CC BY
76
118 Сетевой научно-практический журнал Ж" ТА У Ч Н Ы Й
но серия Медицина и фармация Нрезультат
УДК 615.322: 615.071: 615.074 DOI: 10.18413/2313-8955-2015-1-3-118-130
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ
концентраций спирта этилового для изолирования комплекса
ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.
Корниенко Ирина Вячеславовна, ассистент кафедры фармацевтической химии
и фармакогнозии
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»); ул. Победы, 85, Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected] Новиков Олег Олегович, заведующий кафедрой фармацевтической химии и фармакогнозии, доктор фармацевтических наук, профессор Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»); ул. Победы, 85, Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected] Писарев Дмитрий Иванович, доцент кафедры фармацевтической химии и фармакогнозии, доктор фармацевтических наук, доцент Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»); ул. Победы, 85, Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected] Малютина Анастасия Юрьевна, старший преподаватель кафедры фармацевтической химии и фармакогнозии, кандидат фармацевтических наук Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»); ул. Победы, 85, Белгород, 308015, Россия; E-mail: malyutina [email protected]
НОТАЦИЯ
Одним из растений, которое уже на протяжении долгого времени не попадает во внимание исследователей, является можжевельник обыкновенный - Juniperus communis L. Результаты изучения фармацевтического рынка фитопрепаратов свидетельствуют об отсутствии лекарственных средств из указанного растения. J. communis L. позиционируется как эфиромасличное растение, однако в суммарном фармакологическом эффекте растения участвует полифенольный комплекс, который изучен недостаточно полно. В литературе также отсутствуют сведения об оптимальном растворителе, способном наиболее полно извлекать комплекс полифенольных соединений. Изучен химический состав плодов J. communis L. с помощью метода обращённо-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Установлено наличие 19 компонентов флавоноидной структуры. Основными компонентами являются гликозиды апигенина, скутелляреина и бифла-воноиды. Проведён сравнительный анализ экстрагирующей способности спиртов для извлечения флавоноидов J. communis L. Установлено, что спирт этиловый 95% наиболее полно извлекает гликозиды апигенина. Спирт этиловый 40% концентрации, лучше извлекает гликозиды скутелляреина. Бифлавоноиды активнее переходят в разбавленный спирт. Равномерный выход всех групп флавоноидов наблюдается при экстракции спиртом этиловым 70% концентрации. Наибольший суммарный выход флавоноидов наблюдается при экстракции 95% спиртом этиловым. По результатам исследований сделан вывод, что наиболее подходящим экстрагентом для флавоноидов плодов J. communis L. является спирт этиловый 95%.
K ючевые слова: плоды можжевельника; флавоноиды; экстракция; обращён-но-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография.
№3 2015
fin Сетевой научно-практический журнал Ж" ТА У Ч Н Ы Й
119 серия Медицина и фармация Нрезультат
UDC 615.322: 615.071: 615.074 DOI: 10.18413/2313-8955-2015-1-3-5-118-130
Kornienko I.V., COMPARATIVE ANALYSIS OF THE
EXTRACTION ABILITY OF ETHYL ALCOHOL
Novikov O.O., DIFFERENT CONCENTRATIONS
Pisarev D.I., TO ISOLATE A COMPLEX OF FLAVONOIDS
Malyutina A.Yu. FROM JUNIPERUS COMMUNIS L. FRUITS
Kornienko Irina Vyacheslavovna, Assistant Lecturer Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia E-mail: [email protected]
Novikov Oleg Olegovich, Head of department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy, Doctor of Pharmacy, Professor Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia E-mail: [email protected]
Pisarev Dmitri Ivanovich, Associate Professor, Doctor of Pharmacy, Associate Professor Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia E-mail: [email protected]
Malyutina Anastasia Yurievna, Senior Lecturer, PhD of Pharmacy Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia E-mail: malyutina [email protected]
STRAKT
One of the plants, which have for a long time does not get the attention of researchers is the common juniper - Juniperus communis L. The results of the study of the pharmaceutical market of herbal remedies, indicate the absence of drugs of said plant. J. communis L. positioned as aromatic plants, but in the overall pharmacological effects of the plants involved polyphenol complex that is not fully understood. The literature also lacks information about the optimal solvent capable of removing the most complete range of polyphenolic compounds. The chemical composition of the fruit J. communis L. converted via Method-phase high performance liquid chromatography. The presence of 19 components of the flavonoid structure. The main components are glycosides of apigenin, and skutellyareina bi-flavonoidy. The comparative analysis of the extraction ability of alcohol to extract flavonoids
J. communis L. It was found that ethyl alcohol 95% more fully extract apigenin glycosides. Ethyl alcohol concentration of 40%, better glycosides extracts skutellyareina. Biflavonoidy increasingly moving into dilute alcohol. Uniform output of all groups flavonoid extraction observed in 70% ethyl alcohol concentration. The highest total yield of flavonoids the extraction is observed when 95% ethyl alcohol. According to the research concluded that the most appropriate extractant for the fruits of flavonoids J. communis L. is 95% ethyl alcohol.
