Сравнительный анализ состоятельности модели уролитиаза у крыс и кроликов Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Оригинальная статья

УДК 612.466.1: 599.325.1: 599.323.45

https://doi.org/10.57034/2618723X-2024-04-03

Сравнительный анализ состоятельности модели уролитиаза у крыс и кроликов

В.Д. Каранина*, А.Е. Кательникова, А.А. Матичин, Е.В. Беляева, В.Г. Макаров

АО «НПО «ДОМ ФАРМАЦИИ», Ленинградская обл., Россия * E-mail: [email protected]

Резюме. Мочекаменная болезнь (уролитиаз) характеризуется образованием минерализованных конкрементов в мочевыводящих путях и является одним из самых распространенных заболеваний современного человека. Физико-химические реакции, составляющие основу патогенеза формирования камней, а также роль регулирующих молекул в данном процессе до конца не изучены, что затрудняет разработку эффективных лекарственных препаратов для лечения и профилактики данной патологии и в то же время обусловливает актуальность исследования возможных моделей уролитиаза на лабораторных животных. В данной работе представлены результаты моделирования мочекаменной болезни у самцов крыс и кроликов при помощи введения этиленгликоля (ЭГ) с питьевой водой. ЭГ обладает литогенным действием, поскольку в результате его метаболизма синтезируется большое количество оксалат-ионов, которые, соединяясь с ионами кальция в моче, образуют нерастворимые соли. Возможность формирования патологии исследовали в следующих режимах дозирования индуктора: введение крысам 1% ЭГ в течение 28 дней (л=20) и 1,5% ЭГ в течение 9 дней (л=20); кроликам 1,5% ЭГ в течение 28 дней (л=16) и 4% ЭГ в течение 13 дней (л=16). В рамках данной работы у всех экспериментальных животных регистрировали потребление воды, массу тела, проводили ежедневное клиническое наблюдение, в сыворотке крови оценивали уровень альбумина, общего белка, кальция, фосфора, мочевины, креатинина, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы и лактатде-гидрогеназы, в пробах мочи исследовали содержание кристаллов, креатинина, мочевины, белка и кальция. Почки крыс и кроликов подвергались гистологическому исследованию. На основании полученных данных проведена оценка эффективности формирования уролитиаза у крыс и кроликов в исследованных режимах, по результатам которой наиболее удачным признано введение 1% ЭГ крысам в течение 28 дней. При необходимости использовать кроликов в качестве тест-системы следует помнить о слабой выраженности отклонений лабораторных параметров от физиологической нормы.

Ключевые слова: мочекаменная болезнь, уролитиаз, этиленгликоль, крысы, кролики

Благодарности. Работа выполнена без спонсорской поддержки.

Для цитирования: Каранина В.Д., Кательникова А.Е., Матичин А.А., Беляева Е.В., Макаров В.Г. Сравнительный анализ состоятельности модели уролитиаза у крыс и кроликов. Лабораторные животные для научных исследований. 2024; 4. 22-34. https://doi.org/10.57034/2618723X-2024-04-03.

Original article

Comparative study of urolithiasis model validity in rats and rabbits

V.D. Karanina*, A.E. Katel'nikova, A.A. Matichin, E.V. Belyaeva, V.G. Makarov

Research and manufacturing company "Home of Pharmacy", Leningrad oblast, Russia * E-mail: [email protected]

Abstract. Kidney stone disease (KSD, urolithiasis) is defined as formation of mineralized concrements in urinary tract and is one of the most widespread diseases in humans today. Physicochemical reactions of stone forming and the role of regulating molecules remain not completely studied. This problem complicates development of effective medicines for KSD treatment and prevention, but at the same time makes research into modelling of urolithiasis in laboratory animals significant. This work presents data on KSD model development by ethylene glycol (EG) administration with drinking water in male rats and rabbits. EG is a lithogenic agent, his metabolites form insoluble calcium salts in the urine. The possibility of KSD modelling was investigated using the following schemes of EG administration: 1% EG for 28 days (n=20) and 1,5% EG for 9 days (n=20) in rats; 1,5% EG

© Каранина В.Д., Кательникова А.Е., Матичин А.А., Беляева Е.В., Макаров В.Г., 2024 Лабораторные животные для научных исследований

Том 7, №4 (2024) • Laboratory animals for science labanimalsjournal.ru

for 28 days (n=16) and 4% EG for 13 days in rabbits. During the study water intake and body weight were registered in all experimental animals. The serum concentrations of albumin, total protein, calcium, phosphorus, urea, creatinine, alanine transaminase, aspartate transaminase, alkaline phosphatase and lactate dehydrogenase were studied. Urine samples were tested for crystals, creatinine, urea, protein and calcium levels. Histological study of the kidneys of rats and rabbits was performed. Based on the data the studied administration schemes were assessed for repeatability and effectiveness of urolithiasis model creation. According to the results the administration of 1% EG to rats for 28 days was recognized as most successful. Rabbits can be used as models for urolithiasis with consideration to mild to no alterations of laboratory values from reference range.

Keywords: kidney stone disease, urolithiasis, ethylene glycol, rats, rabbits

Acknowledgements. The study was performed without external funding.

For citation: Karanina V.D., Katel'nikova A.E., Matichin A.A., Belyaeva E.V., Makarov V.G. Comparative study of urolithiasis model validity in rats and rabbits. Laboratory Animals for Science. 2024; 4. 22-34. https:// doi.org/10.57034/2618723X-2024-04-03.

Введение

Мочекаменная болезнь (уролитиаз) — заболевание, характеризующееся образованием и ростом конкрементов в мочевых путях, представляет одну из самых распространенных патологий современной цивилизации, им страдает до 10% населения планеты [1]. До 30% больных в урологических отделениях медицинских учреждений проходят лечение по поводу уро-литиаза, при этом заболеваемость имеет тенденцию к росту и наиболее часто встречается у лиц трудоспособного возраста [1, 2]. Более половины почечных камней являются окса-латными и образованы кристаллами оксалата кальция [3, 4], поэтому исследование именно данного типа уролитиаза представляет наибольшую актуальность.

Образование оксалатных камней является сложным физико-химическим процессом, которому способствуют перенасыщенность и повышение рН мочи, повреждение эндотелия почечных канальцев, недостаток в моче ингибиторов и увеличение промотеров камнеобразования и задержка мочи [3-5]. Простыми словами этот процесс можно описать как «камни порождают камни» [4]: в перенасыщенной моче образуются кристаллы оксалата кальция, которые наслаиваются друг на друга с участием органических компонентов, повреждают эндотелий канальцев и откладываются в ткани почек, что усиливает агрегацию и адгезию кристаллов и приводит к развитию мочекаменной болезни.

Разработка современных методов лечения и профилактики уролитиаза является актуальной проблемой медицинской науки. Безусловно, ударно-волновая литотрипсия совершила революцию в элиминации почечных камней, но тем не менее она не снизила частоту заболеваемости [6]. Наличие неизвестных механизмов в патогенезе образования камней и не до конца выясненная роль протеинов в регуляции этого процесса осложняют разработку лекарственных препаратов для лечения и профилактики мочекаменной болезни. Именно для этого необходимо разработать адекватные и воспроизводимые экспериментальные модели [7-11].

