CC BY
23
© Беспалова Е. Я., Трембовецкая Е. М., Колтунова А. Б., Руснак А. О., Крикунов А. А. УДК 612. 017:612. 112:616. 126-002-022]-089
Беспалова Е. Я., Трембовецкая Е. М., Колтунова А. Б., Руснак А. О., Крикунов А. А. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЛОКТЕВОЙ И ПОДКЛЮЧИЧНОЙ ВЕНЫ У БОЛЬНЫХ ИНФЕКЦИОННЫМ ЭНДОКАРДИТОМ
ГУ «Национальный институт сердечно-сосудистой хирургии им. Н. М. Амосова НАМН
Украины» (г. Киев)
Связь работы с научными программами, планами, темами. Работа выполнена согласно основного плана научно-исследовательских работ Института сердечно - сосудистой хирургии им. Н. М. Амосова НАМН Украины (Киев) и является фрагментом темы «Исследовать патогенетические механизмы системного воспалительного ответа на общую управляемую гипертермию при хирургическом лечении больных инфекционным эндокардитом», № гос. регистрации 011311000578.
Вступление. До настоящего времени проблема сепсиса остается актуальной в хирургии. Это связано с увеличением числа больных, высокой летальностью среди них и значительными экономическими затратами на их лечение. Среди этих больных особое место занимают больные с инфекционным эндокардитом (ИЭ). Проявлением этого грозного заболевания является поражения эндотелия и развитие полиорганной недостаточности, активизация каскадных протеолитических систем крови (комплимента, свертывания, фибри-нолиза) и иммунокомпетентных клеток, синтезирующих ряд биологически активных соединений - ци-токинов, адгезивных молекул и др. [1,2].
Одним из механизмов патогенеза инфекционного эндокардита является воспалительный процесс, в основе которого лежит взаимодействие различных иммунокомпетентных клеток и синтезируемых ими биологически активных вещественных [6]. Сбалансированность иммунного ответа на антигенную нагрузку напрямую зависит от основных физиологических процессов, происходящих в самой иммунной системе: пролиферации, дифференциации лимфоидных клеток, способности иммунокомпетентными клетками распознавать антиген межклеточных контактов [3].
При заболеваниях, сопровождающихся длительным антигенным действием и интоксикацией нарушается скорость образования и дифференциации лимфоцитов, интенсивность апоптоза, что приводит к нарушениям в иммунной системе, усложняя протекания инфекционного процесса в организме [4].
Поэтому определение показателей клеточного и гуморального звена иммунной системы у больных
ИЭ до операции представляет весьма большой интерес та как во многом определяет результаты лечения.
Цель работы - изучить клеточные и гуморальные факторы иммунитета периферической крови локтевой и подключичной вены у больных ИЭ до оперативного вмешательства.
Объект и методы исследования. Объект исследования - периферическая кров локтевой и подключичной вены больных ИЭ, n = 18. Исследование иммунологических показателей проводили до операции. Контрольную группу составили 20 практически здоровых доноров крови.
По общепринятой методике определяли абсолютное содержание лейкоцитов и лимфоцитов. Количественные характеристики субпопуляций лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD16, CD19 - определяли методом фенотипирования лимфоцитов с помощью моноклональных антител. Функциональную активность Т-лимфоцитов оценивали с помощью реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) с митогенами, морфологическим методом. Для количественного определения иммуноглобулинов G, A, M, Е использовали иммуноферментный анализ. Уровень циркулирующих иммунных комплексов определяли спектрофотометрическим методом.
Статистическая обработка материала проводилась с использованием универсальных статистических программ Microsoft Excel с учитыванием критерия Стьюдента [5].
