CC BY
6
УДК 614.72:546.174]-07:616.4i0-076.4
В. И. Ковалишик, И. И. Даценко, Е. И. Панасюк, И. В. Ковтун, Н. В. Авдосьева, П. Д. Гордый, С. Л. Долоишцкий, Е. М. Толмачева,
Е. Ф. Чаговец
УЛЬТРАМИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОСТНОГО МОЗГА БЕЛЫХ КРЫС, ПОДВЕРГШИХСЯ ВОЗДЕЙСТВИЮ СМЕСИ ОКСИДОВ АЗОТА
Львовский медицински» институт
В настоящей работе предпринята попытка применения ультрамикроскопического метода для оценки острого действия нитрогазов на экспериментальных животных. Этот метод, использованный при изучении воздействия других веществ, дал положительные результаты [2].
Опыты поставлены на 10 беспородных белых крысах-самцах массой 150—170 г, разделенных на 2 группы по 5 животных в каждой. Животных 1-й группы подвергали ингаляционному воздействию смеси оксидов азота в кон-
центрации 0,4 мг/л (близкой к среднесмертельной) в течение 2 ч в 200-литровых камерах, предложенных НИИ гигиены труда и профессиональных заболеваний АМН СССР [5]. Интактные животные 2-й группы служили контролем. Материал отбирали через 21 ч после окончания эксперимента. Костный мозг фиксировали в 2 % растворе четы-рехокиси осмия на 0,1 М фосфатном буфере. В дальнейшем материал обрабатывали по общепринятой в электрон-нон микроскопии методике. Ультратонкие срезы тканей
Рис. 1. Ультраструктура костного мозга бедра интактных белых крыс. а — мегакариоцнт низкой электронной плотности в окружении различных групп клеток. Х1550: б — рядом лежат мегакариоцнты средней к высокой электронной плотности. Х4000: в — клетки убывающей электронной плотности, находящиеся на различных этапах митоза. Х2000; г — клетки нарастающей электронной плотности, находящиеся в состояниях, аналогичных интерфазе. Х2000. КГР— клетки гранулоцнтарного ряда: ЛЦ — лимфоцит: ЛЦП — лимфоцнтонодобная клетка; МК— мегакариоцнт; МС — мнтотическая клетка, характеризующаяся убывающей электронной плотностью и распадом ультраструктур; МТ—клетка, аналогичная интерфазной н характеризующаяся нарастающей электронной плотностью: ОРЭК—островок развивающихся эрнтрондных клеток; ПК — просвет капилляра; Э — эритроцит; Я — ядро; ЯХ — ядерный хроматин.
Рис. 2. У.пьтраструктура костного мозга бедра белых крыс в условиях затравки их
смесью оксидов азота. а — разрушение базальной мембраны капилляров и системы внутренних мембран эндотелпоцитов. Х7000; б — цитоплазма макрофагов богата аутофаголизосомамн. 1'ндом располагаются клетки эрпт-роидного ряда, находящиеся на этапах митоза, характеризующегося распадом ультраструктур и уменьшением электронной плотности. Х2000: в — десквамация цитоплазмы клеток эрнтроидного ряда. X19 ООО: г — вакуолизнрованный и частично дегранулнроваиный мегакариоцит в окружении макрофагов, клеток эрнтрондного и гранулоцитарного ряда. Х1500: ЛФ — г утофаголизосома; />Л1 — ба-зальная мембрана; В — вакуоль; ЗДЦ — зона десквамацни цитоплазмы И — интерстпцнй; К — коагулят; Л( — митохондрия; МФ — макрофаг: Я — преципитат: ИМ — плазматическая мембрана;
ЭК — эндолелпальная клетка. Остальные обозначения те же. что на рис. I.
костного мозга бедра, полученные на ультрамккротоме УМТП-3 и последовательно контрастнрованные в растворах уранилацетата [221 и нитрата свинца [21], изучали и фотографировали с помощью электронного микроскопа
УЭМВ-100К.
Результаты исследований позволили установить, что ультраструктура костного мозга интактных крыс не отличалась в основном от таковой, описанной ранее [1, 4, 13, 15—17]. Однако нами обнаружено, что среди каждого вида клеток в зависимости от ультраструктурной организации и электронной плотности выделяются два типа аналогичных клеток: убывающей электронной плотности (рис. 1, в), в которых преобладают процессы распада ультраструктур над их образованием (светлые клетки), и нарастающей электронной плотности (рис. 1, г) с преобладанием образования ультраструктур над их распадом (темные клетки). Эти данные согласуются с результатами такого рода исследований, проведенных на почке и поджелудочной железе, где установлено наличие в структурно-функциональных образованиях «светлых» и «темных» клеток, которые соответственно объединены в подгруппы, группы («светлую», «промежуточную», «темную»), ряды.