Наиболее популярными тест-системами для воспроизведения патологий мочевыдели-тельной системы, в том числе уролитиаза, являются крысы и кролики, при моделировании важно учитывать особенности анатомии и физиологии почек человека и данных лабораторных животных. Почки человека являются муль-типапиллярными, тогда как у кролика и крысы органы однопапиллярные. У крысы и человека аналогичное соотношение коркового и мозгового вещества — 2:1 [7], однако почка крысы характеризуется менее развитой собирательной системой по сравнению с органом человека [12, 13]. Тем не менее камни в почках у людей и крыс располагаются на поверхности сосочков и имеют схожий состав. При уролитиазе у людей и крыс отмечено сходство патоморфологиче-ских признаков. Кроме того, уролитиаз у кроликов, крыс и людей вызывает аналогичные изменения показателей обмена [7, 8, 14].

К настоящему времени описаны модели генетического нокаута (крысы Sprague-Dawley с генетически обусловленным гиперкальци-урическим камнеобразованием [10]), а также экзогенной индукции рассматриваемой патологии хирургическим (временная обструкция мочевыводящих путей [15], резекция кишечника [16]) или консервативным методом. Предложен ряд моделей гипероксалурии у крыс, основанных на экзогенном введении в организм животного литогенных веществ: оксалата натрия, гликолевой кислоты, этиленгликоля (ЭГ) и гидрокси^-пролина [12].

В процессе метаболизма ЭГ в печени последовательно синтезируются высокотоксичные вещества: гликоальдегид, гликолевая, глиок-силовая и щавелевая кислота. Гликолевая кислота — достаточно долгоживущий метаболит и является основной причиной метаболического ацидоза, в то время как щавелевая кислота оказывает нефротоксическое действие путем отложения нерастворимых солей моногидрата оксалата кальция в почечных канальцах, что приводит к некрозу их проксимального участка [17]. Согласно исследованию субхронической токсичности ЭГ на крысах Вистар и F-344 [18], именно осаждением кристаллов оксалата обусловлено

поражение почек, которое характеризовалось дилатацией просвета канальцев, дистрофией их эпителия, воспалительной инфильтрацией интерстиция и фиброзом. Агентство охраны окружающей среды Дании в своем проекте № 1495 (2013) подтверждает важность данного патогенетического фактора, но при этом указывает на недостаточную изученность механизма токсического воздействия ЭГ на почки [19]. Таким образом, ЭГ достоверно является литогенным веществом и вызывает поражение почечной ткани.

По данным литературы [8, 12], введение ЭГ в организм крыс осуществляют разными методами: с питьевой водой, в составе обогащенного корма, путем инстилляций через желудочный зонд, внутрибрюшинной инъекции и даже подкожной имплантации оксалатсодержащих осмотических мини-насосов. Встречаются различные режимы введения ЭГ с питьевой водой крысам: 0,75% ЭГ в течение 28 дней [10], 1% ЭГ в течение 21 дня [11], 1% ЭГ в течение 28 дней [20]. По данным S.R. Khan и соавт. [21], введение крысам ЭГ с питьевой водой приводит к последовательным проявлениям гипероксалурии, кристаллурии и оксалатного уролитиаза.

Несмотря на то что кролики широко применяются для моделирования патологий мочевыде-лительной системы [22], сообщения о моделировании уролитиаза у кроликов весьма скудны. Тем не менее ряд характеристик (более крупный размер этих животных по сравнению с крысами и мышами, возможность использования лекарственных форм в нативном виде без разрушения) вдохновили некоторых исследователей на разработку модели уролитиаза на кроликах. Так, V. Rossa и U. Weber [23] осуществляли моделирование патологии путем введения ЭГ кроликам в концентрации 4% в течение 15 нед.

Как показали многочисленные эксперименты, существенное влияние на развитие мочекаменной болезни оказывают половые гормоны. При этом эстрогены ингибируют камнеобразо-вание, в то время как андрогены, наоборот, его усиливают [7]. Растворы ЭГ с низкой концентрацией, которые вызывают уролитиаз у самцов крыс, не дают аналогичных результатов у самок [9]. Таким образом, в настоящем исследовании в качестве тест-систем были выбраны самцы крыс и кроликов.

Цель исследования — провести сравнительный анализ состоятельности модели уролитиаза, вызванного этиленгликолем, у крыс и кроликов. Для ее достижения были поставлены следующие задачи: сформировать уролитиаз у крыс и кроликов, определить критерии оценки патологии и дать рекомендации в отношении использования одной из апробированных моделей.

Материал и методы

Работа выполнена на базе АО «НПО «ДОМ ФАРМАЦИИ». Эксперимент был одобрен на за-

седании биоэтической комиссии, заключение № 3.52/19.

В эксперименте использовали 40 самцов крыс Вистар средней массой 250 г (2 группы, n=20) и 32 самца кролика породы советская шиншилла средней массой 2,8 кг (2 группы, n=16). На основании анализа статистической мощности показателя «содержание креатинина в крови» крыс при сравнении интактной группы с группой патологии, размере эффекта 0,985, мощности 0,95 и уровне значимости 0,05 оптимальное количество животных в группе составило 8 самцов. При вычислении объема выборки для кроликов использовался тот же показатель и входные параметры, при размере эффекта 0,7 оптимальное количество животных в группе составило 6 самцов. Для выявления статистически значимых выбросов объем выборки увеличен на 2 особи на каждую точку эвтаназии. Таким образом, количество крыс и кроликов в каждой группе, которое позволит подвергнуть результаты исследования статистической обработке, составило 20 и 16 соответственно. Животные были получены из собственного питомника и переданы в эксперимент клинически здоровыми. Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с Директивой 2010/63/EU от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях. Кроликов содержали индивидуально в решетчатых клетках со сплошным дном, с кормушкой и поилкой, крыс — группами не более 5 особей в прозрачных пластиковых клетках со стальными решетчатыми крышками и кормовым углублением с поилками. В качестве подстила использовали древесные гранулы. Температура содержания составляла 18-26 °C, влажность — 45-65%, уровень вредных веществ (аммиак, углекислый газ) не превышал допустимых значений, режим воздухообмена составлял 10-20 объемов помещения в час, световой режим — 12 ч темноты/12 ч света в соответствии с Директивой и Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных (8-е издание, 2011 г.). Кормление осуществляли согласно установленным нормам, в качестве корма использовали комбикорм ЛБК-120 для крыс и ПК-90 для кроликов, приготовленный ЗАО «Тоснен-ский комбикормовый завод» в соответствии с требованиями ГОСТа 34566-20193 и 3289720144 соответственно.

