CC BY
350
ке крови методами ИФА с использованием наборов DiaSys (Германия), Biolaboj (Франция), Human (Германия), «Bender MedSystems» (Австрия) на приборах Alpha Prime фирмы Meredith Diagnostics (Англия) и «Anthos 2020» (Австрия). Исследование маркеров производили при поступлении больных в стационар и на 7-е и 14-е сутки после радикального оперативного вмешательства. Группу сравнения составили 15 практически здоровых лиц мужского пола в возрасте от 20 до 55 лет. Полученные данные обработаны статистически с использованием t-критерия Стьюдента.
Величины изучаемых параметров в группе сравнения соответствовали референтным величинам. Анализ содержания растворимых молекул адгезии у больных хроническим остеомиелитом выявил достоверное увеличение уровня slCAM (до 1,94±0,55 нг/мл,р < 0,01) и sVCAM (до 1,94±0,58 нг/мл, р < 0,01), амилоида А до1,64±0,36 нг/мл (р > 0,05), С-реактивного белка до 1180,4±22,6 мг/л (р < 0,001), нео-птерина до 53,7±5,6 нмоль/л (р < 0,001), ИЛ-4 до 15,6±0,9 пг/мл (р < 0,05), ИЛ-6 до 25,4±1,2 пг/мл (р < 0,05), ФНО-а до 32,7±1,2 пг/мл (р < 0,05). После оперативного вмешательства на 7-е сутки уровни изучаемых параметров были
- sICAM -0,59±0,26 нг/мл; sVCAM -0,58±0,37 нг/мл; сывороточный амилоид А - 1,29±0,14 нг/мл; С-реактивный белок
- 195,5±62,9 мг/л. Через 14 сут все показатели приближались к референтным величинам.
У пациентов имело место обострение хронического остеомиелита, при котором существует тесная взаимосвязь между повреждением эндотелиальных клеток, нарушением Т-клеточной иммунорегуляции и хроническим воспалением сосудистой стенки.
Б. Г. Яровинский, М. А. Вандышева. Продукция цитоки-нов в культуре клеток при почесухе взрослых. ГБОУ ВПО Челябинская ГМА Минздравсоцразвития РФ
Почесуха взрослых (ПВ) - аллергодерматоз, характеризующийся приступообразно появляющимися на любом участке кожного покрова зудящими отечными папулами, волдырями, папуловезикулами. Иммунологическим нарушением при ПВ является дисбаланс Th1- и 1Ъ2-субклассов Т-лимфоцитов в пользу последних.
Цель исследования - исследовать продукцию некоторых цитокинов in vitro при почесухе взрослых.
В исследовании использована методика культивирования клеток-предшественников грануломоноцитопоэза периферической крови у 8 больных ПВ в фазе обострения, а также у 8 доноров in vitro. Содержание некоторых цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-17, ИЛ-Щ ИНФ-а, ИНФ-у) исследовали в супернатантах клеточной культуры через 7 и 12 сут культивирования, методом им-муноферментного анализа на ИФА-анализаторе Micro Reader 4 (Hyperion, США). Использовались наборы реактивов ЗАО «Вектор Бест». Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы BIOSTAT, критерий Вилкоксона.
При сравнении с контролем концентрации цитокинов в супернатантах 7-дневной культуры достоверные изменения получены в содержании ИНФ-у в 12-дневной культуре - ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-ф. Существенной разницы в содержании остальных цитокинов нами обнаружено не было.
Полученные результаты делают необходимым дальнейшее изучение иммунологических особенностей ПВ.
СТАНДАРТИЗОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА МОЧИ
В. В. Меньшиков. Стандартизация технологий для клинических микробиологических исследований. Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздравсоцразвития РФ
Лабораторные диагностические исследования осуществляются в чрезвычайно изменчивой среде биологических материалов организма человека, пораженного патологическим процессом, и преследуют цели объективной оценки не менее изменчивых биологических объектов эндогенного и экзогенного происхождения: химических соединений и клеточных элементов разнообразной структуры и свойств, микроорганизмов различного вида и рода. Поэтому выбор и обеспечение постоянных, проверенных условий лабораторного исследования для получения аналитически, биологически и клинически достоверной информации являются настоятельной необходимостью современной лабораторной медицины во всех ее разделах.