периоды [7, 8, 10]. Аналогичные объединения клеток в принципе правомерно дифференцировать и в тканях костного мозга, где преобладают клетки «промежуточной» группы, обладающие средней электронной плотностью, оптимальной дифференцировкой и дедифференцировкой, характерной для того или иного уровня организации ткани. Между видами, так же как и внутри видов, выявляются формы клеток, обладающие переходными электронно-микроскопическими характеристиками. Данное явление в наибольшей мере прослеживается среди лимфоцитов и аналогичных клеток, имеющих наибольшую с ними степень подобия (см. рис. 1). Следует указать, что наши данные служат дополнением и строятся как продолжение исследований, относимых к проблеме «светлых» и «темных» клеф ток [3, 6, 9, 11, 12, 14, 18—20], а также разработок, осу^— ществляемых в области морфологической идентификации стволовых кроветворных клеток [1, 4].
Экспериментальное воздействие смеси оксидов азота в костном мозге крыс вызывает появление клеток с выраженными деструктивными изменениями, которые в основном касаются ультраструктурного уровня их организации. Так, в системе эндотелиальцых клеток гемокаиилляров об-
наружены незначительная дезорганизация и разрыхление апикальной плазмолеммы. Ядра фрагментнрованы, митохондрии, как и другие мембранные структуры, незначительно разрыхлены, а в отдельных случаях распадаются. Базальная мембрана гемососудов находится в состоянии повышенного разрыхления (рис. 2. а). Макрофаги содержат большие количества аутофаголизосом и остаточных телец. Электронная плотность этих клеток значительно уменьшена, а размеры увеличены. Другие клеточные и неклеточные элементы стромы подвержены дезорганизации, сопровождающейся интенсивным расслоением их на зоны Аг'зко повышенной и резко пониженной электронной плотности. Соотношение клеток эритрондного ряда, судя по нашим визуальным наблюдениям, изменено в сторону увеличения количества форм, близких к таковым, имеющим место на завершающих этапах образования эритроцитов. В то же время отмечено увеличение количества клеточных форм, напоминающих фигуры митоза, характеризующихся низкой электронной плотностью и распадом ультраструктур (рис. 2, б). Количество клеток этого ряда, обычно представленных в норме промежуточными формами, уменьшено. Следует указать, что целостность плазматических мембран клеток эритрондного ряда нарушена. Имеются разрыхления, в отдельных случаях выпадение участка мембраны. Нами также обнаружена десквамация части наружной цитоплазмы многих клеток этого ряда (рис. 2, в). В отдельных случаях в цитоплазме клеток найдены преципитаты и коагулянты измененных ультраструктур. Клетки лнмфоидного и граиулоцитарного рядов претерпевают изменения, аналогичные изменениям клеток эритрондного ряда. Мегакариоциты подвергаются изменениям, которые
Жажаются в основном в значительной дегрануляции ци-
1азматического содержимого, образовании в их цитоплазме вакуолей. Поверхностный слой многих мегакарио-цнтов подвержен распаду и отслоению его частей в интер-стиций (рис. 2, г). Последний по сравнению с таковым у интактных животных расширен (см. рис. 2).
Выявленные изменения в костном мозге указывают на сдвиг клеточного пула в сторону уменьшения количества клеток, имеющих характеристики «промежуточной» группы у здоровых животных, с параллельным увеличением количества клеток «темной» группы, особенно ее «светлой» подгруппы. Одновременно происходит нарушение формы и уменьшение электронной плотности ультраструктур, которые определяются этапами образования преципитатов, коагулятов, активацией лизосом и последующим интенсивным формированием остаточных телец, вакуолей.
Таким образом, действие смеси оксидов азота приводит к дезорганизации тканей костного мозга, которая развива-ефя в основном в соответствии с этапами преобразовании клеточных и неклеточных структур по «светлому» типу. Использованный метод чувствителен и может быть реко-
мендован для оценки токсического влияния химически* веществ на организм.