В рамках исследования индукция патологии проводилась путем введения ЭГ (АО «Экос-1», Россия) с питьевой водой ad libitum при помощи поилки. Концентрации раствора ЭГ — 1% для крыс и 4% для кроликов — были выбраны в соответствии с данными литературы [11, 20, 23]. Дополнительно в эксперимент включили группу крыс, у которых использовалась более высокая доза — 1/2 ЛД50, или 2,35 мг/кг (ЛД50 ЭГ для крыс при перораль-ном употреблении 4,7 мг/кг [24]). Для ее до-

Таблица 1

Схема проведения эксперимента

Манипуляция

Дни эксперимента

Крысы

1% ЭГ (n=20)

1,5% ЭГ (n=20)

Кролики

1,5% ЭГ (n=16)

4% ЭГ (n=16)

Индукция патологии 1-28 1-9 1-28 1-13

Отмена индуктора патологии 29-43 10-43 29-43 14-43

Регистрация массы тела 1-43, еженедельно

Клиническое наблюдение 1-43, ежедневно

Регистрация потребления индуктора патологии 2-29, ежедневно

Биохимический анализ крови 1-й (фон, до индукции патологии), 15, 29, 43-й

Общий и биохимический анализы мочи 1-й (фон, до индукции патологии), 15, 29, 43-й

Эвтаназия и забор почек на гистологическое исследование 29-й и 43-й (по 50% животных из группы)

стижения животным давали 1,5% раствор ЭГ, исходя из средней массы тела крысы 250 г и предполагаемого объема потребляемой воды 40 мл/сут. Данная концентрация раствора ЭГ была выбрана и для второй группы кроликов как общая для обоих видов.

Дизайн исследования с фактическими временными сроками для обоих видов животных представлен в табл. 1.

Массу тела крыс и кроликов регистрировали на электронных весах Vibra AJ-1200CE (Vibra, Япония) и МК-15.2-А20 (АО «МАССА-К», Россия) соответственно. Все исследования биохимических показателей крови осуществляли на биохимическом анализаторе «Random Access А-25» (BioSystems, Испания) с применением реагентов фирмы BioSystems (Испания) в сыворотке крови. Для исследования использовали кровь, которую отбирали из хвостовой вены у крыс и краевой вены уха у кроликов в вакуумные пластиковые пробирки с активатором свертывания и гелем. Для получения сыворотки кровь центрифугировали (центрифуга Z 216 МК, Hermle Labortechnik GmbH, Германия) 15 мин при 3000 об/мин. В сыворотке определяли следующие параметры: содержание альбумина, уровень общего белка, кальция, фосфора, мочевины, креатинина, активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Для получения образцов мочи крыс помещали в индивидуальные метаболические клетки с присоединенными к ним чистыми одноразовыми пробирками. У кроликов образцы мочи получали путем массажа мочевого пузыря без регистрации суточного диуреза. В пробах мочи оценивали уровень креатинина, мочевины, белка, кальция, фосфора и магния, у крыс определяли клиренс креатинина по собственной методике согласно публикации [24]. До-

полнительно выполняли микроскопию осадка мочи при помощи лабораторного микроскопа Olympus CX23 (Olympus, Япония), типирова-ние кристаллов проводили в соответствии с атласом К.А. Синк и Н.М. Вейнштейн «Общий анализ мочи в ветеринарной медицине» [25]. Для оценки выраженности кристаллурии была разработана балльная оценка: 0 баллов — отсутствие кристаллов, 1 — единичные, 2 — до 20% поля зрения покрыто кристаллами, 3 — до 50% поля зрения покрыто кристаллами, 4 — до 100% поля зрения покрыто кристаллами. Влияние индуктора патологии на результаты лабораторных исследований оценивали путем их сравнения с исходными значениями (фон) у экспериментальных животных. В связи с этим в исследовании было принято решение отказаться от контрольной группы по биоэтическим соображениям.

В соответствии с Директивой 2010/63/EU животных подвергали эвтаназии с помощью СО2 (начальный этап для крыс) или, используя передозировку препаратов анестетиков (начальный этап для кроликов), с последующим обескровливанием полостей сердца (конечный этап). Данный вид эвтаназии животных сопровождался минимумом боли, страдания и дистресса и проводился компетентными сотрудниками. Во время вскрытия оценивали внешний вид и плотность почек, затем фиксировали их в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24 ч, после чего по общепринятой методике заливали в парафин. Затем изготавливали срезы тканей почек толщиной 3-5 мм, выполняли окраску гематоксилином и эозином. Анализ гистологических препаратов проводили при помощи светооптического микроскопа Микро-мед 2 (inf. 3-20) (ООО «Наблюдательные приборы», Россия) при увеличении в 40, 100 и 400 раз.

На основании полученных данных разработана система балльной оценки признаков уро-

литиаза у самцов крыс и кроликов (табл. 2). Количество баллов при оценке мочекаменной болезни присваивается исследователем: 0 баллов при отсутствии признака уролитиаза, 0,5 или 1 балл при его наличии. Исследователь определяет наличие патологии для количественных показателей как превышение внутри-лабораторных норм на 10% и более, для полуколичественных — в соответствии с балльной системой оценки показателя, для патоморфо-логических признаков без балльной оценки — факт их обнаружения.

В случае нормального распределения данных были рассчитаны среднее значение и стандартная ошибка среднего (M±SEM). В случаях несоответствия данных закону нормального распределения были рассчитаны медиана и квартильный размах [Ме (Q1; Q3)]. Статистический анализ первичных данных проводили с использованием программного обеспечения Statistica 10.0 (StatSoft, США).

Результаты и обсуждение

Исследование на крысах Введение ЭГ у крыс планировалось в течение 28 дней, но поскольку уже к 9-му дню эксперимента у животных, получавших 1,5% ЭГ, регистрировали изменения общего состояния, которые характеризовались снижением реакции на раздражители, тонуса мускулатуры, атаксией и гибелью 3 животных, введение ЭГ животным данной группы было отменено. На фоне введения 1% ЭГ у крыс отмечали изменение общего состояния в сторону угнетения и снижение массы тела, но менее выраженное, чем при использовании 1,5% ЭГ (табл. 3). После отмены

индуктора патологии животные начинали набирать массу тела. По результатам оценки потребления воды была определена средняя доза ЭГ, которую получили животные на 8-й день в виде 1,5% раствора (2,46 мг/кг), что составляет приблизительно 52% от ЛД50 для крыс при перо-ральном употреблении (4,7 мг/кг) [26]. Раствор ЭГ 1% концентрации самцы получали в течение 28 дней, к концу периода введения средняя суточная доза действующего вещества увеличивалась. На 8-й день она составляла 1,69 мг/кг (36% от ЛД50), на 15-й - 2,11 мг/кг (45% от ЛД50), на 22-й - 2,17 мг/кг (46% от ЛД50), на 29-й -2,58 мг/кг (54% от ЛД50). Данная тенденция к увеличению потребления воды, а также суточного диуреза, возможно, обусловлена полидипсией на фоне интоксикации организма продуктами азотистого обмена.

В табл. 4-7 представлены изменения основных показателей мочи и крови экспериментальных крыс обеих групп на протяжении исследования, в табл. 4, 6 отдельно вынесены клинически значимые параметры, которые авторы предлагают использовать в качестве критерия формирования патологии. В общем анализе мочи крыс на фоне введения 1% и 1,5% раствора ЭГ отмечали лейкоцитурию и эритроцитурию. Также было отмечено увеличение уровня оксалатов в моче подопытных животных (см. табл. 4), что согласуется с данными литературы [8, 10, 17, 27].

