CC BY
1
УДК 618.15-002-079.3 DOI 10.24412/2220-7880-2024-4-13-16
ТВЕРДОФАЗНАЯ ДИАГНОСТИКА В МОНИТОРИНГЕ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И ДИСБИОТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ВЛАГАЛИЩА
'Молчанов О. Л., 2Николаева А. Е., 3Шикарная К. Е.
1ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия (197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, 6-8), e-mail: [email protected]
2СПб ГБУЗ «Женская консультация № 22», Санкт-Петербург, Россия (194354, г. Санкт-Петербург, ул. Сикейроса, д. 10, лит. В)
3СПб ГБУЗ «Городской перинатальный центр № 1», Санкт-Петербург, Россия (193312, г. Санкт-Петербург, пр-т Солидарности, д. 6)
Ввиду широкого распространения, частых рецидивов, хронизации и осложнений инфекционно-воспалительных и дисбиотических заболеваний влагалища их диагностика является актуальной составляющей работы амбулаторных подразделений акушерско-гинекологического профиля. Цель: провести оценку динамики клинических и лабораторных показателей с помощью комплексного количественного экстемпорального определения биохимических параметров влагалищной жидкости: уровня рН, содержания белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты и лейкоцитов у больных бактериальным вагинозом в условиях амбулаторного приема врача акушера-гинеколога при помощи отечественной инновационной твердофазной диагностической системы «Кольпо-тест». В исследование были включены 162 женщины репродуктивного возраста. Контрольную группу составили 30 здоровых женщин; основную - 132 пациентки с клинико-лабораторно верифицированным диагнозом «бактериальный вагиноз (БВ)». Специально для реализации цели исследования была создана твердофазная тест-система количественного биохимического экспресс-анализа кислотности влагалища (рН), содержания белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты и лейкоцитов. По результатам исследования у женщин с БВ уровень рН влагалищной жидкости (ВЖ) существенно отличался от такового у здоровых женщин. Инновационной частью исследования явилось то, что измерение рН производилось одновременно с другими показателями биохимического состава ВЖ. Уровень белка, рН при БВ был достоверно выше в сравнении с группой здоровых женщин. Концентрация глюкозы во ВЖ была достоверно ниже при БВ, чем у здоровых женщин. Показатели концентрации аскорбиновой кислоты и содержания лейкоцитов не отличались в группах. Резюмируя результаты исследования эффективности лабораторного теста т. н. «сухого» экспресс-анализа, можно констатировать, что система «Кольпо-тест» является быстрым и информативным лабораторным методом мониторирования состояния микроэкосистемы влагалища.
Ключевые слова: диагностика, бактериальный вагиноз, влагалищная жидкость, аскорбиновая кислота.
MONITORING OF INFECTIOUS AND INFLAMMATORY DISEASES OF THE VAGINA USING SOLID-PHASE DIAGNOSIS
'Molchanov O. L., 2Nikolayeva A. E., 3Shikarnaya K. E.
1Pavlov University, St. Petersburg, Russia (197022, St. Petersburg, Lev Tolstoy St., 6-8), e-mail: [email protected] 2St. Petersburg Women's consultation No. 22, St. Petersburg, Russia (194354, St. Petersburg, Sikeiros St., 10, lit. V) 3St. Petersburg City Perinatal Center No. 1, St. Petersburg, Russia (193312, St. Petersburg, Solidarity Ave., 6)
Due to the widespread, frequent recurrence, chronization and complications of infectious, inflammatory and dysbiotic diseases of the vagina, their diagnosis is an urgent component of the work of outpatient departments of the obstetric and gynecological profile. The main goal is to assess biochemical changes in the clinical and laboratory parameters of the vaginal fluid, such as: pH, protein, glucose, ascorbic acid levels and leukocyte count in patients with bacterial vaginosis in an obstetrics and gynecology outpatient clinic using "Kolpo-test", an innovative solid-phase diagnostic system. The study included 162 women of reproductive age. The control group consisted of 30 healthy women; the main group consisted of 132 patients with the diagnosed bacterial vaginosis. To carry out the research, a solid-phase test system for quantitative measurement of vaginal acidity (pH), protein, glucose, ascorbic acid and leukocytes was created. The results obtained have shown that the VF pH level in women with BV is significantly different from that in healthy women. The innovation of the study involves simultaneous measurement of pH and other biochemical indicators of the VF composition. The protein and pH level in women with BV was significantly higher in comparison with that of healthy women, while concentration of glucose in BV cases was significantly lower. Ascorbic acid concentration and leukocyte count did not differ in the 2 groups. To conclude, the Kolpo-test system is a fast and informative laboratory method to assess the vaginal microecosystem.