Результаты исследований и их обсуждение. В результате проведенного исследования было выявлено, что течение инфекционного эндокардита сопровождается изменением ряда показателей иммунной системы по сравнению с практически здоровыми людьми. Полученные результаты исследований представлены в таблице. В ходе проведенного иммунологического исследования периферической крови с локтевой вены у больных ИЭ до операции наблюдались нарушения иммунного статуса. Выявленные иммунологические изменения характеризовались тенденцией к увеличению количества лейкоцитов - 8,89 ± 3,80 1 09/л в контроле 5,30 ± 0,20 109/л. Наблюдалась дисфункция
Таблица
Показатели иммунной системы у больных инфекционным эндокардитом
Исследуемые показатели Периферическая кровь больных ИЭ Периферическая кровь больных ИЭ Контрольная группа n = 20
локтевая вена, п = 18 подключичная вена, п = 18
Лейкоциты, 109/л 8,89 ± 3,80 8,53 ± 4,41 5,30 ± 0,20
CD3 % 68,78 ± 9,22 67,68 ± 5,88 64,50 ± 0,91
109/л 0,93 ± 0,42 1,14 ± 0,67 1,15 ± 0,09
CD4 % 41,92 ± 4,52 39,44 ± 4,14 38,41 ± 1,17
109/л 0,57 ± 0,26 0,65 ± 0,34 0,34 ± 0,05
CD8 % 25,93 ± 7,15 28,60 ± 5,68 28,53 ± 1,86
109/л 0,35 ± 0,17 0,48 ± 0,30 0,51 ± 0,06
CD4 /CD8 1,72 ± 0,54 1,41 ± 0,35 1,45 ± 0,10
0016 % 11,47 ± 3,33 12,96 ± 3,36 14,35 ± 0,91
109/л 0,15 ± 0,07 0,21 ± 0,11 0,19 ± 0,08
0019 % 8,36 ± 4,04 7,27 ± 2,49 9,62 ± 0,42
109/л 0,10 ± 0,06 0,12 ± 0,09 0,34 ± 0,09
РБТЛ, спонт. % 4,38 ± 3,43 4,72 ± 2,73 6,81 ± 0,13
РБТЛ, ФГА % 41,83 ± 11,59 40,11 ± 8,85 47,6 ± 1,82
РБТЛ, ткань миокарда % 7,05 ± 4,27* 7,22 ± 3,70* 2,14 ± 0,08
1д О г/л 12,30 ± 2,75 12. 13 ± 2,55 10,31 ± 0,32
1д А г/л 2,59 ± 1,21 2,47 ± 1,09 1,92 ± 0,18
|д М г/л 2,08 ± 0,99* 2,01 ± 1,02 1,35 ± 0,07
|д е г/л 183,16 ± 4,27* 174,50 ± 2,56* 100,12 ± 10,53
ЦИК усл. ед. 75,44 ± 42,58 70,94 ± 40,84 79,92 ± 3,12
Ауто а/т к миокарду здоровому % 20,0 ± 6,85* 20,0 ± 6,85* 0
Ауто а/т к миокарду ишемизированному % 18,88 ± 7,58* 18,88 ± 7,58* 0
Ауто а/т к аорте здоровой % 18,33 ± 7,07* 18,33 ± 7,85* 0
Ауто а/т к аорте склерозированной % 17,22 ± 7,51* 17,22 ± 8,26* 0
Примечание: * - по сравнению с контрольной группы (р < 0,05).
клеточного звена иммунной системы, что проявилась дисбалансом субпопуляций Т-клеток, тенденцией к увеличению Т-хелперов (004+) клеток и уменьшению относительного количества Т- супрессоров (008+) - 25,93 ± 7,15 % в контроле 28,53 ± 1,86 %, что отразилось на иммунорегуляторном индексе, который составил 1,72 ± 0,54 и 1,45 ± 0,10 в контроле. Абсолютные показатели количества 003+, 004+ и 008+ лимфоцитов отражали дисфункцию иммунорегуляторных клеток. При определении 0016+ лимфоцитов наблюдалась тенденция снижения этого показателя, как в относительных, так и в абсолютных цифрах.
Изменения количественных показателей клеточного звена иммунной системы согласовывались с изменением функциональной активности лимфоцитов в реакции бласттрансформации лимфоцитов.
Прослеживалась тенденция снижения спонтанной пролиферативной активности лимфоцитов.
Снижен уровень пролифератив-ной активности лимфоцитов с неспецифическим митогеном ФГА и составил 41,83 ± 11,59 % в контрольной группе 47,6 ± 1,82 %. Со специфическим митогеном (ткань миокарда) достоверно повышенный уровень пролиферации лимфоцитов и составил 7,05 ± 4,27 %, в контроле 2,14 ± 0,08 %, р < 0,05.
Исследование гуморально-
го звена иммунной системы показало, что, несмотря на отсутствие достоверных различий в количестве В-лимфоцитов (0019+), гуморальное звено иммунной системы активировано. Наблюдалась тенденция повышения продукции иммуноглобулинов:
концентрация 1д й составила 12,30 ± 2,75 г/л и 10,31 ± 0,32 г/л в контрольной группе; 1д А - 2,59 ± 1,21 г/л и 1,92 ± 0,18 г/л в контроле; 1д М 2,08 ± 0,99 г/л в контроле 1,35 ± 0,07 г/л, р < 0,05. При этом уровень 1д Е достоверно отличался от контрольной группы и составил 183,16 ± 4,27 г/л в контрольной группе 100,12 ± 10,53 г/л, р < 0,05. Одновременно в исследуемых больных ИЭ обнаружены достоверно высокие уровни аутоантител к миокарду здоровому 20,0 ± 6,85 %, к миокарду ишемизированному 18,88 ± 7,58 %, к аорте здоровой 18,33± 7,07%, к аорте склерозированной 17,22 ± 7,51 %, р < 0,05 в контрольной группе они отсутствуют.
