CC BY
74
Лечение и профилактика
УДК 619:615.284
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРЕПАРАТА «КОКЦИДОН СУСПЕНЗИЯ 5 %»
ПРИ КОКЦИДИОЗЕ СВИНЕЙ
Д.С. ПОСЕЛОВ аспирант М.В. АРИСОВ
научный руководитель - доктор ветеринарных наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28, e-mail: vigis@ncport. ru
Изучены параметры острой токсичности препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при введении внутрь: ЛД50 для мышей составила 23750±938,7 мг/кг, для крыс - 28541,7±1666,1 мг/кг. Препарат относится к 4 классу малоопасных веществ. Суммарная доза препарата «Кокцидон суспензия 5 %», при которой наблюдали начало эффекта, во много раз превысила значение однократной ЛД50. Коэффициент кумуляции значительно больше 1, что указывает на отсутствие кумулятивных свойств. Эффективность препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при кокцидиозе свиней составила 100 %. При введении препарата и в течение 30 сут не отмечали каких-либо побочных явлений и осложнений.
Ключевые слова: кокцидон, токсичность, кумулятивные свойства, крысы, мыши, кокцидиоз, свиньи, эффективность.
Кокцидиоз в свиноводстве - актуальная проблема, признанная в большинстве стран мира (государства Европы, Канада, США, Мексика, Бразилия, Китай, Австралия). В этих странах неблагополучными по кокцидиозу объявлены до 85 % свиноводческих хозяйств, при этом заболеваемость составляет от 33 до 36 %. Заболевание вызывает микроорганизм, относящийся к типу Protozoa, классу Sporozoa, отряду Coccidiia, семейству Eimeriidae, подсемейству Eimeriinae, роду Eimeria. Поросята особенно восприимчивы к кокцидиозу в период с 1-14-суточного до 2-3-месячного возраста. В дальнейшем вероятность заражения снижается многократно. Экономические потери свиноводов от кокцидиоза складываются: из ухудшения усвояемости молозива в первые дни жизни; смертности; наслоения вторичной инфекции и как следствие дополнительных затрат на ветеринарное вмешательство; увеличения затрат корма на 1 кг прироста. Сумма совокупного ущерба от кокцидиоза в свиноводстве в денежном выражении эквивалентна недополучению 10-30 % прироста и гибели до 100 % молодняка.
Одним из важнейших мероприятий в комплексе мер, обеспечивающих предупреждение и ликвидацию заболеваний животных кокцидиозом, в настоящее время по-прежнему является фармакотерапия и профилактика, способствующие не только освобождению животных от паразитов, но и
92
предотвращению рассеивания инвазионного начала в окружающей среде и предупреждению угрозы нового заражения.
Для лечения эймериоза предложено значительное число препаратов -кокцидиостатиков. Сегодня антиэймериозные средства - это антибиотики, алкалоиды, выделенные из растений, производные различных химических групп и т. д., используемые для угнетения жизнедеятельности или уничтожения эндогенных стадий эймерий. Однако, необходимо иметь в виду, что многие кокцидиостатики вызывают привыкание к себе эймерий и через некоторое время они становятся неэффективными. Систематическое применение одних и тех же кокцидиостатиков в течение продолжительного периода времени, способствует формированию генерации паразитов, устойчивых к данным химиотерапевтическим средствам [1, 3, 7, 9, 11, 12].
Исходя из вышеизложенного, возникает необходимость в проведении дополнительных исследований по изысканию, скринингу и широкому внедрению новых химических препаратов, сравнительно дешевых, доступных и обладающих, помимо этого, широким спектром противококцидийного действия. Бесспорно, что реализация указанного научного направления является весьма актуальной задачей для ветеринарной науки и практики.
На базе ВИГИС составлена рецептура и приготовлена лекарственная форма для химиотерапии и профилактики кокцидиозов сельскохозяйственных животных «Кокцидон суспензия 5 %» на основе современного активного компонента - толтразурила. Планируемая стоимость данного препарата значительно ниже существующих аналогов.
Первоначально нами изучены острая токсичность и кумулятивные свойства препарата и эффективность при кокцидиозе свиней в сравнительном аспекте с аналогичным препаратом «Байкокс 5 % суспензия».
Материалы и методы
Расчет параметров острой токсичности препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при пероральном введении проводили в соответствии с методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ [10], используя метод Кербера в модификации Прозоровского [5, 6].