Keywords: diagnosis, bacterial vaginosis, vaginal fluid, ascorbic acid.
Введение
Традиционно лабораторная часть диагностического процесса инфекционно-воспалительных и дис-биотических процессов базируется на результатах микроскопии влагалищного мазка, бактериологической и молекулярно-генетической диагностики, которые учитывают только микробиологическую составляющую патологического процесса. Однако не менее важной составляющей клинического анализа является экстемпо-ральное, непосредственно на рабочем месте, определение некоторых компонентов влагалищной жидкости (ВЖ), маркеров локального воспаления, пищевых субстратов, необходимых для реализации пластических и энергетических потребностей микроорганизмов. Решение подобной задачи возможно с помощью использования твердофазных комплексных тест-систем.
Встречаемость инфекционно-воспалительных процессов в структуре гинекологической патологии занимает лидирующие позиции и составляет от 30 до 70% среди гинекологических пациентов [1-3]. Частота диагностирования бактериального вагиноза (БВ) тоже достаточно высока. Данная нозологическая форма составляет от 16 до 65% всей инфекционно-воспалительной и дисбиотической заболеваемости влагалища [4-7]. Установлено, что наиболее значимым диагностическим признаком является повышение значений рН влагалищной жидкости на фоне снижения содержания молочной кислоты. При этом наблюдается существенное изменение биохимического состава влагалищной жидкости. Во многом снижение кислотности ВЖ зависит от степени выраженности нарушения регуляторной функции метаболически активных слоев эпителия влагалища [8-10].
Лабораторная верификация вышеуказанных состояний связана с определенным сроком ожидания результатов, что не позволяет врачу назначить лечение уже на первом визите. В настоящее время для диагностики воспалительных процессов и БВ перспективным является использование экстемпоральных тестов с цветовой индикацией и количественным учетом результатов исследования. Применение удобно как для врача, так и для самих пациенток, поскольку данные тесты могут применяться с целью самоконтроля. Тем не менее для большинства клиницистов остается невыясненной теоретическая база оценки результатов исследования с практической реализацией.
Цель исследования: провести оценку динамики клинических и лабораторных показателей с помощью комплексного количественного экстемпорального определения биохимических параметров влагалищной жидкости: уровня рН, содержания белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты и лейкоцитов у больных бактериальным вагинозом в условиях амбулаторного приема врача акушера-гинеколога при помощи отечественной инновационной твердофазной диагностической системы «Кольпо-тест».
Материал и методы
Настоящее исследование проводилось в период с 2015-го по 2022-й г. в СПб ГБУЗ «Городская поликлиника № 17 женская консультация № 9». В исследование включены 162 женщины репродуктивного возраста. Критерии включения: женщины в возрасте от 18 до 45 лет; отсутствие беременности на момент исследования; отсутствие хронических заболеваний (сахарный диабет, мо-чекислый диатез и другие); отсутствие приема поливитаминных комплексов; согласие на участие в исследовании.
Проводили отбор биологического материала для микроскопического учета влагалищного мазка и молекулярно-генетических исследований.