Установлено, что введение 1% и 1,5% ЭГ приводило к статистически значимому снижению выведения продуктов азотистого обмена и скорости клубочковой фильтрации (СКФ) (р<0,05; см. табл. 4, 6). Сразу после отмены индуктора патологии (29-й день) у жи-

Таблица 2

Система балльной оценки признаков уролитиаза у самцов крыс и кроликов

Баллы Условие присвоения балла

Временная точка регистрации признака Изменение признака Частота встречаемости изменения признака в группе, %

1 50-100

Одна,

_ Наличие

0,5 за которую присвоен 1-49

„ , патологии максимальный балл

00

Таблица 3

Влияние ЭГ на массу тела (в г) самцов крыс на протяжении эксперимента (М±БЕМ)

Концентрация раствора ЭГ День эксперимента

0-й (фон) 8-й 15-й 22-й 29-й 36-й 43-й

1% 251±3 (n=20) 218±4* ** (n=20) 203±5** (n=17) 207±6** (n=16) 196±7* ** (n=15) 230±10 (n=8) 235±10* (n=8)

1,5% 246±5 (n=20) 200±4** (n=17) 200±13** (n=8) 231±12 (n=8) 257±14 (n=8) 284±12 (n=4) 280±11 (n=4)

Примечание. Различия статистически значимы по сравнению: * — c группой животных, получавших 1,5% ЭГ в соответствующий день А-критерий Стьюдента для независимых переменных; p<0,05) ** — с исходным уровнем в соответствующей группе (^критерий Стьюдента для зависимых переменных; p<0,05).

Таблица 4 Результаты исследования мочи крыс (приведены клинически значимые параметры)

День эксперимента Креатинин, мкмоль/л (M±SEM) Мочевина, ммоль/л (M±SEM) Общий белок, мг/дл Me (Q1; Q3) Соли в осадке, баллы Me (Q1; Q3)

1% ЭГ в течение 28 дней

Фон (n=20) 7335±983 767±94 0,0 (0,0; 15,0) 1,0 (1,0; 1,0) *

15-й (n=18) 2002±229*** 254±21*** 0,0 (0,0; 15,0) * 2,0 (1,0; 2,0) **

29-й (n=15) 1891±187***4* 270±16*** 4* 0,0 (0,0; 15,0) 0,0 (0,0; 1,0) **

43-й (n=8) 3338±249*** 4* 325±29*** 0,0 (0,0; 0,0) 1,0 (1,0; 1,0)

1,5% ЭГ в течение 9 дней

Фон (n=20) 7181±1028 717±89 0,0 (0,0; 0,0) 0,0 (0,0; 1,0)

15-й (n=8) 1784±229*** 259±18*** 0,0 (0,0; 0,0) 1,0 (1,0; 1,0)

29-й (n=6) 3885±527*** 473±66*** 0,0 (0,0; 0,0) 1,0 (0,0; 1,0)

43-й (n=4) 5971±1447 479±131 0,0 (0,0; 5,0) 1,0 (1,0; 1,5)

Примечание. Различия статистически значимы по сравнению: *— с группой животных, получавших 1,5% ЭГ в соответствующий день (критерий Манна — Уитни для независимых переменных; р<0,05); ** — с исходным уровнем в соответствующей группе (критерий Вилкоксона для зависимых переменных; р<0,05); *** — с исходным уровнем в соответствующей группе (^критерий Стьюдента для зависимых переменных; р<0,05); 4* — с группой животных, получавших 1,5% ЭГ в соответствующий день (^критерий Стьюдента для независимых переменных; р<0,05).

Таблица 5 Результаты исследования мочи крыс (приведены остальные параметры) (М±БЕМ)

День эксперимента Кальций, мг/дл Фосфор, мг/дл* Магний, мг/дл

1% ЭГ в течение 28 дней

Фон (n=20) 23±4,9 36±6,1 39±4,7

15-й (n=18) 4±0,5** 11±6,5** (n=11) 20±1,6**, ***

29-й (n=15) 6±0,6**, *** 8±3,2** (n=7) 19±1,2**

43-й (n=8) 9±2,3** 20±5,9** 21±2,0

1,5% ЭГ в течение 9 дней

Фон (n=20) 18±5,4 57±9,5 37±4,4

15-й (n=8) 4±0,6** 2±0,3 (n=4)** 51±11,4

29-й (n=6) 19±7 9±5,9 (n=3)** 69±24,2**

43-й (n=4) 5±2,8** 22±4,1** 33±10,5

Примечание. * — данный показатель у некоторых животных был ниже уровня определения; различия статистически значимы

по сравнению: ** — с исходным уровнем в соответствующей группе (^критерий Стьюдента для зависимых переменных; р<0,05);

*** — с группой животных, получавших 1,5% ЭГ в соответствующий день (^критерий Стьюдента для независимых переменных; р<0,05).

вотных, получавших 1% ЭГ, креатинин в моче снизился в 3,8 раза, а мочевина — в 3 раза относительно исходных уровней соответственно (р<0,05; см. табл. 4). У животных, которым отменили 1,5% ЭГ с 10-го дня, те же показатели на 15-й день достоверно снизились относительно исходного уровня в 4 и 2,7 раза соответственно (р<0,05; см. табл. 4).

Снижение выведения продуктов азотистого обмена с мочой привело к их накоплению в крови подопытных крыс, что также согласуется с данными других авторов [28-30]. На 29-й день у животных, получавших 1% ЭГ, зарегистрировано статистически значимое

увеличение уровня креатинина и мочевины относительно исходного в 4,7 и 6,2 раза соответственно (р<0,05; см. табл. 6). У крыс, получавших 1,5% ЭГ, после отмены индуктора патологии (9-й день) данные показатели относительно фона увеличились в 8 и 7 раз соответственно, однако уже к 15-му дню снизились в 4-5 раз (см. табл. 6).

При сравнении величин массовых коэффициентов почек отмечено статистически значимое увеличение данного показателя почти в 2 раза на 29-й день эксперимента у животных, получавших 1% ЭГ, по сравнению с крысами, получавшими ЭГ 1,5%, и физиологическими

нормами [31] для данного вида животных (критерий Стъюдента; р<0,05): 1,8±0,1 и 1,0±0,1% соответственно.

При проведении гистологического исследования обнаруживалось ярко выраженное развитие уролитиаза у крыс в обеих группах. На вскрытии поверхность почек всех крыс была бугристая, цвет варьировал независимо от дозы ЭГ и дня эвтаназии: пестрая окраска, светло-желтый цвет или с желтоватым оттенком различной выраженности (рис. 1, 2). Обнаруживались очаги лимфоцитарной инфильтрации интерстиция и воспаление канальцев почек, характеризующееся их расширением, присутстви-

ем плотных кристаллов и белковых масс с гра-нулоцитами в просвете, выраженной дистрофией и атрофией эпителия. При этом в более поздние сроки наблюдалось разрастание фиброзной ткани в интерстиции, то есть переход патологии в хроническую форму. Отмечено вовлечение в процесс гломерулярного аппарата в виде склероза отдельных расположенных рядом с патологическими очагами клубочков (см. рис. 1, 2).

