CC BY
0
© Коллектив авторов, 2024
Кречетов С.П.1, Хорошкеева О.В.1, Тетруашвили Н.К.1, Кречетова Л.В.1, Янкевич Т.Э.2, Трофимов Д.Ю.1, Сухих Г. Т.1
Связь исходов беременности при иммуноцитотерапии привычного выкидыша с генотипами иммуноглобулиноподобных рецепторов клеток-киллеров и их лигандов у матери и плода
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства, 115522, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. В течение долгого времени объяснение причин повторяющегося прерывания беременности на ранних сроках гестации (привычного выкидыша, ПВ) связывали с особенностями гистосовместимости родителей по системе HLA и в основе исследований лежал анализ аллельных вариантов генов HLA. В настоящее время сложилось мнение о необходимости проведения исследований иммунологических причин ПВ, не ограничиваясь только системой HLA.
Цель - оценить возможное влияние генетических особенностей иммуноглобулиноподобных рецепторов клеток-киллеров (KIR) НК-клеток и молекул HLA класса I (HLA-I), являющихся их лигандами (KIR-L), на исходы беременности, наступившей на фоне лечения ПВ с использованием иммуноцитотерапии (ИЦТ).
Материал и методы. В исследование включили 67 пациенток с диагнозом ПВ. Пациентки в результате простой рандомизации были разделены на 2 группы: группа пациенток (n = 39), стандартное лечение которым дополнили ИЦТ, и группа пациенток (n = 28), которым не проводили ИЦТ. ИЦТ проводили дважды вне беременности и дважды во время беременности. Для типирования генов KIR и генов HLA-I использовали периферическую кровь матери, пуповинную кровь новорожденного, ткань хориона абортуса. Типирование проводили методом высокопроизводительного секвенирования NGS.
Результаты. Не выявлено различий в частотах встречаемости генотипов KIR и представленности KIR-L у матерей с различными исходами беременности при лечении ПВ без и с использованием ИЦТ. Однако при обоих способах лечения невыношенные беременности отличались от беременностей, завершившихся рождением ребенка, отсутствием у всех плодов KIR-L с эпитопом A3. Кроме того, при лечении с применением ИЦТ плоды в случае невыношенных беременностей чаще являлись носителями KIR-L с эпи-топом Bw4-80I на молекуле HLA-B.
Заключение. Отсутствие у плода эпитопа HLA-A3, а также наличие эпитопа HLA-Bw4-80I может рассматриваться как предпосылка ПВ и низкой эффективности его лечения.
Ключевые слова: генотипирование; иммуноглобулиноподобные рецепторы клеток-киллеров; иммуноцито-терапия; привычный выкидыш; HLA; НК-клетки
Статья получена 13.09.2024. Принята в печать 14.11.2024.
Для цитирования: Кречетов С.П., Хорошкеева О.В., Тетруашвили Н.К., Кречетова Л.В., Янкевич Т.Э., Трофимов Д.Ю., Сухих Г.Т. Связь исходов беременности при иммуноцитотерапии привычного выкидыша с генотипами иммуноглобулиноподобных рецепторов клеток-киллеров и их лигандов у матери и плода. Иммунология. 2024; 45 (6): 742-754. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-6-742-754
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Тетруашвили Н.К., Трофимов Д.Ю.; клиническое обследование пациентов, получение биообразцов - Хорошкеева О.В.; KIR- и HLA-типирование биологических образцов - Янкевич Т.Э.; анализ клинических данных - Кречетова Л.В., Хорошкеева О.В.; статистическая обработка и анализ лабораторных данных, подготовка иллюстраций - Кречетов С.П., написание текста - Кречетов С.П., Кречетова Л.В., Хорошкеева О.В., Янкевич Т.Э.; утверждение окончательного варианта статьи и ответственность за целостность всех частей статьи - Сухих Г.Т., Трофимов Д.Ю. Все авторы участвовали в редактировании статьи.
Для корреспонденции
Кречетов Сергей Петрович -кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клинической иммунологии ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0003-2861-6010
Krechetov S.P.1, Khoroshkeeva O.V.1, Tetruashvili N.K.1, Krechetova L.V.1, Yankevic T.Е.2, Trofimov D.Yu.1, Sukhikh G.T.1
Association of pregnancy outcomes after immunocytotherapy of recurrent pregnancy loss with genotypes of killer cell immunoglobulin-like receptors and their ligands in mother and fetus
1 National Medical Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology named after Academician V.I. Kulakov, Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
2 National Research Center Institute of Immunology of the Federal Medical-Biological Agency, 115522, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. For a long time, the causes of early recurrent pregnancy loss (RPL) were associated with the characteristics of the parents' histocompatibility according to the HLA system, and the studies were aimed at analyzing the allelic characteristics of the HLA genes. At present, there is an opinion that it is insufficient to limit the studies of the immunological causes of RPL only to the HLA system.
Aim - to estimate the possible influence of the genetics of killer cell immunoglobulin-like receptors (KIR) of NK cells and HLA class I molecules (HLA-I), which are their ligands (KIR-L), on the outcomes of pregnancy that occurred during treatment of RPL using immunocytotherapy (ICT).
Material and methods. The study included 67 patients diagnosed with RPL. The patients were divided into two groups by simple randomization: a group of patients (n = 39) whose standard treatment was supplemented with ICT, and a group of patients (n = 28) who did not undergo ICT. ICT was performed twice outside pregnancy and twice during pregnancy. Maternal peripheral blood, newborn cord blood, and abortive chorionic tissue were used for typing of KIR genes and HLA-I genes. Typing was performed using high-throughput NGS sequencing.
Results. No differences in the frequencies of KIR genotypes and KIR-L representation were found in mothers with different pregnancy outcomes when treated RPL without and with ICT. However, after both treatment methods, miscarriages differed from pregnancies that resulted in the birth of a child by the absence of KIR-L with the A3 epitope in all fetuses. In addition, when treated with ICT, fetuses in miscarriages were more often carriers of KIR-L with the Bw4-80I epitope on the HLA-B molecule.
Conclusion. The absence of the HLA-A3 epitope in the fetus, as well as the presence of the HLA-Bw4-80I epitope, can be considered a prerequisite for RPL and the low effectiveness of its treatment.
Keywords: genotyping; killer cell immunoglobulin-like receptor; immunocytotherapy; recurrent pregnancy loss; HLA; NK cells
Received 13.09.2024. Accepted 14.11.2024.
For citation: Krechetov S.P., Khoroshkeeva O.V., Tetruashvili N.K., Krechetova L.V., Yankevic ТЕ., Trofimov D.Yu., Sukhikh G.T. Association of pregnancy outcomes after immunocytotherapy of recurrent pregnancy loss with genotypes of killer cell immunoglobulin-like receptors and their ligands in mother and fetus. Immunologiya. 2024; 45 (6): 742-54. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-6-742-754 (in Russian)
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Concept and design - Tetruashvili N.K., Trofimov D.Yu.; clinical study of patients, obtaining of biosamples - Khoroshkeeva O.V.; KIR and HLA typing of biological samples - Yankevic ТЕ.; analysis of clinical data - Krechetova L.V., Khoroshkeeva O.V.; statistical evaluationи and analysis of laboratory data, illustration design -Krechetov S.P.; writing the text - Krechetov S.P., Krechetova L.V., Khoroshkeeva O.V., Yankevic ТЕ.; finalizing and integrity management - Sukhikh G.T., Trofimov D.Yu. All authors contributed to the editing of the article.
For correspondence
Sergey P. Krechetov -PhD, Leader Researcher of the Clinical Immunology Lab., V.I. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0003-2861-6010
Введение
В течение продолжительного времени объяснение причин повторяющегося самопроизвольного прерывания беременности (привычного выкидыша, ПВ) на ранних сроках гестации связывали с особенностями системы молекул главного комплекса гистосовместимости (у человека HLA) родителей [1]. Считалось, что причина ПВ заключается в недостаточной реакции иммунной системы матери при совпадении аллелей HLA у родителей в силу слабости сигнала чужеродности от плода, который не обеспечивает достаточную стимуляцию формирования плаценты [2]. Однако в настоящее время накапливаются сведения о недостаточности ограничения иммунологических причин ПВ только системой HLA [3].