Литература
1. Бутенко 3. А., Зак К. П., Хоменко Б. Л/., Афанасьева
B. В. //Цитология,— J985. — Т. 27, jY° 6. — С. 628— 632.
2. Гогичадзе Г. К-, Качарова H. Н. // Арх. анат. — 1986.— Т. 90, № 4. — С. 29—30.
3. Даниленко Ai. В., Монастырский В. А.. Алексевич Я. И. и др.//Цитология. — 1982. —Т. 24, № 12. — С. ¡444— 1446.
4. Зак К. П., Бутенко 3. А., Комиссаренко С. В. // Гема-тол. и трансфузиол. — 1983.— Т. 28, № 2.— С. 38—42.
5. Корякин 10. В. Чистота химических реактивов. — М.; Л., 1947.
6. Квитницкий-Рыжов 10. Н., Квитницкая-Рыжова Т. Ю. // Цитология. — 1981. — Т. 23. — № 2. — С. 117—128.
7. Ковалишин В. /.// 3'1зд Украшського ф!зюлопчного товариства ¡м. I. П. Павлова, 12-й: Тези допов|'ден. — Льв1в, 1986.— С. 180—181.
8. Ковалишин В. И., Литвинчук M. Ai. // Съезд эндокринологов УССР, 4-й: Тезисы докладов. — Киев, 1987.—
C. 182.
9. Коломина С. М. // Успехи совр. биол. — 1985.— Т. 100, № 2/5. — С. 302—315.
10. Панасюк Е. П., Ковалишин В. И., Кухарук Л. О. // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. — Львов, 1986.— Т. 8. —С. 153—154.
11. Саркисов Д. С. //Арх. пат. — 1973. — № 12.— С. 3—12.
12. Саркисов Д. С., Пальцин А. А., Втюрин Б. В. Приспособительная перестройка биоритмов. — М., 1975.
13. Хэм А., Кормак Д. Гистология: Пер. с англ. — М., 1983. — Т. 2. — С. 127—252.
14. Чернух А. М„ Александров П. И.. Алексеев О. В. Микроцпркуляция. — М., ! 984.
15. Чертков И. Л., Гуревич О. Л. Стволовая кроветворная клетка и ее мнкроокруженне. — М., 1984.
16. Чертков И. Л., Фриденштейн А. Я■ Клеточные основы кроветворения. — М., 1977.
17. Швелидзе Т. И., Асламазова Е. Б., Цагарели 3. Г. // Тер. арх. — 1978, — № 7, — С. 89—94.
18. Ясвоин Н. Г. Темные к светлые клетки. — М., 1948.
19. Clara M. // Z. mikr.-anat. Forsch. — 1931. — Bd 26. — S. 45—172.
20. Clara M. // Ibid. — 1932. — Bd 31. —S. 193—250.
21. Reynolds E. S.//J. cell. Biol. — 1963. — Vol. 17. — P. 208—212.
22. Stempac J. 1., Ward R. T. // Ibid. — 1964. — Vol. 22. — P. 697—701.
Поступила 01.02.88
УДК 615.285.7:547.522.13].015.4:579.841.! I
М. И. Леей, С. Л. Степанова, А. И. Туник, М. М. Лившиц, В. Г. Слизкова,
Л. И. Андреева
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ХЛОРАМИНА С СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКОЙ
Центральная контрольно-исследовательская лаборатория дезинфекционной станции,
Москва
Синегнойная палочка часто является возбудителем госпитальной инфекции, в борьбе с которой дезинфекцию офчно производят при помощи растворов хлорамина [2|. В^о же время механизм действия хлорамина на синегной-ную палочку не выяснен.
Для экспериментов использовали Pseudomonas aeruginosa штамм 7253, обладавший типичными признаками. Изучение числа живых микробных клеток осуществляли путем высева на чашки с мясопептонным агаром и последующего подсчета колоннеобразующнх единиц (КОЕ). Концентрацию хлорамина в растворе устанавливали общепри-
нятым методом. Для определения содержания связанного хлорамина смесь бактерий и дезинфектанта подвергали центрифугированию, после чего бактерии оказывались в осадке, а в надосадочной жидкости измеряли концентрацию несвязанного хлорамина. Разница между концентрациями исходного (контроль) и несвязанного хлорамина и была концентрацией связанного дезинфектанта.
В опытах использовали разные концентрации микробных клеток (м. к.) и хлорамина. Исходной обычно служила взвесь 1010 м. к. еннегнойной палочки, приготовленная на деионизированной дистиллированной воде, на которой