JKeywords: fructus Juniperi; flavonoids; extraction; converted-phase high performance liquid chromatography.
№3 2015
120
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Введение. Подавляющее количество лекарственных средств, применяющихся в современной медицине, приходится на соединения, изготавливаемые методами органического синтеза. Однако растения по-прежнему продолжают оставаться важнейшим источником сырья для получения лекарственных препаратов. Причём удельный вес фитопрепаратов составляет 25 - 30% от аптечного ассортимента. Количество растительных препаратов с каждым годом возрастает, что свидетельствует об их значительном спросе вследствие экономической и терапевтической целесообразности. В процесс создания новых лекарственных растительных средств вовлекается всё большее количество растений, по причине появляющихся уточнённых данных об их химическом составе и клинических данных. Растущая потребность в растительных препаратах, свидетельствует о необходимости поиска новых сырьевых источников или более подробном изучении ранее известных. Одним из растений, которое уже на протяжении долгого времени не попадает во внимание исследователей, является можжевельник обыкновенный - Juniperus communis L. Результаты изучение фармацевтического рынка фитопрепаратов, свидетельствуют об отсутствии лекарственных средств из указанного растения. Однако, разнообразный химический состав, широкий спектр фармакологических свойств свидетельствуют об актуальности таких исследований. Известно, что J. communis L. позиционируется как эфиромасличное растение, поскольку основным классом, ответственным за проявление фармакологического эффекта являются терпены, состав которых в растении изучен достаточно подробно [4,5]. Наряду с терпенами в суммарном фармакологическом эффекте растения участвует полифенольный комплекс [1]. Среди полифенолов J. communis L. характерно наличие достаточно редких групп: 6-оксифлавнонов и бифлавоноидов [2, 3]. Вместе с тем полифенольный комплекс данного объекта изучен в значительно меньшей степени, чем терпенов. В литературе также отсутствуют сведения об оптимальном растворителе, способном наиболее полно извлекать комплекс полифенольных соединений.
Учитывая вышесказанное, целью настоящего исследования явилось изучение хими-
ческого состава полифенолов плодов J. communis L. и подбор оптимального экстрагента для их извлечения.
Экспериментальная часть. В качестве объекта исследования использованы воздушно-сухие плоды J. communis L. Подготовку образцов для анализа проводили следующим образом. По 1,0 г измельчённых, воздушно-сухих плодов J. communis L. помещали в 3 плоскодонные колбы вместимостью 100 мл, в каждую добавляли по 25 мл спирта этилового в разных концентрациях: 95%, 70%, 40% и экстрагировали на ультразвуковой водяной бане при температуре 80°С в течении 2-х часов. Полученные извлечения фильтровали через бумажные фильтры в мерные колбы объёмами по 100 мл и операцию экстракции повторяли ещё 3 раза, каждый раз фильтруя извлечения в мерные колбы. Полученные таким образом 95%, 70% и 40% извлечения далее хроматографировали.
Хроматографические исследования проводили на хроматографическом приборе фирмы «Agilent Technologies 1200 Infinity» производства США c автоматическим пробоотборником Agilent 1200, вакуумным микродегазатором, градиентным насосом и термостатом той же серии. Электронные спектры поглощения регистрировали с помощью спектрофотометрического детектора с диодной матрицей серии Agilent 1200 (диапазон длин волн от 190 до 950 нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; объемом 13 мкл), шаг сканирования - 2 нм.
Для регистрации и обработки спектральных данных и хроматограмм использовали программное обеспечение «Agilent Chem Station».
Для приготовления подвижных фаз использовали следующие растворители: воду сверхчистую (для жидкостной хроматографии), спирт этиловый (по ГОСТ Р 51652), кислоту муравьиную (квалификация х.ч. по ГОСТ 61).