В опытах при введении в желудок использовали белых мышей (7 групп по 6 голов массой 20-22 г) и белых крыс (6 групп по 6 голов массой 190-200 г). Препарат вводили с помощью иглы с булавовидным утолщением в желудок натощак мышам в дозах: первой группе - 0,3 мл (300 мг/гол. или 15000 мг/кг); второй - 0,35 мл (350 мг/гол. или 17500 мг/кг); третьей - 0,4 мл (400 мг/гол. или 20000 мг/кг); четвертой - 0,45 мл (450 мг/гол. или 22500 мг/кг); пятой - 0,5 мл (500 мг/гол. или 25000 мг/кг); шестой - 0,55 мл (550 мг/гол. или 27500 мг/кг). Седьмая группа мышей служила контролем и препарат не получала.
Препарат вводили крысам в дозах: первой группе - 3,5 мл (3500 мг/гол. или 17500 мг/кг); второй - 4,0 мл (4000 мг/гол. или 20000 мг/кг); третьей - 5,0 мл (5000 мг/гол. или 25000 мг/кг); четвертой - 6,0 мл (6000 мг/гол. или 30000 мг/кг); пятой - 7,0 мл (7000 мг/гол. или 35000 мг/кг); шестая группа служила контролем и препарат не получала. Дозы 6,0 и 7,0 мл вводили в два этапа с интервалом 3 ч.
Опытные и контрольные животные содержались в одинаковых условиях, получали одинаковый рацион.
Кормление животных осуществляли через 2 ч после введения препарата. За животными вели наблюдения в течение 6 сут. Учитывали характер токсического действия: поведение, двигательную активность, состояние шерстного покрова, нарушение физиологических функций.
Кумулятивность препарата «Кокцидон суспензия 5 %» определяли по методу Лима с соавт. [13], которые предложили тест субхронической токсич-
93
ности. Опыт провели на белых мышах массой 20-23 г. Препарат вводили животным ежедневно, индивидуально, при помощи металлического зонда, алиментарным путем в виде суспензии. В течение первых четырех суток животные опытной группы получали препарат в дозе, равной 0,1 от ранее установленной однократной ЛД50. Через каждые четыре дня, на пятый дозу увеличивали в 1,5 раза. В течение 28 сут за всеми животными вели наблюдения, отмечая их смертность. Оценку результатов исследования проводили по отношению средних эффективных доз острого и подострого экспериментов по формуле: Ккит = ЛД50(подостр)/ЛД50(остр), откуда следует. При коэффициенте кумуляции меньше 1, испытуемый препарат обладает кумулятивными свойствами, больше 1 - отмечается повышенная устойчивость к препарату (слабо выраженная кумуляция) [2].
Определение терапевтической эффективности препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при кокцидиозе свиней проводили в условиях ООО «СПХ Смолмясо» СК «Катынь» Смоленской области и племзавода им. Ленина Ко-вернинского района Нижегородской области.
В ООО «СПХ Смолмясо» опыт по определению эффективности препарата проводили с июля по сентябрь 2013 г. По результатам копроскопических исследований подобрано 60 поросят 1-4-месячного возраста (доращивание), которых разделили на три группы (зараженные) по 20 голов: первой группе назначали препарат «Кокцидон суспензия 5 %», второй - препарат «Байкокс 5 % суспензия»; третья группа - контрольные животные.
В племзаводе им. Ленина опыт проводили с августа по сентябрь 2013 г. По результатам копроскопических исследований подобрано 60 поросят 2-4месячного возраста, которых разделили на три группы (зараженные) по 20 голов: первой группе назначали препарат «Кокцидон суспензия 5 %», второй - препарат «Байкокс 5 % суспензия»; третья группа - контрольные животные.
Препараты применяли перорально, однократно, индивидуально в дозе 0,4 мл суспензии на 1 кг массы, но не менее 0,5 мл и не более 2 мл на животное. В течение всего опытного периода за животными вели наблюдения.
Эффективность препаратов учитывали по результатам лабораторных исследований (копроскопических) животных подопытных и контрольных групп до и через 10, 20, 30 сут после обработки. Расчет эффективности препаратов осуществляли по типу «контрольный тест».
Результаты исследований подвергали статистическому анализу по методике Стьюдента-Фишера (Плохинский, 1978) с использованием методов современной прогностики.
Результаты и обсуждение
Острая токсичность препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при пероральном введении. В первые сутки после введения препаратов гибель животных отмечали при больших дозах (мыши 25000-27500, крысы 30000-35000 мг/кг), малые дозы не вызывали гибели животных. Однократное введение препарата «Кокцидон суспензия 5 %» в больших дозах вызывало как у мышей, так и у крыс общее угнетение, учащенное дыхание, взъерошенность, зуд; животные зарывались в подстилку и через 7-12 ч отмечали их гибель. В последующие двое суток гибель отмечали от доз: мыши 20000-25000, крысы 20000-30000 мг/кг. Максимальная переносимая доза, при которой не отмечали гибели животных, составила 17500 мг/кг для обоих видов животных. При введении препарата в дозе 20000 мг/кг отмечено начало гибели животных. Абсолютно смертельная доза для белых мышей - 27500, для крыс - 35000 мг/кг (табл. 1, 2). При вскрытии павших животных выявлены патологоанатомические изменения, характерные при остром отравлении: брыжеечные сосуды кровенаполнены, увеличена печень и селезенка, слизистая оболочка желудка и кишечника утолщена, с кровоизлияниями.
