Научная статья на тему 'ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ И СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ ПРИ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ'

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ И СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ ПРИ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
86
17
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Терапевтический архив
Scopus
ВАК
Область наук
Ключевые слова
МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИЙ СИНДРОМ / MYELODYSPLASTIC SYNDROME / ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИЦЫ / HEMATOPOIETIC PROGENITOR CELLS / CD34+ CELLS / МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ СТРОМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ / MESENCHYMAL STROMAL CELLS / ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ / CYTOGENETIC ASSAY / КЛЕТКИ CD34+

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Пименова М. А., Паровичникова Е. Н., Кохно А. В., Домрачева Е. В., Манакова Т. Е.

Резюме. Цель исследования. Изучить и сравнить цитогенетические аномалии в гемопоэтических клетках-предшественницах CD34+, выделенных из костного мозга (КМ), периферической крови и мезенхимальных стромальных клеток (МСК), у пациентов с миелодиспластическим синдромом (МДС). Материалы и методы. Представлены результаты цитогенетического анализа общей популяции клеток костного мозга (ККМ), гемопоэтических клеток-предшественниц CD34+ КМ, периферической крови и МСК КМ 35 больных (29 с МДС и 6 в стадии трансформации в острый миелоидный лейкоз - ОМЛ) и 7 здоровых доноров КМ. Цитогенетическое исследование выполнено методами G-дифференциального окрашивания хромосом (G-band) и флюоресцентной in situ гибридизации (FISH). Результаты. У 17 (49%) из 35 больных (с МДС 13 и с ОМЛ 4) в ККМ выявлены аномалии кариотипа, у остальных определен нормальный кариотип. У всех обследованных пациентов с аномалиями кариотипа с помощью FISH-исследования подтверждено наличие тех же цитогенетических аномалий в выделенных из КМ и периферической крови гемопоэтических клетках-предшественницах CD34+. Средние размеры патологического клона в общей популяции ККМ, ККМ CD34+ и клетках периферической крови CD34+ не различались и составили 65,8, 73,1 и 74,8% соответственно. У пациентов, в КМ которых определен нормальный кариотип, в клетках CD34+ также не выявлены хромосомные аномалии. Кариотип МСК проанализирован у 23 (с МДС - 19 и с ОМЛ - 4) из 35 больных. У пациентов с трансформацией в ОМЛ аномалии кариотипа не выявлены. У 2 (11%) из 19 пациентов с МДС определены структурные хромосомные аберрации - у одного с конституциональной инверсией inv(9)(p13q21) обнаружена неклональная транслокация t(2;22)(p10;q11), у другого - клон с добавочным сегментом длинного плеча 2-й хромосомы в 35% клеток. Численные аномалии кариотипа МСК не выявлены. У 7 здоровых доноров КМ определен нормальный кариотип МСК. Заключение. Цитогенетический анализ гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц показал, что хромосомные аномалии, выявленные в этих клеточных популяциях, у пациентов с МДС различны. В изолированных клетках CD34+ определены те же цитогенетические аномалии, что и в общей популяции ККМ. При исследовании МСК у большинства пациентов цитогенетические аномалии не обнаружены. У пациентов с ОМЛ определен нормальный кариотип МСК. У 2 (11%) пациентов с МДС обнаружены структурные хромосомные аномалии, которые отличались от выявленных в общей популяции ККМ и изолированных клетках CD34+. Различия хромосомных аномалий в кроветворных и мезенхимальных клетках-предшественницах указывают на то, что стромальное микроокружение не является частью патологического клона при МДС, однако, вероятно, имеет большое значение в патогенезе заболевания.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Пименова М. А., Паровичникова Е. Н., Кохно А. В., Домрачева Е. В., Манакова Т. Е.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

CYTOGENETIC CHARACTERISTICS OF HEMATOPOIETIC AND STROMAL PROGENITOR CELLS IN MYELODYSPLASTIC SYNDROME

AIM: To study and compare cytogenetic abnormalities in the bone marrow (BM) and peripheral blood (PB) CD34+ hematopoietic progenitor cells and in the BM mesenchymal stromal cells (MSCs) in patients with myelodysplastic syndrome (MDS)/MATERIAL AND METHODS: The results of a cytogenetic analysis of the total population of BM cells (BMC), CD34+ hematopoietic progenitor cells from BM and PB, and BM MSCs were analyzed in 35 patients (29 patients with MDS and 6 with MDS transformed into acute myeloid leukemia (AML)) and 7 healthy BM donors. Cytogenetic examinations were performed by G-banding of chromosomes and fluorescence in situ hybridization (FISH)/RESULTS: The BMC karyotype was abnormal in 17 (49%) of the 35 patients (13 with MDS and 4 with AML); the others were found to have a normal BM karyotype. The FISH analysis confirmed the same cytogenetic abnormalities in the BM and PB CD34+ hematopoietic progenitor cells in all the examinees with an abnormal karyotype. The mean abnormal clone sizes in the total population of BMCs and BM and PB CD34+ progenitor cells did not differ and constituted 65.8, 73.1, and 74.8%, respectively. The patients with a normal BM karyotype had no chromosome abnormalities in the CD34+ cells either. The karyotype of MSCs was analyzed in 23 (19 with MDS and 4 with AML) of the 35 patients. No karyotype abnormalities were revealed in the patients with MDS transformed into AML. There were structural chromosome aberrations in 2 (11%) of the 19 patients with MDS (one with constitutional inv(9)(p13q21) was found to have non-clonal translocation t(2;22)(p10;q11) and the other had a clone with an additional segment of the long arm of chromosome 2 in 35% of the cells. No numerical MSC karyotype abnormalities were detected. A normal MSC karyotype was defined in 7 healthy BM donors/CONCLUSION: The cytogenetic analysis of hematopoietic and mesenchymal progenitor cells showed that the chromosome abnormalities revealed in these cell populations were different in the patients with MDS. The isolated CD34+ cells displayed the same cytogenetic abnormalities as in a total population of BMC. Examination of the latter could reveal no cytogenetic abnormalities in the majority of the patients. A normal BMC karyotype was detectable in the patients with AML. Two (11%) patients with MDS were found to have structural chromosome abnormalities that differed from those detected in the total population of BMC and in isolated CD34+ cells. The differences of chromosome abnormalities in the hematopoietic and mesenchymal progenitor cells point to the fact that the stromal microenvironment is not part of the abnormal clone in MDS, however, it may be of great importance in the pathogenesis of the disease.

