CC BY
16
УДК 636.5:611.36:619:616.98
СТРУКТУРНАЯ ПЕРЕСТРОЙКА ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ ОРГАНОВ ЦЫПЛЯТ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ ЦИРКОВИРУСОМ
И.Н. ГРОМОВ, В.С. ПРУДНИКОВ, М.К. СЕЛИХАНОВА УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026 А.С. АЛИЕВ, М.В. БУРЛАКОВ ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» г. Санкт-Петербург, Российская Федерация, 196084 В.К. ЗИМИН ООО «Биотехагро» г. Санкт-Петербург, Российская Федерация, 350012
(Поступила в редакцию 29.02.2012)
Введение. В условиях птицефабрик при значительной концентрации поголовья на ограниченных площадях значительно повышается опасность возникновения инфекционных болезней вирусной и бактериальной этиологии. Ранняя и точная диагностика инфекционных болезней позволяет своевременно и правильно организовать ветеринар-но-санитарные и лечебно-профилактические мероприятия по их ликвидации.
Диагностика инфекционных птиц должна проводиться комплексно, с учетом эпизоотической обстановки, симптомов проявления болезни, результатов патологоанатомического вскрытия и лабораторных исследований. В этом комплексе патоморфологические исследования нередко имеют решающее значение, как, например, при лейкозе, болезни Марека, туберкулезе и других болезнях. Кроме того, патологоанато-мическое и гистологическое исследование позволяет в кратчайший срок поставить предварительный диагноз, что очень важно для организации и проведения предварительных противоэпизоотических мероприятий, и наметить направление дальнейших лабораторных исследований.
В имеющихся изданиях крайне скудно освящены аспекты патоло-гоанатомической диагностики новых и малоизученных болезней птиц, к которым можно отнести инфекционную анемию. Болезнь впервые была зарегистрирована в Японии в 1979 г. В настоящее время вспышки инфекционной анемии регистрируются во многих странах с развитым птицеводством [2, 3]. Результаты исследований В.А. Лобанова и др. [10] свидетельствуют о широком распространении вируса инфекционной анемии цыплят в птицеводческих хозяйствах Российской Федерации, Украины и Республики Беларусь. В крупных птицеводческих хозяйствах промышленного типа инфекционная анемия наносит зна-
332
чительный экономический ущерб, который обусловлен гибелью птицы, низкими приростами и оплатой корма, снижением категорийности тушек, повышенной выбраковкой, расходами на лечение вторичных инфекций и проведение соответствующих ветеринарно-санитарных мероприятий [3].
В отечественной и зарубежной литературе имеется недостаточное количество сведений, посвященных изучению патоморфологических изменений во внутренних органах цыплят при спонтанном и экспериментальном течении болезни. Патоморфологические данные охватывают незначительный срок наблюдения. Многие аспекты указанных проблем носят противоречивый характер и требуют более детального изучения.
Цель работы - изучить структурные изменения в иммунокомпе-тентных органах у цыплят при экспериментальном заражении цирко-вирусом.
Материал и методика исследований. Исследования были проведены на СПФ-цыплятах суточного возраста. Птица была подобрана по принципу аналогов и разделена на две группы по 15 цыплят в каждой. Цыплят 1-й группы в суточном возрасте внутримышечно заражали вирулентным штаммом вируса инфекционной анемии. Вируссодержа-щим материалом служил стерильный 20%-ный гомогенат печени спонтанно больных цыплят-бройлеров, обработанный по общепринятой методике. Интактные цыплята 2-й группы служили контролем. За всей птицей было установлено клиническое наблюдение. На 21-й день после заражения цыплят убивали для проведения морфологических исследований.
При проведении морфологических исследований кровь получали из яремной и крыловой вен [4]. Мазки крови птиц готовили на тонких обезжиренных предметных стеклах, высушивали на воздухе, фиксировали в метаноле и окрашивали по Романовскому-Гимза. Лейкограмму выводили на основании подсчета 100 клеток.
