CC BY
33
--------------1--------------1------------2------------з--------------------------------------
А.А. Фильченков , М.П. Завелевич , С.Л. Рыбалко , Д.Ю. Блохин
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЦИТОПАТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ВИРУСА
ПРОСТОГО ГЕРПЕСА ЧЕЛОВЕКА НА КЛЕТКИ JURKAT/A4 Т-ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА С ФЕНОТИПОМ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
1ИЭПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев
2НИИ эпидемиологии и инфекционных заболеваний АМН Украины, Киев 3ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохин»а РАМН, Москва
Введение. Один из возможных механизмов множественной лекарственной резистентности (МЛР) опухолевых клеток заключается в дефектах реализации в них апоптоза. Апоптоз является одним из механизмов элиминации клеток, инфицированных вирусами, в частности вирусом простого герпеса (ВПГ). Представляло интерес определить потенциал реализации эффекторных путей апоптоза при заражении ВПГ клеток с фенотипом МЛР, в которых не происходит заметной индукции апоптоза под влиянием химиотерапевтических препаратов.
Цель исследования. Сравнить чувствительность к ВПГ клеток Т-лимфобластного лейкоза человека линии Jurkat и ее клональной сублинии Jurkat/A4 с фенотипом МЛР.
Материалы и методы. Использовали клональную сублинию Jurkat/A4 полученную методом селекции при инкубации CD95+ клеток Т-лимфобластного лейкоза человека линии Jurkat с агонистическими анти-CD95 антителами (А. Соколовская с соавт., 2001). В работе использован штамм ВН ВПГ 2-го типа (ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН). ВПГ титровали по цитопатогенному действию на клетках Vero. Учет результатов титрования проводили на 3-е сутки. Клетки Jurkat и Jurkat/A4 инфицировали в дозе 3 1§ИД50 и 2 ^ИДйо Содержание гиподиплоидных клеток определяли с помощью цитофлуориметра “FACSCalibur” (“Becton Dickinson”, США). Активную форму каспазы-3 выявляли с помощью набора “Caspase-3, Active Form, mAb Apoptosis Kit: FITC” (“BD Bioscience Pharmingen”, США).
Результаты. Клетки Jurkat и Jurkat/A4 оказались чувствительными к инфицированию ВПГ. По данным титрования на клетках Vero титр ВПГ при заражении клеток Jurkat и Jurkat/A4 составил, соответственно, 10-3 и 10-4,5. Инфицирование ВПГ увеличивало содержание гиподиплоидных клеток примерно на 30 % в культуре Jurkat и 25 % в культуре Jurkat/A4. Индукция апоптоза вирусом герпеса в клетках Jurkat и Jurkat/A4 сопровождалась увеличением содержания клеток с активной формой каспазы-3.
Выводы. Клетки Jurkat и Jurkat/A4 дают продуктивную инфекцию при заражении вирусом герпеса, что сопровождается индукцией каспазо-зависимого апоптоза. Следовательно, эффекторные механизмы апоптоза в клетках Jurkat/A4 с фенотипом МЛР не заблокированы.
Е.М. Фуаниияни. Л.Ю. Владимирова, Е. Ф. Комарова ОСОБЕННОСТИ СВЯЗЫВАНИЯ ДОКСОРУБИЦИНА
С БЕЛКАМИ ПЛАЗМЫ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
ФГБУ «РНИОИ» Минздравсоцразвития РФ. Ростов-на-Дону
Задачи исследования. Выяснение процессов в белках плазмы крови после ее инкубации с доксору-бицином.
Материалы и методы. Исследовали выделенные из плазмы крови 20 больных раком молочной железы Т2-4 N1^ М0 альбуминовые и глобулиновые фракции. Использовали две модельные системы: нативную плазму крови, инкубированную с доксорубицином-ЛЭНС (Россия) в дозе 100 мкг/мл и размороженную плазму крови, инкубированную с доксорубицином в дозе 100 мкг/мл.
Результаты и выводы. Показано, что при инкубации с нативной плазмой крови цитостатик связывается именно с фракцией альбумина. При этом количество связавшегося с альбумином препарата составляло 80,1+5,8 % от его исходного количества (р<0,05). Снижение уровня сульфгидрильных групп (8И-групп) в альбумине составило 29 %, что говорит об использовании их лишь на треть. При исследовании индекса ароматичности молекулы альбумина не было отмечено его снижение. Изучение молекул средней массы, а также содержание свободных NИ2-групп, выявило увеличение после инкубации этих показателей в 7,4 раз и в 2,7 соответственно, что указывало на фрагментацию молекул альбумина, происходящую в процессе инкубации. Принципиально другая последовательность событий происходила при инкубации размороженной плазмы крови с доксорубицином: для связывания химиопрепарата также использовалась фракция альбумина, с которой связывалось 87,1+2,2 % от его исходного количества. Однако количество свободных 8И-групп альбумина после инкубации снизилось лишь на 12,2 % по сравнению с показателем до инкубации, что в 2,4 раза меньше, чем в случае использования нативной плазмы. При исследовании индекса ароматичности молекулы альбумина было отмечено его снижение на 22,3 % именно после инкубации, т.е. цитостатик соединялся с молекулой альбумина в двух лекарствосвязывающих участках. Содержание молекул средней массы и свободных NH2-групп, не изменялось после инкубации, т.е. связывание с альбумином размороженной плазмы не вызывало фрагментацию белка. Использование модельных систем дает возможность сравнить действие нативного и подверженного воздействию цитостатиком белка и сделать выводы о механизмах их действия.
№ 2/том 11/2012
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