Текст научной работы на тему «ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ И СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ ПРИ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ»

© Коллектив авторов, 2013

Цитогенетическая характеристика гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц при миелодиспластическом синдроме

М.А. ПИМЕНОВА, Е.Н. ПАРОВИЧНИКОВА, А.В. КОХНО, Е.В. ДОМРАЧЕВА, Т.Е. МАНАКОВА, Ю.С. МАЛЬЦЕВА, М.Л. КОННОВА, Л.А. ШИШИГИНА, В.Г. САВЧЕНКО

Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Cytogenetic characteristics of hematopoietic and stromal progenitor cells in myelodysplastic syndrome

M.A. PIMENOVA, E.N. PAROVICHNIKOVA, A.V. KOKHNO, E.V. DOMRACHEVA, T.E. MANAKOVA, YU.S. MALTSEVA, M.L. KONNOVA, L.A. SHISHIGINA, V.G. SAVCHENKO

Hematology Research Center, Ministry of Health of Russia, Moscow

Резюме

Цель исследования. Изучить и сравнить цитогенетические аномалии в гемопоэтических клетках—предшественницах CD34+, выделенных из костного мозга (КМ), периферической крови и мезенхимальных стромальных клеток (МСК), у пациентов с миелодиспластическим синдромом (МДС).

Материалы и методы. Представлены результаты цитогенетического анализа общей популяции клеток костного мозга (ККМ), гемопоэтических клеток—предшественниц CD34+ КМ, периферической крови и МСК КМ 35 больных (29 с МДС и 6 в стадии трансформации в острый миелоидный лейкоз — ОМЛ) и 7 здоровых доноров КМ. Цитогенетическое исследование выполнено методами G-дифференциального окрашивания хромосом (G-band) и флюоресцентной in situ гибридизации (FISH).

Результаты. У 17 (49%) из 35 больных (с МДС 13 и с ОМЛ 4) в ККМ выявлены аномалии кариотипа, у остальных определен нормальный кариотип. У всех обследованных пациентов с аномалиями кариотипа с помощью FISH-исследования подтверждено наличие тех же цитогенетических аномалий в выделенных из КМ и периферической крови гемопоэтических клетках-предшественницах CD34+. Средние размеры патологического клона в общей популяции ККМ, ККМ CD34+ и клетках периферической крови CD34+ не различались и составили 65,8, 73,1 и 74,8% соответственно. У пациентов, в КМ которых определен нормальный кариотип, в клетках CD34+ также не выявлены хромосомные аномалии. Кариотип МСК проанализирован у 23 (с МДС — 19 и с ОМЛ — 4) из 35 больных. У пациентов с трансформацией в ОМЛ аномалии кариотипа не выявлены. У 2 (11%) из 19 пациентов с МДС определены структурные хромосомные аберрации — у одного с конституциональной инверсией inv(9)(p13q21) обнаружена неклональная транслокация t(2;22)(p10;q11), у другого — клон с добавочным сегментом длинного плеча 2-й хромосомы в 35% клеток. Численные аномалии кариотипа МСК не выявлены. У 7 здоровых доноров КМ определен нормальный кариотип МСК.

Заключение. Цитогенетический анализ гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц показал, что хромосомные аномалии, выявленные в этих клеточных популяциях, у пациентов с МДС различны. В изолированных клетках CD34+ определены те же цитогенетические аномалии, что и в общей популяции ККМ. При исследовании МСК у большинства пациентов цитогенетические аномалии не обнаружены. У пациентов с ОМЛ определен нормальный кариотип МСК. У 2 (11%) пациентов с МДС обнаружены структурные хромосомные аномалии, которые отличались от выявленных в общей популяции ККМ и изолированных клетках CD34+. Различия хромосомных аномалий в кроветворных и мезенхимальных клетках-предшественницах указывают на то, что стромальное микроокружение не является частью патологического клона при МДС, однако, вероятно, имеет большое значение в патогенезе заболевания.

Ключевые слова: миелодиспластический синдром, гемопоэтические клетки-предшественницы, клетки CD34+, мезенхи-мальные стромальные клетки, цитогенетический анализ.

Aim. To study and compare cytogenetic abnormalities in the bone marrow (BM) and peripheral blood (PB) CD34+ hematopoietic progenitor cells and in the BM mesenchymal stromal cells (MSCs) in patients with myelodysplastic syndrome (MDS). Subjects and methods. The results of a cytogenetic analysis of the total population of BM cells (BMC), CD34+ hematopoietic progenitor cells from BM and PB, and BM MSCs were analyzed in 35 patients (29 patients with MDS and 6 with MDS transformed into acute myeloid leukemia (AML)) and 7 healthy BM donors. Cytogenetic examinations were performed by G-banding of chromosomes and fluorescence in situ hybridization (FISH).

Results. The BMC karyotype was abnormal in 17 (49%) of the 35 patients (13 with MDS and 4 with AML); the others were found to have a normal BM karyotype. The FISH analysis confirmed the same cytogenetic abnormalities in the BM and PB CD34+ hematopoietic progenitor cells in all the examinees with an abnormal karyotype. The mean abnormal clone sizes in the total population of BMCs and BM and PB CD34+ progenitor cells did not differ and constituted 65.8, 73.1, and 74.8%, respectively. The patients with a normal BM karyotype had no chromosome abnormalities in the CD34+ cells either. The karyotype of MSCs was analyzed in 23 (19 with MDS and 4 with AML) of the 35 patients. No karyotype abnormalities were revealed in the patients with MDS transformed into AML. There were structural chromosome aberrations in 2 (11%) of the 19 patients with MDS (one with constitutional inv(9)(p13q21) was found to have non-clonal translocation t(2;22)(p10;q11) and the other had a clone with an additional segment of the long arm of chromosome 2 in 35% of the cells. No numerical MSC karyotype abnormalities were detected. A normal MSC karyotype was defined in 7 healthy BM donors.

Conclusion. The cytogenetic analysis of hematopoietic and mesenchymal progenitor cells showed that the chromosome abnormalities revealed in these cell populations were different in the patients with MDS. The isolated CD34+ cells displayed the same cytogenetic abnormalities as in a total population of BMC. Examination of the latter could reveal no cytogenetic abnormalities

in the majority of the patients. A normal BMC karyotype was detectable in the patients with AML. Two (11%) patients with MDS were found to have structural chromosome abnormalities that differed from those detected in the total population of BMC and in isolated CD34+ cells. The differences of chromosome abnormalities in the hematopoietic and mesenchymal progenitor cells point to the fact that the stromal microenvironment is not part of the abnormal clone in MDS, however, it may be of great importance in the pathogenesis of the disease.

