CC BY
352015, т. 5, №4 (20)
крымский журнал экспериментальной и клинической медицины
УДК: 579:616.992.282:615.282
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ВИДОВОГО СОСТАВА И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИМИКОТИКАМ ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ЗДОРОВЫХ ЛИЦ
В ГОРОДЕ СИМФЕРОПОЛЕ
Л. А. Шевкопляс, М. А. Кирсанова, Ю. А. Шабалин, И. Б. Андроновская
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
Медицинская академия имени С. И. Георгиевского
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»
Адрес переписки: бул. Ленина 5/7, г. Симферополь, 295006, Республика Крым, Российская Федерация
E-mail: mila.shevckoplyas.yandex.ru
РЕЗЮМЕ
В работе проведен анализ видового состава и чувствительности к антимикотикам грибов рода Candida, полученных от здоровых лиц в городе Симферополе в 2005 и 2015 гг. Выявлено, что частота выделения грибов рода Candida от здоровых лиц в 2015 г как и в 2005г. составила около 10%. Выявлено снижение чувствительности к нистатину и повышение чувствительности к клотримазолу у изолятов 2015 г. по сравнению с изолятами грибов, полученных в 2005 г.
COMPARATIVE ANALYSIS OF DIVERSITY AND ANTIMYCOTIC SENSITIVITY OF
CANDIDA SPP. ISOLATED FROM HEALTHY INDIVIDUALS IN 2005 AND IN 2015 IN
SIMFEROPOL
L. A. Shevkoplyas, M. A. Kirsanova, Yu. A. Shabalin, Yu. L Krivorutchenko, I. B. Andronovskaya
RESUME
The diversity of Candida spp. and their sensitivity to antifungal drugs have been analyzed in species isolated from healthy people in Simferopol in 2005 and in 2015. It is revealed that Candida spp. are being isolated from about 10% of individuals in 2005 and in 2015. The drug sensitivity has been studied in both groups of isolates. Decreased incidence of nystatin sensitivity, and elevated incidence of clotrimazole sensitivity has been determined for Candida spp. isolated in 2015 in comparison with those, isolated in 2005.
Ключевые слова: Кандидоз, чувствительность к антимикотикам, видовой состав.
Кандидоз, оппортунистический микоз, вызываемый грибами рода Candida, является актуальной проблемой современной медицины. Связано это с большой распространенностью иммунодефицитных состояний, в том числе ятрогенных. Грибам рода Candida (всего около 200 видов) присуща повсеместная распространенность среди населения и в окружающей среде. Наиболее частым возбудителем канди-доза остается C. albicans, однако наблюдается тенденция к увеличению вклада в патологию других видов, среди которых чаще встречаются C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, C. kefir, C. sake и C. lusitaniae. Соотношение между видами Candida (Candida spp.) у пациентов с различной первичной/основной патологией отличается. Отмечается вариабельность в распределении Candida spp. по географическим регионам и чувствительности к применяемым антифунгальным препаратам [2].
Наряду с очаговым кандидозом возрастает частота кандидемии и острого диссеми-нированного кандидоза, генерализованных форм инфекции, которые отличаются тяжестью клинических проявлений и высокой летальностью. По данным исследований, проведенных в Европе и США, наиболее высо-
кая частота смертельных случаев наблюдается при инфекциях, вызванных C. glabrata (45%), C. tropicalis (35%), C. krusei (30%) [16].
Источником инфекции являются канди-доносители и больные кандидозом люди, а также животные, предметы окружающей среды, продукты питания. По данным некоторых авторов частота кандидоносительства у здоровых лиц достигает на коже 20%, в полости рта - 25%, в кишечнике - 65-80% и значительно превышает частоту заболевания [12].
В настоящее время сообщается о неудачах лечения кандидозных поражений кожи, ногтевых пластин и слизистых оболочек и о большом проценте рецидивов заболевания. Возможной причиной этого является рост устойчивости грибов к антимикотическим препаратам [11]. Микозы являются хроническими заболеваниями и требуют длительного лечения, а некоторые грибы (в том числе представители рода Candida) могут длительно выживать в больничной среде. Бесконтрольное применение антифунгаль-ных препаратов и антибактериальных средств также приводит к ухудшению ситуации [9,15].