В микробиологии ситуация осложняется особенно высокой изменчивостью объектов исследования - микроорганизмов и их чувствительностью к малейшим изменениям в условиях проведения исследования: состава питательной среды, температуры, реакции среды, наличия влияющих веществ и т. п. Данные внешней оценки качества лабораторных исследований постоянно доказывают наличие реальных трудностей в достижении адекватных результатов микробиологических исследований во многих российских клинико-диагностических лабораториях. Поэтому разработка стандартизованных аналитических технологий для микробиологических исследований является важным делом сообщества специалистов клинической микробиологии. В отечественной практике применяется ряд нормативных документов статуса методических рекомендаций. Международный опыт также свидетельствует об
усилиях на этом пути. В ряде стран изданы стандарты выполнения ряда микробиологических исследований. Росстандарт утвердил и ввел в действие ГОСТ Р ИСО 20776-2010, часть 1 «Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни», и часть 2 «Оценка эксплуатационных характеристик устройств для испытания антимикробной чувствительности», ГОСТ Р ЕН 12 322-2010 «Изделия медицинские для диагностики in vitro. Питательные среды для микробиологии. Критерии эксплуатационных характеристик питательных сред». Стандартизации условий преаналитического этапа микробиологических исследований способствует выполнение положений ГОСТ Р 53079.4-2008 «Технологии медицинские лабораторные. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа».
Задача заключается в том, чтобы на основе имеющихся данных разработать четкие и реальные установки стандартизованных аналитических технологий для клинико-диагностических лабораторий, выполняющих микробиологические исследования патогенов в различных биологических материалах, неукоснительное следование которым способно обеспечить получение надежных результатов, позволяющих клиницистам принимать правильные и своевременные лечебные решения.
Б. Ф. Шуляк. Оптимизация бактериологического анализа мочи в соответствии с международными стандартами. ООО «ГЕМ», Москва
Бактериологический анализ мочи в отечественных лабораториях проводят в соответствии с нормами, изложенными в Приказе № 535 Минздрава СССР от 22.04.85 г. В нем точно
СТАНДАРТИЗОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА МОЧИ
сформулированы цель анализа и пути ее достижения. Однако опыт российских и зарубежных медицинских специалистов, приобретенный в последующий за выходом данного приказа период, обусловил необходимость внесения в регламент бактериологического анализа мочи ряда существенных изменений. В связи с этим Научное общество специалистов лабораторной медицины создало рабочую группу по разработке Стандартизованной технологии «Бактериологический анализ мочи», в состав которой вошли также эксперты нашей компании.
Анализ периодической литературы и зарубежной нормативной документации по современным подходам к бактериологическому анализу мочи, в т. ч. Руководства по анализу мочи Европейской Конфедерации Лабораторной Медицины (ECLM, 2000), Рекомендаций Британской Ассоциации Инфекционистов (BIA, 2011) и Национального стандарта Великобритании BSOP 41 (NHS, 2009), показал, что в последние 20 лет произошла переоценка роли ряда микроорганизмов в патогенезе болезней мочевой системы. К основной группе уропатогенов, помимо E. coli, стали причислять S. saprophiticus. Остальные бактерии, вызывающие инфекции мочевыводящих путей, в зависимости от патогенетического потенциала стали делить на второстепенные и сомнительные уропатогены.
Истинную бактериурию дифференцируют от случайной контаминации мочи на основании повторной изоляции микроорганизма либо признания его титра диагностическим. Раньше считали, что он должен быть > 105 КОЕ/мл, но в последующем было доказано, что его величина колеблется от 102 до 105 КОЕ/мл в зависимости от клинического состояния пациента, наличия в пробе мочи 1 или нескольких микроорганизмов, а также их патогенности.
В связи с быстрым размножением бактерий в пробах мочи необходимо максимально сокращать преаналитический период (до 2 ч при комнатной температуре). На практике данное условие трудно выполнить, что затрудняет правильную интерпретацию результатов бактериологического анализа мочи. Поэтому мы сочли необходимым включить в Стандартизированную технологию рекомендацию о применении средств (дипстрик и др.), позволяющих проводить немедленный посев мочи после ее взятия.
Применение новых сред (CLED, хромогенных и др.) значительно расширяет возможности лабораторий, ускоряет и облегчает изоляцию, а также идентификацию уропатогенов. И хотя многими из них и сейчас широко пользуются в отечественных лабораториях, но необходима их «легализация» посредством включения в стандартизованную технологию.
Претерпели изменения и подходы к оценке чувствительности к антибиотикам выделенных из мочи бактерий, в частности появились Е-тест и микропланшетные системы.