Животные контрольных групп были живы и клинически здоровы.
94
1. Параметры острого токсического действия препарата «Кокцидон суспензия
Показа- тель Дозы, мг/кг
15000 17500 20000 22500 25000 27500
Погибло 0/6 0/6 1/6 1/6 4/6 6/6
Z d Zd 0 0,5 1 2,5 5
2500 2500 2500 2500 2500
0 1250 2500 6250 12500
2. Параметры острого токсического действия препарата «Кокцидон суспензия __________________5 %» для крыс при введении в желудок_________________
Показател Дозы , мг/кг
ь 17500 20000 25000 30000 35000
Погибло 0/6 1/6 1/6 3/6 6/6
Z 0,5 2 4,5
d 2500 5000 5000 5000
Zd 1250 5000 10000 22500
Примечание. Z - среднее арифметическое из числа животных, у которых отмечен учитываемый эффект под влиянием двух смежных доз; d - интервал между двумя смежными дозами.
Расчет параметров токсичности по таблице 1 (мыши):
ЛД50= ЛД100 - Е Zd : n = 27500 - 22500 : 6 = 23750 мг/кг.
Расчет параметров токсичности по таблице 2 (крысы):
ЛД50= ЛД100 - Е Zd : n = 35000 - 38750 : 6 = 28541,7 мг/кг.
Следует отметить, что после трех суток падежа мышей не отмечено, но общее состояние у некоторых мышей оставалось неудовлетворительным в течение 6 сут. В дальнейшем клиническое состояние нормализовалось.
Таким образом, ЛД50 препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при введении внутрь для мышей с учетом стандартной ошибки составила 23750±938,7, для крыс - 28541,7± 1666,1 мг/кг, что дает основание отнести данный препарат к 4 классу токсичности - малоопасные вещества по ГОСТ 12.1.007-76 [4].
Изучение кумулятивных свойств препарата «Кокцидон суспензия 5 %». Первоначальная доза препарата составила 0,1 от ранее установленной однократной ЛД50 - 23750 мг/кг или 0,475 мл/гол. Для удобства введения препарата внутрь мышам и последующих расчетов значение первоначальной дозы округлили до 0,05 мл/гол. (2500 мг/кг).
При введении препарата и в последующее время не отмечено каких-либо отклонений в поведении мышей и общем состоянии. Начиная с 24-х суток введения препарата, у пяти животных фиксировали учащенное дыхание, у одной мыши - угнетение. При вскрытии павших животных отмечали кровоизлияния в желудочно-кишечном тракте, дистрофические изменения печени и почек, переполнение мочевого пузыря (табл. 3).
3. Изучение кумулятивных свойств препарата «Кокцидон суспензия 5 %»
Период введения, сут Ежедневно вводимая доза, мл/гол. Ежедневно вводимая доза, мг/кг Суммарная доза, мг/кг Погибло, гол. Процент гибели
1-4 0,05 2500 10000 0 0
5-8 0,075 3750 15000 0 0
9-12 0,11 5500 22000 0 0
13-16 0,165 8250 33000 0 0
17-20 0,25 12500 50000 0 0
21-24 0,4 20000 80000 1 3,3
25-28 0,6 30000 120000 3 10
95
100 %-ной гибели мышей в данном эксперименте не достигнуто. В связи с этим расчет суммарной ЛД50 не представляется возможным и необходимым, так как суммарная доза препарата «Кокцидон суспензия 5 %», при которой наблюдали начало эффекта, во много раз превысила значение однократной ЛД50. Поэтому коэффициент кумуляции значительно больше 1, и это говорит об отсутствии кумулятивных свойств исследуемого препарата.
Определение терапевтической эффективности препарата «Кокцидон суспензия 5 %» при кокцидиозе свиней. В ООО «СПХ Смолмясо» через 10 сут после назначения препаратов в первой группе ооцисты эймерий обнаружены у шести, во второй группе - у пяти поросят. В контрольной группе ооцисты эймерий зарегистрированы у всех животных.
Через 10 сут в племзаводе им. Ленина после назначения препаратов в первой группе ооцисты эймерий обнаружены у восьми, во второй группе - у девяти поросят. В контрольной группе ооцисты эймерий отмечены у всех животных.