В начале XXI веке процесс формирования у дрожжеподобных грибов устойчивости к широко применяемым антимикотикам заметно
активизировался. Так, в исследованиях Е.И. Полищук с соавторами было показано, что среди грибов рода Candida, циркулировавших в Украине у ВИЧ-инфицированных лиц, доля штаммов, устойчивых к препаратам группы азолов была: для флюконазола - 93%, для итра-коназола - 62 % и для клотримазола 56% [13]. Эти сведения совпадали с данными учёных, которые выявили устойчивость к флюконазо-лу (дифлюкану) у 30-60 % штаммов изолятов дрожжеподобных грибов, выделенных на территории России [1]. Некоторые авторы утверждали, что в начале XXI веке чувствительность грибов сохраняется только к таким препаратам, как амфотерицин В и нистатин: 93,3% и 100% чувствительных штаммов соответственно[3,10].
Между тем, в ряде работ последних лет отмечалось уменьшение резистентности к некоторым антифунгальным препаратам. Так, в работах российских и зарубежных авторов показано, что к клотримазолу были устойчивы от 5% до 10% изученных изолятов [4, 8, 14]. Устойчивость к препаратам флюконазол и итраконазол за последние 10 лет, согласно данным литературы, существенно не менялась и оставалась высокой (40-60%). Что касается устойчивости к препарату нистатин, то одни авторы показывают высокий процент устойчивости (около 50%) [1], другие говорят о сохранении высокой чувствительности изолятов грибов к этому препарату [4,6].
В связи с этим, целью нашего исследования было сравнительное исследование видового состава и чувствительности к антимикотикам грибов рода Candida, выделенных у здоровых лиц, проживавших в городе Симферополе в 2005 и 2015гг.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
На базе кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Медицинской академии имени С.И.Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ имени В.И.Вернадского» был изучен видовой состав и исследована чувствительность к анти-микотикам грибов рода Candida, изолирован-
ных из ротовой полости здоровых лиц в городе Симферополе в 2005 и 2015 г. Было обследовано 255 и 350 студентов - медиков в 2005г. и 2015г. соответственно. Возраст обследованных был 18-20 лет. Выделение и идентификацию грибов проводили в соответствии со стандартными методиками. Биологический материал засевали на среду Сабуро и инкубировали при температуре 30°С в течение 48 ч. В последующем изучали материал из изолированных колоний, который при микроскопии определяли, как дрожжеподобные грибы. Для идентификации штаммов C. albicans проводили тест на ростковые трубки [7]. Для этого микроскопировали нативный препарат, приготовленный из культуры Candida, которую предварительно инкубировали в течение 2 ч при 37°С в жидкой среде с добавлением сыворотки крови лошади. Если тест на ростковые трубки был отрицательным, проводили полную видовую идентификацию по биохимическим показателям. Для этого определяли ферментативные свойства на средах "пестрого ряда" с использованием углеводов (глюкозы, мальтозы, сахарозы, лактозы, галактозы и трегалозы) и с помощью тест системы Auxocolor 2 (BioRad, Франция). Чувствительность грибов к антимикотикам определяли методом дисков (использовали диски производства отдела новых технологий НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург).
Статистический анализ результатов проводился с помощью программ MS Excel 5.0 и MedStat Анализ сравнения результатов проводили с помощью t - критерия Стьюдента.[5].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
По данным микологического исследования, частота выделения грибов рода Candida от здоровых лиц в 2005г. как и в 2015г. составила ме-нее10%. В 2005г. от здоровых лиц было выделено 24 изолята грибов рода Candida, что составило 9,4 %, а в 2015г. - 32 изолята, что соответствует 9,1%. Как показано на рис.1 вид C. albicans доминировал среди изолятов как в 2005г. так и в 2015г.
Сравнительная кэ со:тава грибов 2005 и
2G15-".
Рис.1 Сравнительная характеристика видового состава грибов рода Candida 2005г. и 2015г.
2015, т. 5, №4 (20)
крымскии журнал экспериментальном и клиническои медицины
Количественное соотношение отдель- и в 2015г., представлено в таблице 1. ных видов грибов, выделенных в 2005г.