Одноразовые контейнеры, бактериологические петли с дозированным отбором проб, пастеровские и градуированные пипетки, чашки Петри и т. д. прочно вошли в рутинную лабораторную практику и облегчают проведение как преана-литического, так и аналитического периода.
С учетом вышеизложенного мы рекомендовали включить в разрабатываемый Технический стандарт упомянутые выше достижения и изменения с тем, чтобы облегчить и сделать более точным бактериологический анализ мочи, а также привести отечественную нормативную базу диагностики инфекций мочевыводящих путей в соответствие с зарубежными стандартами.
М. В. Сухорукова, И. В. Палагин, Р. С. Козлов. Разработка проекта стандартизованной аналитической технологии «Бактериологический анализ мочи». НИИ антимикробной химиотерапии ГБОУ ВПО Смоленская ГМА Минздравсоц-развития РФ
Правила проведения бактериологического исследования мочи в России регламентируются приказом Минздрава СССР № 535 «Об унификации микробиологических (бактериоло-
гических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» от 22.04.85 г. Внедрение научных достижений в практику микробиологических лабораторий, изменение требований к работе лабораторий, закрепленные в нормативных документах, утвержденных в последние десятилетия, определили необходимость создания соответствующего отраслевого нормативного документа.
Цель - разработать проект стандартизированной аналитической технологии бактериологического исследования мочи на основе имеющихся нормативных документов, руководств по лабораторной медицине и международных стандартов.
Подготовлен проект стандартизованной технологии «Бактериологический анализ мочи». Документ регламентирует проведение преаналитического и аналитического этапов исследования: показания, необходимые условия, включая требования к специалистам, оборудованию и расходным материалам, правила и методы взятия образцов, их хранения и доставки в лабораторию, оценки пригодности для исследования, методы культурального исследования и правила интерпретации полученных результатов.
Разработка и внедрение стандартизированной технологии бактериологического исследования мочи позволит обеспечить унификацию условий проведения, корректную интерпретацию результатов исследования и возможность сравнения данных, полученных в разных лабораториях.
Л. А. Кафтырева, М. А. Макарова, З. Н. Матвеева. Значение энтеробактерий в этиологии инфекции мочевыво-дящих путей. ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, Санкт-Петербург
Цель - обосновать этиологическую роль E. coli при инфекции мочевыводящих путей (ИМП), колонизирующих кишечник человека.
Изучены 96 штаммов E. coli, изолированные из фекалий детей, у которых отсутствовали клинические проявления ИМП и острых кишечных инфекций (ОКИ). В ПЦР проводили детекцию генов вирулентности E. coli: уропатогенных, вызывающих ИМП и диареегенных, вызывающих ОКИ.
Штаммы принадлежали к серогруппам О1, О4, О6, О18. На основании этих данных клиницистами был поставлен диагноз «носительство энтеропатогенных Е. coli». Использование ПЦР-технологии показало, что у всех штаммов отсутствовали гены, кодирующие способность к адгезии, инвазии, синтезу энтеротоксинов и др. , наличие которых характерно для эшерихий - возбудителей ОКИ. ПЦР-анализ выявил в геноме штаммов перечисленных серогрупп наличие генов, присущих уропатогенным эшерихиям: pap-ген, кодирующий пиелонеф-рит-ассоциированные пили (Р пили) и aer-ген, ответственный за продукцию аэробактина. Количество таких штаммов варьировало от 101 до 107 КОЕ в 1 г испражнений. Нередко такие штаммы присутствовали в испражнениях «в чистой культуре». Результаты наших исследований позволили отменить диагноз «носительство ЭПКП». Назвать таких пациентов «здоровые» было бы неправильно, т. к. они являются носителями возбудителей ИМП. Эти лица должны быть отнесены к группе повышенного риска развития бактериальных ИМП, они могут быть активными выделителями возбудителей ИМП, так как нередко содержат их в значительном количестве.
Полученные результаты свидетельствуют о необходимости в ряде случаев для повышения эффективности бактериологической диагностики ИМП использовать ПЦР-тех-нологии для обоснования этиологической значимости Е. соН. Детекция генов вирулентности позволяет дать истинную информацию о патогенных свойствах штаммов E. coli и обосновать возможность вызывать «внекишечные» заболевания, включая ИМП.
Т. И. Долгих. Перинатальная патология: потенциал лаборатории при бактериологическом исследовании мочи.
