (диссоциация) отдельных мышечных волокон или их групп. При механическом повреждении сердца тяжелой степени наблюдалась резко выраженная фрагментация мышечных волокон в виде «разломов» целых групп миофибрилл. При механическом повреждении сердца отмечалась вариабельность размеров митохондрий как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения (рис. 2). Однако при количественном анализе обнаружена тенденция к возрастанию их общей объемной плотности. При механическом повреж-
Таблица 1
Результаты морфометрического исследования объемной плотности (V?) органелл и включений
кардиомиоцитов желудочков сердца (М ± т)
Органеллы и включения Правый желудочек Левый желудочек
Контрольная группа Ушиб сердца средней степени тяжести Ушиб сердца тяжелой степени Контрольная группа Ушиб сердца средней степени тяжести Ушиб сердца тяжелой степени
Митохондрии 1687,6 ± 85,0 2024,1 ± 77,5 2833,4 ± 47,3 2530,8 ± 83,9 3289,9 ± 67,4 5262,1 ± 52,4
Рибосомы 49,3 ± 2,2 44,8 ± 2,2 34,3 ± 2,6 93,6 ± 8,3 78,0 ± 6,4 61 ± 5,7
Саркоплазматический ретикулум 17,1 ± 2,6 23,8 ± 3,2 38,9 ± 3,3 23,9 ± 1,8 35,8 ± 2,7 64,4 ± 3,6
Лизосомы 1,0 ± 0,1 1,4 ± 0,1 2,3 ± 0,2 1,6 ± 0,2 2,3 ± 0,4 4,4 ± 1,2
Гликоген 41,9 ± 3,3 32,2 ± 4,2 21,4 ± 1,8 67,4 ± 3,6 48,2 ± 2,7 26,7 ± 2,6
Таблица 2
Результаты морфометрического исследования объемной плотности (Уу) органелл эндотелиоцитов
миокарда желудочков сердца (М ± т)
Органеллы и включения Правый желудочек Левый желудочек
Контрольная группа Ушиб сердца средней степени тяжести Ушиб сердца тяжелой степени Контрольная группа Ушиб сердца средней степени тяжести Ушиб сердца тяжелой степени
Митохондрии 5,3 ± 0,3 6,7 ± 0,7 9,7 ± 0,7 7,9 ± 0,9 11,1 ± 1,9 19,9 ± 1,7
Рибосомы 13,4 ± 2,19 11,1 ± 0,8 7,9 ± 2,6 24,8 ± 4,3 16,9 ± 1,3 8,8 ± 0,6
Микропиноцитозные везикулы: люминальные 11,3 ± 1,1 13,5 ± 1,0 20,3 ± 4,8 14,0 ± 1,36 19,7 ± 1,7 39,3 ± 3,5
свободные 47,4 ± 2,1 53,1 ± 2,2 74,2 ± 6 66,3 ± 4,9 86,1 ± 7,2 116,1 ± 10,0
базальные 12,4 ± 0,3 13,6 ± 0,7 17,6 ± 2,13 16,1 ± 1,9 20,3 ± 1,4 27 ± 4,1
дении сердца средней степени тяжести в увеличенных, отечных митохондриях наблюдалось расширение расстояний между кристами, часто кристы были деформированными, иногда были видны их единичные разрывы. При механическом повреждении сердца тяжелой степени очаги просветления из-за отека могли занимать почти всю площадь митохондрий. Кроме того, разрывы крист были многочисленнее, встречалась их частичная и полная гомогенизация. При механическом повреждении сердца отмечено значительное снижение количества рибосом в кардиомиоцитах по сравнению с кардиомиоцитами контрольной группы животных. Также наблюдалось расширение везикул саркоплазматической сети с увеличением ее объемной плотности, появление крупных вакуолей в гиалоплазме кардиомиоцитов, придающих ей «дырчатый» вид. При механическом повреждении сердца значительно чаще встречались лизосомы, практически не обнаруживаемые в кардиомиоцитах контрольной группы животных. Отмечалось резкое уменьшение, а в неко-
торых участках миокарда - полное исчезновение гранул гликогена при механическом повреждении сердца по сравнению с его содержанием в контрольной группе.