Key words: myelodysplastic syndrome, hematopoietic progenitor cells, CD34+ cells, mesenchymal stromal cells, cytogenetic assay.

ККМ — клетки костного мозга КМ — костный мозг

МСК — мезенхимальные стромальные клетки ОМЛ — острый миелоидный лейкоз РА — рефрактерная анемия

РАИБ — рефрактерная анемия с избытком бластов

РАКС — рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробласта-

ми

FISH — флюоресцентная in situ гибридизация

Оценка цитогенетических аномалий в костном мозге (КМ) у больных с миелодиспластическим синдромом (МДС) имеет большое значение для подтверждения кло-нальной природы заболевания, определения прогноза заболевания и выбора тактики лечения больных. Цитогене-тические аномалии в клетках костного мозга (ККМ) выявляют у 40—70% пациентов с МДС, и их разнообразие характеризует заболевание. Так, изолированная делеция (5ф выявляется у пациентов с отдельной нозологической формой МДС, 5д-синдромом, характеризующейся своеобразной клинической картиной, хорошим ответом на иммуномодулирующую терапию и благоприятным прогнозом. Изолированная трисомия 8 позволяет отнести пациента к группе промежуточного риска и является прогностическим фактором эффективности иммуносупрес-сивной терапии. Аномалии 7-й хромосомы (моносомия или делеция д-плеча) определяют крайне неблагоприятный прогноз и диктуют необходимость выбора агрессивной тактики лечения, в том числе выполнения трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток в качестве первой линии терапии. Комплексные хромосомные аномалии (3 и более) могут включать —5^е1(5д), —7/ de1(7q), de1(17p) и чаще всего ассоциируются с вторичным МДС и неблагоприятным течением заболевания. Разнообразие выявляемых генетических аномалий при МДС представлено в табл. 1 [1].

Клиническое течение МДС различно и зависит от варианта заболевания. Рефрактерные цитопении (рефрактерная анемия — РА, рефрактерная тромбоцитопения, рефрактерная нейтропения), как правило, имеют благоприятный прогноз. При увеличении количества бластных

Сведения об авторах:

Паровичникова Елена Николаевна — д.м.н., зав. отд. химиотерапии гемобластозов, депрессий кроветворения и ТКМ Кохно Алина Владимировна — к.м.н., в.н.с. отд-ния химиотерапии гемобластозов и депрессий кроветворения

Домрачева Елена Васильевна — д.м.н., проф., зав. кариологиче-ской лаб.

Манакова Татьяна Ефимовна — к.б.н., с.н.с. лаб. физиологии кроветворения

Коннова Мария Леонидовна — н.с. кариологической лаб. Мальцева Юлия Семеновна — н.с. кариологической лаб. Шишигина Любовь Александровна — н.с. кариологической лаб. Савченко Валерий Григорьевич — д.м.н., акад. РАМН, проф., ген. дир. ГНЦ МЗ РФ

Таблица 1. Аномалии кариотипа и их частота при МДС в момент диагностики (ВОЗ, 2008), %

Аномалия кариотипа МДС В-МДС

Несбалансированные:

+8* 10 —

—7/del(7q) 10 50

—5/del(5q) 10 40

del(20q)* 5—8 —

_Y* 5 —

i(17)/t(17p) 3—5 —

-13/del(13q) 3 —

del(11q) 3 —

del(12p)/t(12p) 3 —

del(9q) 1—2 —

idic(X)(q13) 1—2 —

Сбалансированные:

t(11;16)(q23;p13.3) — 3

t(3;21)(q26.2;q22.1) — 2

t(1;3)(p36.3;q21.2) 1 —

t(2;11)(p21;q23) 1 —

inv(3)(q21q26.2) 1 —

t(6;9)(p23;q34) 1 —

Примечание. * — наличие данной аномалии изолированно без морфологических критериев не является доказательством наличия МДС. Наличие других аномалий в случаях стойких цитопе-ний без четких морфологических признаков дисплазии указывает на возможный диагноз МДС. В-МДС — вторичный МДС (после предшествующей терапии).

клеток в КМ (варианты РА с избытком бластов — РАИБ-1 и РАИБ-2) вероятность трансформации в острый лейкоз увеличивается, и при определении более 20% бластных клеток диагностируют острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) с предшествующей миелодисплазией [1—5].

Развитие МДС обусловлено клональным повреждением стволовой кроветворной клетки. Происходит ли это нарушение на уровне истинно стволовой клетки или ком-митированных миелоидных предшественников, остается неясным. В последние годы в литературе опубликованы

Контактная информация:

Пименова Мария Анатольевна — асп. отд. химиотерапии гемобластозов и ТКМ; тел.: +7(495)612-4592; e-mail: maria_pimenova@ mail.ru

данные о выявлении хромосомных аберраций в популяции гемопоэтических клеток—предшественниц CD34+ у пациентов с МДС и ОМЛ [6—10]. Указывается также на определение патологического клона не только среди мие-лоидных клеточных линий, но и лимфоидных [11—13], что может быть обусловлено повреждением мультипо-тентной стволовой клетки.

Кроветворение в КМ обеспечивается постоянным взаимодействием гемопоэтических клеток-предшественниц и клеток стромального микроокружения. Мезенхи-мальные стромальные клетки (МСК) являются главным компонентом микроокружения и удобной моделью для изучения in vitro. В последнее время опубликованы работы о нарушенной функции стромы при МДС, в частности нарушен механизм миграции гемопоэтических клеток-предшественниц в костномозговые ниши. При сочетан-ном культивировании гемопоэтических и стромальных предшественников показано, что МСК, полученные от больных с МДС, демонстрируют сниженную способность к поддержанию нормальных гемопоэтических предшественников, у них существенно снижена пластичность по сравнению с таковой у МСК, полученных из КМ здоровых лиц, что может обусловливать неэффективный гемо-поэз при МДС [11, 14—18].

Рядом исследовательских групп получены данные, согласно которым в МСК не определяются характерные для МДС хромосомные аберрации, и было сделано предположение, что строма не вовлечена в клональный процесс при данном заболевании и кариотип МСК не изменен [19—21]. Однако в работах E. Flores-Figueroa и соавт. [22, 23], O. Blau и соавт. [24, 25] показано наличие хромосомных нарушений в МСК, в том числе клональных, у отдельных пациентов с МДС. Исследование экспрессии генов с помощью микрочипов демонстрирует наличие генетических аномалий МСК у пациентов с МДС, в частности с 5д-синдромом [26]. Кроме того, на непосредственное участие стромального микроокружения в развитии МДС указывают данные, полученные M. Raaijmakers и соавт. [27], об индуцированном появлении признаков диспла-зии в кроветворных клетках мышей при специфическом повреждении стромы.