В рамках адаптивного иммунитета молекулы HLA действуют во взаимодействии с Т-клеточным звеном и предназначены для выявления клеток с синтезом белков, не соответствующих геному организма [4]. Контроль появления в организме клеток, которые невозможно проверить на наличие признаков чужого с помощью молекул HLA-I при их отсутствии, осуществляют НК-клетки, относящиеся к системе врожденного иммунитета и составляющие до 70 % лимфоидных клеток в плаценте в I триместре беременности [5]. Наиболее значимыми для активации НК-клетки при образовании иммунологического синапса с клеткой-мишенью с измененной экспрессией HLA-I являются иммуноглобулиноподобные рецепторы кил-лерных клеток (killer-cell immunoglobulin-like receptor, KIR), лигандами (KIR-ligand, KIR-L) для которых являются как классические молекулы HLA-I (HLA-A/B/C), так и неклассические (HLA-G/F) [6]. KIR регулируют функции НК-клеток антиген-независимо и представлены ингибирующими и активирующими рецепторами. Способность НК-клеток активироваться клетками-мишенями с угнетенной экспрессией HLA-I получила название «распознавания потери своего» (missing self recognition) [7].
Как и гены HLA, гены KIR характеризуются выраженным аллельным полиморфизмом, однако, в отличие от HLA , в гаплотипах KIR необязательно представлены все обнаруженные гены этой группы, что является основой разделения гаплотипов KIR на группы А и В [8]. В геноме человека гены KIR и HLA расположены в разных хромосомах, 19 и 6 соответственно, что предполагает отсутствие сцепленного наследования генов этих семейств и большое разнообразие сочетаний KIR и KIR-L у индивидуумов. По современным представлениям, совместимость наборов KIR и KIR-L в организме является не просто следствием сохранения в ходе эволюции только функционально уравновешенных наборов генов KIR и HLA-I. Состояние, необходимое для контроля «потери своего» НК-клетками в отношении собственных клеток-мишеней на основе приобретенных организмом наборов KIR и KIR-L, возникает в результате настройки («обучения») НК-клеток [9]. Определяющую роль в настройке, как и в цитолитическом ответе НК-клеток
на клетки-мишени с «потерей своего», играет взаимодействие ингибирующих КГЯ (ЖЖ) с их лигандами (ЖЖ-Ь) [10]. Двойственность управления и настройки предполагает возможность наличия в плаценте популяций децидуальных НК-клеток (дНК) с разнонаправленным цитолитическим действием. С одной стороны, популяция дНК, настроенная материнскими дециду-альными клетками, ограничивает избыточную инвазию трофобластов, а с другой - популяция дНК, настроенная трофобластами, в первую очередь вневорсинчатыми трофобластами (ВВТ), устраняя часть материнских клеток, разрушает структуру эндометрия и обеспечивает его обновление с учетом постоянно меняющихся потребностей растущего плода [11].
Одной из лечебных процедур, увеличивающих вероятность вынашивания беременности пациентками с ПВ, является их иммунизация лейкоцитами супруга (иммуно-цитотерапия, ИЦТ). Применение ИЦТ в случаях с идио-патическим ПВ сопровождается значимым увеличением количества живорождений [12]. Лечебный эффект ИЦТ связывают с влиянием на разные звенья материнской иммунной системы присутствия клеток с признаками чужеродности отцовского происхождения [13]. Нельзя исключить, что особые сочетания КГЯ у матери и КГЯ-Ь у матери и плода могут оказывать положительное и отрицательное влияние на исходы лечения ПВ, в том числе с использованием ИЦТ. Экспериментально сведения о КЖ и КГЯ-Ь, имеющихся у матери и плода, могут быть получены на основе типирования генов К1Я и ИЬЛ. Поэтому с целью изучения участия НК-клеток в аллоиммунном взаимодействии «мать-плод» нами было проведено типирование по генам классических ИЬЛ-1 и генам К1Я пациенток с диагнозом идиопатичес-кого ПВ и их плодов при беременности, наступившей при лечении без ИЦТ и с проведением ИЦТ.
Материал и методы
Пациенты. В исследование включили 67 пациенток с диагнозом ПВ [14], наблюдавшихся в ФГБУ «НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России в 2009-2017 гг. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России как соответствующее действующим требованиям руководящих документов РФ и Всемирной медицинской ассоциации (ЛЭК ФГБУ НМИЦ АГП, решение № 35 от 09.04.2009).
В исследование включали женщин в супружеских парах с ПВ, от 20 до 45 лет, с двумя и более самопроизвольными прерываниями беременности от одного и того же партнера, нормальным кариотипом супругов, морфологически нормальным плодом при ультразвуковом исследовании (УЗИ), подписанным информированным согласием супругов на проведение исследования.
Критерии исключения из исследования: наличие патологического кариотипа/особенностей кариотипа родителей; анатомические причины ПВ; аномалии развития и/или врожденные пороки у плода при УЗИ; наличие хронических инфекционных, онкологичес-
ких, системных аутоиммунных заболеваний у матерей; резус-сенсибилизация при беременности; ожирение у матери (индекс массы тела, ИМТ > 30 кг/м2). Также из исследования исключали пациентов при отсутствии возможности продолжить проведение всех мероприятий, запланированных в данном исследовании, добровольном желании пациента прекратить участие в исследовании, нарушении пациентом требований протокола исследования.
Лечение. Пациентки с ПВ получали стандартное лечение в условиях стационара в соответствии с алгоритмом, разработанным и принятым в отделении профилактики и терапии невынашивания беременности, клиническим рекомендациям «Привычный выкидыш» [15]. Пациентки в результате простой рандомизации были разделены на 2 группы: группа пациенток, стандартное лечение которым дополнили ИЦТ (n = 39), и группа пациенток, которым не проводили ИЦТ (n = 28).
Процедуру ИЦТ проводили лимфоцитами супругов в предгестационной подготовке и в I триместре наступившей беременности. Для проведения процедуры использовали лимфоциты супруга (полового партнера) в соответствии с критериями донорства [16]. Лимфоциты выделяли и готовили для процедуры, как было описано ранее [17]. Для процедуры ИЦТ использовали 1 мл суспензии лимфоцитов в физиологическом растворе, содержащей от 30 до 50 млн клеток. Лимфоциты вводили внутрикожно в ладонную поверхность предплечья женщин дважды с интервалом в 1 мес на 5-10-й день менструального цикла вне беременности и дважды во время наступившей беременности в сроке 5-6 и 8-9 нед. Все пациентки беременели естественным путем.
Образцы биоматериала. В качестве биологического материала у матерей и новорожденных для анализа использовали цельную периферическую кровь. У матерей отбирали 5 мл крови из локтевой вены в пробирки Vacuette (Greiner Bio-One, Kremsmunster, Austria) с добавлением в качестве антикоагулянта соли этиленди-аминтетраацетата. У новорожденных в пробирку с указанным антикоагулянтом собирали 3-5 мл пуповинной крови, свободно вытекающей из пуповины после ее пересечения. В случае невынашивания беременности (выкидыш) в качестве плодного биологического материала использовали ткань ворсинчатого хориона. После выскабливания полости матки несколько ворсин хориона суммарным весом 2-3 мг помещали в 0,5 мл физиологического раствора и обрабатывали протеиназой К. Выделение геномной ДНК из образцов крови и хориона проводили с помощью набора «ПРОБА-МЧ МАКС» («НПО ДНК-технология», Москва, Россия).