Для проведения морфологических исследований отбирали кусочки кости, тимуса, бурсы Фабрициуса, селезенки. Зафиксированный материал подвергали уплотнению путем заливки в парафин по общепринятой методике [8]. Для изучения общих структурных изменений срезы окрашивали гематоксилин-эозином [5]. Миелограмму выводили, исходя из подсчета 1000 клеток в мазках, окрашенных по Романовскому -Гимза [4, 9]. Наряду с оценкой миелограммы выводили парциальные формулы различных групп клеток костного мозга [5]. Для объективной оценки характера изменений в органах иммунной системы птиц определяли содержание Т- и В-лимфоцитов, лимфо- и плазмобластов, незрелых и зрелых плазмоцитов, митозов, подсчитывали общее количество клеточных элементов, находили число и размеры лимфоидных узелков. Подсчет клеточных элементов проводили в 50 полях зрения микроскопа (объектив х 90, окуляр х 10, бинокуляр х 1,5) с использованием компьютерной программы Imagescope-M.
На гистологических срезах тимуса и бурсы Фабрициуса определяли абсолютные размеры коркового и мозгового вещества долек тимуса и
лимфоидных узелков бурсы Фабрициуса (объектив х 8, окуляр х 10, бинокуляр х 1,5). Затем вычисляли соотношение этих величин. Для измерений использовали микрофотометрическую линейку (50-кратным наложением), а также компьютерные программы ScopePhoto и Imagescope-M. Площадь элементов стромы и паренхимы в тимусе определяли, используя методику точечного счета с наложением окулярной сетки Г.Г. Автандилова. Количество лимфоцитов, приходящееся на условную единицу площади сетки Г.Г. Автандилова, подсчитывали при 50-кратном наложении ее на корковую и мозговую зону долек тимуса (объектив х 40, окуляр х 10, бинокуляр х 1,5). На гистологических срезах селезенки определяли число и размеры лимфоидных узелков.
Гистологические, гистохимические и иммуноморфологические исследования проводили с помощью световых микроскопов «OLYMPUS BX51» (Япония), «МИКМЕД-2» и «БИОМЕД-6» (Россия). Полученные данные документированы микрофотографированием с использованием цифровой системы считывания и ввода видеоизображения «ДСМ-510», а также программного обеспечения по вводу и предобработке изображения Imagescope-M и ScopePhoto.
Цифровые данные обработаны статистически с использованием программы Microsoft Excel 2003.
Результаты исследований и их обсуждение. Установлено, что в костном мозге цыплят опытной группы выявлялись признаки атрофии миелоидной (кроветворной ткани). При этом кроветворные ткани были представлены лишь небольшими группами или диффузными скоплениями, которые локализовались вокруг синусоидных капилляров и артериол. При этом основные структурные изменения со стороны ге-мопоэтических элементов регистрировались чаще в центральной части органа и значительно реже - в пространствах под периостом.
Наряду с процессами аплазии эритроидного и гранулоцитарного кроветворения в костном мозге большинства подопытных птиц отмечена выраженная гиперплазия клеток лимфоидного ряда. При этом крупноочаговые скопления лимфоцитов различной степени зрелости визуализировались в периферической части органа непосредственно под периостом.
В тимусе птиц опытной группы отмечено значительное уменьшение размеров коркового вещества долек тимуса по сравнению с контролем. При этом размеры мозгового вещества существенно не изменялись. У отдельных птиц происходила почти полная потеря коркового вещества, которое было представлено лишь островками лимфоцитов на периферической части долек. В то же время среди элементов мозгового вещества часто выявлялись очаговые лимфоидноклеточные пролифераты. Отмечено также значительное увеличение числа телец Гассаля, которые выявлялись не только в мозговом, но и в корковом веществе.
В фабрициевой бурсе птиц опытной группы отмечено достоверное уменьшение в 1,2 раза размеров корковой зоны лимфоидных узелков по сравнению с контролем. При этом соотношение корковой и мозговой зон изменялось с 0,74±0,05 (контроль) до 0,47±0,03 (?<0,01). Плотность лимфоцитов на условную единицу площади в корковой зоне лимфоидных узелков у подопытных цыплят снижалась на 38 % по отношению к контрольным показателям ^<0,05).
