CC BY
60
УДК 619:616.995.122:636.611.018
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЙ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЖЕЛТОЧНЫХ КЛЕТОК ТРЕМАТОД ЕиЯУТЯЕМЛ РЛМСЯЕЛТ1СиМИ СОЯЯЮ1Л СОЯЯЮМ
Л.В. НАЧЕВА доктор биологических наук В.М. ГРЕБЕНЩИКОВ кандидат биологических наук
Кемеровская государственная медицинская академия
Установлены возрастные изменения желточных клеток трематод Еигу^вша рапстаИсит и Corrigia cоrrigia, которые выражались формированием желточных гранул. Обнаружено наличие небольшого количества железа, гексозаминогликанов, мелких зерен гликогена в цитоплазме желточных клеток; гликопротеинов, основных и кислых белков в скорлуповых гранулах.
Желточники трематод представлены фолликулами, общий план строения которых у многих видов трематод изучен ранее (1, 3, 6, 9, 10). Отложение гликогена в желточниках идет различными путями (2). Большинство исследователей не обнаружили гликогена в желточных клетках (8). По данным гистохимических тестов доказано, что скорлуповые гранулы дикроцелий состоят из основных белков с SS- и SH-группами (7).
Разноречивые данные по микроморфологии и гистохимии дали повод для проведения сравнительного морфофункционального анализа желточ-ников и желточных клеток трематод в возрастном аспекте.
Материалы и методы
Для настоящей работы были взяты трематоды Eurytrema pancreaticum (Janson, 1889) из протоков поджелудочной железы овец и коров и Corrigia corrigia (Strom, 1940) из протоков
поджелудочной железы кекликов при экспериментальном заражении. Материал был собран в НИИ Зоологии АН Казахстана г. Алма-Аты под руководством В.Я. Панина и обработан с использованием стандартных гистологических и гистохимических методов: гематоксилином - Карацци-эозином по Маллори, бромфеноловым синим на белки (БФС) и Кумасси-бриллиантовым синим (по Начевой Л.В., 1993), ШИК-реакции на гликоген и мукопротеиды с соответствующим контролем, толуидиновым синим (ТС) для выявления гликозаминогли-канов. Для выявления ДНК использовали реакцию Фельгена с применением холодного гидролиза (по Логачёву, 1965), для выявления трехвалентного железа - окраску по Перлсу с применением желтой кровяной соли. К гистохимическим реакциям были поставлены соответствующие химические (метилирование, деметилирование, сульфатирование) и ферментативные
контроли с амилазой и диастазой слюны.
Результаты и обсуждение
Результаты сравнительного мик-роморфологического анализа динамики развития желточных клеток корри-гий показали, что желточники корри-гий 30-дневного возраста не представляют собой типичные фолликулы. Они состоят из групп желточных клеток двух типов: незрелых, размером 0,0046-0,0054 мм в диаметре с ядром 0,0031-0,0035 мм, и зрелых, диаметр которых равен 0,0092-0,0085 мм, а ядро 0,0038-0,0046 мм, реже 0,0054 мм. Данные клетки располагаются в фолликулярной группе в разных частях. По периферии этих групп происходит размножение желточных клеток путем митоза, фазы которого удалось обнаружить (5). Ближе к центру фолликулярной группы появляются зрелые клетки, имеющие желточные гранулы, за счет чего цитоплазма клеток имеет желтоватый цвет, а при окраске по Маллори желточные гранулы приобретают оранжево-желтый цвет, что свидетельствует о липопротеиновом характере. Размеры гранул меньше 0,00075 мм.
Желточники корригий 45-дневного возраста представляют собой незрелые фолликулы, которые окружены волокнами паренхимы и не имеют четких границ. Поперечный диаметр фолликулов в пределах от 0,054 до 0,077 мм. Клетки фолликулов имеют округлую форму, мелкосетевидную цитоплазму, размер в диаметре составляет 0,0115 мм. Ядра имеют хорошо выраженные зерна хроматина размером 0,0054-0,0062 мм. Цитоплазма клеток содержит желточные
гранулы размером 0,00077-0,0012 мм. Они накапливаются и, очевидно, вместе с желточными клетками поступают в начальные отделы матки.