Таблица 1
Соотношение частоты выделения изолятов дрожжеподобных грибов разных видов, выделенных от
здоровых людей в 2005 г. и 2015 г.
Виды Количество изолятов 2005 г n=24 Количество изолятов 2015 г. n=32
С. albicans 19 (79,2%) 28 (87,5%)
C. parapsilosis 2 (8,2%) 1 (3,1%)
C. tropicalis - 2 (6,3%)
C. zeylanoides - 1 (3,1%)
C. lusitaniae 1 (4,2%) -
C. glabrata 1 (4,2%) -
C. dubliniensis 1 (4,2%) -
Методом дисков была определена чувствительность выделенных изолятов к ряду анти-микотиков (Рисунок 2). В 2005г. устойчивость выделенных изолятов к нистатину составила 16,6%, к клотримазолу - 45,8%, к итраконазолу - 58,3% и флуконазолу - 58,3%. Устойчивость изолятов 2015 г. к нистатину составила 81,3%, клотримазолу - 12,5%, итраконазолу - 43,8% и
флуконазолу - 62,5%. При сравнении этих данных было установлено достоверное увеличение устойчивости выделенных грибов к нистатину (р<0,001) и снижение устойчивости к клотримазолу (р=0,008). Что касается чувствительности к итраконазолу и флуконазолу, различия средних значений не являлись статистически значимым (р=0,451 и р=0,758 соответственно).
Рис.2 Чувствительность к антимикотикам грибов рода Candida, выделенных в г.Симферополе от
здоровых лиц в 2005г. и 2015г. к антимикотикам
При разделении выделенных изолятов на группы С.а1Ысап$ и С.поп-а1Ысап$ были получены следующие результаты. В 2005г. 21% С.а1Ысат были устойчивы к нистатину, 47,4% - к клотримазолу, 42,1% - к итраконазолу 52,6% - к флуконазолу. При этом С.поп-аШсат, устойчивых к нистатину, выявлено не было, а устойчивость к клотримазолу и итракона-золу составила по 40%, а к флуконазолу 60%.
В 2015г. С.аШсат имела 82,1% устойчивости к нистатину, 10,7% - к клотримазолу, 39,3% - к итраконазолу и 60,7% - к флуконазолу. В свою очередь 75% С.поп-а1Ысап8 проявили устойчивость к нистатину, 50% - к клотримазолу, 75% - к итраконазолу и 75% - к флуконазолу.
Статистически достоверная разница в устойчивости изолятов была выявлена для С.а1Ысат при сравнении данных 2005 и 2015
г по препаратам нистатин и клотримазол. Для видов C.non-albicans статистически значимых отличий не выявлено как при сравнении изолятов, полученных за разные годы, так и при сравнении с группой C.non-albicans.
Выявленная сравнительно высокая чувствительность изолятов грибов, выделенных в 2015г. к клотримазолу, отмечена и в работах других российских авторов [4,8]. Однако, выявленное в данном исследовании резкое падение чувствительности грибов к нистатину, произошедшее с 2005г. по 2015г., требует дальнейшего изучения.
Полученный нами результат может отражать реальное возрастание циркуляции у жителей Крыма резистентных к нистатину штаммов, что, возможно, является результатом чрезмерного использования полиеновых антимикотиков населением. Для разрешения этого вопроса целесообразно провести исследование устойчивости изолятов грибов с помощью альтернативного количественного метода разведений с использованием препаратов нистатина разных производителей.
ВЫВОДЫ
Результаты работы продемонстрировали, что вид C. albicans доминировал среди изолятов как в 2005 г (79,2 %), так и в 2015 г (87,5 %). Также выявлен значительный рост резистентности изолятов грибов рода Candida к нистатину и снижение устойчивости к препарату кло-тримазол, что следует учитывать при выборе антифунгальной терапии. Возможно, широкое использование нистатина, как средства борьбы с кандидозами, вызвало повышение резистентности C. albicans к данному препарату.
ЛИТЕРАТУРА
1. Азизов И.С. Сравнительная оценка чувствительности к противогрибковым препаратам клинических штаммов C. albicans и C. non - albicans, выделенных при кандидозных кольпитах / И. С. Азизов, Н.А. Шамбилова, Л.С. Омарова, М.С. Сакенова, Н.Н. Наурызов // Успехи медицинской микологии. - 2015. - Т. XIV. - С. 176-179.