Изучение микроморфометрических показателей селезенки показало, что у птиц контрольной группы соотношение белой и красной пульпы находилось в пределах 0,44±0,05, а у подопытных цыплят -0,54±0,08 ^<0,05). Одновременно в селезенке птиц опытной группы регистрировалось увеличение числа ^<0,05) и размеров ^>0,05) лим-фоидных узелков по сравнению с контролем.
При изучении плазмоцитарной реакции у птиц опытной группы мы отмечали достоверное повышение в 1,2 раза общего числа плазмоци-тов по сравнению с контрольными показателями. Рост достигался главным образом за счет увеличения количества бластных форм клеток.
При исследовании мазков крови подопытных цыплят выявлены существенные структурные изменения всех форменных элементов, но особенно - клеток эритроидного и тромбоцитарного ростков. Так, заражение цыплят цирковирусом приводило к появлению патологических форм эритроцитов, имеющих малые размеры, конденсированный хроматин ядра и перинуклеарные зоны просветления в цитоплазме. Отдельные клетки принимали неправильную форму (округлую или, наоборот, удлиненную с заостренными полюсами). Часто выявлялись эритроциты на разных этапах апоптоза (рис. 1).
Рис. 1. Мазок крови цыпленка опытной группы. Формирование апоптозного тельца: 21-й день после инокуляции цирковируса. Окраска по Романовскому - Гимза. Olympus BX-51. Микрофото. Ув.: х 1200: 1 - апоптозное тельце; 2 - эритроциты; 3 - тромбоцит 335
В отдельных мазках визуализировались эритроциты, имеющие ок-сифильные перинуклеарные цитоплазматические включения. Компен-саторно-репаративные процессы со стороны эритроидного ростка характеризовались появлением в мазках большого числа незрелых форм клеток - эритробластов, базофильных, полихроматофильных и окси-фильных нормоцитов (рис. 2, 3).
Рис. 2. Мазок крови цыпленка опытной группы. 21-й день после заражения цирковирусом. Окраска по Романовскому - Гимза. Olympus BX-51. Микрофото. Ув.: х 1200:
1 - эритробласт;
2 - эритроциты; 3 - лимфоцит
Изменения со стороны клеток тромбоцитарного ряда характеризовались появлением крупных экземпляров округлой формы, имеющих выраженную вакуолизацию цитоплазмы и мелкие оксифильные гранулы вокруг ядра (рис. 4).
Рис. 4. Мазок крови цыпленка опытной группы. 21-й день эксперимента - набухание цитоплазмы тромбоцитов с появлением в ней вакуолей и оксифиль-
ных гранул. Окраска по Романовскому - Гимза. Olympus BX-51. Микрофото. Ув.: х 1200:
1 - тромбоциты;
2 - эритроциты;
3 - лимфоциты
Инокуляция цыплятам цирковируса приводила также к появлению в крови больших зернистых лимфоцитов, имеющих морфологические признаки естественных киллерных клеток. Кроме того, в мазках крови цыплят опытной группы часто выявлялись плазматические клетки различной степени зрелости. Лейкограмма подопытных птиц характеризовалась достоверным уменьшением по сравнению с контролем числа эозинофилов, а также различных форм клеток псевдоэозинофильного ряда. Кроме того, в мазках крови цыплят подопытной группы часто выявлялись гранулоциты в состоянии апоптоза.
Заключение. При заражении цыплят вирусом инфекционной анемии структурные изменения характеризуются: атрофией кроветворных островков, аплазией эритроцитарного и гранулоцитарного рядов в костном мозге; уменьшением размеров и делимфатизацией коркового вещества, увеличением числа и размеров телец Гассаля в мозговом и корковом веществе долек в тимусе; сужением корковой зоны лимфоидных узелков в бурсе Фабрициуса.