Типирование генов HLA класса I и определение наличия KIR-L. Библиотеки ДНК для типирования генов HLA-I готовили с помощью «Набора реагентов для подготовки библиотек фрагментов ДНК генов HLA классов I и II для генотипирования с помощью высокопроизводительного секвенирования (NGS) «HLA-Экс-перт» (НПО ДНК-технология, Москва, Россия). Ампли-
фикацию образцов и подготовку библиотек проводили с использованием амплификатора ДТпрайм («НПО ДНК-технология», Москва, Россия). Полученную библиотеку секвенировали на приборе MiSeq (Illumina, Inc., США) с использованием набора MiSeq Reagent Kit v3 (Illumina, Inc., США).
По результатам секвенирования типирование генов HLA-I выполняли с использованием программного обеспечения «HLA-Эксперт» версии 2.0 («НПО ДНК-технология», Москва, Россия). По типированным аллелям HLA-I определяли наличие эпитопов KIR-L: A3/11 [18], Bw4 [19], B27 [20] и C1/C2 [21]. Наличие эпитопа Bw4 на молекулах HLA-B и эпитопов C1 и C2 на HLA-C подтверждали с помощью онлайн-инструмента «KIR Ligand Calculator» [22].
Типирование генов KIR и определение генотипов KIR. С использованием праймеров собственной разработки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) проводили амплификацию участков ДНК, содержащих 3, 4 и 5 экзоны генов и псевдогенов KIR. Использовали 10 праймеров, включая 4 прямых и 6 обратных прайме-ров, что позволяло получать продукты амплификации длиной 377, 354 и 449 п. н. ПЦР проводили в амплифи-каторе ДТпрайм (НПО ДНК-технология, Москва, Россия). Подготовку библиотек и секвенирование проводили, как описано выше для типирования генов HLA-I.
Типирование генов KIR по результатам секвенирования выполняли с использованием специального программного обеспечения, являющегося модификацией «HLA-Эксперт» версии 2.0 («НПО ДНК-технология», Москва, Россия). В этом случае полученные в результате секвенирования последовательности сравниваются с референсными последовательностями экзо-нов аллелей из базы данных IPD-KIR версия 2.8. На основе референсных последовательностей для генов KIR полученные в результате секвенирования нуклео-тидные последовательности ампликонов трех экзонов, относили к какой-либо объединенной экзонной группе аллелей (Exon Allele Group Combination, EAGCs) [23], неразличимых для данного набора экзонов. Наличие в исследуемом геноме одной или нескольких значимых EAGCs одного гена KIR служило основанием для утверждения о наличии этого гена в геноме. В результате каждой матери и каждому плоду был поставлен генотип KIR с указанием наличия или отсутствия в исследуемом геноме генов KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DS1, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR3DL3, KIR3DS1, KIR2DP1 и KIR3DP. Определение вида генотипа KIR у пациента выполняли вычленением из последовательности присутствующих в нем генов типовых полугаплотипов [24, 25] и представляли в виде, учитывающем наличие центромерных и теломерных полу-гаплотипов KIR A и B.
Описание возможного аллоиммунного ответа с участием дНК проводили с использованием подхода, ориентированного на их настройку (приобретение способности к цитолитическому ответу) при взаимодействии
Примечание. * - ребенок умер на 10-е сутки жизни; ** - 1 ребенок умер на 33-и сутки жизни. Здесь и в табл. 2: ПВ - привычный выкидыш; ИЦТ - иммуноцитотерапия.
Таблица 1. Исходы беременностей у обследованных женщин после лечения
Группа исходов беременности Исход беременности Количество исходов после лечения, % Р
с ИЦТ (n = 39) без ИЦТ (n = 28)
Самопроизвольный выкидыш Ранний самопроизвольный выкидыш / неразвивающаяся беременность в сроке до 9 нед 6 дней 9 (23,1) 11 (39,3) 0,18
Поздний самопроизвольный выкидыш в сроке 10 нед - 21 нед 6 дней 2 (5,1) 2 (7,1) 1,0
Всего выкидышей 11 (25,6) 13 (46,4) 0,196
Преждевременные роды Экстремально ранние преждевременные роды в сроке 22 нед -27 нед 6 дней 0 (0) 1 (3,6)* 1,0
Ранние преждевременные роды в сроке 28 нед - 31 нед 6 дней 2 (5,1) 2 (7,1)** 1,0
Преждевременные роды в сроке 32 нед - 33 нед 6 дней 0 (0) 0 (0) -
Поздние преждевременные роды в сроке 34 нед - 36 нед 6 дней 0 (0) 2 (7,1) 0,17
Всего преждевременно рождено 2 (5,1) 5 (17,9) 0,12
Умерло преждевременно рожденных 0 (0) 2 (7,1) 0,17
Своевременные роды в сроке 37 нед -41 нед 6 дней Самопроизвольные роды 8 (20,5) 5 (17,9) 1,0
Экстренное кесарево сечение 6 (15,4) 3 (10,7) 0,72
Плановое кесарево сечение 12 (30,8) 2 (7,1) 0,031
Всего своевременно рождено 26 (66,7) 10 (35,7) 0,015
Всего жизнеспособных детей 28 (71,8) 13 (46,4) 0,045
iKIR, экспрессируемых на поверхности дНК, с iKIR-L на поверхности материнских децидуальных клеток или трофобластов. Данный подход представляет собой развитие модели, применяемой при оценке аллоре-активности НК-клеток для подбора лучшего донора при пересадке костного мозга только по iKIR-L [22]. Согласно использованному подходу, iKIR-L, которые присутствуют у материнских децидуальных клеток и отсутствуют у трофобластов, при наличии родственного iKIR у дНК обусловливают настройку дНК, воспринимающими трофобласты как чужеродные («потерявшие свое») и пара iKIR-iKIR-L настраивает дНК на цитолитическое действие против трофобластов (реакция типа «хозяин против трансплантата», «host-versus-graft», HvG). В случае наличия iKIR-L у тро-фобластов и отсутствия у материнских децидуальных клеток при наличии iKIR у дНК, данная пара iKIR-iKIR-L должна приводить к настройке с приобретением дНК способности к цитолитическому действию на материнские клетки (реакция типа «хозяин против хозяина», «host-versus-host», HvH). Отсутствие iKIR у дНК и/ или отсутствие iKIR-L одновременно у клеток-мишеней материнского и плодного происхождения означает невозможность настройки дНК такими сочетаниями iKIR-iKIR-L, что предполагает существование дНК в гипореактивном состоянии (HYPO) с неспособностью к цитолитическому ответу. Наличие же iKIR у дНК и присутствие iKIR-L одновременно у клеток-мишеней материнского и плодного происхождения означает для такой пары iKIR-iKIR-L возможность настройки дНК с выполнением ими функции защиты от «потери своего» двунаправленно (BD): в отношении клеток матери и плода. С использованием описанного
подхода каждая беременность была охарактеризована, исходя из участия в настройке дНК со стороны матери эпитопов A3, A11, B27, Bw4, C1 и C2, а со стороны плода - только эпитопов C1 и C2, в силу отсутствия экспрессии HLA-A и HLA-B на трофобластах [11].
Статистический анализ выполняли с использованием пакета статистических программ MedCalc® Software версия 14.8.1 (MedCalc, Belgium). Для оценки различий между клиническими группами по количественным параметрам использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Для сравнения частот встречаемости признаков в парах групп использовали точный критерий Фишера. При сравнении встречаемости признака в количестве групп больше двух использовали критерий согласия Пирсона. Различия считались значимыми приp < 0,05.
Результаты
Клинико-анамнестический анализ показал, что в клинических группах, сформированных для проведения лечения ПВ с применением ИЦТ и без этой процедуры, женщины не различались по возрасту (соответственно 31,8 ± 4,7 и 32,1 ± 4,5 года, p = 0,779). Группы не отличались по структуре соматической и гинекологической заболеваемости. В табл. 1 показаны исходы беременности у женщин с диагнозом ПВ, наступившей на фоне лечения с использованием стандартной терапии с включением ИЦТ и стандартной терапии без ИЦТ.