С учетом несомненной тесной взаимосвязи гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц при развитии МДС представляется важным изучение цитоге-нетических особенностей этих клеточных популяций у пациентов с МДС.

Материалы и методы

M. Seabright [28] в модификации с применением красителя Wright. Цитогенетическое исследование МСК выполняли по методу, описанному Z. Zhang и соавт. [29]. Хромосомный анализ проводили в соответствии с Международной цитогенетической номенклатурой хромосом человека (ISCN 2005) [30]. Анализировали в среднем 20 метафаз. Клональной считали аномалию при обнаружении структурной перестройки и трисомии минимум в 2 метафазах и моносомии минимум в 3. При обнаружении структурной перестройки в одной метафазе перестройку обозначали как неклональную (спонтанную). Единичные неполные митозы не учитывали ввиду возможности потерь хромосом при обработке клеточного осадка. Флюоресцентную in situ гибридизацию (FISH) выполняли на ККМ и изолированных клетках CD34+ с использованием набора ДНК-зондов LSI (5q33—q34) EGR-1 SpectrumOrange/D5S721/D5S23 SpectrumGreen Probe, LSI (7q31) SpectrumOrange/CEP 7 SpectrumGreen Probe, CEP 8 SpectrumOrange DNAProbeKit, LSIAML1/ETO Dual Color Fusion Translocation Probe, CEP X SpectrumOrange/CEPY SpectrumGreen DNA Probe, LSI D20S108 (20q12) SpectrumOrange Probe («Vysis Abbott», США). Гибридизацию осуществляли согласно методике фирмы-производителя. Анализ сигналов проводили под флюоресцентным микроскопом Zeiss-Axioscope с использованием тройного фильтра Orange/Green/Dapi. Анализировали 200 интерфазных ядер.

Гемопоэтические клетки—предшественницы CD34+ получали из КМ и периферической крови. Мононуклеарные клетки выделяли, центрифугируя в градиенте плотности фиколла, и метили CD34 MicroBeads human. Изолированную фракцию клеток CD34+ получали, используя MACS колонки для магнитной сепарации, в соответствии с инструкциями фирмы-производителя («Miltenyi Biotec», «Bergisch Gladbach», Германия). Чистота полученной фракции проверена с помощью проточной цитометрии и составила 94,5% (рис. 1). Выделенную фракцию клеток концентрировали с помощью цитоспина на адгезивном стекле для выполнения FISH-исследования.

Культуру МСК получали из КМ. Фракцию мононуклеаров выделяли из аспирата КМ в градиенте плотности фиколла (1,077 г/см3). Для получения МСК мононуклеары культивировали в пластиковых матрасах с площадью дна 25 и 75 см2 в концентрации 1—6-106 клеток на флакон в среде а-МЕМ («HyClone», США) с 10% эмбриональной телячьей сывороткой («HyClone», США), 2 мМ L-глутамина («BioWest»), 100 ЕД/мл пенициллина и 50 ЕД/мл

В работе представлены результаты обследования 35 первичных больных, полученные в момент диагностики, в период с июля 2011 г. по май 2012 г.: 29 больных, их которых с МДС (РА) — 4, с рефрактерная цитопенией с мультилинейной дисплазией (РЦМД) — 13, с рефрактерной анемией с кольцевыми сидеробла-стами (РАКС) — 2, с РАИБ — 7, с 5q-синдром — 3; 6 больных в стадии трансформации в ОМЛ (1 пациент с вторичным ОМЛ) и 7 здоровых доноров КМ. Диагноз устанавливали в соответствии с классификацией ВОЗ (2008) [1]. Соотношение мужчин и женщин 18/17. Медиана возраста составила 60 лет (19—77 лет).

Цитогенетическое исследование ККМ проводили прямым методом и после краткосрочного (16—24 ч) культивирования клеток. Фиксацию и приготовление препаратов хромосом выполняли по общепринятой методике. G-дифференциальную окраску хромосом ^-Ьапф осуществляли по методике

Рис. 1. Контроль чистоты популяции клеток CD34+ после магнитной сепарации с помощью проточной цитоме-трии.

стрептомицина («Ферейн», Россия). После образования кон-флюэнтного монослоя из фибробластов клетки снимали 0,05% раствором трипсина и пассировали. В большинстве исследований использовали клетки после 2—3 пассажей.

Результаты

Цитогенетическое исследование ККМ. Характеристика больных и результаты цитогенетического исследования КМ представлены в табл. 2. Нормальный кариотип определен у 19 из 35 больных, у одного из них выявлена конституциональная инверсия inv(9)(p13q21); у 13 (МДС у 11 и ОМЛ у 2) — аномалии кариотипа и у 3 делящиеся клетки не обнаружены. Спектр выделенных аномалий следующий: у 7 больных (МДС у 6 и ОМЛ у 1) выявлены изолированные del(5q), -7, i(14), inv(3); у 1 (МДС) — 2 аномалии

— del(5q) и -7, и у 5 (МДС — у 3 и ОМЛ — у 2) комплексный кариотип.

Метод FISH на ККМ использовали у пациентов с выявленными аномалиями кариотипа для подтверждения этих аномалий. У пациентов с нормальным кариотипом или в отсутствие делящихся клеток выполняли FISH-исследование с ДНК-зондами к 5, 7 и 8-й хромосомам для выявления патологии в указанных хромосомах как наиболее значимых аномалий при МДС.

У 5 (14%) из 35 больных методом FISH выявлены скрытые хромосомные аномалии, которые не определены при кариотипировании: у 2 из них (МДС) при цитогене-тическом исследовании не получены митозы и методом FISH выявлены хромосомные аномалии: в первом случае

— одновременно del(5q) и del(7q) в 84% клеток, во втором

— трисомия 8 в 67% клеток. Еще у 2 больных (ОМЛ у 1 и МДС у 1) методом G-band определен нормальный кариотип, однако с помощью метода FISH выявлена del(5q) в обоих случаях. У 1 больного МДС, у которого в кариотипе определена изолированная del(5q), FISH-анализ позволил выявить дополнительно трисомию 21 в 52% клеток (исследование выполнено прицельно, так как имелись анамнестические данные предыдущего цитогенетическо-го анализа у этого пациента, выявившего 2 аномалии). Таким образом, после применения метода FISH дополнительно к исследованию кариотипа число больных с цито-генетическими аномалиями в ККМ увеличилось с 13 до 17 (49%).