При проведении сравнительного анализа иммунологических
показателей периферической крови локтевой вены и показателей крови подключичной вены, выявленные изменения клеточного и гуморального звена иммунной системы были однотипны и достоверно между собой не отличались. Выводы.
1. Изменения показателей клеточного и гуморального звена иммунной системы периферической крови локтевой и подключичной вены у больных ИЭ в дооперационном периоде носят однотипный характер и не зависят от места забора крови.
2. Дисфункция клеточного звена иммунной системы у больных ИЭ, проявлялась нарушением субпопуляционного состава иммунорегуляторных клеток, тенденцией к увеличению Т-хелперов (004+) и уменьшению Т-супрессоров (008+), натуральных киллерных клеток (0016+).
3. Изменения количественных показателей кле- Перспективы дальнейших исследований. В
точного звена иммунной системы согласовывались - „
' дальнейшем перспективным является изучение,
с изменениями их функциональной активности в
РБТЛ- снижением пролиферативной активности влияния применения общей управляемой гиперлимфоцитов спонтанной и индуцированной. термической перфузии при хирургическом лечении
4. Активация гуморального звена иммунной си-
л - больных инфекционным эндокардитом на функцио-
стемы проявлялась дисиммуноглобулинемией и на- ^ «г«
личием специфических аутоантител. нальную активность лимфоцитов.
Литература
1. Кнышов Г. В. Динамика иммунологических и вирусологических показателей у больных инфекционным эндокардитом, инфицированных вирусами иммунодефицита человека и гепатита С, оперированных в условиях общей управляемой гипертермической перфузии / Г. В. Кнышов, В. Б. Максименко, А. Б. Колтунова [и др.] // Вюник серцево-судинноУ х1рургп. - 2014. - № 22. - С. 123-128.
2. Кнышов Г. В. Инфекционный ендокардит / Г. В. Кнышов, В. Н. Коваленко. - К., 2004. - 255 с.
3. Лапоть С. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием EXCEL / С. Н Лапоть, А. В. Чубенко, П. Н. Бабич. - Киев : «Морион», 2000. - 320 с.
4. Особенности иммунного статуса больных инфекционным эндокардитом в зависимости от длительности лихорадки в дооперационном периоде / Е. Я. Беспалова, Л. Н. Климова, 3. Т. Баланник [и др.] // Щор1чник наукових праць Асо^ацп серцево-судинних х1рурпв УкраУни «Серцево-судинна х1рурпя». - КиУв, 2004. - Вип. 12. - С. 210-213.
5. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. - Москва : «Мир», 2000. - 582 с.
6. Тюрин В. П. Иммунный статус больных подострым септическим эндокардитом [Текст] / В. П. Тюрин, И. В. Пясик, Г. И. Заболотнова // Тез. докл. науч. -практ. конф. Септич. эндокардиты в хирургии пороков сердца. - Новосибирск, 2006. - С. 46-48.
УДК 612. 017:612. 112:616. 126-002-022]-089
ПОР1ВНЯЛЬНИЙ АНАЛ13 1МУНОЛОГ1ЧНИХ ПОКАЗНИК1В ПЕРИФЕР1ЙНОТ КРОВ1 Л1КТЬОВОТ ТА П1ДКЛЮЧИЧНОТ ВЕНИ У ХВОРИХ НА 1НФЕКЦ1ЙНИЙ ЕНДОКАРДИТ
Беспалова О. Я., Трембовецька О. М., Колтунова А. Б., Руснак А. О., Крикунов О. А.
Резюме. Локал1зац1я ¡нфекци в ендокард1 клапаыв серця призводить до формування набутоУ вади серця, а також до розвитку ¡мунолопчних змш, внаслщок наявност активного вогнища ¡нфекци. Проведено визна-чення показниюв кттинноУ та гуморальноУ ланки ¡муытету перифермноУ кровi лктьовоУ та пщключичноУ вени у 18 хворих на ¡нфекцмний ендокардит до кардiохiрургiчноУ операцiУ. Розвиток ¡нфекцмно-запального про-цесу у хворих на Ыфекцмний ендокардит супроводжуеться дисфунк^ею клiтинноУ i активацieю гуморальноУ ланки ¡мунг^ту. Змiни показникiв клiтинноУ та гуморальноУ ланки ¡мунноу системи перифермноУ кровi л^ьо-воУ та пщключичноУ вени носять однотипний характер i не залежать вiд мiсця забору кровг
Ключов1 слова: iнфекцiйний ендокардит, клггинна i гуморальна ланка ¡мунноу системи, лiмфоцити.