Согласно табл. 1, в группе с ИЦТ было больше своевременных родов (p = 0,015) и рождено больше жизнеспособных детей (p = 0,045), что подтверждает клиническую эффективность ИЦТ и обосновывает правомочность использования сформированных в настоящей
Таблица 2. Количество генотипированных пациентов
Группа пациентов с ПВ Количество пациентов в группе
матери дети абортусы всего детей и абортусов
всего с рождением ребенка с повторным выкидышем всего сыновья дочери
Лечение с ИЦТ 37 26 11 25* 13 12* 11 36*
Лечение без ИЦТ 23 10 13 10 7 3 13 23
Всего 60 36 24 35* 20 15 24 59*
Примечание. * - биоматериал одного ребенка женского пола был утрачен при пробоподготовке.
работе групп для исследований, направленных на понимание механизмов ИЦТ и факторов, влияющих на ее эффективность. Общее количество пациентов, типи-рованных по генам KIR и HLA, представлено в табл. 2. Клинические случаи с преждевременными родами были исключены из исследования с генотипированием как не имеющие однозначных признаков самопроизвольного выкидыша или своевременных родов.
Результаты типирования генов KIR (рис. 1) не выявили статистически значимых различий по их представленности у матерей и у плодов в сформированных клинических группах, что исключает необходимость учета исходных межгрупповых различий представленности KIR при оценке особенностей результатов лечения с использованием ИЦТ и без ИЦТ.
На рис. 2 представлены результаты определения генотипов KIR у матери и плода в клинических группах с лечением ПВ, включающим ИЦТ (рис. 2А, В), и с лечением ПВ без ИЦТ (рис. 2Б, Г). Сравнение распределений частот встречаемости различных генотипов KIR, как и в случае отдельных генов KIR, не выявило различий между клиническими группами как у матерей (рис. 2А, Б, светлые столбцы), так и у плодов (рис. 2В, Г, светлые столбцы), что исключает влияние особенно-
стей, связанных с неодинаковой представленностью генотипов в группах с разными видами лечения, на исходы лечения. Анализ возможного влияния генотипа KIR на эффективность использованных видов лечения (рис. 2, затененные столбцы) также не выявил ни при каком выделяемом генотипе KIR статистически значимого преобладания какого-либо из исходов (рождение ребенка или выкидыш) для беременности, наступившей в ходе обоих видов лечения ПВ.
Результаты типирования генов HLA, как и в случае генотипирования KIR, не выявили ни у матерей (рис. 3А, Б, светлые столбцы), ни у плодов (рис. 3В, Г, светлые столбцы) различий частот встречаемости KIR-L между клиническими группами с лечением ПВ, включающим ИЦТ, и лечением ПВ без использования ИЦТ. Этот результат исключает влияние случайно возникших групповых особенностей носительства эпитопов KIR-L на исходы разных видов лечения в группах. При анализе возможной связи KIR-L с эффективностью использованных видов лечения (рис. 3, затененные столбцы) обращает на себя внимание наличие эпитопа A3 только у родившихся детей (у 9 из 25 при ИЦТ и у 3 из 10 без ИЦТ) при полном отсутствии указанного эпитопа у невыношенных плодов (ни одного носителя из 11 слу-
Э
Частота встречаемости различных генов KIR у матерей
100 -
80 -
й 60 -
4 40-
20 -
э
Частота встречаемости различных генов KIR у плодов
ги 100 -
80 -
й 60 -
Ч 40 -
20 -
^ ^ ^
^ ^ й 9 9
^ «I
Гч, ^ кО кО к^
9 9
rn ^t
GQ GQ GQ GQ GQ GQ
9 9 9 9 ~ ~
9 9
<N <N
□ Без ИЦТ (n=23) □ С ИЦТ («=36)
'—I <N ^ ^ ^ ^ ^ ^
<N <N <N <N
^ CQ
^ «О
<v>
^ ^ ^
<N ^ ^
C^ C^ C^ C^ C^ C^
Q Q Q Q Q Q
□ Без ИЦТ (n=23) □ С ИЦТ (n=36)
0
0
Рис. 1. Доля носителей генов KIR среди пациенток с ПВ (А) и их плодов (Б) в клинических группах с лечением, включающим ИЦТ, и лечением без ИЦТ
Здесь и на рис.2, 3: ПВ - привычный выкидыш; ИЦТ - иммуноцитотерапия.
Э
100 -
80 -
60 -
40 -
20 -
Доля матерей, являющихся носителями генотипов KIR, при лечении ПВ с ИЦТ
ГП
хы
!?1
cq cq
cq -С -
cq cq
cq cq <! cq
cq cq cq <
Э
cq cq cq cq
100-
80-
60-
40-
20-
Доля матерей, являющихся носителями генотипов KIR, при лечении ПВ без ИЦТ
д
д
§
cq ж
cq • С •
cq cq
cq cq < cq
cq cq cq <
cq cq cq cq
I I Все (n = 37) О Ребенок (n = 26) Ц Выкидыш (n = 11)
I I Все (n = 23) О Ребенок (n = 10) Ц Выкидыш (n = 13)
0
0
Э
100 -
80 -
60 -
40 -
20 -
Доля плодов, являющихся носителями генотипов KIR, от матерей с ПВ при лечении с ИЦТ
Д
гП г-П г-П гП
cq cq cq <( cq cq cq cq
< cq о ^ cq < о ^ cq cq о ^
□ Все (n = 36) I I Ребенок (n = 25) О Выкидыш (n = 11)
100-
80-
n
т60
40-
20-
Доля плодов, являющихся носителями генотипов KIR, от матерей с ПВ при лечении без ИЦТ
JL
33 3§
cq cq -cq < -
cq cq cq cq
cq cq cq cq cq cq cq
□ Все (n = 23) □ Ребенок (n = 10) I I Выкидыш (n = 13)
Рис. 2. Доля носителей генотипов KIR среди пациенток с ПВ (А, Б) и их плодов (В, Г) А, В - лечение с включением в комплексную терапию ИЦТ; Б, Г - лечение без ИЦТ.
0
0
чаев при ИЦТ и из 13 случаев без ИЦТ) при обоих видах лечения (рис. 3В, Г). Однако эта особенность является статистически значимой только при лечении с проведением ИЦТ (рис. 3В, р = 0,034; рис. 3Г, р > 0,05), возможно, в силу большего количества клинических случаев в группе с таким лечением. Другой статистически значимой особенностью КГЯ-Ь, отличающей исходы лечения ПВ, оказалась повышенная доля носителей эпитопа Bw4-80T у абортусов при лечении с ИЦТ (у 9 из 11 абортусов и у 9 из 25 родившихся детей, р = 0,027). При этом отличий во встречаемости этого эпитопа у плодов с различными исходами (у 4 из 13 абортусов и у 5 из 10 родившихся детей) при лечении без ИЦТ не обнаруживается (р > 0,05).
Полученные результаты оценки участия ЖЖ-Ь в настройке дНК (рис. 4) указывают на то, что у более 80 % исследованных беременностей возможна настройка дНК по типу Ну в (рис. 4 А и Б, светлые столбцы) на основе хотя бы одного 17КГО.-Ь (Л(ЖЖ-Ь) > 1). При
этом определяющую роль в этой настройке играет наличие эпитопа Bw4 (p < 0,0001). С другой стороны, сохранившаяся экспрессия HLA-C на ВВТ может обеспечить настройку дНК против материнских децидуальных клеток по типу HvH лишь не более чем в 20 % беременностей (рис. 4А, Б, светлые столбцы). В то же время необходимо отметить, что особенностью ВВТ является экспрессия на их поверхности молекул HLA-G, являющихся лигандами для KIR2DL4. Поскольку ген KIR2DL4 является рамочным, он обязательно присутствует во всех генотипах KIR, и это должно обеспечивать настройку 100 % дНК по типу HvH в плаценте, независимо от набора эпитопов HLA-C у плода. На рис. 4 А, Б эта особенность настройки отражена столбцами с пунктирной границей.