Эффективность колонки определяли вычислением числа теоретических тарелок N. Чем выше эффективность, тем больше эта величина и меньше расширение пика первоначально узкой полосы по мере продвижения ее через колонку, тем уже пик на выходе из колонки. В качестве оптимального критерия
СЕРИЯ Медицина и фармация
121
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
эффективности колонки использована величина - не менее 5000.
Расчет числа теоретических тарелок проводили по формуле 1:
Форму хроматографического пика, характеризующую перегрузку хроматографической колонки, определяли путём расчёта коэффициента асимметрии пика (Т,) по формуле 3:
N = 5,545 х {-+- )2
V0.5 (1)
где t - время удерживания определяемого вещества мм;
JU0 5 - ширина на половине высоты пика, мм. Основным критерием оценки адекватного разделения соседних пиков служил коэффициент разделения Rs, который должен быть не менее 1,5 согласно Европейской Фармакопее. При этом пики должны быть разделены по базовой линии.
Коэффициент разделения пиков Rs вычисляли по формуле 2:
(2)
где А/ - расстояние между вершинами двух соседних пиков мм;
^0 5(1), М05(2) - ширина на половине высоты пиков двух компонентов мм.
m ^0 L1 ■.
(3)
где р0 05 - ширина пика на высоте 5.0% от базовой линии (мм);
f - расстояние от начала пика на высоте 5.0% от базовой линии до перпендикуляра, проведенного из его вершины (мм).
Оптимальной величиной коэффициента асимметрии Т, принят показатель - менее 2 [6].
Суммы полифенольных комплексов и ан-тоцианов подвергали хроматографическому разделению в следующих условиях:
подвижная фаза: 1.0% водный раствор кислоты муравьиной (А) - спирт этиловый 95% (Б) в градиентном режиме элюирования;
колонка: Ascentis express C18 2.7рм х 100 мм х 4.6 мм.
скорость подвижной фазы - 0,5 мл/мин; температура колонки +35 оС; объём вводимой пробы 1 pl.
Состав подвижной фазы программировали в условиях, указанных в таблице 1.
Таблица 1
Условия градиентного элюирования флавоноидов плодов J. communis L.
Table 1
Terms gradient elution flavonoids fruits J. communis L.
Время, мин А,% Б,%
0 90 10
10 80 20
20 70 30
30 50 50
40 10 90
Детектирование осуществляли при длинах волн: 230, 260, 325, 340 и 350 нм.
Идентификацию компонентов осуществляли по совпадению времён удерживания анализируемых веществ со СО зафиксированных в аналогичных условиях эксперимента и по результатам диодно-матричного детектирования.
Относительное содержание индивидуальных флавоноидов определяли как отно-
шение площади хроматографического пика и суммы площадей пиков всех идентифицированных флавоноидов по формуле 4:
„ S х100
-Л = —=—
X S
где Si - среднее значение площади пика компонента на хроматограммах суммы;
XS - среднее значение суммы всех площадей пиков на хроматограммах.
СЕРИЯ Медицина и фармация
122
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Нр
аучныи
РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Результаты и их обсуждение. Хроматограмма 95% спиртового извлечения из плодов J. communis L. представлена на рисунке 1.
Рисунок 1. Хроматограмма 95% этанольного извлечения из плодов J. communis L. (детекция диодно-матричная при k= 340 нм)
Figure 1. Chromatogram 95% ethanolic extract of the fruits of J. communis L. (diode array detection at k = 340 nm)
Эффективность хроматографической системы оценивали по критериям, результаты расчёта которых приведены в таблице 2.
Таблица 2
Показатели пригодности хроматографической системы для определения
Table 2
Indicators of system suitability for determining
tR S N R T Wb
14.476 836.5 226751 >1.5 0.647 0.1216
15.6l6 149.8 300754 >1.5 0.834 0.1139
16.476 148.5 273145 >1.5 0.809 0.1261
17.681 336.7 250524 >1.5 1.039 0.1413
18.785 403.9 288887 >1.5 0.885 0.1398
19.806 59 344897 >1.5 0.701 0.1349
20.368 191.5 356247 >1.5 0.922 0.1365
21.781 1292.6 429760 >1.5 0.727 0.1329
22.203 458.5 140425 >1.5 0.953 0.237
25.456 65.3 779905 >1.5 0.858 0.1153
27.897 524.8 1160153 >1.5 0.713 0.1036
28.355 188 967655 >1.5 0.756 0.1153
30.771 865.2 1296438 >1.5 0.636 0.1081
31.495 605 1281188 >1.5 0.599 0.1113
32.179 84.6 1543638 >1.5 0.956 0.1036
34.152 848.6 1866174 >1.5 0.722 0.1005
34.926 1190.1 2131050 >1.5 0.676 0.0957
35.605 103.8 2300439 >1.5 0.622 0.0939
36.388 841.3 2680605 >1.5 0.649 0.0889
tR - абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок, R, -коэффициент разделения пиков, Tf - коэффициент асимметрии, Wb - ширина пика на базовой линии
СЕРИЯ Медицина и фармация
123
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Как показывают данные, приведённые в таблице 2, основные критерии (N>5000, Rs >1,5, Tf <2) соответствуют требованиям пригодности. Поэтому использованная хроматографическая система может считаться эффектив-
ной для определения флавоноидов в 95% спиртовом извлечении из плодов J. communis L.