Отмеченные изменения показателей обмена мочи и крови обусловлены снижением фильтрующей способности почек, которое по результатам гистологического исследования связано с повреждением нефронов конкремента-

Таблица 6 Результаты биохимического исследования крови крыс (приведен ы клинически значимые параметры) (M±SEM)

День эксперимента Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л Клиренс креатинина, мкл/мин

1% ЭГ в течение 28 дней

Фон (n=20) 49±2 6,9±0,3 785±53

15-й (n=18) 172±27*, ** 30,8±3,9* ** 190±21* **

29-й (n=15) 234±26* ** 43,9±4,7* ** 173±29*

43-й (n=8) 105±10*, ** 14,8±1,8* 500±77*

1,5% ЭГ в течение 9 дней

Фон (n=20) 51±3 7,1±0,3 853±126

9-й (n=9)*** 423±60* 52,3±3,7* —

15-й (n=8) 75±5* 13,4±1,8* 380±30*

29-й (n=6) 63±4 10,6±0,7* 673±79*

43-й (n=4) 61±9 9,3±0,9 1058±229

Примечание. Здесь и в табл. 7: различия статистически значимы по сравнению: * — с исходным уровнем в соответствующей группе А-критерий Стьюдента для зависимых переменных; p<0,05); ** — с группой животных, получавших 1,5% ЭГ в соответствующий день А-критерий Стьюдента для независимых переменных; p<0,05); *** — кровь на анализ отобрана посмертно после внеплановой эвтаназии 9 самцов, у которых регистрировали тяжелую степень дистресса.

Таблица 7

Результаты биохимического исследования крови крыс (приведены остальные параметры) (М±БЕМ)

День Общий Альбумин, АСТ, АЛТ, ЩФ, ЛДГ, Кальций, Фосфор,

эксперимента белок, г/л г/л Ед/л Ед/л Ед/л ЕД/л ммоль/л ммоль/л

1% ЭГ в течение 28 дней

Фон (n=20) 70±1,1 30±0,4 170±8 45±2 273±14 825±101 10,7±0,4 9,1±0,2

15-й (n=18) 69±0,9 28±0,4 106±6* 38±2** 231±15 871±82 9,7±0,4 8,0±0,8

29-й (n=15) 70±2,1** 28±1,0** 84±7* ** 35±3** 360±65* 489±77* ** 10,7±0,2** 9,9±0,8

43-й (n=8) 71±0,9 29±1,4 135±12 42±2 241±33 682±120 10,1±0,1* ** 8,3±0,3

1,5% ЭГ в течение 9 дней

Фон (n=20) 72±0,8 30±0,7 175±5 48±2 292±16 819±79 10,8±0,3 9,1±0,2

9-й (n=9) *** 63±1,7 27±0,8 272±94* 42±1 487±110* 663±208 9,6±0,6 17,6±3,4*

15-й (n=8) 69±1,2 29±1,2 122±8* 49±4 252±37 784±118 9,0±0,3* 7,8±0,4*

29-й (n=6) 76±1,4 33±0,5 117±6* 49±3 274±29 833±83 9,4±0,2* 9,2±0,3

43-й (n=4) 68±1,5 29±0,3 147±4 48±4 226±12 754±104 9,5±0,2 8,6±0,4

Рис. 1. Срез почки. Самец крысы № 2.10, эвтаназия на 9-й день. Расширенные канальцы с кристаллическими структурами (стрелка). Окраска гематоксилином и эозином, х40

¿4 ,v,-J\' г * й№

- *?»*>/ " Г-..;- ¿¿.-уГ" tШ •

Рис. 2. Срез почки. Самец крысы № 1.18, эвтаназия на 43-й день. Расширенные канальцы с кристаллическими структурами, воспалительная инфильтрация и фиброз в интерстиции, склероз клубочков (стрелка). Окраска гематоксилином и эозином, х100

ми, образующимися в почках при введении ЭГ. Выявленные отклонения были частично обратимы через 14 дней после отмены индуктора патологии. Обнаруженные патоморфологиче-ские изменения находят подтверждение в работах других авторов [11, 27, 30, 32]. В связи с тем, что ЭГ является токсичным агентом и может вызывать развитие полиорганной недостаточности при введении экспериментальным животным [33], использование 1% ЭГ для моделирования уролитиаза у крыс выглядит более эффективным и гуманным по сравнению с более высокой концентрацией раствора.

Исследование на кроликах Введение ЭГ у кроликов планировалось в течение 28 дней. У животных, получавших 4% ЭГ, к 13-му дню были зарегистрированы гибель 3 особей, а также следующие симптомы интоксикации: угнетение, значительная потеря массы тела (табл. 8), снижение реакции на раздражители, тонуса мускулатуры и атаксия. В связи с этим введение 4% ЭГ кроликам было прекращено с 14-го дня, после его отмены животные начинали набирать массу тела. При оценке потребления 4% ЭГ кроликами была отмечена тенденция к снижению потребления, что, вероятно, обусловлено интоксикацией животных.

Введение 1,5% и 4% раствора ЭГ самцам кроликов не оказало значительного влияния на изучаемые показатели общего и биохимического анализов мочи (табл. 9). Только на 15-й день эксперимента у животных, получавших 4% ЭГ, выявлено статистически значимое трехкратное увеличение уровня креатинина и мочевины в крови относительно исходного (табл. 10; ^критерий Стьюдента для зависимых переменных; р<0,05). Однако данное изменение было клинически незначимым, поскольку другие параметры мочи и крови также статистически значимо не отклонялись от исходных значений,

в том числе концентрации креатинина и мочевины в моче.

Значимых межгрупповых различий по массовым коэффициентам почек у кроликов, а также по сравнению с референсными значениями не выявлено (^критерий Стьюдента для независимых переменных; р>0,05). Макроскопически почки животных обеих групп имели дряблую консистенцию и корковый слой с желтоватым оттенком. В целом у кроликов па-томорфологическая картина уролитиаза была выражена слабее, чем у крыс. У большинства животных картина патологии соответствовала тубулиту (поражению канальцев), признаки очаговой воспалительной инфильтрации в интерстиции проявлялись слабо или умеренно. У некоторых кроликов встречались расширение, дистрофия и атрофия извитых канальцев, присутствие кристаллов и белковых масс в их просвете. К концу эксперимента единично отмечали фиброз интерстиция и склероз клубочков, которые являлись вторичным повреждением почечных тканей в результате образования конкрементов (рис. 3, 4). При проведении гистологического исследования наличие кристаллов в просвете канальцев отмечали у 31% животных, получавших 1,5% ЭГ в течение 28 дней, и у 46% животных, получавших 4% ЭГ в течение 13 дней. Согласно данным литературы [20], кристаллы оксалата встречаются в почках при введении кроликам 4% ЭГ через 14-15 нед от начала индукции патологии. Однако в данном эксперименте увеличение периода введения ЭГ не представлялось возможным по этическим соображениям.

Таким образом, в связи с недостаточным количеством клинических маркеров уролитиаза и невозможностью увеличить длительность индукции, кролики как тест-система не подходят для воспроизведения патологии путем введения литогенных веществ с питьевой водой.

Таблица 8

Влияние ЭГ на массу тела (в г) самцов кроликов на протяжении эксперимента (М±БЕМ)

Концентрация раствора ЭГ День эксперимента

0-й (фон) 8-й 15-й 22-й 29-й 36-й 43-й

1,5% 4% 3832±137 3923±117 3990±132 4111±130* 4196±126* 4196±151* 4229±166* (n=16) (n=16) (n=16) (n=15) (n=15) (n=8) (n=8) 3865±146 3609±175* 3745±185 4101±215 3980±255 3977±117 3935±95 (n=16) (n=16) (n=12) (n=8) (n=8) (n=3) (n=3)

Примечание. * — различия статистически значимы по сравнению с исходным уровнем в соответствующей группе (t-критерий Стьюдента для зависимых переменных; p<0,05).