Низкая встречаемость эпитопов A3, A11, B27 (рис. 2) в большой доле беременностей (60-80 %) способствует возникновению у дНК неактивного состояния типа HYPO (рис. 4В, Г, светлые столбцы), тогда как высокая частота встречаемости эпитопа Bw4, наоборот, обуслов-
100 -
80 -
60 -
40 -
20 -
Доля матерей, являющихся носителями генотипов К1Я-Ь, при лечении ПВ с ИЦТ
©
JUL
£
£
3 ^
S3
ы 4-^ ,1
oq
i! «1
о s
З4
н 5
I I Все (n = 37) П Ребенок (n = 26) Н Выкидыш (n = 11)
100 -
80 -
60 -
40 -
20 -
Доля матерей, являющихся носителями генотипов К1К-Е, при лечении ПВ без ИЦТ
ш.
£
5
3
S3
ы 4-^ ,1
eq
¡1
о S 2^
З4
I I Все (« = 23) П Ребенок (n = 10) Н Выкидыш (n = 13)
0
0
100-
80-
60-
40-
20-
Доля плодов, являющихся носителями К1Я-Ь, от матерей с ПВ при лечении с ИЦТ
£
jfL
°9 !
1
£
о 5
г*.
со
4
г ч
З4
о
О
5:
Не экспрессируются на ВВТ □ Все (n = 36) □ Ребенок (n = 25) Н Выкидыш (n =
11)
100 -
80 -
60 -
40 -
20 -
Доля плодов, являющихся носителями К1Я-Ь, от матерей с ПВ при лечении без ИЦТ
£
Л
!
3
ы 4
eq
i! «1
■з
о 5
З4
о
О
Не экспрессируются на ВВТ I I Все (n = 23) П Ребенок (n = 10) Н Выкидыш (n = 12)
0
0
Рис. 3. Доля носителей КШ-Ь среди пациенток с ПВ (А, Б) и их плодов (В, Г)
А, В - лечение с включением в комплексную терапию ИЦТ; Б, Г - лечение без ИЦТ; * - р < 0,05 при сравнении частот разных исходов при одном способе лечения. Здесь и на рис. 4: ВВТ - вневорсинчатые трофобласты.
ливает его более низкое участие (менее 30 %) в возникновении этого состояния. Пониженное участие эпитопов C1 или C2 (< 40 %) в возникновении у дНК состояния типа HYPO обусловлено одновременной экспрессией молекул HLA-C на материнских децидуальных клетках и ВВТ, обязательным наличием этих эпитопов на всех молекулах HLA-C и гаплоидентичностью матери и плода. Одновременно, последняя особенность молекул HLA-C приводит к наличию в каждой беременности хотя бы одного сочетания (A(iKIR-L) > 1) iKIR-iKIR-L, приводящего к настройке дНК по типу BD с возможностью двунаправленной защиты от «потери своего» (рис. 4В, Г). При этом, несмотря на практически 100 % наличие в парах «мать-плод» хотя бы одного (A(iKIR-L) > 1) сочетания
iKIR-iKIR-L, приводящего к состоянию дНК с типом HYPO, полученные данные показывают существование случаев, когда у матери представлены iKIR-L для всех iKIR и отсутствуют предпосылки для возникновения у дНК состояния HYPO (рис. 4В).
Сравнение представленности исходов беременности при различном лечении не выявляет каких-либо особенностей в ответе на лечение (рис. 4, затененные столбцы). Можно лишь отметить исчезновение при лечении с ИЦТ тенденции к различиям по представленности пар iKIR-iKIR-L типа HvG при разных исходах беременности при лечении без ИЦТ (рис. 4Б, затененные столбцы, p = 0,104461 для A(iKIR-L) > 1). Это наблюдение означает, что использование ИЦТ, вероятно, уменьшает вли-
э
100 -
80 -
. 60 -
ло40 Д
20 -
Доля беременностей с наличием условий настройки дНК против ВВТ (ИуО) и децидуальных клеток матери (ИуИ) при лечении ПВ с ИЦТ
ГТП III III R-
о
о
Л1
г? у
-
о
о
/^i
г? у
-
э
100 -
80-
60-
I 40 Д
20-
Доля беременностей с наличием условий настройки дНК против ВВТ (ИуО) и децидуальных клеток матери (ИуИ) при лечении ПВ без ИЦТ
nL ГШ г
4
S и
о
о
)i
г? у
-
тй
о
о
)i
г? у
-
v HvG
v HvH
I I Все (n = 36) О Ребенок (n = 25) Н Выкидыш (n = 11)
v HvG
v
HvH
I I Все (n = 23) П Ребенок (n = 10) Н Выкидыш (n = 13)
0
0
э
100 -
80 -
. 60 -
§ 40 Н Д
20 А
Доля беременностей с отсутствием условий настройки дНК (HYPO) и настройкой для двунаправленной защиты от «потери своего» (BD) при лечении ПВ с ИЦТ
О
О
)i £ ¡3
о
о
)i г?
¡3
100 -
80-
60-
40-
20-
Доля беременностей с отсутствием условий настройки дНК (HYPO) и настройкой для двунаправленной защиты от «потери своего» (BD) при лечении ПВ без ИЦТ
4
S
B
О
о
)i г?
3
о
о
)i £ 3
HYPO
BD
V
HYPO
BD
I I Все (n = 36) О Ребенок (n = 25) Ц Выкидыш (n = 11)
I I Все (n = 23) О Ребенок (n = 10) H Выкидыш (n = 13)
0
0
Рис. 4. Показатели аллосовместимости пар мать^Щ-плод^) по настройке дНК в привязке к отдельным iKIR-L и по наличию хотя бы одного сочетания iKIR-iKIR-L (N(iKIR-L) > 1) в паре «мать-плод»
А, В - данные по пациенткам с включением ИЦТ в комплексную терапию ПВ; Б, Г - данные по пациенткам со стандартной терапией ПВ. А, Б - доля беременностей с наличием условий настройки дНК против ВВТ (HvG) и децидуальных клеток матери (HvH). Пунктиром показаны столбцы N(iKIR-L) > 1, соответствующие настройке дНК по типу HvH с учетом экспрессии на ВВТ молекул HLA-G. В, Г - доля беременностей с отсутствием условий настройки дНК (HYPO) и настройкой для двунаправленной защиты от «потери своего» (BD).
яние активности дНК в отношении ВВТ на перестройки в плаценте, сопровождающие развитие плода и по-разному протекающие у пациенток с ПВ при лечении без ИЦТ в случаях с выкидышем и своевременными родами.
Обсуждение
Полученные в настоящей работе данные показывают, что среди сохранившихся в ходе эволюционного
отбора генотипов KIR и HLA-I отсутствуют однозначно способствующие неблагоприятному развитию беременности. В результате не выявлено каких-либо особенностей в наличии генов и генотипов KIR (рис. 1, 2), а также представленности KIR-L (рис. 3) у матерей с различными исходами беременности при лечении ПВ без и с использованием ИЦТ. В то же время при обоих способах лечения невыношенные беременности отличались от беременностей, завершившихся рождением ребенка,
отсутствием у всех плодов KIR-L с эпитопом A3. Кроме того, при лечении с ИЦТ плоды в случае невыношен-ных беременностей чаще являлись носителями KIR-L с эпитопом Bw4-80I на молекуле HLA-B. Однако, учитывая данные об отсутствии экспрессии молекул HLA-A и HLA-B на трофобластах, механизм вовлечения этих молекул в возникновение различий в ответе на лечение непонятен и требует дополнительных исследований. До выяснения истинного значения отмеченных генетических особенностей для протекания беременности целесообразно исходить из того, что, если по результатам гено-типирования родителей ожидается высокая вероятность появления у плодов генотипов HLA с такими особенностями, это может рассматриваться как предпосылка ПВ и низкой эффективности его лечения.