2. Веселов А.В. Эмпирическая терапия инвазив-ного кандидоза в отделениях реанимации и интенсивной терапии: современное состояние проблемы /А.В. Веселов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2011. - Том 13, №1. - С.
3. Данилейченко Н. А. Резистентность к противогрибковым препаратам грибов рода Candida, выделенных в г. Лисичанске Луганской области в 2009 году / Н. А. Данилейченко, О.А. Астапова, Т.А Бирукова // Внутршньо лкарняш шфекци та методи визначення механiзмiв резистентност Ух збудниш до антимiкробних препаралв: Всеукраш. наук. -практ. конф. з мiжнар.участ, 25-26 мая 2010г. м.Кив: тез. допов. - С.83-85.
4. Захарова Е.А. Устойчивость к антимикотиче-ским препаратам грибов рода Candida, выделенных из ротовой полости / Е.А Захарова, А.В. Лавриненко, И.С.Азизов // Успехи медицинской микологии. - 2015.
- Т. XII. - С. 206-208
5. Лапач С. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С. Н. Лапач, А. В. Липницкий, О. М. Очурова. - К.: Морион, 2001. - 407 с.
6. Лахтин В.М. Системная оценка резистентности и чувствительности к антимикотикам рода, видов и штаммов кандид популяционного урогенитального биотопа
- потенциальных участников кандидозов / В.М. Лахтин, А.Л. Байракова, М. В. Лахтин, С.С. Афанасьев // Успехи медицинской микологии. - 2015. - Т. XII. -С. 187-190
7. Лещенко В. М. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. /В. М. Лещенко. - Москва: Медицина, 1992г. - 142 с.
8. Марковская А.А. Оптимизация методов профилактики грибковых оппортунистических инфекций ротоглотки у лиц с иммунодефицитами / А. А. Марковская // Успехи медицинской микологии. - 2015. - Т. XIV. - С. 148-151.
9. Потекаев Н.С Кандидоз / Н.С. Потекаев, М. Н. Гаджиев М.Н. // Consilium Medicum. 2002. - Т. 4, № 5. - С. 230—233
10. Хамаганова И.В. Резистентность к противогрибковым препаратам: решение проблемы. Учебно-методическое пособие / И.В. Хамаганова, А.Э. Карамова, В.В. Кальменсон - М.: - 2006. - С. 20.
11. Шебашова Н.В. Видовое разнообразие грибов рода Candida при микозах кожи и онихомикозах / Н.В. Шебашова, И.А. Клеменова, В.В. Кальменсон // Вестник дерматологии и венерологии. - 2009. - №6. - С. 81-84
12. Шевяков М.А. Кандидоз пищевода: диагностика и современный выбор лечения // Журнал «Лечащий Врач». - 2008. - №9. - С.16
13. Полщук О. I. Чутливють до антимкоти^в дрiжджоподiбних грибiв, iзольованiх вщ ВШчнфкованих хворих / О. I. ПолЦук, А. В. Покас, Ж. Е. В'ялих та Ы. // Мiкробiол. журн. - 2007. - Т.69, № 3. - С. 37- 43.
14. Abdullah Al-mamari. Identify and sensitivity to antifungal drugs of Candida species causing vaginitis isolated from vulvovaginal infected patients in Sana'a city / Abdullah Al-mamari, Mahmoud Al-buryhi, Mohammed A. Al-heggami, Sadeq Al-hag Availabl // Pharma. Chemica. - 2014. - 6(1). -Р.336-342 http://derpharmachemica.com/archive.html
15. Cniou C. C. Esophagal candidiasis in pediatric acquired immunodeficiency syndrome: clinical manifestations and risk factors / C. C. Cniou, A. H. Groll, C.E. Gonzale at al.// Pediatr. Infect. Dis. J. - 2000. - Vol.19, №8. - Р.729-734.
16. Viscoli C. Candidemia in cancer patients: a prospective multicenter surveillance study by the invasive fungal infection group (IFIG) of the European Organization for Research and Treatment of Cancer (EORTC) / С. Viscoli, С. Girmenia , L. Marinus et al. // Clin. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 28. Р.1071-1080.