FI S H-исследование выделенных гемопоэтических клеток—предшественниц CD34+ из КМ и периферической крови. Методом FISH проанализированы гемопоэтические клетки—предшественницы CD34+, полученные из КМ и периферической крови, у 24 из 35 пациентов (у 3 ОМЛ, у 21 МДС). У 10 из 24 пациентов в КМ определены хромосомные аномалии. Мы подтверждали эти аномалии в популяции клеток CD34+ с помощью FISH-исследования. В данной группе у всех обследованных пациентов в гемопоэтических клетках—предшественницах CD34+ были определены хромосомные аберрации. Среднее число ядер с патологическими флюоресцентными сигналами в общей популяции ККМ, ККМ и периферической крови CD34+ статистически значимо не различалось и составило 65,8, 73,1 и 74,8% соответственно (табл. 3). Однако у 4 из 10 обследованных больных отмечены существенные различия по размерам патологических клонов в ККМ и изолированных клетках CD34+. У 2 из них (пациенты

№15 и 35) размер клонов в ККМ был невелик: моносомия 21 в 25% ядер у одного и del(5q) в 27% ядер у второго пациента, в то время как в клетках CD34+ эти аномалии выявлены в 80 и 75% ядер соответственно. У пациента №9 с МДС, РЦМД моносомия 7 выявлена в 60% ККМ, а в клетках CD34+ — всего в 26%. Следует также отметить распределение клонально измененных клеток у больного (№34) с del(5q) и +21. В общей популяции ККМ создавалось впечатление о наличии одновременно 2 клонов клеток: часть клеток с del(5q) не содержали +21, в то же время во фракции клеток CD34+ одинаковое число (70%) клеток содержало одновременно 2 аномалии. У 14 из 24 пациентов, в ККМ которых с помощью методов G-band и FISH определен нормальный кариотип, в изолированной фракции ККМ и периферической крови CD34+выполнено FISH-исследование с ДНК зондами к 5, 7 и 8-й хромосомам, которое не выявило исследуемые аномалии.

Цитогенетическое исследование МСК. Криологический анализ МСК выполнен у 23 из 35 пациентов (МДС у 19 и ОМЛ у 4) и у 7 здоровых доноров КМ (см. табл. 2). У 12 больных из 35 не удалось получить рост МСК в культуре вследствие ограниченной способности стромальных клеток больных с МДС к пролиферации. Нормальный кариотип МСК определен у всех больных ОМЛ и у 6 больных с МДС, у одного из которых в кариотипе МСК определена конституциональная инверсия inv(9). У 2 (11%) из 19 пациентов с МДС выявлены аномалии кариотипа. У одного из них с конституциональной inv(9) (пациент №12) выявлена неклональная транслокация в одной мета-фазе: 46XY,t(2;22)(p10;q11), inv(9)(p13q21)[1]/46XY, inv(9) (p13q21)[19]. У второго (пациент №21) в кариотипе МСК выявлена клональная перестройка в 7 метафазах из 20: 46ХУ^(2ф[7]/46ХУ[13]. В КМ у этого больного определен комплексный кариотип (рис. 2). У обоих пациентов с инверсией inv(9) в ККМ и МСК ее конституциональный характер был подтвержден результатами исследования кариотипа стимулированной фитогемагглютинином культуры лимфоцитов периферической крови. При кариоти-пировании МСК от здоровых доноров КМ во всех исследованных образцах получен нормальный кариотип.

Обсуждение

В настоящей работе представлен анализ цитогенети-ческих изменений в популяциях гемопоэтических и стромальных клеток-предшественниц у пациентов с различными вариантами МДС, а также в стадии трансформации заболевания в ОМЛ. Интерес к изучению этой области определяется тем, что до сих пор остается неуточненным вопрос об истинном уровне генетического повреждения при МДС, а также участии стромального микроокружения в патогенезе клональной эволюции миелодисплазии.

Определение кариотипа ККМ в настоящее время входит в перечень стандартных исследований, необходимых для верификации диагноза МДС. Выявленные хромосомные аномалии определяют прогноз заболевания и соответственно тактику лечения больных. Современные прогностические шкалы, в частности шкала IPSS-R, помимо количества бластных клеток в КМ, степени цитопении и зависимости от гемотрансфузий, включают данные цито-генетического анализа [31]. В нашем исследовании цито-генетические аномалии в КМ обнаружены у 17 (49%) из 35

Таблица 2. Характеристика пациентов: результаты цитогенетического исследования ККМ и МСК

№ п/п Пол, возраст, годы Диагноз Кариотип (КМ) Маркер FISH, (%) (КМ) № пассажа МСК Кариотип МСК

1 М, 19 ОМЛ 45XY, -7[18]/46XY[2] н/д 2 46XY[20]

2 М, 74 МДС, РАИБ 46XY[20] н/д 2 46XY[20]

3 М, 33 МДС, РАИБ 46XY, -7, inv(9)(p13q21), -7 (80%) 5 46XY, inv(9)(p13q21) [20]

i(17)(9q10),

+22[19]/46XYinv(9)(p13q21) [1]

4 Ж, 49 МДС, 5q- LL J 46ХХ[20] del5q (75%) 4 46XX[20]

5 М, 63 МДС, РАИБ 46XY,i(14)(q10)[7]/46XY[13] Нет 4 46XY[20]

IgH(14q34) — (0)

6 М, 77 ОМЛ 46XY[20] Нет — н/д

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 —

(0)

7 Ж, 57 МДС, РА 45XX,del 5(q31;q35), -7[20] del5q (90%) — н/д

-7 (90%)

8 Ж, 58 ОМЛ 46XX[20] н/д 3 46XX[20]

9 Ж, 61 МДС, РЦМД 45XX, -7[17]/46XX[3] -7(60%) 5 46XX[20]

10 Ж, 53 МДС, РА 46XX[20] Нет — н/д

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 —

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

(0)

11 М, 57 МДС, РЦМД 46XY[20] Нет — н/д

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 —

(0)

12 М, 63 МДС, РАИБ 46XYinv(9)(p13q21)[20] Нет 3 46XY, t(2;22)(p10;q11),

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 — inv(9)(p13q21)[1]/46XY,

(0) inv(9)(p13q21)[19]