Результаты хроматографирования 70% этанольного извлечения из плодов J. communis L. представлены на рисунке 2.
Рисунок 2. Хроматограмма 70% этанольного извлечения из плодов J. communis L. (детекция диодно-матричная при k= 340 нм) Figure 2. Chromatogram 70% ethanolic extract of the fruits of J. communis L. (diode array detection at k = 340 nm)
Результаты расчёта критериев проверки пригодности использованной хроматографической системы приведены в таблице 3.
Таблица 3
Показатели пригодности хроматографической системы для определения
Table 3
Indicators of system suitability for determining
tR S N R T А f Wb
I4.496 1091.4 214376 >1.5 0.619 0.125
15.631 169.8 290020 >1.5 0.818 0.1161
16.467 187.3 266887 >1.5 0.726 0.1275
17.646 353.9 274585 >1.5 0.856 0.1347
18.352 2524.1 321327 >1.5 0.707 0.1295
18.753 298.7 313366 >1.5 0.926 0.134
19.698 62.6 374806 >1.5 0.688 0.1287
20.085 93.7 492325 >1.5 1.038 0.1145
20.267 171.5 382962 >1.5 0.934 0.131
21.562 1360.7 432145 >1.5 0.741 0.1312
28.107 112.8 1114422 >1.5 1.053 0.1065
30.369 454.2 1399072 >1.5 0.676 0.1027
31.060 302.1 1323352 >1.5 0.629 0.108
31.750 47.8 1612900 >1.5 0.806 0.1
33.673 432.5 1778446 >1.5 0.756 0.101
34.474 542.1 1967869 >1.5 0.701 0.0983
35.225 51.1 2478425 >1.5 0.818 0.0895
36.010 365.9 2660999 0.698 0.0883
tR - абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок, Rs -коэффициент разделения пиков, Tf - коэффициент асимметрии, Wb - ширина пика на базовой линии
СЕРИЯ Медицина и фармация
124
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Как свидетельствуют данные таблицы 3, рассчитанные критерии пригодности хроматографической системы укладываются в допустимые пределы, что доказывает её пригодность для определения флавоноидов в 70% из-
влечении из плодов J. communis L.
Хроматограмма 40% спиртового извлечения из плодов J. communis L. представлена на рисунке 3.
Рисунок 3. Хроматограмма 40% этанольного извлечения из плодов J. communis L. (детекция диодно-матричная при k= 340 нм) Figure 3. Chromatogram 40% ethanolic extract of the fruits of J. communis L. (diode array detection at k = 340 nm)
Эффективность хроматографической системы оценивали по критериям, результаты расчёта которых приведены в таблице 4.
Таблица 4
Показатели пригодности хроматографической системы для определения
Table 4
Indicators of system suitability for determining
tR S N R T f Wb
I4.462 1204.72 214512 >1-5 0.615 0.1249
15.600 181.5 281549 >1.5 0.81 0.1176
16.441 134.4 261513 >1.5 0.722 0.1286
17.622 376.5 271415 >1.5 0.884 0.1353
18.335 2705.9 318269 >1.5 0.706 0.13
18.740 403.1 323465 >1.5 0.923 0.1318
20.089 98.0 482358 >1.5 1.022 0.1157
20.277 189.8 389260 >1.5 0.917 0.13
21.596 1375.4 437502 >1.5 0.747 0.1306
22.046 381.8 229940 >1.5 0.983 0.1839
24.102 60.83 375637 >1.5 0.66 0.1573
27.566 231.1 1166315 >1.5 0.741 0.1021
28.114 81.55 1100463 >1.5 0.978 0.1072
30.385 222.9 1425420 >1.5 0.693 0.1018
31.076 95.3 1453626 >1.5 0.763 0.1031
31.759 15.94 19448816 >1.5 0.776 0.091
33.695 121.2 1816564 >1.5 0.76 0.1007
34.50 893 1904400 >15 0.663 0.1007
tR - абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок, Rs -коэффициент разделения пиков, Tf - коэффициент асимметрии, Wb - ширина пика на базовой линии
СЕРИЯ Медицина и фармация
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА
Н
'ЛУЧИ Ы И РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Из представленных данных таблицы 4 следует, что критерии пригодности (N>5000, Rs >1,5, Tf <2) не выходят за пределы допустимых значений, следовательно, хроматографическая система пригодна для анализа флавоноидов в 40% извлечении из плодов J. communis L.