Основные морфологические изменения в крови подопытных птиц отмечаются со стороны эритроцитов (уменьшение размера клеток с конденсацией хроматина и просветлением цитоплазмы, появление уродливых форм, развитие апоптоза) и тромбоцитов (увеличение размеров клеток, вакуолизация цитоплазмы с появлением в ней окси-фильных гранул). Компенсатарно-приспособительные и регенераци-онные процессы при экспериментальной цирковирусной инфекции характеризуются активизацией лимфоидного кроветворения в костном мозге, развитием очаговых лимфоидных пролифератов в мозговом веществе долек тимуса и новообразованных лимфоидных узелков в бурсе Фабрициуса, расширением белой пульпы, увеличением числа лимфоидных узелков, а также усилением бласттрансформации лимфоцитов и плазматизации в селезенке, появлением бластных и незрелых форм эритроцитов, зернистых лимфоцитов, а также плазматических клеток в крови.
ЛИТЕРАТУРА
1. Болотников, И.А. Гематология птиц / И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев. - Л.: Наука, 1980. - 115 с.
2. Гусева, Е.В. Инфекционная анемия цыплят: обзор литературы / Е.В. Гусева, Т.А. Сатина, Т.А. Фомина // ВНИИЗЖ. - Владимир, 1997. - 72 с.
3. Инфекционная анемия цыплят / А.С. Алиев [и др.] // Ветеринарная медицина. -2011. - № 1. - С. 49-53.
4. Карпуть, И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных / И.М. Карпуть. - Минск: Ураджай, 1986. - 183 с.
5. Коленкин, С.М. Основные правила исследования пунктата костного мозга / С.М. Коленкин, А.И. Михеева // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - N° 2. -С. 41-43.
6. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли; под ред. В.В. Португалова; пер. с англ. И.Б. Краснов [и др.]. - М.: Мир, 1969. - 645 с.
7. Луппа, Х. Основы гистохимии / Х. Луппа; под ред. Н.Т. Райхлина; пер. с нем. И.Б. Бухвалова, Е.Д. Вальтер. - М.: Мир, 1980. - 343 с.
337
8. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. -Ленинград: Медицина, 1969. - 432 с.
9. Микроскопическая техника: руководство / Д.С. Саркисов [и др.]; под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Петрова. - М.: Медицина, 1996. - 544 с.
10. Серологический мониторинг инфекционной анемии цыплят и молекулярно-биологическая характеристика изолятов вируса / В.А. Лобанов [и др.] // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2003. - № 2. - С. 66-69.
УДК 636:2:619:618-002(047.31)
КОМПЛЕКСНОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ С АСПАРАГИНОВОЙ АМИНОКИСЛОТОЙ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОРОВ С ПОСЛЕРОДОВЫМ ЭНДОМЕТРИТОМ
П.А. КРАСОЧКО, Т.В. СНИТКО УО «Гродненский государственный аграрный университет» г. Гродно, Республика Беларусь, 230008
(Поступила в редакцию 29.02.2012)
Введение. На первом этапе получения продуктов питания стоит животноводство. Для выполнения данной задачи предстоит значительно повысить продуктивность животных. Интенсивное развитие животноводства возможно при условии получения здорового приплода и сохранения всего молодняка и маточного поголовья. Это одна из главных задач животноводства, имеющая большое значение в обеспечении населения продуктами питания животного происхождения и промышленность сырьем.
Одним из главных недостатков, тормозящих развитие животноводства, является бесплодие коров. Из множества причин, вызывающих бесплодие и снижающих темпы воспроизводства животных, особое место занимают осложнения послеродового периода, а преобладающей патологией у коров является послеродовой эндометрит. Воспаление слизистой оболочки матки у крупного рогатого скота в послеродовой период - одна из самых распространенных патологий в большинстве животноводческих хозяйств. Клинической формой заболевания болеет каждая третья корова, в высокопродуктивных стадах диагностируют заболевание у 70-80 % животных. Субклинические эндометриты регистрируются у 70 % бесплодных коров.
Данное заболевание чаще регистрируется в хозяйствах, где отсутствует активный моцион, роды проходят в условиях скотного двора, а акушерская помощь оказывается нередко, с нарушением правил асептики и антисептики [9, 13, 14].
Послеродовой эндометрит наносит ощутимый экономический урон, который складывается из снижения репродуктивной способности животного, молочной продуктивности и качества молока и повышения затрат на лечение. На данный момент создано и применяется много
338