Проводили определение выраженности аминово-го теста. Для этого на предметное стекло наносили несколько капель вагинального содержимого и смешивали его с эквивалентным количеством 10%-ного раствора гидроокиси калия (КОН). При положительном результате появлялся неприятный специфический запах «гниющей рыбы». Полученные результаты оценивали полуколичественным методом по Е. Ф. Кира (1995).
В соответствии с дизайном исследования были выделены две исследуемые группы: здоровые и пациентки с установленным диагнозом бактериальный вагиноз.
Группа больных бактериальным вагинозом объединила 132 пациентки. Контрольная группа была представлена 30 здоровыми женщинами, обратившимися в медицинское учреждение с целью профилактического или репродуктологического обследования, не предъявлявшими характерных жалоб, которым в результате учета результатов микроскопии мазка и молекулярно-генетического исследования было установлено лабораторное заключение «нормоценоз». По основным параметрам (возраст, фаза менструального цикла, паритет, гинекологические заболевания и др.) исследуемые группы были репрезентативны.
Специально для реализации цели была разработана методология изучения 5 показателей ВЖ и создана твердофазная тест-система количественного биохимического экспресс-анализа кислотности влагалища, содержания белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты и лейкоцитов. Подобная тест-система проста в использовании и может применяться как здоровыми женщинами с целью самодиагностики, так и пациентками с инфекционно-воспалительными и дисбиотическими заболеваниями влагалища.
Методика заключается в том, что во время гинекологического осмотра в зеркалах индикаторная зона тестовой полоски прикладывается на 15-20 секунд к стенке влагалища или погружается во ВЖ таким образом, чтобы все индикаторные наклейки полностью были смочены содержимым влагалища. Далее полоска извлекается через интервал в 1 минуту и производится учет результатов путем сравнения изменения цвета на полоске со значениями тестовой шкалы, нанесенной на упаковке.
Для анализа полученных в процессе выполнения работы исходных данных использовалась система STATISTICA for Windows (версия 12). Сравнение изучаемых количественных параметров (глюкоза, белок, лейкоциты, рН, аскорбиновая кислота в моче и др.) в исследуемых группах осуществлялось с использованием критериев Манна - Уитни, Колмогорова - Смирнова, медианного хи-квадрат и модуля ANOVA, т.к. распределение всех показателей не соответствовало нормальному. Сопоставление частотных характеристик качественных показателей проводилось с помощью непараметрических методов х2, критерия Фишера. Критерием статистической значимости получаемых выводов мы считали общепринятую в медицине величину р<0,05.
Результаты и их обсуждение
В таблице представлены результаты исследования ВЖ в группах.
Результаты исследования рН во ВЖ в норме и при БВ. Среди всех диагностических параметров ВЖ наиболее хорошо изучена кислотность, которая в диапазоне физиологических значений в значительной степени
Таблица
Результаты исследования ВЖ у здоровых пациенток и у пациенток с диагнозом БВ
Показатель Здоровые пациенты Пациенты с БВ
рн 4,05±0,09 6,31±0,42
4 [4-4,2] 6 [5,8-7,0]
Белок (г/л) 0,86±0,68 2,21±0,98
1 [0-4] 3 [1-3]
Глюкоза (мМ/л) 4,43±1,40 0,13±0,59
4,43 [2,8-5,6] 0 [0-2,8]
Аскорбиновая кислота (мг/дл) 0,00±0,00 0,00±0,00
0 [0-20] 0 [0-0]
Лейкоциты (Л/мкл) 3,87±6,67 1,59±4,64
0 [0-15] 0 [0-15]
поддерживается резидентной ацидофильной микрофлорой, метаболически детерминированной на образование молочной кислоты. Функциональная активность влагалищного эпителия также направлена на модуляцию кислотности и осмолярности ВЖ.
В нашем исследовании у здоровых женщин локальный уровень рН 4,05±0,09, тогда как при БВ величина данного показателя достоверно значимо возрастала до 6,31±0,42 (р<0,001). Новым в этой части работы явилось то обстоятельство, что измерение рН производилось одновременно с другими показателями биохимического состава ВЖ. Очевиден тот факт, что сдвиг рН ВЖ в щелочную сторону сочетается с клинически установленным увеличением количества влагалищной жидкости и появлением неприятного «аминового запаха» - характерных признаков бактериального вагиноза.