Рис. 2. Вариабельность размеров митохондрий и деформация крист при ушибе сердца средней тяжести (электронограмма, увеличение х 8000)
Рис. 3. Складчатость люминальной поверхности эн-дотелиоцита с формированием микроворсинок и явлениями клазматоза при ушибе сердца тяжелой степени (электронограмма, увеличение х 8000)
В эндотелиоцитах кровеносных капилляров миокарда при механическом повреждении сердца происходило увеличение объемных плотностей микропиноцитозных везикул по сравнению с показателями объемной плотности указанных компонентов эндотелиоцитов контрольной группы лабораторных животных, которое зависело от степени тяжести повреждения сердца. При механическом повреждении сердца более высокая объемная плотность органелл наблюдалась в эндоте-лиоцитах капилляров миокарда левого желудочка сердца по сравнению с эндотелиоцитами правого желудочка. В эндотелиоцитах капилляров миокарда контрольной группы животных более высокая объемная плотность микропиноцитозных везикул отмечалось у базальных поверхностей клеток. При механическом повреждении сердца средней степени тяжести обнаружена тенденция к сокращению различий объемных плотностей микропиноцитозных везикул, сконцентрированных у базальных и люминальных поверхностей эндотелиоцитов капилляров миокарда желудочков. При механическом повреждении сердца тяжелой степени наблюдалось преобладание объемных плотностей микропиноцитозных везикул, сконцентрированных у люминальных поверхностей эндотелиоцитов капилляров миокарда, над объемными плотностями микропиноцитоз-ных везикул, расположенных у базальных поверхностей эндотелиоцитов. При механическом повреждении сердца отмечалась повышенная складчатость люминальной поверхности эндоте-лиоцитов, вплоть до образования микроворсинок. При механическом повреждении сердца тяжелой степени наблюдался отрыв микроворсинок эндо-
телиоцитов от тел клеток - клазматоз (рис. 3). Количественный анализ показал увеличение объемной плотности митохондрий при механическом повреждении сердца. Характер структурных изменений митохондрий эндотелиоцитов при механическом повреждении сердца был аналогичным изменениям митохондрий в кардиомиоцитах при повреждении сердца. При механическом повреждении сердца также отмечено значительное снижение количества рибосом и гранул гликогена в эндотелиоцитах по сравнению с эндотелиоцита-ми контрольной группы животных.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При механическом повреждении сердца в виде его ушиба в кардиомиоцитах желудочков увеличивается объемная плотность митохондрий, саркоплазматического ретикулума, лизосом в сочетании со снижением объемной плотности рибосом и гликогена; в эндотелиоцитах кровеносных капилляров миокарда желудочков повышается объемная плотность митохондрий и микропино-цитозных везикул, уменьшается объемная плотность рибосом.
В результате нарушений ультраструктуры митохондрий в виде их набухания, редукции, деформации и деструкции крист, вплоть до их полной гомогенизации, вызванных механическим воздействием, становится невозможным перенос электронов по электронно-транспортной цепи внутренней мембраны митохондрий, прекращается процесс окислительного фосфорили-рования с образованием энергии и АТФ. Такие острые альтеративные изменения ультраструктуры митохондрий ведут к прогрессирующему энергетическому дефициту в кардиомиоцитах, богатых этими органеллами. Снижение синтеза макроэргических фосфатов неизбежно вызывает нарушение сократительной способности мио-фибрилл, так как мышечное сокращение требует больших затрат энергии. Нарушение целости мембран митохондрий приводит к быстрому освобождению из органелл ионов кальция с неблагоприятными последствиями для клетки. Вышедший из митохондрий кальций активно всасывается саркоплазматическим ретикулумом, в результате чего его каналы резко расширяются вплоть до образования вакуолеподобных структур. Несмотря на то что гликолиз вносит заметно меньший вклад в общий энергетический баланс здорового миокарда, чем аэробное окисление, при механическом повреждении в результате повреждений митохондрий происходит значительное снижение его резервов. Кроме того, для про-
цессов, регулирующих уровень ионов кальция в саркоплазме клетки (а обмен кальция, как было указано, при механической травме нарушается), преимущественным источником АТФ является именно гликолиз. Существует прямая зависимость между содержанием гликогена и рибосом в гиалоплазме клеток и уровнем энергетического и пластического обмена в них. Уменьшение или исчезновение указанных компонентов цитоплазмы является одним из ранних изменений, сопровождающих нарушение метаболизма в клетках. Из-за деструктивных изменений в клетках активируются лизосомы, участвующие в системе внутриклеточного катаболизма. Активация микропи-ноцитозной активности эндотелия кровеносных капилляров миокарда при повреждающем механическом воздействии свидетельствует об усилении компенсаторно-приспособительных реакций в миокарде.