УДК 612. 017:612. 112:616. 126-002-022]-089
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЛОКТЕВОЙ И ПОДКЛЮЧИЧНОЙ ВЕНЫ У БОЛЬНЫХ ИНФЕКЦИОННЫМ ЭНДОКАРДИТОМ
Беспалова Е. Я., Трембовецкая Е. М., Колтунова А. Б., Руснак А. О., Крикунов А. А.
Резюме. Локализация инфекции в эндокарде клапанов сердца привела к формированию приобретенного порока сердца, а также к развитию иммунологических изменений, вследствие наличия активного очага инфекции. Проведено определение показателей клеточного и гуморального звена иммунитета периферической крови локтевой и подключичной вены у 18 больных инфекционным эндокардитом до кар-диохирургической операции. Развитие инфекционно-воспалительного процесса у больных инфекционным эндокардитом сопровождается дисфункцией клеточного и активацией гуморального звена иммунитета. Изменения показателей клеточного и гуморального звена иммунной системы периферической крови локтевой и подключичной вены носят однотипный характер и не зависят от места забора крови.
Ключевые слова: инфекционный эндокардит, клеточное и гуморальное звено иммунной системы, лимфоциты.
UDC 612. 017:612. 112:616. 126-002-022]-089
Comparative Analysis of Immunological Parameters in Peripheral Blood Samples from Cubital and Subclavian Vein in Patients with Infective Endocarditis
Bespalova E. Y., Trembovetska O. M., Koltunova A. B., Rusnak A. O., Krykunov A. A.
Abstract. One of the pathogenetic mechanisms of infective endocarditis (IE) is an inflammatory process, which is based on the interaction of various immune cells and synthesized by them biologically active substances. Balance of the immune response to the antigen load depends on the basic physiological processes that occur in the immune system itself: proliferation, differentiation of lymphoid cells.
In cases involving prolonged antigenic impact and intoxication, the rate of lymphocytes formation and differentiation is impaired, i. q. the intensity of apoptosis, that leads to disturbances in the immune system, complicates the course of infection in the human body. Localization of infection in valvular endocardium leads to the formation of acquired heart disease and development of immunological changes, due to the presence of the active focus of infection.
Therefore, the identification of cellular and humoral immune system factors in patients with IE before surgical intervention is of great interest, and noticeably determines the outcome.
Objective: To study the cellular and humoral immunity factors in peripheral blood samples from cubital and subclavian vein in patients with infective endocarditis.
Subjects and methods. The object of study - the peripheral blood samples from cubital and subclavian vein of patients with IE, n = 18. The study of immunological parameters was performed before surgery. Control group composed 20 healthy blood donors.
Results and discussion. Identification of cellular and humoral immune system factors in blood samples, obtained from cubital and subclavian vein, of 18 patients with IE was performed. The conducted research of cubital blood samples in patients with IE revealed violations in the immune status preoperatively. Development of infectious inflammatory process in patients with IE is accompanied by suppression of cellular and activation of humoral immunity. The identified immunological changes were characterized by a tendency to increased number of leukocytes - 8,89 ± 3,80 109/l, in the control group - 5,30 ± 0,20 109/l. Dysfunction of cell immunity system was observed, that manifested in imbalance of T-cells subpopulations, tendency to increased CD4+-cells and decreased relative amount CD8+-cells, that was reflected in the immunoregulatory index, which composed 1,72 ± 0,54 and 1,45 ± 0,10 in the control group.
Changes in quantitative indicators of cell immunity system correspond with the change in the functional activity of lymphocytes in blast transformation reaction of lymphocytes. The tendency to reduced spontaneous proliferative activity of lymphocytes was observed.
Investigation of humoral immunity system displayed that despite the lack of significant differences in the number of B-lymphocytes humoral immunity system is activated. The tendency to increased production of immunoglobulin Ig M, Ig G, Ig A was detected.
Comparative analysis of immunological parameters in peripheral blood samples from cubital and subclavian vein was performed, identified changes in cellular and humoral immune system were similar and did not differ significantly.
Conclusions. Preoperative changes in cellular and humoral immune system in peripheral blood samples from cubital and subclavian vein in patients with IE were of the same type and did not depend on the place of blood sampling.
Dysfunction of cell immunity in patients with IE manifestated in violation of immunoregulatory cells subpopulations and reduction of the lymphocytes proliferative activity.
Activation of humoral immune system manifested in disimmunoglobulinemia and presence of specific autoantibodies.
Keywords: infective endocarditis, cellular and humoral immune system, lymphocytes.
Рецензент - проф. Катеренчук I. П.
Стаття надшшла 5. 09. 2014 р.