Таблица 9

Результаты исследования мочи кроликов

День эксперимента Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л Общий белок, мг/дл Me (Q1; Q3) Соли в осадке, баллы Me (Q1; Q3) Кальций, мг/дл Фосфор, мг/дл* Магний, мг/дл

(M±SEM) (M±SEM)

1,5% ЭГ в течение 28 дней

Фон (n=16) 9663±1718 403±47 0,0 (0,0; 30,0) 0,0 (0,0; 0,0) 7,4±1,2 9,5±2,5 (n=6) 4,7±0,8

15-й (n=16) 9959±1242 439±44 30,0 (15,0; 30,0) 0,5 (0,0; 0,5) 9,2±1,0 15,7±13,7 (n=12) 7,5±0,8*

29-й (n=15) 8799±1106 410±37 30,0 (30,0; 30,0) 0,0 (0,0; 0,0) 10,4±1,0 2,3±1,8 (n=10) 9,1±0,6

43-й (n=8) 9441±1585 355±57 30,0 (7,5; 30,0) 0,0 (0,0; 0,0) 9,2±1,2 1,9±0,3* 3,2±0,2

4% ЭГ в течение 13 дней

Фон (n=16) 10023±1605 461±61 30,0 (0,0; 30,0) 0,0 (0,0; 0,0) 9,3±1,5 23,2±9,7 (n=9) 5,9±0,8

15-й (n=12) 10252±1789 366±73 15,0 (15,0; 30,0) 0,5 (0,5; 0,5) 6,1±2,2 29±12,0 (n=6) 4,9±0,9

29-й (n=8) 11874±2122 505±75,7 30,0 (30,0; 65,0) 0,0 (0,0; 0,0) 9,9±2,2 4,3±3,3 (n=5) 9,6±1,4

43-й (n=3) 7367±2752 281±90 10,0 (0,0; 100,0) 0,0 (0,0; 0,0) 5,8±1,4 3,6±0,9 2,8±0,5

Примечание. * — различия статистически значимы по сравнению с группой животных, получавших 4% ЭГ в соответствующий день А-критерий Стьюдента для независимых переменных; p<0,05).

Таблица 10

Результаты биохимического исследования показателей* крови кроликов (M±SEM)

День Креатинин, Мочевина, Общий Альбумин, АСТ, АЛТ, ЩФ, ЛДГ, Кальций,

эксперимента мкмоль/л ммоль/л белок, г/л г/л Ед/л д/л Ед/л ЕД/л ммоль/л

1,5% ЭГ в течение 28 дней

Фон (n=16) 100±3 7,0±0,3 57±0,7 45±0,9 31±3 37±3 128±13 287±26 20±0,3

15-й (n=16) 90±5 6,9±0,5 63±0,9 45±0,4 27±2 41±4 132±14 292±36 21±0,2

29-й (n=15) 94±5 6,6±0,2 55±0,8 38±0,6 28±2 45±4 101±10 242±18 20±0,2

43-й (n=8) 105±3 8,0±0,4 59±2,7 51±1,7 24±2 40±5 96±11 214 ±27 19±0,4

4% ЭГ в течение 13 дней

Фон (n=16) 96±3 6,5±0,4 57±1,4 44±1,3 25±2 37±3 132±17 258±33 20±0,2

15-й (n=12) 287±101** *** 15 5±3 9** *** 63±1,3 48±0,4 23±3 31±3 93±13 243±26 20±0,7

29-й (n=8) 100±7 6,2±0,5 56±1,2 39±1,0 25±2 46±5 80±9 167±13*** 20±0,3

43-й (n=3) 112±8 7,0±0,6 51±1,8 43±1,9*** 30±1 57±2 93±7 156±25 17±0,2***

Примечание. * — СКФ у кроликов не определяли, содержание фосфора в крови было ниже порога определения; различия статистически значимы по сравнению: ** — с исходным уровнем в соответствующей группе (^критерий Стьюдента для зависимых переменных; p<0,05); *** — с группой животных, получавших 1,5% ЭГ в соответствующий день (^критерий Стьюдента для независимых переменных; p<0,05).

* '»А V. ' Г » #1 'а'. л

Рис. 3. Срез почки. Самец кролика № 2.15. Эвтаназия

на 43-й день. Расширенные канальцы с кристаллическими структурами (прерывистая стрелка), воспалительная инфильтрация и фиброз в интерстиции, склероз клубочков (стрелка). Окраска гематоксилином и эозином, х100

» <■' Т? "Л rTi i, i» '

- ч-* Л.'— * » !».

¿\ . 'г i л •

к

Ч • ;; .

Л*» • • ' ; • «Л-

Y -r'A'i

ш

• » 'т..'

S * , -г- «S*

■/Jf

I**

Рис. 4. Срез почки. Самец кролика №2.8. Эвтаназия на 13- й день. Расширенные канальцы с кристаллическими структурами в просвете (стрелка). Окраска гематоксилином и эозином, х100

Таблица 11 Оценка (в баллах) признаков уролитиаза у крыс и кроликов на наиболее удачных моделях

Показатель Вид тест-системы (концентрация и длительность введения ЭГ)

Крысы (1% ЭГ 28 дней) Кролики (4% ЭГ 13 дней)

Гипероксалурия 1 0

Снижение уровня креатинина в моче 1 0

Снижение уровня мочевины в моче 1 0

Снижение СКФ 1 0

Увеличение уровня креатинина в крови 1 0,5

Увеличение уровня мочевины в крови 1 0,5

Кристаллические депозиты в ткани почек 1 0,5

Всего 7 1,5

Результаты проведенного исследования, включавшего биохимический анализ крови и мочи, а также гистологическое исследование, показали, что при моделировании изучаемой патологии на крысах у всех животных после введения 1% ЭГ в течение 28 дней и 1,5% ЭГ в течение 9 дней наблюдалось выраженное развитие уролитиаза. При этом по результатам гистологического исследования почек крыс не выявлено межгрупповых отличий между концентрациями индуктора по степени выраженности признаков патологии почечной ткани. По данным гистологического исследования и биохимического анализа крови у кроликов отмечена более выраженная патоморфологическая картина поражения почек в концентрации ЭГ 4%. Установлена тенденция к прогрессированию патологических проявлений в динамике — усиление поражения ткани почек с вовлечением в процесс как ка-нальцевого, так и гломерулярного аппарата, а также переход процесса в хроническую форму с развитием фиброза и склероза участков по-

чечной ткани. Таким образом, при моделировании уролитиаза у всех крыс и у некоторых кроликов отмечены достаточно выраженные патологические проявления, которые могут быть классифицированы как мочекаменная болезнь.

Для сравнения успешности моделирования мочекаменной болезни было выбрано по одному режиму введения для каждого вида животных. В связи с высокой степенью дистресса у животных на фоне введения 1,5% ЭГ рекомендуется моделирование патологии на крысах с помощью 1% ЭГ в течение 28 дней. Статистически значимые изменения клинических показателей обнаружили только в одной из двух групп кроликов: 4% ЭГ в течение 13 дней. В табл. 11 собраны основные клинические и посмертные признаки уролитиаза, каждому из которых присвоен балл в зависимости от частоты встречаемости в группе животных. Баллы за каждый показатель суммированы, итоговое значение показало, что на крысах патология была более выражена, чем на кроликах (см. табл. 11).