Желточники корригий 90-дневного возраста - это сформированные фолликулы, имеющие овальную форму. Они располагаются, начиная от яичников, и продолжаются вдоль задней части тела, не образуя гроздьев на всем своем протяжении. Размеры фолликулов колеблются в пределах 0,0730,077 мм. Фолликулы желточников отделены от паренхимы простой тонкой мембраной, волокна которой способны инвагинировать вглубь фолликула, состоящего из зрелых желточных клеток с большим количеством желточных гранул.
На разных этапах функциональной деятельности желточные клетки выглядят различно. В период накопления питательных веществ желточные клетки темные, так как сливаются и образуют крупные конгломераты, сдавливая и оттесняя ядро к периферии. Размер зрелой желточной клетки в диаметре 0,01115 мм, а ядра - колеблется в пределах 0,0031-0,0038 мм, что зависит от состояния клетки. Период накопления питательных веществ в желточных клетках мы определяем периодом концентрации гранул. Затем клетка поступает в проток и начальные отделы матки. Если она не успевает продвинуться в проток, то оставаясь в фолликулах, продолжает накапливать желточный материал. В результате этого клетка перенасыщается и наблюдается кариорексис и распад цитоплазмы. В это момент желточные гранулы разной величины можно наблюдать вне клеток. Размеры этих гранул: мелких - 0,00077 мм,
средних - 0,0023, крупных - 0,00380,0046 мм. Причем, среди центральной части фолликулов гранулы в клетках имеют золотисто-желтый цвет, аналогичный цвету скорлупы зрелых яиц (по Маллори). По периферии гранулы более темные. В протоке обнаруживают гранулы разной формы, величины и цвета. В фолликулах и желточном протоке иногда обнаруживают гранулы грязно-желтого цвета, обладающие свойством опалесценции. Подобные, но более мелкие гранулы в виде мелкого зерна, располагаются вокруг желточников в паренхиме. Вероятно, это те гранулы или зерна, которые имеют липоидный характер, и появляются они в зрелом возрасте марит.
Желточники зрелых эуритрем состоят из нескольких фолликулов, имеющих вид кленового листа, собирающихся в один проток. Размеры фолликулов - 0,115-0,154 мм. Жел-точники окружены четко выраженной волокнистой мембраной. Клетки желточных фолликулов крупные и содержат большое количество гранул округлой формы, которые, накапливаясь в клетках желточников, впоследствии разрушают ее цитоплазму и выходят в желточный проток. Установлено, что чем старее гранулы, тем окраска их светлее, так же, как и оболочка яиц. По периферии фолликулов встречаются желточные клетки, которые содержат мало желточных гранул, и в них четко определяется ядро, богатое хроматином. Размеры ядер колеблются от 0,0046 до 0,0062 мм в зависимости от накопления желточного материала. В центральной части, ближе к протоку, в фолликулах желточные клетки имеют очень большое количество гранул, ко-
торые сдавливают ядро, деформируют его и приводят к кариорексису и ка-риолизису. Это свойственно для перезрелых клеток, которые появляются как результат невозможной своевременной реализации их в отделы матки. Такие клетки способны к распаду, в результате которого в протоке обнаруживаются гранулы разной величины: мелкие - 0,00077 мм в диаметре, средние - 0,0023-0,0031, крупные -
0,0061 и более мм.
Г истохимическими исследованиями установлено, что желточники эуритрем приобретают четкие границы при постановке ШИК-реакции за счет более яркого малинового окрашивания гранул по сравнению с окружающей тканью-паренхимой. Но в паренхиме эуритрем и корригий конту-рируются обособленные, округлые, богатые гликопротеинами гранулы. По контуру располагаются мелкие зерна гликогена, яркой, темномалиновой окраски. Желточные гранулы не содержат гликоген. Небольшое количество гликогена можно определить в желточных клетках между гранулами в виде мельчайших, точечных зерен.