Результаты исследования содержания белка во ВЖ в норме и при БВ. Белки играют важную роль в обеспечении всех составляющих метаболизма организма человека. Любые изменения функции белков приводят к нарушениям функциональной активности органов и систем и, соответственно, формированию патологических состояний. Содержание белка в ВЖ зависит от состояния слизистой оболочки, а именно наличия или отсутствия местной воспалительной реакции, интенсивности синтетических и цитолитических процессов в эпителии, количества микроорганизмов.
Концентрация общего белка во ВЖ здоровых женщин составила 0,86±0,68 г/л, при БВ этот показатель был достоверно выше и составил 2,21±0,98 г/л (р<0,001). Подобные изменения содержания белка могут быть обусловлены гиперколонизированным микробным сообществом, а именно белками лизированных микробных клеток и эксфолиированными клетками поверхностного эпителия. Воспалительный генез повышенного содержания белка маловероятен по причине отсутствия клинических и лабораторных (лейкорея) признаков соответствующей реакции.
Результаты исследования содержания глюкозы во ВЖ в норме и при БВ.
Глюкоза - важная углеводная молекула, которая является мономерной единицей гликогена - поли-сахаридного полимера животного происхождения. Как составляющая метаболизма, она является субстратом метаболических циклов, в том числе и микрофлоры.
В результате исследования было установлено, что концентрация глюкозы во ВЖ была достоверно ниже при БВ, чем у здоровых женщин, и составила соот-
ветственно 0,13±0,59 мМ/л и 4,43±1,40 мМ/л (р<0,001). Снижение содержания глюкозы при БВ может косвенно свидетельствовать либо о существенном повышении использования данного метаболита в качестве питательного субстрата гиперколонизированной, ассоциированной с БВ микрофлорой на фоне снижения локальных резервов гликогена во влагалищном эпителии.
Результаты исследования содержания аскорбиновой кислоты во ВЖ в норме и при БВ.
В состав твердофазной тест-системы входит диагностическая компонента, позволяющая определять концентрацию аскорбиновой кислоты. Аскорбиновая кислота (АК), являясь витамином, лимитирующим протекание важнейших биохимических реакций, чрезвычайно важна для полноценного функционирования живого организма. До настоящего времени в микробиоме человека не обнаружен микроорганизм, способный продуцировать аскорбиновую кислоту. Потребности среднестатистического человека в сутки составляют 70 мг витамина. Известно, что избыточные количества аскорбиновой кислоты выделяются с мочой в неизменном виде. Наличия АК во ВЖ ни в контрольной группе женщин, ни в группе с БВ не выявлено.
Заслуживает отдельного внимания то, что при формировании контрольной группы у 4 здоровых женщин было выявлено присутствие аскорбиновой кислоты во ВЖ в верифицируемых концентрациях. При детальном выяснении было установлено, что данные пациентки в целях профилактики острых респираторных заболеваний использовали большие дозы аскорбиновой кислоты количественно, от 300 до 1000 мг в сутки. Этот факт свидетельствует о том, что прием продуктов с высоким содержанием АК или фармакологических витаминно-минеральных комплексов, содержащих витамин С, определяет повышение концентрации этого вещества не только в моче, но и во ВЖ. Очевидно, что это связано с активной экскреторной функцией метаболически активных слоев эпителия влагалища. В результате проведенного дополнительного исследования было установлено, что минимальная доза, позволяющая в определенной степени модулировать кислотность влагалищной жидкости благодаря поступлению в локус при системном пероральном приеме, соответствует 300 мг. Увеличение дозы, по нашему мнению, не оправдано, поскольку длительный прием аскорбиновой кислоты, существенно превышающий физиологическую норму, может приводить к формированию мочекислого диатеза и образованию микролитов в почках.