13 М, 60 МДС, РЦМД 46XY[20] Нет 2 46XY[7]

-5/del(5q), -7/del(7q),+8 —

(0)

14 М, 76 ОМЛ 46XY[20] del5q (67%) 3 46XY[20]

15 Ж, 64 В-ОМЛ 47XX, del(9)(q22), del(12) +21 (25%) — н/д

(p13), -?21,+mar,del(21)

(q11?) +mar[5]/46XX[15]

16 Ж, 64 МДС, РАИБ 46XX[20] Нет 3 46XX[20]

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 —

(0)

17 Ж, 67 МДС, РЦМД Нет митозов del5q (84%) del7q (84%) 3 46XX[20]

18 Ж, 55 МДС, 5q- 46XX, del5(q15q33) del5q (85%) 2 46XX[20]

[11]/46XX[9]

19 Ж, 60 МДС, РЦМД Нет митозов +8 (67%) — н/д

20 М, 42 МДС, РАИБ 51XY,+Y,+3,+6,+8, del(9) XYY (77%) 3 46XY[20]

(q13), +del(9)(q13) +8 (76%)

[19]/46XY[1]

21 М, 58 МДС, РА 45—46XY, —?5,—13, der(19), del5q (74%) 2 46XY,add(2q)[7]/46XY[13]

add(q13?or p13?), -20,+mar -20 (70%)

х2, +mar?del(13q21) [15]/45—

46XY idem,

+dmin[2]/46XY[3]

22 М, 60 МДС, РЦМД 46XY[20] Нет 2 46XY[20]

-5/del(5q),

-7/del(7q), +8 — (0)

23 Ж, 29 МДС, РЦМД 46XX[20] Нет 2 46XX[20]

-5/del(5q),

-7/del(7q), +8 — (0)

24 М, 73 МДС, РАКС 46XY[20] Нет 2 46XY[20]

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 —

(0)

25 М, 77 МДС, РАИБ Нет митозов Нет — н/д

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 —

(0)

Таблица 2. Характеристика пациентов: результаты цитогенетического исследования ККМ и МСК (Продолжение)

№ Пол, воз-п/п раст, годы

Диагноз

Кариотип (КМ)

Маркер FISH, (%) (КМ)

№ пассажа МСК

Кариотип МСК

26

27

28 29

Ж, 66

М, 56 Ж, 61 Ж, 51

ОМЛ

МДС, РЦМД МДС, РЦМД МДС, РЦМД

30 Ж, 44 МДС, РЦМД

31 Ж, 37 МДС, РАКС

32 Ж, 71 МДС, РЦМД

33 М, 43 МДС, РА

46—47ХХ, der(3),-5 ordel(5) (q13q33),? der(7) or?del(7) (22), del(p10)(q22), der(12) add(q24), -?17 or ?der(17) add(p11) or ?t(7;17)(p10q10), +mar1—2[20] 46XY[20] 46XX, inv3(q21;q26)[11] 46ХХ[20]

46ХХ[20]

35 М, 62 МДС, 5q-

46ХХ[20]

46ХХ[20]

46XY[20]

34 М, 48 МДС, РЦМД 46XY, del(5)(q15q33)

[10]/46XY[10]

46XY, del(5)(q15q33) [7]/46XY[11]

н/д

н/д н/д Нет

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 (0) Нет

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 (0) Нет

-5/del(5q), -7/del(7q), +8 (0) Нет

-5/del(5q), -7/del(7q),+8 -(0) Нет

-5/del(5q), -7/del(7q),+8 -(0)

del5q (80%) +21 (52%)

del5q (27%)

46XX[20]

46XY[20] 46XX[20] 46XX[20]

н/д н/д н/д 46XY[20]

н/д н/д

Примечание. М — мужчина; Ж — женщина; н/д — нет данных.

обследованных, что коррелирует с данными литературы [1—5]. Стоит еще раз отметить, что не во всех случаях метод стандартного цитогенетического исследования явился достаточным для обнаружения аномалий кариотипа, и у около 10% пациентов не удалось получить делящиеся клетки для анализа. По меньшей мере в 14% случаев (по нашим данным, у 5 из 35 больных) методом FISH могут быть выявлены дополнительные (скрытые) хромосомные аномалии. У всех 5 больных размер выявленных клонов был довольно велик (от 52 до 84%); такие клоны не могут быть незамеченными при хромосомном анализе. По-видимому, все эти клетки находятся в стадии G0, не выходят в митоз и поэтому не обнаруживаются при кариоти-пировании. У 1 из 5 пациентов с выявленной del(5q) не-разделившиеся клетки содержали вторую аномалию — трисомию 21. Можно предположить, что у этого больного наблюдалось 2 клона клеток в КМ — один только с del(5q) и второй одновременно с del(5q) и трисомией 21. Выявление дополнительных хромосомных аномалий у ряда пациентов может иметь принципиальное значение, так как от этого зависят и прогноз заболевания, и терапевтический подход. Так, при определении нормального кариотипа в ККМ может быть выбрана тактика динамического наблюдения с последующими исследованиями КМ, тогда как выявление del(5q) позволяет эффективно применять им-муномодулирующую терапию. Следовательно, в дебюте

заболевания всем пациентам целесообразно сначала проводить стандартное цитогенетическое исследование, и в случаях определения нормального кариотипа или отсутствия делящихся клеток необходимо выполнять FISH-исследование с целью определения клинически значимых хромосомных аномалий. Всем пациентам, не дожидаясь получения результатов кариотипирования, проводить FISH-исследование нецелесообразно [32].

В клетках CD34+, выделенных из КМ и периферической крови, определены те же клональные нарушения, что и в ККМ пациентов с аномалиями кариотипа, что подтверждает поражение гемопоэтических предшественников при МДС. По данным литературы, количество клеток—предшественниц CD34+ в КМ больных МДС значительно больше, чем у здоровых лиц, пациентов с апласти-ческой анемией и вторичными цитопеническими синдромами. Процент клеток CD34+ неоднороден у пациентов категорий низкого (1,7%) и высокого (10,5%) риска и максимальный у пациентов с ОМЛ (35%), он коррелирует с процентом бластных клеток и немного превышает его [33]. Количество циркулирующих клеток CD34+ у пациентов с МДС также значительно больше, чем у здоровых лиц, и зависит от процентного содержания их в КМ [34]. Наряду с увеличением количества бластных клеток, увеличение количества клеток CD34+ тоже может свидетельствовать о прогрессии заболевания. В нашем исследова-

2

2

Ii (I

Тф

10 11 12

** А* 41

13 14 15

IX AI 44

16 17 18

19 20

**

21 22

Y

а

б

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Рис. 2. Кариотип ККМ и МСК пациента №21 И., 58 лет, диагноз: МДС, РА.