При окрашивании на белки желточные клетки, в особенности гранулы, приобретают интенсивно синий цвет с зеленоватым оттенком, что свидетельствует о накоплении кислых белков. Яркое синее окрашивание скорлуповых глобул Кумасси-бриллиантовым синим в кислой рН среде свидетельствует о накоплении основных белков. Положительные ШИК-реакция и Кумасси подтверждают гликопротеиновую природу этих гранул. Обнаружено, что желточные клетки содержат некоторое
количество железа, на что ранее уже указывалось (4) при исследовании распределения железа в тканях трематод, в частности, эуритрем.
В цитоплазме желточных клеток зрелых корригий происходит положительная реакция Перлса за счет наличия небольшого количества железа. Ядра клеток выделяются на фоне зеленоватой цитоплазмы темным цветом окрашивания хроматинового материала. Степень окраски ядер дает возможность определить функциональное состояние желточных клеток. Мета-хроматических явлений при окраске толуидиновым синим обнаружить не удалось, а ортохроматическое окрашивание свидетельствует об общем скоплении гексозаминогликанов в цитоплазме желточных клеток. Максимально окрашиваются ядра молодых клеток, минимально - ядра зрелых клеток. Важно отметить, что при ок-
рашивании по Маллори структуры, приобретающие оранжево-красную окраску, содержат большое количество белковых комплексов с липидами. В желточных клетках эуритрем и кор-ригий это касается гранул, особенно тех, которые накапливаются в желточном протоке.
В заключение следует отметить, что желточники трематод E. pancreati-cum и C. corrigia обладают однотипным строением и функциями. Микро-морфологические исследования в динамике показали возрастные изменения желточных клеток, которые выражаются формированием желточных гранул. Гистохимически установлено наличие небольшого количества железа, гексозаминогликанов, мелких зерен гликогена в цитоплазме желточных клеток; гликопротеинов, основных и кислых белков в скорлуповых гранулах.
Литература
1. Ахметов А. А. Микроморфология и гистохимия половой системы некоторых видов трематод: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Алма -Ата, 1990. - 27 с.
2. Гинецинская Т.А., Люкшина Л.Ш. // Экол. и эксперимент. паразитол. -Л., 1979. - № 2. - С. 11-18.
3. Гребенщиков В.М. Микроморфологические и гистохимические исследования половой системы и гаметогенеза некоторых трематод в норме и при действии антигельминтиков: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Алма -Ата, 1984. - 20 с.
4. Начева Л.В., Гребенщиков В.М. // Профилактика, диагностика и лечение заболеваний человека. - Кемерово, 1980. - С. 359-362.
5. Начева Л.В., Панин В.Я. // Матер. докл. VII науч. конф., посвящ. теорет. и практ вопр. общ. и эколог. паразитол. - Кемерово, 1984. - С. 20-23.
6. Шаймарданов Ж.К. // Тр. Ин-та Зоологии АН Каз. ССР. - Алма-Ата, 1984. - 7 с. Деп. в ВИНИТИ N 6218 - 84.
7. Шаймарданов Ж.К., Панин В.Я. // Успехи соврем. биол. - М., 1989. -Т. 18, 2(5). - С. 310-320.
8. Burton P.R. // Exp. Zool. - 1963. - V. 154. - P. 247-258.
9. Gupta B.C., Parshad V.R., Guraya S.S. // J. Helminthol. - 1987. - V. 61, N 4. - P. 297-305.
10. Tulloch G.S., Shapiro T.E. // J. Parasitol. - 1957. - V.43, N 6. - P. 628-632.
Comparative micromorphological and histochemical analysis of vitelline cells of trematodes Eurytrema pancreaticum and Corrigia corrigia
L.V. Nacheva, V.M. Grebenshchikov
Age changes of vitelline cells of trematodes Eurytrema pancreaticum and Corrigia corrigia which were expressed by formation of vitelline granules are established. Presence of small amount of iron, hexosaminoglycanes, fine grains of glycogen in cytoplasm of vitelline cells; glycoproteins, the basic and sour fibers in shell granules are revealed.