Результаты исследования содержания лейкоцитов во ВЖ в норме и при БВ.
Традиционно определение количества лейкоцитов в биологических жидкостях, таких как кровь, моча, ликвор и др., выполняется либо путем визуального учета присутствия форменных элементов в мазках или в счетных камерах под микроскопом, либо в специальных апертурных анализаторах.
Для решения задачи нашего исследования определение количества лейкоцитов во ВЖ осуществляли с помощью специальной твердофазной индикаторной системы. Принцип проведения анализа заключался в реакции диагностикума на эстеразу полиморфноядерных нейтрофильных гранулоцитов. Эстераза разлагает реагент, образуемая молекула вступает в реакцию с солью диазония, образуя соединение сиреневой окраски. Интенсивность окрашивания индикаторной полоски соответствует определенному количественному содержанию нейтрофильных гранулоцитов в исследуемой пробе.
Известно, что увеличенное по сравнению с нормой количество лейкоцитов в крови или моче является признаком инфекционно-воспалительного процесса.
В результате исследования установлено, что у здоровых женщин лейкоциты во ВЖ не обнаруживались или обнаруживались следы, соответствующие значениям диапазона «0-15» контрольной шкалы. При бактериальном вагинозе лейкоциты также не определялись или определялись следы значения диапазона «0-15» контрольной шкалы. Результаты экстемпоральной диагностики сравнивались с результатами исследования методом световой микроскопии, где показатель присутствия лейкоцитов не превышал диапазон от 0 до 7 в поле зрения. Таким образом, установлено практически полное совпадение результатов, полученных при использовании обоих методов.
Литература/References
1. Анкирская А. С., Муравьева В. В., Карапетян Т. Э. Аэробные вагиниты в структуре оппортунистических инфекций влагалища. Дискуссионный вопрос нозологической терминологии // Акушерство и гинекология. 2013. № 1. C. 21-28. [Ankirskaya A. S., Murav'yova V. V., Karapetyan T. E. Aerobic vaginitis in the structure of opportunistic vaginal infections. A debatable issue of nosological terminology. Obstetrics and Gynecology. 2013; 1: 21-28. (In Russ.)]
2. Пестрикова Т. Ю., Воронова Ю. В. Оценка эффективности лечения вагинитов неспецифической этиологии // Гинекология. 2014. Т. 16. № 2. С. 13-17. [Pestrikova T. Yu., Voronova Yu. V. Evaluation of the effectiveness of treatment of vaginitis of non-specific etiology Gynecology. 2014; 16 (2): 13-17. (In Russ.)]
3. Савичева А. М., Тапильская Н. И., Шипицына Е. В., Воробьева Н. Е Бактериальный вагиноз и аэробный вагинит как основные нарушения баланса вагинальной микрофлоры. Особенности диагностики и терапии // Акушерство и гинекология. 2017. № 5. С. 24-31. [Savicheva A. M., Tapil'skaya N. I., Shipitsyna E. V., Vorob'yova N. E. Bacterial vaginosis and aerobic vaginitis as the main imbalance of the vaginal microflora. Features of diagnosis and therapy. Obstetrics and Gynecology. 2017; 5: 24-31. (In Russ.)] DOI: dx.doi.org/10.18565/ aig.2017.5.24-31.
4. Кира Е. Ф., Душкина Е. А., Бадикова Н. С. Биологическая роль кислотности влагалища. Механизмы стабильности и методы коррекции // Акушерство и гинекология. 2013. № 3. C. 102-106. [Kira E. F., Dushkina E. A., Badikova N. S. The biological role of vaginal acidity. Stability mechanisms and correction methods. Obstetrics and Gynecology 2013; 3: 102-106. (In Russ.)]