Омская государственная медицинская академия
При изучении клинико-патогенетических факторов повреждения мочевыводящей системы установлена особая роль инфекционного фактора. С целью выявления микробной обсемененности и выделения потенциального патогена проведено бактериологическое исследование мочи от 1140 женщин на разных сроках беременности. Для повышения качества преаналитического этапа сбор мочи проводился в вакуумные пробирки («BD Vacutainer», США) и в одноразовые стерильные пластиковые контейнеры с последующим применением приспособлений «Dipstreak»» (Израиль) и тест-системы «URIN system plus» («Liofilchem S. R. L., Италия), предназначенной для одновременной оценки степени бактериурии, идентификации микроорганизмов и определения чувствительности к антибиотикам. Их использование позволило снизить время выдачи результата до 24-42 ч, что удовлетворяло потребностям клинической службы, и снизить нагрузку на персонал лаборатории в 8 раз. Результаты анализа показали отсутствие роста бактерий в 37,8% случаев. Степень бактериурии менее 5 • 105 КОЕ в 1 мл отмечена в 47,83%, 5 • 105 КОЕ в 1 мл - в 4,4%, а 2 • 106 КОЕ в 1 мл - в 47,8% случаев. Установлены прямые корреляционные связи между сроком беременности, степенью бактерии, бактериальными ассоциациями (2-4 вида бактерий) и резистентностью, что позволило выделить группы риска по развитию осложнений. Enterococcus faecalis был идентифицирован в 64,71%, Escherichia coli встречалась в 17,65%, стафилококки - в 13,2% (с преобладанием Staphylococcus aureus в 9,43%, при этом 90,6% приходилось на коагулазонегативных стафилококков). Таким образом, внедрение новых методов позволяет стандартизировать преаналитический этап, обеспечить ускоренную диагностику заболеваний, повысить клиническую эффективность и значительно снизить нагрузку на персонал лаборатории.
А. А. Бойцов. Диагностические критерии оценки значимости бактериурии. ГБУВПО Северо-западный государственный медицинский университет им. И. И. Мечникова, Санкт-Петербург
При исследовании средней порции свободно выпущенной мочи необходимо учитывать ее неизбежную контаминацию при прохождении нижней трети уретры. Дифференциация случайной контаминации от истинной бактериурии проводится с использованием количественного критерия. Традиционно диагностически значимым считался уровень контаминации 105 КОЕ/мл. В последние годы неоднократно отмечалась необходимость пересмотра этого критерия. С одной стороны, из-за сложности взятия материала у женщин 100% достоверной предлагается считать бактериурию только при совпадении результатов исследований 3 проб [МУ 4.2.2039-05], с другой - считается необходимым существенно снизить уровень значимой концентрации при некоторых клинических ситуациях. Так, согласно «European Manual of Clinical Microbiology» (2012), с учетом клинических признаков и наличия лейкоцитов в моче может быть признана клинически значимой и требующей определения чувствительности к лекарственным препаратам выделенных микроорганизмов бактериурия на уровне 103 КОЕ/мл. При обнаружении стафилококков при остром цистите у женщин, по мнению S. R. Norrby, значима даже концентрация 102 КОЕ/мл, что меньше порога чувствительности метода секторного посева по Gold, используемого большинством лабораторий нашей страны.
Вышеизложенное делает. необходимым консультации врача-бактериолога с лечащим врачом, т. е. требует более тесного взаимодействия между клиникой и лабораторией для интерпретации результатов исследования.
Е. В. Алиева. Оценка эффективности этапов бактериологического исследования мочи. Кафедра клинической фармакологии, бактериологии, аллергологии и иммунологии Ставропольской государственной медицинской академии
Бактериологический посев мочи - исследование мочи,
направленное на количественное определение степени бактериурии (количества бактерий, находящихся в 1 мл мочи) при инфекциях мочеполовой системы с последующей идентификацией и определением чувствительности к антибиотикам. Данный вид исследования позволяет не только выделить патоген, но и дает возможность лечащему врачу определиться с дальнейшей тактикой назначения лекарственных средств. Поэтому очень важно строго соблюдать все этапы проведения бактериологического исследования мочи. Специалистам необходимо знать требования к проведению каждого этапа и уметь оценить эффективность каждого из них.