Заключение

В ходе проведенного исследования была успешно сформирована патология мочекаменной болезни у крыс и кроликов путем введения этиленгликоля с питьевой водой. Критерии формирования патологии у крыс были оценены как прижизненно, так и посмертно, тогда как у кроликов — только путем гистологического анализа. У крыс, помимо пато-морфологического исследования, для оценки степени повреждения почек могут быть использованы показатели общего анализа мочи с микроскопией осадка на предмет наличия оксалатов, результаты биохимического анализа мочи с оценкой уровня креатинина, мочевины, белка и скорости клубочковой фильтрации, а также параметры биохимического анализа крови — креатинин и мочевина. По результатам проведенных исследований были определены наиболее успешные модели уролитиаза на крысах (1% этиленгликоль с питьевой водой в течение 28 дней)и на кроликах (4% этилен-гликоль с питьевой водой в течение 13 дней). При помощи разработанной системы балльной оценки признаков мочекаменной болезни было установлено, что наиболее выраженная патология получена при моделировании у крыс. Полученные данные позволяют сделать заключение об адекватности и воспроизводимости уролитиаза на крысах в рамках использованной в работе модели. При необходимости использовать кроликов в качестве тест-системы следует помнить о слабой выраженности отклонений лабораторных параметров от физиологической нормы.

СПИСОК ИСТОЧНИКОВ

1. Shafi H., Moazzami B., Pourghasem M. An overview of Treatment options for urinary stones // Caspian J. Intern. Med. 2016. N. 7. P. 1-6.

2. Россоловский А.Н., Березинец О.Л., Блюмберг Б.И. Мочекаменная болезнь: эволюция представления // Бюллетень медицинских интернет-конференций. 2014. № 4. C. 84-86. [Rossoiovskiy A.N., Bere-zinets O.L., Biyumberg B.I. Mochekamennaya boiezn': evoiyutsiya predstavieniya // Byuiieten' meditsinskikh internet-konferentsiy. 2014. N. 4. P. 84-86. (In Russ.)].

3. Aieiign T., Petros B. Kidney Stone Disease: An Update on Current Concepts // Adv. Urol. 2018. URL: https://pubmed.ncbi.n1m.nih.gov/29515627/ (дата обращения: 08.2024).

4. Dawson C.H., Tomson C.R. Kidney stone disease: pathophysiology, investigation and medical treatment // Clin. Med. (Lond). 2012. N. 12. P. 467-471.

5. Aggarwai K.P., Naruia S., Kakkar M., Tandon C. Urolithiasis: molecular mechanism of renal stone formation and the critical role played by modulators // Biomed Res. Int. 2013. URL: https://pubmed.ncbi.n1m. nih.gov/24151593/ (дата обращения: 08.2024).

6. Marengo S.R., Romani A.M. Oxalate in renal stone disease: the terminal metabolite that just won't go away // Nat. Clin. Pract. Nephrol. 2008. N. 7. P. 368-377.

7. Жариков А.Ю., Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лам-патов В.В. Современные методы моделирования оксалатного уролитиаза // Нефрология. 2008. № 12. С. 28-35. [Zharikov A.Yu., Bryukhanov V.M., Zverev Ya.F., Lampatov V.V. Current methods of modeling of oxalate urolithiasis // Nephrologiya. 2008. N. 12. P. 28-35. (In Russ.)].

8. Tzou D.T., Taguchi K., Chi T., Stolle M.L. Animal models of urinary stone disease // International Journal of Surgery. 2016. N. 36. P. 596-606.

9. Khan S.R. Animal models of kidney stone formation: an analysis // World journal of urology. 1997. N. 15. P. 236-243.

10. Ashok P., Koti B.C., Vishwanathswamy A.H.M. Antiuro-lithiatic and antioxidant activity of Mimusops elengi on ethylene glycol-induced urolithiasis in rats // Indian journal of pharmacology. 2010. N. 42. P. 380-383.

11. Талалаев С.В., Лепилов А.В., Булгаков В.П. и др. Обратимость структурных изменений мозгового вещества почки крыс, вызванных субхроническим приемом этиленгликоля // Нефрология. 2008. № 12. С. 53-57. [Talalaev S.V., Lepilov A.V., Bulgakov V.P. et al. Reversibility of structural changes of the rats kidney medulla caused by subchronic intake of ethylene glycol // Nephrology (Saint-Petersburg). 2008. N. 12. P. 53-57. (In Russ.)].

12. Khan S.R., Shevock P. N., Hackett R.L. Acute hyperoxaluria, renal injury and calcium oxalate urolithiasis // J. Urol. 1992. N. 147. P. 226-230.

13. Khan S.R., Finlayson B., Hackett R.L. Histologic study of the early events in oxalate induced intranephronic calculosis // Invest Urol. 1979. N. 17. P. 199-202.

14. Quesenberry K.E. et al. Ferrets, Rabbits, and Rodents: Clinical Medicine and Surgery, 3rd edition, Elsevier, 2012. 596 p.

15. Itatani H., Yoshioka T., Namiki M., Koide T., Takemo-to M., Sonoda T. Experimental model of caicium-con-taining renal stone formation in a rabbit // Invest Urol. 1979. N. 17. P. 234-240.

16. Worcester E.M., Chuang M., Laven B. et al. A new animal model of hyperoxaluria and urolithiasis in rats with small bowel resection // Urol. Res. 2005. N. 33. P. 380-382.

17. Iqbal A., Glagola J.J., Nappe T.M. Ethylene Glycol Toxicity. 2022. URL: https://www.ncbi.n1m.nih.gov/books/ NBK537009/ (дата обращения: 08.2024).

18. Cruzan, G. Subchronic Toxicity of Ethylene Glycol in Wis-tar and F-344 Rats Re1ated to Metabo1ism and C1ear-ance of Metabolites // Toxicological Sciences. 2004. N. 81. P. 502-511.

19. Evaluation of health hazards by exposure Ethylene g1yco1 and proposa1 of a hea1th-based qua1ity criterion for ambient air (Environmental Project No. 1495). Danish Ministry of the Environment. Environmental Protection Agency. 2013. URL: https://www2.mst.dk/Udgiv/ pub1ications/2013/08/978-87-93026-32-2.pdf (дата обращения: 08.2024).

20. Asian Z., Aksoy L. Anti-inflammatory effects of royal jelly on ethylene glycol induced renal inflammation in rats // International Braz. J. Urol. 2015. N. 41. P. 1008-1013.

21. Khan S.R., Johnson J.M., Peck A.B., Corne1ius J.G., G1enton P.A. Expression of osteopontin in rat kidneys:

induction during ethylene glycol induced calcium oxalate urolithiasis // J. Urol. 2002. N. 168. P. 1173-1181.

22. Трофимец Е.И., Боровкова К.Е., Гущин Я.А. и др. Апробация модели острого бактериального цистита на кроликах // Лабораторные животные для научных исследований. 2021. № 2. C. 25-37. [Trofimets E.I., Borovkova K.E., Guschin YA.A. et al. Approbation of the mode1 of acute bacteria1 cystitis on rabbits // Laboratory Animals for Science. 2021. N. 2. P. 25-37. (In Russ.)].

