CC BY
41106
Ветеринария
www.agroyug.ru
DOI 10.24411/9999-007А-2020-10039 УДК 619:579.62: 579.842.11: 579.833.1
Семина А.Н., кандидат ветеринарных наук, [email protected] Новикова О. Б., кандидат ветеринарных наук
Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН (ВНИВИП)
ЦИРКУЛЯЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕМ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ В ПТИЦЕВОДЧЕСКИХ ХОЗЯЙСТВАХ
Аннотация. Бактериальные заболевания респираторного характера в условиях интенсивного развития птицеводства являются экономической проблемой, так как приводят к существенным потерям продукции из-за выбраковки птицы. Для борьбы с данными заболеваниями необходимо учитывать эпизоотологическую ситуацию в каждом конкретном птицеводческом хозяйстве. Цель исследования данной работы изучить состав возбудителей бактериальных респираторных болезней в птицеводческих хозяйствах, используя различные методы диагностики.
Ключевые слова: птица, бактерии, респираторные инфекции, диагностика.
В условиях современного интенсивного развития птицеводства все чаще встает вопрос получения здорового и качественного сырья для населения. Технологический процесс выращивания птицы обусловлен плотностью посадки ее на небольших площадях, что в свою очередь может являться фактором, который способствует увеличению бактериальной флоры в производственных помещениях и, как следствие, проявляется это в быстром распространении инфекционных заболеваний среди поголовья птицы [1]. Бактериальным респираторным болезням в этом вопросе отводиться значительная роль, т.к. основная причина их возникновения является неблагоприятные условия содержания, а также технологический стресс, приводящий к ослаблению иммунной системы птицы [2].
В промышленном птицеводстве все чаще используются кроссы, основным качеством которых является быстрый темп роста и большой выход мясной продукции. Зачастую, использование данных кроссов требует особого подхода по их выращиванию в частности, применения качественного вентилируемого оборудования, т.к. потребность их в кислороде значительно выше. Не соблюдение необходимого воздухообмена в помещениях приводит к запыленности воздуха и повышению условно патогенной микрофлоры в нем, провоцируя тем самым развитие смешанных инфекций.
По наблюдениям многих исследователей развитие бактериальных респираторных болезней у птицы связано с присутствием в хозяйстве сразу нескольких возбудителей инфекционных заболеваний [3]. Такое
Annotation. Bacterial diseases of a respiratory nature in the conditions of intensive development of poultry farming are an economic problem, as they lead to significant losses of production due to poultry culling. To combat these diseases, it is necessary to take into account the epizootological situation in each particular poultry farm. The purpose of this study is to study the composition of pathogens of bacterial respiratory diseases in poultry farms using various diagnostic methods.
Key words: poultry, bacteria, respiratory infections, diagnostics.
течение болезни может повлиять на изменение вирулентных свойств возбудителей и характер заболевания принимает не типичное для него развитие, что в свою очередь приводит к затруднениям в постановке диагноза и планированию правильных про-тивоэпизоотологических мероприятий в хозяйстве.
Широкое распространение бактериальных респираторных болезней у птицы и их важная роль как этиологического агента делают актуальной задачу быстрого и достоверного обнаружения этих возбудителей.
Поэтому, мы использовали в данной работе метод выявления ДНК возбудителей, основанный на применении полимеразной цепной реакции (ПЦР) [4]. Полимеразная цепная реакция обладает рядом преимуществ по сравнению с традиционным бактериологическим методом выявления возбудителей бактериальных респираторных болезней, так как сочетает в себе быстроту и простоту исполнения, а также - потенциально высокую специфичность и чувствительность при выявлении патогенных микроорганизмов.
Материалы и методы. Работа выполнялась в 2020 г. в отделе диагностики и эпизоотологиче-ского анализа, а также в отделе микробиологии ВНИВИП. В соответствии с поставленными задачами в птицехозяйствах страны различного технологического направления проводился отбор клинического материала с целью дальнейшего исследования его на содержания в нем возбудителей бактериальных респираторных болезней. Материал для исследования отбирали у птицы с проявлениями
ЭФФЕКТИВНОЕ № 7 октябрь ЖИВОТНОВОДСТВО 2020
клинических признаков, павших, а также без проявления признаков на установление бактерионосительства. Материалом для прижизненной диагностики служил экссудат, выделяемый с верхних дыхательных путей, посмертно отбирали органы и ткани, имеющие патологические изменения. Учитывая тот факт, что в исследуемом материале может содержаться большое количество разнообразных микроорганизмов, необходимо было получить чистую культуру возбудителей. Выявление и дальнейшее изучение выделенных микроорганизмов из отобранных проб проводили, используя бактериологические методы. Посев исследуемого материала делался на различных питательных средах, выбор сред основывался на специфике выделяемых возбудителей. Для более детального изучения выделенных культур использовали различные биохимические тесты, а также проводили окраску мазков с целью изучения морфологических особенностей полученных микроорганизмов.