Первый этап - преаналитический - включает в себя взятие образцов мочи, хранение и транспортировку образцов. При его проведении необходимо учитывать требования стандарта ГОСТ Р 53079.4-2008 [7] и МУ 4.2.2039-05. Этот этап самый важный, так как от качества проведения зависит конечный результат. Его эффективность определяется несколькими моментами: разъяснением пациенту правил сбора мочи, квалификацией персонала, осуществляющего сбор мочи, а также использованием современных транспортных систем. В настоящее время существует несколько методик хранения и транспортировки мочи. Из них наиболее эффективными являются методики, сочетающие хранение и первичный посев. Они позволяют медицинским работникам, не имеющим навыков бактериологической работы, уже у постели больного сделать посев мочи на питательные среды, что значительно облегчает работу бактериологов и улучшает качество проводимого исследования.
Второй этап - аналитический (лабораторный) включает в себя:
- предварительную оценку наличия бактерий в моче. Выполняется по запросу лечащего врача в экстренных ситуациях как первый этап диагностического поиска, а также в качестве скрининга отдельных категорий пациентов и определения показаний для дальнейшего обследования;
- бактериологическое (культуральное) исследование мочи. Это основной этап, эффективность проведения которого зависит от квалификации сотрудников бактериологической лаборатории, а также от качества расходного материала и оборудования, которые используются при проведении этой работы;
- интерпретацию результатов бактериологического исследования мочи. Эффективность проведения этого этапа зависит от того, насколько тесно взаимодействуют бактериологи и лечащие врачи. При интерпретации результатов следует учитывать следующие критерии: наличие клинических проявлений ИМП; соблюдение стандартных процедур взятия, транспортировки образца, культурального исследования (объем инокулированного образца и техника посева); результаты отдельных лабораторных исследований - количество патогенов (моно- или смешанная культура), уропатогенность отдельных видов, частоту их выделения из мочи;
- определение чувствительности выделенных возбудителей к АМП проводится в соответствии с действующими нормативными документами (МУК 4.2.1890-04).
Е. В. Галеева, О. Ю. Самарина. Опыт применения тест-систем ДипСтрик для бактериологического экспресс-анализа мочи на этапе стандартизованной технологии «Бактериологический анализ мочи». ГУЗ Детская городская клиническая больница № 9 им Г. Н. Сперанского, Москва
Цель - оценить использование тест-системы «ДипСтрик» в стандартизованной аналитической технологии «Бактериологический анализ мочи».
Исследование было выполнено на базе бактериологической лаборатории. Технологический поток бактериологического исследования мочи состоял из преаналитического этапа с учетом требований стандарта ГОСТ Р 53079.4-2008(7) и МУ 4.2.2039-05(6), аналитического этапа(лабораторного). Использовались стандартные для микробиологической лабо-
СТАНДАРТИЗАЦИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ
ратории оборудование, реагенты и материалы, имеющие сертификат качества и действующий срок годности. Применялись стандартные питательные среды для культивирования микроорганизмов, комплект для экспресс-диагностики мочи. Видовая принадлежность уропатогенов и чувствительность к АМП определялась на анализаторе Укек 2 (ВюМепеих). Интерпретация результатов проводилась с учетом этиологической значимости, количества, степени патогенности уро-патогенов и частоты их выделения при ИМВП (инфекции мочевыделительных путей).
Было исследовано 266 образцов мочи от детей с ИМП из отделения урологии. Образцы мочи до назначения АБТ, согласно инструкции по забору материала, отбирались в универсальные одноразовые контейнеры методом, назначенным врачом-клиницистом в каждом конкретном случае. Из контейнера производился забор материала в пробирку системы Уасишпег (для микроскопии осадка) и посев на систему «ДипСтрик». После оформления сопроводительного направления, согласно утвержденной форме (строго указано время забора материала), образцы доставляли в лабораторию. Аналитический этап включал: 1. Метод предварительной оценки наличия бактерий в моче (микроскопия осадка на анализаторе ЦБ 10001); 2. Метод культурального исследования мочи традиционным методом (несекторный посев на кровяной агар и Уриселект 4) и сопоставление полученных результатов с результатами тест-системы «ДипСтрик». Результаты учитывали через 24-48 ч после инкубации при 35-370С. Из 266 образцов мочи, посеянной обычным несекторным методом и методом ДипСтрик, был получен результат «роста нет» в
74 и 76% соответственно. Образцы мочи, «отрицательные» при исследовании на наличие микроорганизмов на анализаторе UF 1000i, показали результат «роста нет» при посеве, выполненном как традиционным методом, так и экспресс-методом «ДипСтрик». Уропатогены при традиционном методе посева и посева методом «ДипСтрик» выделялись соответственно: E. coli 57% и 55%; Kl. Pneumoniae 12 и 11,8%; E. faecalis - 20 и 19%; E. faecium 4 и 3,5%; Ps. aerugenosa - 3,1 и 2,9%; S. aureus - 3,1 и 3,0%; S. Saprophyticus - 2,5 и 2,5%; P. mirabilis - 1,5 и 1,5%; P. vulgaris - 1 и 1%. Степень бакте-риурии выделенных уропатогенов при традиционном методе посева и ускоренном методе посева на «ДипСтрик» составила соответственно: 10*2-2,9% и 3,0%; 10*4-42% и 42; 10*5-50% и 50,5; 10*6-4,4 и 5%.