23. Rossa V., Weber U. Effect of ethylene glycol on rabbit retinas // Ophthaimoiogica. 1990. N. 200. P. 98-103.

24. Мирошников М.В., Султанова К.Т., Ковалева М.А., Акимова М.А., Макарова М.Н. Определение референтных интервалов клиренса эндогенного креатинина у лабораторных животных // Лабораторные животные для научных исследований. 2022. № 4. С. 21-30. [Miroshnikov M.V., Suitanova K.T., Kovaie-va M.A., Akimova M.A., Makarova M.N. Opredeienie referentny'x intervaiov kiirensa e'ndogennogo kreati-nina u iaboratorny'x zhivotny'x // Laboratorny'e zhivot-ny'e diya nauchny'x issiedovanij. 2022. N. 4. P. 21-30. (In Russ.)].

25. Синк К.А., Вейнштейн Н.М. Общий анализ мочи в ветеринарной медицине. Цветной атлас. Москва: Аквариум-Принт, 2016. [Sink K.A., Vejnshtejn N.M. Obshhij anaiiz mochi v veterinarnoj medicine. Czvetnoj atias. Moskva: Akvarium-Print, 2016. (In Russ.)].

26. The Physicai and Theoreticai Chemistry Laboratory of Oxford University (2009). Materiai Safety Data Sheet (MSDS) for ethyiene giycoi. URL: http:// msds.chem.ox.ac.uk/ET/ethyiene_giycoi.htmi (дата обращения: 08.2024).

27. Зверев Я.Ф., Брюханов В.М., Талалаева О.С. и др. О роли процессов свободно-радикального окисления в развитии экспериментального уролитиаза // Нефрология. 2008. № 12. C. 58-63. [Zverev Y.F.,

Bryukhanov V.M., Taiaiaeva O.S. et ai. On the roie of processes of free radicai oxidation in the deveiopment of experimentai uroiithiasis // Nephroiogy (Saint-Petersburg). 2008. N. 12. P. 58-63. (In Russ.)].

28. Bano H., Jahan N., Makbui S.A. A., Kumar B.N., Hu-sain S., Sayed A. Effect of Piper cubeba L. fruit on ethyiene giycoi and ammonium chioride induced uroiithiasis in maie Sprague Dawiey rats // Integrative Medicine Research. 2018. N. 7. P. 358-365.

29. Jaraid E.E., Kushwah P., Edwin S., Asghar S., Patni S.A. Effect of Unex on ethyiene giycoi-induced uroiithiasis in rats // Ind. J. Pharmacoi. 2011. N. 43. P. 466-468.

30. Shekha M.S., Ismaii T.F., Aziz F.M. Anti-uroiithia-tic and anti-oxidant effects of fenugreek on ethyiene giycoi-induced kidney caicuii in rats // Jordan Journai of Bioiogicai Sciences. 2015. N. 147. P. 1-5.

31. Макаров В.Г., Макарова М.Н. Справочник. Физиологические, биохимические и биометрические показатели нормы экспериментальных животных. ЛЕМА, 2013. 116 с. [Makarov V.G., Makarova M.N. Spravoch-nik. Fizioiogicheskie, bioximicheskie i biometricheskie pokazateii normy' e'ksperimentai'ny'x zhivotny'x. LEMA, 2013. 116 p. (In Russ.)].

32. Мотина Н.В., Брюханов В.М., Азарова О.В. и др. Морфологические изменения в почках крыс при экспериментальном уролитиазе на фоне длительного применения клеточной культуры Маакии амурской // Нефрология. 2009. № 13. C. 75-79. [Motina N.V., Bryukhanov V.M., Azarova O.V. et ai. Morfoiogicheskie izmeneniya v pochkax kry's pri e'ksperimentai'nom uroiitiaze na fone diitei'nogo primeneniya kietochnoj kui'tury' Maakii amurskoj // Nephroiogy. 2009. N. 13. P. 75-79. (In Russ.)].

33. Eder A.F., McGrath C. M., Dowdy Y.G. et ai. Ethyiene giycoi poisoning: toxicokinetic and anaiyticai factors affecting iaboratory diagnosis // Ciin. Chem. 1998. N. 44. P. 168-177.

Информация об авторах

В.Д. Каранина, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник отдела специфической токсикологии и фармакодинамики, [email protected], https://orcid.org/0000-0001-9536-9676

А.Е. Кательникова, кандидат медицинских наук, руководитель отдела специфической токсикологии и фармакодинамики, https://orcid.org/0000-0003-3203-9869

A.А. Матичин, заместитель руководителя отдела специфической токсикологии

и фармакодинамики, https://orcid.org/0000-0001-7478-4942 Е.В. Беляева, кандидат ветеринарных наук, заместитель руководителя отдела гистологии и патоморфологии,

https://orcid.org/0000-0003-1185-1399

B.Г. Макаров, доктор медицинских наук, научный руководитель, https://orcid.org/0000-0002-2447-7888 АО «НПО «ДОМ ФАРМАЦИИ», 188663, Россия, Ленинградская обл., Всеволжский район, г.п. Кузьмоловский, ул. Заводская, д. 3, к. 245.

Information about the authors

V.D. Karanina, Candidate of Sciences in Veterinary, Research scientist of the Department of Experimental Pharmacology and Pharmacodynamics, [email protected], https://orcid.org/0000-0001-9536-9676

A.E. Katel'nikova, PhD, Head of the Department of Experimental Pharmacology and Pharmacodynamics, https://orcid.org/0000-0003-3203-9869

A.A. Matichin, Deputy head of the

Department of Experimental Pharmacology

and Pharmacodynamics,

https://orcid.org/0000-0001-7478-4942

E.V. Belyaeva, Candidate of Sciences in Veterinary,

Deputy Head of the Department

of Histology and Pathomorphology,

https://orcid.org/0000-0003-1185-1399

V.G. Makarov, MD, Professor, Scientific Supervisor,

https://orcid.org/0000-0002-2447-7888

Research and manufacturing company

"Home of Pharmacy",

188663, Russia, Leningrad oblast,

Vsevolozhskiy district, Kuzmolovskiy t.s.,

Zavodskaya st. 3-245.

Вклад авторов в написание статьи В.Д. Каранина — анализ данных научной литературы, написание текста статьи. А.Е. Кательникова — критический пересмотр текста и одобрение окончательного варианта рукописи для публикации.

A.А. Матичин — идея, концепция и дизайн исследования.

Е.В. Беляева — патоморфологическое исследование.

B.Г. Макаров — критический пересмотр текста

и одобрение окончательного варианта рукописи для публикации.

Сведения о конфликте интересов В.Г. Макаров является главным редактором журнала «Лабораторные животные для научных исследований». Остальные авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов, требующего раскрытия в данной статье.

Дата поступления рукописи

в редакцию: 22.04.2024

Дата рецензии статьи: 13.06.2024

Дата принятия статьи к публикации: 04.09.2024

Authors contribution

V.D. Karanina — analysis of scientific literature data, writing of the text.

A.E. Katel'nikova — critical review and approval of the final version of the manuscript for publication. A.A. Matichin — elaboration of the idea, concept and design of the study.

E.V. Belyaeva — pathomorphological examination.

V.G. Makarov — critical review and approval

of the final version of the manuscript for publication.

Conflict of interest

V.G. Makarov is the Editor-in-Chief of Laboratory animals for science. The other authors declare no conflict of interest requiring disclosure in this article.

Received: 22.04.2024 Reviewed: 13.06.2024 Accepted for publication: 04.09.2024