Оценка аллосовместимости матери и плода по настройке (обучению) дНК в результате взаимодействия KIR, экспрессируемых на поверхности дНК, с iKIR-L на поверхности материнских децидуальных клеток или трофобластов (см. рис. 4), тоже не выявила сочетаний iKIR-iKIR-L, способствующих или препятствующих вынашиванию беременности при лечении ПВ с выполнением ИЦТ в перечне лечебных процедур и при лечении без ИЦТ. С одной стороны, этот результат может быть истолкован как следствие эволюционного отбора беспроблемных совокупностей сочетаний iKIR-iKIR-L. Но, с другой стороны, возможность использования сочетаний iKIR-iKIR-L для разной настройки дНК предполагает наличие особых механизмов, которые обеспечат отдельным сочетаниям iKIR-iKIR-L возможность определять результат настройки НК-клетки в целом. В частности, очевидно, что представленность во всех беременностях (100 %) сочетаний iKIR-iKIR-L, порождающих у дНК состояние BD, при полной биаллельной экспрессии как генов KIR, так и генов HLA-I, будет означать отсутствие возможности других видов настройки. Поэтому необходим поиск предпосылок, за счет которых наличие сочетаний iKIR-iKIR-L, соответствующих различной настройке дНК, приведет к наличию в плаценте популяций дНК с функциональными фенотипами типа HvG, HvH, HYPO и BD. В этой связи обращает на себя внимание стохастический характер экспрессии генов KIR [26], приводящий к наличию у одного индивидуума НК-клеток не только с разным количеством KIR на поверхности, но и даже их отсутствием [27]. Данная особенность экспрессии генов KIR сочетается с устойчивой кодоминантной экспрессией генов HLA-I, которая происходит в соответствии с характерным для каждого типа клеток набором экспрессируемых генов HLA-I [28]. В таком случае, как минимум, наличие НК-клеток только с одним KIR на поверхности является основой для формирования популяций дНК с разной настройкой, определяемой отдельными сочетаниями
■ Литература
1. McIntyre J.A., Coulam C.B., Faulk W.P. Recurrent spontaneous abortion. Am. J. Reprod. Immunol. 1989; 21 (3-4): 100-4. DOI: https:// doi.org/10.1111/j.1600-0897.1989.tb01011.x
iKIR-iKIR-L. Наличие у таких дНК настройки типа HvG и HvH должно в первую очередь обеспечивать морфогенез плаценты через сдерживание инвазии ВВТ и стимуляцию обновления материнских децидуальных клеток. Одновременно, настройка типа BD в большей степени является основой защиты от развития инфекционных процессов в плаценте через удаление в ней как материнских, так плодных клеток, «теряющих свое» при инфицировании. Необходимо отметить, что среди дНК, на поверхности которых экспрессируется несколько iKIR, по мере увеличения количества iKIR будет преобладать настройка типа BD в силу гаплоидентичности матери и плода. В этой связи в качестве причин нарушений в развитии плаценты, которые приводят к ПВ, могут выступать эпигенетические механизмы, управляющие стохастической экспрессией генов KIR. Очень высокая вероятность экспрессии этих генов, как и слишком низкая, могут приводить к недостаточной представленности дНК с настройкой типа HvG и HvH и дефектному развитию плаценты, а проведение ИЦТ, возможно, приводит к перестройке работы эпигенетических механизмов в НК-клетках с установлением необходимых показателей экспрессии генов KIR.
Заключение
Таким образом, проведенные исследования не выявили никаких особенностей во встречаемости генотипов KIR и представленности KIR-L у матерей с различными исходами беременности при лечении ПВ. Оценка аллосовместимости «мать-плод» на основе факторов настройки (обучения) дНК также не обнаружила статистически значимых особенностей в представленности пар iKIR-iKIR-L с различными направлениями настройки при различных исходах лечения. Выявленные при лечении с использованием ИЦТ у невыно-шенных плодов статистически значимые особенности в виде отсутствия эпитопа A3 и более частого носи-тельства эпитопа Bw4-80I не согласуются с особенностями экспрессии HLA-A и HLA-B на ВВТ и не могут быть напрямую связаны с зависимыми от дНК механизмами аллосовместимости мать-плод. Однако высокая вероятность появления у плодов генотипов HLA с указанными особенностями может рассматриваться как предпосылка ПВ и низкой эффективности его лечения. В целом, полученные в настоящей работе результаты и сделанное предположение о роли особенностей стохастической экспрессии генов KIR в нарушении протекания беременности указывает на целесообразность проведения в дальнейшем исследований, направленных на раскрытие эпигенетических механизмов управления экспрессией KIR на поверхности НК-клеток.
2. Faulk W.P., McIntyre J.A. Immunological studies of human tropho-blast: markers, subsets and functions. Immunol. Rev. 1983; 75: 139-75. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1600-065x.1983.tb01094.x.z
3. Хорошкеева О.В., Тетруашвили Н.К., Бурменская О.В., Агаджа-нова А. А., Трофимов Д.Ю. Роль антигенов главного комплекса гистосов-местимости в реализации привычного выкидыша. Акушерство и гинекология. 2016; (3): 5-10. DOI: https://doi.org/10.18565/aig.2016.3.5-10
4. Kotsias F., Cebrian I., Alloatti A. Antigen processing and presentation. Int. Rev. Cell Mol. Biol. 2019; 348: 69-121. DOI: https://doi. org/10.1016/bs.ircmb.2019.07.005
5. Moffett-King A. Natural killer cells and pregnancy. Nat. Rev. Immunol. 2002; 2 (9): 656-63. DOI: https://doi.org/10.1038/nri886
6. Nersesian S., Carter E.B., Lee S.N., Westhaver L.P., Boudreau J.E. Killer instincts: natural killer cells as multifactorial cancer immunothe-rapy. Front Immunol. 2023; 14: 1269614. DOI: https://doi.org/10.3389/ fimmu.2023.1269614
7. Karre K. NK cells, MHC class I molecules and the missing self. Scand J Immunol. 2002; 55(3): 221-8. DOI: 10.1046/j.1365-3083.2002.01053.x
8. Hsu K.C., Chida S., Geraghty D.E., Dupont B. The killer cell immu-noglobulin-like receptor (KIR) genomic region: gene-order, haplotypes and allelic polymorphism. Immunol. Rev. 2002; 190: 40-52. DOI: https:// doi.org/10.1034/j.1600-065x.2002.19004.x
9. Rascle P., Woolley G., Jost S, Manickam C., Reeves R.K. NK cell education: Physiological and pathological influences. Front. Immunol. 2023; 14: 1087155. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2023.1087155
10. Pugh J., Nemat-Gorgani N., Djaoud Z., Guethlein L.A., Norman P.J., Parham P. In vitro education of human natural killer cells by KIR3DL1. Life Sci. Alliance. 2019; 2 (6): e201900434. DOI: https://doi. org/10.26508/lsa.201900434
11. Strunz B., Bister J., Jonsson H., Filipovic I., Crona-Guterstam Y., Kvedaraite E., Sleiers N., Dumitrescu B., Brannstrom M., Lentini A., Reinius B., Cornillet M., Willinger T., Gidlof S., Hamilton R.S., Ivars-son M.A., Bjorkstrom N.K. Continuous human uterine NK cell differentiation in response to endometrial regeneration and pregnancy. Sci. Immunol. 2021; 6 (56): eabb7800. DOI: https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abb7800
12. Francisco P.D., Tan-Lim C.S.C., Agcaoili-De Jesus M.S.L. Efficacy of lymphocyte immunotherapy in the treatment of recurrent pregnancy loss from alloimmunity: A systematic review and meta-analysis. Am. J. Reprod. Immunol. 2022; 88 (4): e13605. DOI: https://doi.org/10.1111/aji.13605