Также биологический материал исследовали методом полимеразной цепной реакции, для этого применялись специальные наборы для выделения нуклеиновых кислот, а также праймеры, разработанные в отделе диагностики и эпизоотологического анализа. Условия проведения амплификации были апробированы ранее в экспериментах с применением культуральных штаммов микроорганизмов и подтвердили свою достоверность многократными исследованиями.
Результаты исследования. С помощью бактериологического метода проведены исследования более 200 проб биологического материала от птицы различных технологических направлений. Нами были определены наиболее часто встречаемые возбудители бактериальных респираторных заболеваний таких как: пастереллёза, гемофилеза, колибактериоза и орнитобактериоза. Изучение характера роста микроорганизмов на питательных средах проводили с учетом данной выборки по возбудителям. Результаты, полученные после бактериологического исследования, показали, что наиболее часто выделяемой культурой среды возбудителей бактериальной этиологии, поражающих респираторный тракт, является культура Escherichia coli и Pasteurella multocida. При чем при выделении Escherichia coli чаще всего диагностировали сероварианты О2, О1, 078, процент их составил примерно одинаковое количество в пределах 8,2%. Pasteurella multocida выделялась из материала как от павшей птицы, так и птицы не имеющих клинических проявлений заболеваний и составила в среднем 7,4%. Возбудителей Ornithobacterium rhinotracheale и Haemophilus gallinarum выделяли в 2,4% случаев. Чаще отмечалось ассоциативное выделение микроорганизмов, причем комбинации таких моноинфекций были различными и в процентном соотношении занимали примерно одинаковую позицию: Escherichia coli + Ornithobacterium rhinotracheale (10,5%), Escherichia coli + Haemophilus gallinarum (10,2%), Escherichia coli + Ornithobacterium rhinotracheale + Pasteurella multocida (9,8%). Отмечено так же, что от цыплят бройлерного направления чаще выделяются смешанные культуры Escherichia coli + Ornithobacterium rhinotracheale, а у кур-несущек это зачастую были Escherichia coli + Ornithobacterium rhinotracheale + Pasteurella multocida.
Биологический материал, параллельно с бактериологическими исследованиями, был изучен с помощью ПЦР. Для этого использовали видоспец-ифические праймеры на каждого выделенного возбудителя. Полимеразной цепной реакцией удалось выявить в исследуемом материале Escherichia coli, Ornithobacterium rhinotracheale, Pasteurella multocida,
Рис. 1. Результат электрофореза продуктов
амплификации фрагментов генома Pasteurella
multocida исследуемом материале.
1, 2, 3, 4, 5, 7 - положительные пробы из
патологического материала.
6 - положительная проба от клинически здоровой
птицы.
К+ - положительный контроль выделения М - маркер молекулярной массы.
Haemophilus gallinarum. Pasteurella multocida выделялась у клинически здоровой птицы, в биологическом материале от павшей птицы данный микроорганизм выделялся в ассоциации с другими возбудителями (рис.1).
Заключение. Проведенные исследования по выявлению возбудителей бактериальных респираторных заболеваний из биологического материала от птицы показали, что наиболее часто выделяемыми являются такие виды как: Escherichia coli, Ornithobacterium rhinotracheale, Pasteurella multocida, Haemophilus gallinarum. Выделение данных возбудителей в ассоциациях указывает на характер течения заболеваний в виде моноинфекций, что необходимо учитывать при планировании оздоровительных мероприятий в птицеводческих хозяйствах в каждом конкретном случае. Обнаружение Pasteurella multocida у клинически здоровой птицы, также является отягощающим фактором и может в дальнейшем сказаться на развитии благополучия птичника. Поэтому с целью выявления таких скрытых носителей, а также обнаружения больной птицы, необходимы методы быстрой и достоверной диагностики данных возбудителей. Одним из таких методов может являться ПЦР диагностика. Наши исследования показали, что пЦр метод, наряду с общепринятыми бактериологическими методами, обладает высокой специфичностью и позволяет обнаружить возбудителей в исследуемом материале в короткие сроки.
Статья написана по госзаданию 0599-2019-0025
ЛИТЕРАТУРА
1. Новикова О.Б. Микрофлора, выделяемая в птицехо-зяйствах различного технологического направления и контроль бактериальных болезней птиц / Новикова О.Б., Павлова М.А. // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2018. - № 3. - С. 34-36.
2. Новикова О.Б. Респираторный синдром бактериальной этиологии / Новикова О.Б., Павлова М.А. // Животноводство России. - 2019. - № 6. - С. 9-11.
3. Новикова А.Ф. Изучение орнитобактериоза птиц в экспериментальных условиях / Новикова А.Ф., Новикова О.Б., Павлова М.А., Семина А.Н., Титова Т.Г. // Эффективное животноводство. - 2019. - № 4 (152). - С. 70.
4. Семина А.Н. Идентификация Pasteurella тиКо^а методом полимеразно цепной реакции / Семина А.Н. // Международный вестник ветеринарии. - 2020. -№ 3. - С. 14-18.