Через 20 и 30 сут в обоих хозяйствах в первой и второй группах ооцист эймерий не находили. У 100% животных контрольной группы обнаружили ооцисты эймерий (табл. 4, 5).
При введении препаратов и в течение 30 сут не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.
4. Терапевтическая эффективность препаратов «Кокцидон суспензия 5 %» и «Байкокс 5 % суспензия» при кокцидиозе свиней в ООО «СПХ Смолмясо»
Смоленской области
Препарат Число животных, гол. Число животных, у которых обнаружены ооцисты эймерий в дни исследований ЭЭ, %
10 20 30
«Кокцидон суспензия 5 %» 20 6 0 0 100
«Байкокс 5 % суспензия» 20 5 0 0 100
Контроль 20 20 20 20 -
Таблица 5.
Терапевтическая эффективность препаратов “Кокцидон суспензия 5%” и «Байкокс 5% суспензия» при кокцидиозе свиней _____________в племзаводеим. Ленина Нижегородской области ____________
Препарат Число животных, гол. Число животных, у которых обнаружены ооцисты эймерий в дни исследований ЭЭ, %
10 20 30
«Кокцидон суспензия 5 %» 20 8 0 0 100
«Байкокс 5 % суспензия» 20 9 0 0 100
Контроль 20 20 20 20 -
Литература
1. Altuhov N.M., Afanas'ev V.I., Bashkirov B.A. i dr. Spravochnik vete-rinamogo vracha. - M.: Kolos, 1996.
2. Belen'kijM.L. Jelementy kolichestvennoj ocenki farmakologicheskogo jef-fekta. - L.: Gosmedizdat, 1963. -151 s.
3. Vershinin 1.1. Kokcidiozy zhivotnyh i ih differencial'naja diagnostika. -Ekaterinburg, 1996.
96
4. Gost 12.1.007-76. Sistema standartov bezopasnosti truda: vrednye vesh-hestva: klassifikacija i obshhie trebovanija bezopasnosti. - M., 1984.
5. Zhulenko V.N., Rabinovich M.I., Talanov G.A. Veterinarnaja toksikolo-gija. - M.: Kolos, 2001. - 384 s.
6. Klinicheskaja laboratornaja diagnostika v veterinarii. - M., 1985. - S. 134136.
7. Kolabskij N.A., Pashkin P.I. Kokcidiozy sel'skohozjajstvennyh zhivotnyh. - JM.: Kolos, 1974. - 159 s.
8. Kost E.A. Spravochnik po klinicheskim laboratornym metodam is-sledovanija. - M., 1975.
9. Metodicheskie rekomendacii po bor'be s jejmeriozami i izosporozami zhivotnyh. - M., 1994. - 30 s.
10. Metodicheskie rekomendacii po izucheniju obshhetoksicheskogo dejstvija farmakologicheskih sredstv, utverzhdennye Minzdravom RF 29 dekabrja 1997 g. // Vedomosti Farmakop. Komiteta. - 1998. - № 1. - S. 27-32.
11. Nikitin I.I., Voskobojnik V.F., Vasilevskij N.M. i dr. Organizacija i jekonomika veterinarnogo dela. - M., 1998.
12. Parazitologija i invazionnye bolezni sel'skohozjajstvennyh zhivotnyh / Pod red. K.I. Abuladze. - M.: Agropromizdat, 1990.
13. Lim R.K., Rink K.G., Glass H.G. // Arch. Intern. Pharmacodyn. - 1961. -V. 130, № 3-4. - P. 336-353.
Toxicological and therapeutic assessment of «Coctsidon suspension 5 %»
at coccidiosis in pigs
D.S. Poselov рostgraduate M.V. Arisov scientific advisor
All-Russian Scientific Research Institute of Helminthology named after K.I. Skryabin, 117218, Moscow, B. Cheremushkinskaya, 28, tel./fax 8-499-124-56-55, e-mail:visis@,ncport.ru
Parameters of acute toxicity of «Coctsidon Suspension 5 %» are studied at injection: LD50 for mice made 23750±938,7 mg/kg, for rats - 28541,7±1666,1 mg/kg that gives the reason to assign this medicine to the 4th class of toxicity - low-dangerous drugs. Total dose of «Coctsidon Suspension 5 %» applied in the beginning of effect exceeded many times over the value of single dose LD50. In this connection, the cumulatively coefficient is much more than 1 that pointed at the lack of cumulative properties of a medicine. Efficiency of «Coctsidon Suspension 5 %» by coccidiosis in pigs made 100 %. At injection of medicine and within the next 30 days side-effects and complications are not detected.
Keywords: medicine, coctsidon, toxicity, cumulativity, rats, mice, coccidiosis, pigs, efficiency.
97