а — кариотип ККМ: 45—46,XY,-5,-13,der(19),add(q13?or p13),-20,+2mar,+mar del(13q21)?,+d min; б — кариотип МСК: 46,XY,add (2)(q36).

Таблица 3. Исследование методом FISH гемопоэтических клеток-предшественниц CD34+ КМ и периферической крови у пациентов с аномалиями кариотипа

Пациент FISH

все ККМ ККМ CD34+ клетки периферической крови CD34+

№7 del(5q) (90%) del(5q) (90%) del(5q) (95%)

-7 (90%) -7 (95%) -7 (95%)

№9 -7 (60%) -7 (26%) -7 (26%)

№14 del(5q) (67%) del(5q) (84%) del(5q) (84%)

№15 +21 (25%) +21 (80%) +21 (80%)

№18 del(5q) (85%) del(5q) (96%) н/д

№19 +8 (67%) +8 (80%) +8 (80%)

№20 +Y (77%) +Y (65%) +Y (71%)

+8 (76%) +8 (65%) +8 (81%)

№21 del(5q) (74%) del(5q) (70%) del(5q) (70%)

-20 (70%) -20 (70%) -20 (70%)

№34 del(5q) (80%) del(5q) (75%) del(5q) (75%)

+21 (52%) +21 (70%) +21 (70%)

№35 del(5q) (27%) del(5q) (75%) del(5q) (75%)

нии выявлено, что в среднем процент клонально измененных клеток среди гемопоэтических предшественников не отличается от такового в общей популяции ККМ пациентов с аномалиями кариотипа. Однако у 4 из 10 больных отличия выявлены. Согласно нашим наблюдениям размер патологического клона в клетках CD34+ может быть как значительно больше, так и меньше размера клона в общей популяции ККМ. Возможно, выраженность клональных изменений в гемопоэтических клетках-предшественницах может свидетельствовать о динамике развития заболевания и иметь прогностическое значение. Ввиду того что результаты FISH-исследования циркулирующих клеток СD34+ в среднем сопоставимы с результатами исследования ККМ, цитогенетический контроль динамики заболевания в процессе лечения при наличии маркеров для FISH-исследования может осуществляться с использованием изолированной фракции клеток CD34+ или мононуклеарной фракции периферической крови, что поможет снизить кратность пункций КМ у пациентов с МДС. У пациентов с нормальным кариотипом хромосомные перестройки не обнаружены и в популяции клеток CD34+. Таким образом, детальное цитогенетическое исследование (стандартное цитогенетическое исследование и FISH) не выявило у пациентов с нормальным кариотипом в КМ «скрытых» хромосомных аномалий в гемопоэтических предшественниках CD34+.

Почти у 90% пациентов с МДС и у всех пациентов с ОМЛ в нашем исследовании определен нормальный ка-риотип МСК. Хромосомные аномалии МСК выявлены у 2 (11%) из 19 пациентов с МДС. У обоих выявлены структурные аномалии: у одного — 35% клон add(2q), у другого — с конституциональной хромосомной нестабильностью, inv(9)(p13;q21) — единичный митоз с t(2;22) (p10;q11). Учитывая, что у пациента с клональными изменениями кариотипа МСК в ККМ обнаружен комплексный кариотип, можно предположить, что генетическая нестабильность стромы обусловлена множественными цитогенетическими аномалиями в кроветворных клетках. Численные аномалии кариотипа МСК не выявлены ни в одном случае.

Как упоминалось выше, в литературе есть публикации, согласно которым хромосомные аномалии в МСК у пациентов с МДС не определяются [19, 20]. По-видимому, причина заключается в использовании разных методов цитогенетического анализа, так как авторы с целью определения аномалий кариотипа МСК применяли только FISH-исследование с выявленными в ККМ цитогенети-ческими маркерами и не исследовали кариотип МСК, тогда как выявленные нами аномалии МСК определяются только при кариотипировании. Таким образом, в МСК у пациентов с МДС, действительно, не определяются характерные для ККМ цитогенетические аномалии, однако возможны отличные от них аберрации. В работах E. Flores-Figueroa и соавт. [22, 23] и Lu-Xi Song и соавт. [35] описаны аномалии кариотипа МСК более чем у 50% обследованных пациентов с МДС, в основном за счет некло-нальных потерь отдельных хромосом. Однако встречающиеся отдельные неполные митозы нами не учитывались, так как подобные ситуации могут встречаться вследствие технических особенностей обработки клеточного осадка. O. Blau и соавт. [25] описывают клональные структурные аномалии МСК у 16% пациентов с МДС и ОМЛ. Результаты нашего исследования сопоставимы с результатами O. Blau, однако мы не выявили аномалии кариотипа МСК у пациентов в стадии трансформации МДС в ОМЛ.

Заключение

Таким образом, несмотря на небольшое число проанализированных больных, на основании проведенного исследования можно сделать заключение, что в гемопоэ-тических и мезенхимальных клетках-предшественницах у пациентов с МДС определяются разные цитогенетиче-ские аномалии. В клетках CD34+, выделенных из КМ и периферической крови, выявлены те же аномалии, что и в общей популяции ККМ. У 11% пациентов с МДС выявлены аномалии кариотипа МСК, что указывает на генетическую нестабильность стромы при этом заболевании и подверженность возникновению хромосомных поломок. Различия хромосомных аномалий, определяемых в гемо-

поэтических и мезенхимальных клетках-предшественницах, подтверждают, что клетки стромального микроокружения в отличие от гемопоэтических предшественников

не являются частью патологического клона при МДС, однако, вероятно, играют важную роль в патогенезе развития заболевания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Swerdlowet St.H. WHO Classification of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues, 4th Ed. 2008: 88—107.

2. СавченкоВ.Г., ПаровичниковаЕ.Н., Михайлова Е.А. Миелоди-спластический синдром: некоторые вопросы патогенеза и лечения. Тер арх 1996; 7: 31—37.

3. HofmanW., Lubbert M. Myelodysplastic syndromes. Hematol J 2004; 5: 1—8.

4. Ольшанская Ю.В., Домрачева Е.В., Удовиченко А.И. Хромосомные перестройки при миелодиспластическом синдроме. Тер арх 2005; 7: 27—33.