Заключение
Резюмируя результаты исследования эффективности лабораторного теста т.н. «сухого» экспресс-анализа, можно констатировать, что система «Кольпо-тест» является быстрым и информативным лабораторным методом мониторирования состояния микроэкосистемы влагалища и позволяет проводить дифференциальную диагностику между состояниями нормы, БВ и воспалительным процессом во влагалище специфической и неспецифической этиологии непосредственно на рабочем месте.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
5. Пестрикова Т. Ю., Юрасова Е. А., Котельникова А. В., Князева Т. П. Современные подходы к верификации диагностики бактериального вагиноза и тактике ведения // РМЖ. Акушерство и Гинекология. 2018. № 2 (1). C. 48-53. [Pestrikova T. Yu., Yurasova E. A., Kotel'nikova A. V., Knyazeva T. P. Modern approaches to the verification of the diagnosis of bacterial vaginosis and management tactics. RMZH. Obstetrics and Gynecology. 2018; (2-1): 48-53. (In Russ.)]
6. Честнова Т. В., Марийко А. В., Руднева А. А. Бактериальный вагиноз (обзор литературы) // Вестник новых медицинских технологий. 2024. Т. 28. № 1. С. 14-21. [Chestnova T. V., Mariyko A. V., Rudneva A. A. Bacterial vaginosis (literature review). Bulletin of New Medical Technologies. 2024; 28 (1): 14-21. (In Russ.)]
7. Di Simone N. et al. Recent Insights on the Maternal Microbiota: Impact on Pregnancy Outcomes. Front. Immunol. 2020; 11: 528202. DOI: 10.3389/fimmu.2020.528202.
8. Хрянин А. А., Решетникова О. В. Бактериальный вагиноз. Новая парадигма // Акушерство и гинекология. 2016. № 1. С. 133-139. [Khryanin A. A., Reshetnikova O. V. Bacterial vaginosis. A new paradigm. Obstetrics and Gynecology. 2016; 1: 133-139. (In Russ.)]
9. Donders G. G., Ravel J., Vitali B. et al. Protein Content of Cervicovaginal Fluid Is Altered During Bacterial Vaginosis. J. Low Genit. Tract. Dis. 2018; (22-2): 147-151. DOI: 10.1097/ LGT.0000000000000367.
10. Srinivasan S., Morgan M. T., Fiedler T. L. et al. Metabolic signatures of bacterial vaginosis. mBio. 2015; 6 (2): 200-204.15. DOI: 10.1128/mBio.00204-15.
УДК 616.12-008.331.1-085+615.252.349.7 DOI 10.24412/2220-7880-2024-4-16-20
ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ АРТЕРИАЛЬНОГО ДАВЛЕНИЯ У БОЛЬНЫХ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ, ПЕРЕНЕСШИХ COVID-19, ПРИ ВКЛЮЧЕНИИ В КОМБИНИРОВАННУЮ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНУЮ ФАРМАКОТЕРАПИЮ КОМПЛЕКСА L-АРГИНИН + ДИГИДРОКВЕРЦЕТИН
'Налётова О. С., 'Сердюк Е. Б., 'Налётов С. В., 12Налётова Е. Н., 'Алесинский М.М., 'Шалаева И. В.
1ФГБОУ ВО «Донецкий государственный медицинский университет имени М. Горького» Минздрава России, Донецк, Россия (283003, Донецкая Народная Республика, Донецк, пр-т Ильича, 16), e-mail: [email protected]
2ФГБУ «Институт неотложной и восстановительной хирургии имени В. К. Гусака» Минздрава России, Донецк, Россия (283003, Донецкая Народная Республика, Донецк, Ленинский пр-т, 47), e-mail: [email protected]
В статье приведены данные о динамике показателей офисного артериального давления у больных гипертонической болезнью II стадии, перенесших COVID-19, при проведении антигипертензивной фармакотерапии, включающей комплекс L-аргинин (таблетки по 500 мг 1 раз в сутки) + дигидрокверцетин (таблетки по 25 мг 2 раза в сутки). Показано, что предложенное лечение более эффективно, чем стандартная антиги-