Таким образом, при исследовании мочи традиционным культуральным методом и экспресс-методом «ДипСтрик» были получены сопоставимые результаты. Ускоренный метод культуральной диагностики МВП при помощи тест-системы «ДипСтрик» обеспечивает высокую чувствительность и специфичность для негативных образцов и с ростом первичных патогенов (Е. coli, Р. mirabilis, Enterococcus spp) в количестве 10*4, 10*5, 10*6. Высокая бактериальная концентрация (10*7 и >) предполагает субкультивирование для последующей идентификации. На основе особенностей роста и результатов ориентировочной или окончательной (для Е. coli) идентификации выросших на тест-системе «ДипСтрик» колоний, по результатам микроскопии осадка, определению лейкоцитов диагноз ИМВП может быть уверенно установлен и назначена адекватная АБТ в течение первых 24 час.
СТАНДАРТИЗАЦИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ
А. Е. Гущин, Г. А. Шипулин. Особенности стандартизации молекулярных методов в диагностике инфекций, передаваемых половым путем. ФБУН ЦНИИ эпидемиологии, Москва
В настоящее время для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, все чаще используются молекулярные методы. Так, для Mycoplasma genitalium ПЦР - единственный метод диагностики, доступный в рутинной практике, для Chlamydia trachomatis - предпочтительный метод диагностики (в соответствии с международными рекомендациями). Из всех используемых методов выявления Neisseria gonorrhoeae и Trichomonas vaginalis ПЦР обладает наибольшей диагностической чувствительностью.
Метод ПЦР является универсальным для обнаружения различных возбудителей инфекций, передаваемых половым путем. Однако методологические различия преаналитиче-ского и аналитического этапов могут препятствовать адекватной интерпретации получаемых результатов, а также участию лабораторий в совместных клинических и научных исследованиях.
Система стандартизации молекулярных методов диагностики представляет собой интегрированную систему, все компоненты которой направлены на выявление методических и/или технических нарушений, которые могут повлиять на аналитическую и соответственно диагностическую чувствительность исследования. Такие нарушения могут происходить на любом из этапов анализа: взятие клинического материала, экстракция нуклеиновых кислот, амплификация, интерпретация и учет данных в качественном и количественном формате.
В докладе будут представлены детальные практические рекомендации по стандартизации молекулярных методов диагностики на всех этапах исследования материала.
Д. А. Куевда, Д. Е. Киреев, Г. А. Шипулин. Опыт разработки стандартизированной технологии лабораторного анализа вирусной нагрузки ВИЧ и вирусных гепатитов с использованием молекулярно-биологических технологий. ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва
В настоящее время в Российской Федерации отсутствуют единые нормативные требования к обеспечению качества и единообразия проведения молекулярно-биологических исследований. Оценка вирусной нагрузки ВИЧ и вирусов гепатита В и С представляет современный и востребованный вид лабораторного исследования, результаты которого существенно влияют на проводимую терапию. В связи с этим нами была поставлена цель разработки стандартизированной технологии лабораторного анализа вирусной нагрузки, которая позволит установить единые требования при выполнении данного вида исследования в клинико-диагностических лабораториях (КДЛ) медицинских учреждений и достичь унификации результатов.
Разрабатываемая стандартизированная технология включает раздел, описывающий требования к обеспечению выполнения технологии: требования к персоналу, требования к обеспечению безопасности труда, материальные ресурсы, необходимые для выполнения исследования, в том числе оборудование, реактивы и расходные материалы. Раздел, описывающий характеристики методик выполнения технологии, включает взятие образцов для анализа, рекомендованные бланки направления на исследование, оценку качества образца, проведение предобработки образца, экстракции нуклеиновых кислот, проведение реакции амплификации и детекции результатов. Следующие разделы описывают правила регистрации результатов и обеспечение качества выполнения технологии, включая внутрилабораторный контроль