Выявленные альтеративные изменения кар-диомиоцитов и эндотелиоцитов свидетельствуют о снижении в них энергообразующей, сократительной и белок-синтетической функции. Выраженность этих изменений зависит от степени тяжести механического повреждения миокарда. Данным нарушениям, по нашему мнению, принадлежит ведущая роль в развитии острой сократительной недостаточности миокарда при механическом повреждении сердца в результате его ушиба.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Борисенко А.П. Поражение сердца при травматической болезни. М.: Медицина, 1990. 192 с.
2. Гуманенко Е.К., Бояринцев В.В., Супрун Т.Ю., Ляшедько П.П. Объективная оценка тяжести травм. СПб., 1999.
3. Капустин А.В. Судебно-медицинская диагностика закрытых повреждений сердца при тупой травме грудной клетки // Суд.-мед. экспертиза. 1997. (1). 3-6.
4. Новоселов В.П., Савченко С.В., Кошляк Д.А., Воронковская М.В. Использование морфогистохи-мического метода для диагностики ушиба сердца // Суд.-мед. экспертиза. 2008. (5). 16-18.
5. Новоселов В.П., Савченко С.В., Кошляк Д.А. и др. Оценка ультраструктурных изменений сократительного аппарата кардиомиоцитов при ушибе сердца // Суд.-мед. экспертиза. 2010. (2). 13-15.
6. Новоселов В.П., Савченко С.В., Романова Е.А., Циммерман В.Г. Патоморфология миокарда при ушибах сердца. Новосибирск: Наука, 2002. 167 с.
7. Савченко С.В. Актуальные вопросы экспертной оценки морфологии сердца // Вестн. судебной мед. 2012. 1. (3). 5-8.
8. Соседко Ю.И. Судебно-медицинская диагностика повреждений сердца при травме тупыми предметами // Суд.-мед. экспертиза. 2001. (6). 13-16.
9. ElieM.-C. Blunt cardiac injury // Maunt. Sinai J. Med. 2006. 73. (2). 542-552.
ULTRASTRUCTURAL CHARACTERIZATION OF THE MYOCARDIUM IN MECHANICAL TRAUMA OF THE HEART IN THE EXPERIMENT
Vladimir Pavlovich NOVOSELOV1, Sergey Vladimirovich SAVCHENKO1, Aleksandr Nikolaevich PORVIN1, Dmitriy Alekseevich KOSHLYAK1, Vladimir Eduardovich YANKOVSKIY2, Aleksandr Petrovich NADEEV1, Tat'yana Avgustovna AGEEVA1, Yuriy Vladimirovich CHIKINEV1, Aleksey Stanislavovich POLYAKEVICH1
1 Novosibirsk State Medical University of Minzdrav of Russia 630091, Novosibirsk, Krasny av., 52
2 Altai State Medical University of Minzdrav of Russia 656038, Barnaul, Lenin av., 40
Conducted a study to identify changes in the ultrastructure of cardiomyocytes and endothelial cells of blood capillaries of the myocardium of the ventricles of the heart in its mechanical damage of varying severity. Experimental modeling of the closed mechanical damage of the heart in rats of Wistar breed using original techniques. The study showed that the increase in the volume density of mitochondria, sarcoplasmic reticulum, lysosomes and decrease in the volume density of ribosomes and glycogen took place at heart damage in the form of its injury in cardiomyocytes. The increase in the volume density of mitochondria and micropinocytosis vesicles and decrease in the volume density of ribosomes have been observed in endothelial cells of the myocardium. The severity of these changes depends on the severity of mechanical damage of the myocardium. These disorders, in our opinion, play the determined role in the development of acute contractile failure of the myocardium in case of heart mechanical damage.
Key words: cardiac contusion, experiment, electron microscopy, cardiomyocyte, endothelial cell.
Novoselov V.P. - doctor of medical sciences, head of department offorensic medicine, e-mail: [email protected] Savchenko S.V. - doctor of medical sciences, professor of the department offorensic medicine, e-mail: [email protected]
Porvin A.N. - assistant of the department offorensic medicine, e-mail: [email protected] Koshlyak D.A. - candidate of medical sciences, assistant of the department offorensic medicine, e-mail: [email protected]
Yankovskiy V.E. - doctor of medical sciences, professor of the department offorensic medicine and law, e-mail: [email protected]
Nadeev A.P. - doctor of medical sciences, head of the department ofpathological anatomy, e-mail: nadeevngma@mail
Ageeva T.A. - doctor of medical sciences, professor of the department ofpathological anatomy, e-mail: [email protected]
Chikinev Yu.V. - doctor of medical sciences, head of the department of hospital and pediatric surgery, e-mail: [email protected]
Polyakevich A.S. - doctor of medical sciences, associate professor, of the department of hospital and pediatric surgery, e-mail: [email protected]