13. Aslanian-Kalkhoran L., Kamrani A., Alipourfard I., Chakari-Khi-avi F., Chakari-Khiavi A., Aghebati-Maleki L., Shekarchi A.A., Mehdiza-deh A., Mojahedi M., Danaii S., Roshangar L., Ahmadian Heris J., Zol-faghari M., Dolati S., Soltani-Zangbar M.S., Yousefi M. The effect of lymphocyte immunotherapy (LIT) in modulating immune responses in patients with recurrent pregnancy loss (RPL). Int. Immunopharmacol. 2023; 121: 110326. DOI: https://doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110326
14. Клинические рекомендации «Привычный выкидыш» (утв. Министерством здравоохранения РФ, 2022 г.). URL: https://apicr.min-zdrav.gov.ru/api.ashx?op=GetClinrecPdf&id=721_1
15. РОАГ Клинические рекомендации «Привычный выкидыш» от 2022 г. URL: https://roag-portal.ru/recommendations_obstetrics
16. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 28.10.2020 № 1166н «Об утверждении порядка прохождения донорами медицинского обследования и перечня медицинских противопоказаний (временных и постоянных) для сдачи крови и (или) ее компонентов и сроков отвода, которому подлежит лицо при нали-
чии временных медицинских показаний, от донорства крови и (или) ее компонентов». URL: http://publication.pravo.gov.ru/Document/ View/0001202011260032
17. Кречетова Л.В., Ванько Л.В., Вторушина В.В., Николаева М.А., Инвияева Е.В., Тетруашвили Н.К. Активация лимфоцитов в формировании иммунной толерантности у женщин с привычным выкидышем. Биохимия. 2020; 85 (5): 682-94. DOI: https://doi. org/10.31857/S0320972520050073
18. Hansasuta P., Dong T., Thananchai H., Weekes M., Willberg C., Aldemir H., Rowland-Jones S., Braud V.M. Recognition of HLA-A3 and HLA-A11 by KIR3DL2 is peptide-specific. Eur. J. Immunol. 2004; 34 (6): 1673-9. DOI: https://doi.org/10.1002/eji.200425089
19. HLA Antigens Bw4 and Bw6 associated specificities. URL: https:// hla.alleles.org/antigens/bw46.html
20. Kollnberger S., Bird L., Sun M.Y., Retiere C., Braud V.M., McMi-chael A., Bowness P. Cell-surface expression and immune receptor recognition of HLA-B27 homodimers. Arthritis Rheum. 2002; 46 (11): 2972-82. DOI: https://doi.org/10.1002/art.10605
21. Mandelboim O., Reyburn H.T., Vales-Gomez M., Pazmany L., Colonna M., Borsellino G., Strominger J.L. Protection from lysis by natural killer cells of group 1 and 2 specificity is mediated by residue 80 in human histocompatibility leukocyte antigen C alleles and also occurs with empty major histocompatibility complex molecules. J. Exp. Med. 1996; 184 (3): 913-22. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.184.3.913
22. KIR Ligand Calculator. URL: https:/www.ebi.ac.uk/ipd/kir/mat-ching/ligand/
23. Wagner I., Schefzyk D., Pruschke J., Schöfl G., Schöne B., Gruber N., Lang K., Hofmann J., Gnahm C., Heyn B., Marin W.M., Dan-dekar R., Hollenbach J.A., Schetelig J., Pingel J., Norman P.J., Sauter J., Schmidt A.H., Lange V. Allele-Level KIR Genotyping of More Than a Million Samples: Workflow, Algorithm, and Observations. Front. Immunol. 2018; 9: 2843. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.02843
24. Pyo C.W., Guethlein L.A., Vu Q., Wang R., Abi-Rached L., Norman P.J., Marsh S.G., Miller J.S., Parham P., Geraghty D.E. Different patterns of evolution in the centromeric and telomeric regions of group A and B haplotypes of the human killer cell Ig-like receptor locus. PLoS One. 2010; 5 (12): e15115. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015115
25. KIR Genotype Reference List: Group Nomenclature (AA, Bx). URL: http://www.allelefrequencies.net/kir6001a.asp
26. Cichocki F., Miller J.S., Anderson S.K. Killer immunoglobu-lin-like receptor transcriptional regulation: a fascinating dance of multiple promoters. J. Innate Immun. 2011; 3 (3): 242-8. DOI: https://doi. org/10.1159/000323929
27. Horowitz A., Strauss-Albee D.M., Leipold M., Kubo J., Nemat-Gorgani N., Dogan O.C., Dekker C.L., Mackey S., Maecker H., Swan G.E., Davis M.M., Norman P. J., Guethlein L.A., Desai M., Parham P., Blish C.A. Genetic and environmental determinants of human NK cell diversity revealed by mass cytometry. Sci. Transl. Med. 2013; 5 (208): 208ra145. DOI: https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3006702
28. Prevosto C., Usmani M.F., McDonald S., Gumienny A.M., Key T., Goodman R.S., Gaston J.S., Deery M.J., Busch R. Allele-Independent Turnover of Human Leukocyte Antigen (HLA) Class Ia Molecules. PLoS One. 2016; 11 (8): e0161011. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0161011
■ References
1. McIntyre J.A., Coulam C.B., Faulk W.P. Recurrent spontaneous abortion. Am J Reprod Immunol. 1989; 21 (3-4): 100-4. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1600-0897.1989.tb01011.x
2. Faulk W.P., McIntyre J.A. Immunological studies of human tropho-blast: markers, subsets and functions. Immunol Rev. 1983; 75: 139-75. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1600-065x.1983.tb01094.x.z
3. Khoroshkeeva O.V., Tetruashvili N.K., Burmenskaya O.V., Agadzhanova A.A., Trofimov D.Yu. Role of major histocompatibility complex antigens in recurrent miscarriage. Obstetrics and Gynecology. 2016; (3): 5-10. DOI: https://doi.org/10.18565/aig.2016.3.5-10 (in Russian)
4. Kotsias F., Cebrian I., Alloatti A. Antigen processing and presentation. Int Rev Cell Mol Biol. 2019; 348: 69-121. DOI: https://doi. org/10.1016/bs.ircmb.2019.07.005
5. Moffett-King A. Natural killer cells and pregnancy. Nat Rev Immunol. 2002; 2 (9): 656-63. DOI: https://doi.org/10.1038/nri886
6. Nersesian S., Carter E.B., Lee S.N., Westhaver L.P., Boudreau J.E. Killer instincts: natural killer cells as multifactorial cancer immunothe-
rapy. Front Immunol. 2023; 14: 1269614. DOI: https://doi.org/10.3389/ fimmu.2023.1269614
7. Kärre K. NK cells, MHC class I molecules and the missing self. Scand J Immunol. 2002; 55 (3): 221-8. DOI: https://doi.org/10.1046/ j.1365-3083.2002.01053.x
8. Hsu K.C., Chida S., Geraghty D.E., Dupont B. The killer cell immu-noglobulin-like receptor (KIR) genomic region: gene-order, haplotypes and allelic polymorphism. Immunol Rev. 2002; 190: 40-52. DOI: https:// doi.org/10.1034/j.1600-065x.2002.19004.x
9. Rascle P., Woolley G., Jost S, Manickam C., Reeves R.K. NK cell education: Physiological and pathological influences. Front Immunol. 2023; 14: 1087155. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2023.1087155
10. Pugh J., Nemat-Gorgani N., Djaoud Z., Guethlein L.A., Norman P.J., Parham P. In vitro education of human natural killer cells by KIR3DL1. Life Sci Alliance. 2019; 2 (6): e201900434. DOI: https://doi. org/10.26508/lsa.201900434
11. Strunz B., Bister J., Jönsson H., Filipovic I., Crona-Guterstam Y., Kvedaraite E., Sleiers N., Dumitrescu B., Brännström M., Lentini A.,
Reinius B., Cornillet M., Willinger T., Gidlof S., Hamilton R.S., Ivars-son M.A., Bjorkstrom N.K. Continuous human uterine NK cell differentiation in response to endometrial regeneration and pregnancy. Sci Immunol. 2021; 6 (56): eabb7800. DOI: https://doi.org/10.1126/sciimmunol. abb7800
12. Francisco P.D., Tan-Lim C.S.C., Agcaoili-De Jesus M.S.L. Efficacy of lymphocyte immunotherapy in the treatment of recurrent pregnancy loss from alloimmunity: A systematic review and meta-analysis. Am J Reprod Immunol. 2022; 88 (4): e13605. DOI: https://doi.org/10.1111/ aji.13605