5. Haase D. Cytogenetic features in myelodysplastic syndromes. Ann Hematol 2008; 87: 515—526.

6. Haase D., Feuring-Bruske M., Konemann S. Evidence for malignant transformation in acute myeloid leukemia at the level of early hematopoietic stem cells by cytogenetic analysis of CD34+ subpopulations. Blood 1995; 86: 2906—2912.

7. Braulke F., Schanz J., JungK. FISH analysis of circulating CD34+ cells as a new tool for genetic monitoring in MDS: verification of the method and application to 27 MDS patients. Leuk Res 2010; 34 (10): 1296—1301.

8. Nilson L., Astrand-Grundstrom I., Arvidsson I. Isolation and characterization of hematopoietic progenitor/stem cells in 5q-deleted myelodysplastic syndromes: evidence for involvement at the he-matopoietic stem cell level. Blood 2000; 96: 2012—2021.

9. Nilson L., Astrand-Grundstrom I., Arvidsson I. Involvement and functional impairment of the CD34+CD38-Thy+ hematopoietic stem cells pool in myelodysplastic syndromes with trisomy 8. Blood 2002; 100: 259—267.

10. Tehranchi R, Woll P.S., Andreson K. Persistent malignant stem cells in del(5q) myelodysplasia in remission. N Engl J Med 2010; 363 (11): 1025—1037.

11. Nimer S.D. MDS: A stem cell disorder — but what exactly is wrong with the primitive hematopoietic cells in this disease? ASH Education Book 2008; 1: 43—51.

12. Jaju R.J., Jones M., Boultwood J. Combined immunophenotyping and FISH identifies the involvement of B-cells in 5q-syndrome. Genes Chromosomes 2000; 29: 276—280.

13. Kiladjian J.J., Bourgeous E., Lobe I. Cytolytic function and survival of natural killer cells are severely altered in myelodysplastic syndromes. Leukemia 2006; 20: 463—470.

14. Чертков И.Л., Дризе Н.И. «Пластичность» костномозговых стволовых клеток. Тер арх 2004; 7: 5—11.

15. Jadersten M., Hellstrom-Lindberg E. Myelodysplastic syndromes: biology and treatment. J Intern Med 2009; 265 (3): 307—328.

16. Varga G., Kiss J., Varkonyj J. Inappropriate Notch activity and limited mesenchymal stem cell plasticity in the bone marrow of patients with myelodysplastic syndromes. Pathol Oncol Res 2007; 13: 311—319.

17. Marcondes A.M., Ramakrishman A., Deeg H.J. Myeloid malignancies and marrow microenvironment: some recent studies in patients with MDS. Curr Cancer 2009; 5 (4): 310—314.

18. Geyh S., Cadeddu P.R., Frobel J. Analysis of mesenchymal stromal cells and their interactions with CD34 stem and progenitor cells in patients with myelodysplastic syndromes. Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2011; 118: 2393.

19. Ramakrishman A., Awaya N., Bryant E. The stromal component of the marrow microenvironment is not derived from the malignant clone in MDS. Blood 2006; 108 (2): 772—773.

20. Soenen-Cornu V., Tourino C., Bonnet M.L. Mesenchymal cells generated from patients with myelodysplastic syndromes are devoid of chromosomal clonal markers and support short- and long-term hematopoiesis in vitro. Oncogene 2005; 24 (15): 2441—2448.

21. AlviS., Shaher A., Shetty V. Successful establishment of long-term bone marrow cultures in 103 patients with myelodysplastic syndromes. Leuk Res 2001; 25: 941—54.

22. Flores-Figueroa E., Arana-Trejo R.M., Gutierrez-Espindola G. Mes-enchymal stem cells in myelodysplastic syndromes: phenotypic and cytogenetic characterization. Lek Res 2005; 29: 215—224.

23. Flores-Figueroa E., Montesinos J.J., Flores-Guzman P. Functional analysis of myelodysplastic syndromes-derived mesenchymal stem cells. Leuk Res 2008: 32 (9): 1407—1416.

24. Blau O., Hofman W., Baldus C.D. Chromosomal aberrations in bone marrow mesenchymalstroma cells from patients with myelo-dysplastic syndrome and acute myeloblasticleukemia. Exp Hemat 2007; 35 (2): 221—229.

25. Blau O, Baldus C.D., Hofman W. Mesenchymal stromal cells of myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia patients have distinct genetic abnormalities compared with leukemic blasts. Blood 2011; 118 (20): 5583—5592.

26. Lopes-Villar O., Garcia J.L., Sanches-Guijo F.M. Both expanded and uncultured mesenchymal stem cells from MDS patients are genomically abnormal, showing a specific genetic profile for the5q- syndrome. Leuk 2008; 23: 664—672.

27. Raaijmakers M, Mukherjee S, Guo S. Bone progenitor dysfunction induces myelodysplasia and secondary leukemia. Nature 2010; 464: 852—857.

28. Seabright M. Rapid banding technique for human chromosomes. Lancet 1971; 2: 71—72.

29. ZhangZ, Guan L, ZhangK. Cytogenetic analysis of human bone marrow derived mesenchymal stem cells passaged in vitro. Cell Biol Int 2007; 6: 645—648.

30. Shaffer L.G., Tommerup N. (eds), Karger S. An International System for Human Cytogenetic Nomenclature. Basel 2005; 130.

31. GreenbergP.L., Tuechler H, Schanz J. Revised international prognostic scoring system for myelodysplastic syndromes. Blood 2012; 120 (12): 2454—2465.

32. Абрашкина Ю.С., Ольшанская Ю.В., Удовиченко А.И. Эффективность метода флюоресцентной in situ гибридизации (FISH) для выявления скрытых хромосомных перестроек при миелоди-спластических синдромах. Гематол и трансфузиол 2008; 2: 3—7.

33. Dieter D.S., Trullemans F., Jochmans K. Diagnostic potential of CD34+ cell antigen expression in myelodysplastic syndromes. Am J Clin Pathol 2012; 138: 732—743.

34. Marisavljevic D., Kraguljac-Kurtovic N. Biological implications of circulating CD34(+) cells in myelodysplastic syndromes. J Buon 2010; 15 (4): 753—757.

35. Lu-Xi Song, Juan Guo, Qi He. Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Myelodysplastic Syndromes: Cytogenetic Characterization. Acta Haematol 2012; 128: 170—177.

Поступила 21.03.2013

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.