13. Aslanian-Kalkhoran L., Kamrani A., Alipourfard I., Chakari-Khi-avi F., Chakari-Khiavi A., Aghebati-Maleki L., Shekarchi A.A., Mehdiza-deh A., Mojahedi M., Danaii S., Roshangar L., Ahmadian Heris J., Zol-faghari M., Dolati S., Soltani-Zangbar M.S., Yousefi M. The effect of lymphocyte immunotherapy (LIT) in modulating immune responses in patients with recurrent pregnancy loss (RPL). Int Immunopharmacol. 2023; 121: 110326. DOI: https://doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110326
14. Clinical guidelines «Habitual miscarriage» (approved by the Ministry of Health of the Russian Federation, 2022). URL: https://apicr. minzdrav.gov.ru/api.ashx?op=GetClinrecPdf&id=721_1 (date of access 09.09.2024) (in Russian)
15. ROAG Clinical guidelines «Habitual miscarriage» from 2022. URL: https://roag-portal.ru/recommendations_obstetrics (date of access 09.09.2024) (in Russian)
16. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation dated 28.10.2020 No. 1166n «On approval of the procedure for donors to undergo a medical examination and a list of medical contraindications (temporary and permanent) for donating blood and (or) its components and the terms of exemption to which a person is subject in the presence of temporary medical indications from donating blood and (or) its components». URL: http://publication.pravo.gov.ru/Document/View/0001202011260032 (date of access 09.09.2024) (in Russian)
17. Krechetova L.V., Vanko L.V., Vtorushina V.V., Nikolaeva M.A., Inviyaeva E.V., Tetruashvili N.K. Lymphocyte Activation in the Development of Immune Tolerance in Women with Recurrent Pregnancy Loss. Biochemistry (Mosc). 2020; 85 (5): 583-93. DOI: https://doi.org/10.1134/ S0006297920050077 (in Russian)
18. Hansasuta P., Dong T., Thananchai H., Weekes M., Willberg C., Aldemir H., Rowland-Jones S., Braud V.M. Recognition of HLA-A3 and HLA-A11 by KIR3DL2 is peptide-specific. Eur J Immunol. 2004; 34 (6): 1673-9. DOI: https://doi.org/10.1002/eji.200425089
19. HLA Antigens Bw4 and Bw6 associated specificities. UTL: https:// hla.alleles.org/antigens/bw46.html
20. Kollnberger S., Bird L., Sun M.Y., Retiere C., Braud V.M., McMi-chael A., Bowness P. Cell-surface expression and immune receptor recognition of HLA-B27 homodimers. Arthritis Rheum. 2002; 46 (11): 2972-82. DOI: https://doi.org/10.1002/art.10605
21. Mandelboim O., Reyburn H.T., Vales-Gomez M., Pazmany L., Colonna M., Borsellino G., Strominger J.L. Protection from lysis by natural killer cells of group 1 and 2 specificity is mediated by residue 80 in human histocompatibility leukocyte antigen C alleles and also occurs with empty major histocompatibility complex molecules. J Exp Med. 1996; 184 (3): 913-22. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.184.3.913
22. KIR Ligand Calculator. URL: https:/www.ebi.ac.uk/ipd/kir/mat-ching/ligand/
23. Wagner I., Schefzyk D., Pruschke J., Schöfl G., Schöne B., Gruber N., Lang K., Hofmann J., Gnahm C., Heyn B., Marin W.M., Dan-dekar R., Hollenbach J.A., Schetelig J., Pingel J., Norman P.J., Sauter J., Schmidt A.H., Lange V. Allele-Level KIR Genotyping of More Than a Million Samples: Workflow, Algorithm, and Observations. Front Immunol. 2018; 9: 2843. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.02843
24. Pyo C.W., Guethlein L.A., Vu Q., Wang R., Abi-Rached L., Norman P.J., Marsh S.G., Miller J.S., Parham P., Geraghty D.E. Different patterns of evolution in the centromeric and telomeric regions of group A and B haplotypes of the human killer cell Ig-like receptor locus. PLoS One. 2010; 5 (12): e15115. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015115
25. KIR Genotype Reference List: Group Nomenclature (AA, Bx). URL: http://www.allelefrequencies.net/kir6001a.asp
26. Cichocki F., Miller J.S., Anderson S.K. Killer immunoglobu-lin-like receptor transcriptional regulation: a fascinating dance of multiple promoters. J Innate Immun. 2011; 3 (3): 242-8. DOI: https://doi. org/10.1159/000323929
27. Horowitz A., Strauss-Albee D.M., Leipold M., Kubo J., Nemat-Gorgani N., Dogan O.C., Dekker C.L., Mackey S., Maecker H., Swan G.E., Davis M.M., Norman P. J., Guethlein L.A., Desai M., Parham P., Blish C.A. Genetic and environmental determinants of human NK cell diversity revealed by mass cytometry. Sci Transl Med. 2013; 5 (208): 208ra145. DOI: https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3006702
28. Prevosto C., Usmani M.F., McDonald S., Gumienny A.M., Key T., Goodman R.S., Gaston J.S., Deery M.J., Busch R. Allele-Independent Turnover of Human Leukocyte Antigen (HLA) Class Ia Molecules. PLoS One. 2016; 11 (8): e0161011. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0161011
■ Сведения об авторах
Кречетов Сергей Петрович - канд. мед. наук, вед. науч. сотр. лаб. клинической иммунологии ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0003-2861-6010
Хорошкеева Ольга Владимировна - врач - акушер-гинеколог 2-го отд. акушерского патологии беременности (отделение терапии и профилактики невынашивания беременности) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-5153-5422
Тетруашвили Нана Картлосовна - д-р мед. наук, руководитель 2-го отд. акушерского патологии беременности (отделение терапии и профилактики невынашивания беременности) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-9201-2281
■ Authors' information
Sergey P. Krechetov - PhD, Leader Researcher of the Clinical Immunology Lab., V.I. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0003-2861-6010
Olga V. Khoroshkeeva - Obstetrician-Gynecologist of the Pregnancy Pathology Dept. (Dept. of Therapy and Prevention of Miscarriage), V.I. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-5153-5422
Nana K. Tetruashvili - MD, PhD, Head of the Pregnancy Pathology Dept. (Dept. of Therapy and Prevention of Miscarriage), VI. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-9201-2281
Кречетова Любовь Валентиновна - д-р мед. наук, зав. лаб. клинической иммунологии ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0001-5023-3476
Янкевич Татьяна Эдуардовна - канд. мед. наук, мл. науч. сотр. лаб. генетики гистосовместимости ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-0105-3812
Трофимов Дмитрий Юрьевич - член-корр. РАН, д-р биол. наук, директор Института репродуктивной генетики ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-1569-8486
Сухих Геннадий Тихонович - академик РАН, д-р мед. наук, профессор, директор ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Ку -лакова» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-7712-1260
Lyubov V. Krechetova - MD, PhD, Head of the Clinical Immunology Lab., V.I. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0001-5023-3476
Tatjana E. Jankevic - PhD, Junior Researcher of Human Histocompatibility Genetics Lab., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-0105-3812
Dmitriy Yu. Trofimov - Corresponding Member of RAS, Dr.Sci., PhD, Director of the Institute of the Reproductive Genetics, VI. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-1569-8486
Gennady T. Sukhikh - Academician of RAS, MD, PhD, Prof., Director of V.I. Kulakov NMRC OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-7712-1260