В результате хроматографирования 95% спиртового извлечения из плодов J. communis L. было установлено, что его флавоноид-ный состав представлен разными группами: бифлавоноиды, 6-оксифлавоны, флавоны,
флавонолы. Необходимо было определить при какой длине волны диодно-матричного детектирования оценивать удельный вес каждой группы флавоноидов. В результате изучения спектров поглощения этих соединений было установлено, что для всех перечисленных групп флавоноидов существует общая полоса поглощения, по которой можно оценить их содержание на хроматограмме, лежащая в максимуме поглощения при X = 340 нм, как показано на рисунке 4.
Рисунок 4. Электронные спектры поглощения основных представителей
флавоноидов плодов J. communis L.
Figure 4. Electronic absorption spectra of the main representatives of the fruits of
flavonoids J. communis L.
В результате хроматографирования спиртовых извлечений из плодов J. communis L. установлено, что доминирующими группами флавоноидов являются гликозиды апигени-на, бифлавоноиды и гликозиды скутелляре-ина. В небольшом количестве встречаются гликозиды кверцетина и лютеолина. По ко-
личеству компонентов в каждой группе флавоноидов оказалось следующим: 4 бифлаво-ноида, 3 гликозида скутелляреина, 2 глико-зида кверцетина, 2 гликозида лютеолина и 9 гликозидов апигенина.
Компонентный состав флавоноидов плодов J. communis L. представлен в таблице 5.
СЕРИЯ Медицина и фармация
126
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Компонентный состав полифенолов плодов J. communis L. Component composition offruitpolyphenols J. communis L.
Таблица 5 Table 5
Время удерживания, мин УФ-спектр, идентифицированные компоненты Суммарная площадь пиков в 95% извлечении Суммарная площадь пиков в 70% извлечении Суммарная площадь пиков в 40% извлечении
14.476 - 18.785 mAU 80 70 60 50 40 30 20 DAD1, 14 441 (64 3 mAU, - ) Ref=14 281 & 14 781 of JUNIPER20D 220 240 260 280 з00 з20 з40 360 380 nm 3686.7 4101.5 4446.0
Бифлавоноиды
15.616 -17.681 mAU 14 12 10 8 6 4 2 DAD1, 15 568 (13 8 mAU, - ) Ref=15 475 & 16 301 of JUNIPER20 D 220 240 260 280 300 320 340 360 380 nm 150.0 208.4 241.0
Гликозиды кверцетина
19.806 -22.203 mAU 120 100 80 60 40 20 DAD1,21 748 (117 mAU, - ) Ref=21115 & 22915 of JUNIPER20D 220 240 260 280 300 320 340 360 380 nm 2147.2 2143.0 2134.0
Гликозиды скутелляреина
20.368 mAU 20 175 15 125 10 75 5 25 DAD1,20 348 (186 mAU, - ) Ref=20 068 & 20 595 of JUNIPER20 D 220 240 260 280 300 320 340 360 380 nm 272.75 229.0 288.0
Гликозиды лютеолина
27.897 -36.388 mAJ 120 100 80 60 40 20 0 DAD1,34 148 (124 mAU, - ) Ref=34 015 & 34 761 of JUNIPER20D 220 240 260 280 300 320 340 360 380 nm 5249.0 2623.0 677.0
Гликозиды апигенина
Процентное распределение флавоноидов в 95% извлечении представлено на рисунке 5.
СЕРИЯ Медицина и фармация
127
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Рисунок 5. Процентное распределение флавоноидов J. communis L.
в 95% этанольном извлечении Figure 5. Percentage distribution of flavonoids J. communis L.
in 95% ethanol-extraction
На рисунке 5 видно, что основной удельный вес флавоноидов плодов J. communis L. приходится на гликозиды апигенина (45.7%) и в меньшей степени на бифлавоноиды (32.0%).
В 70% спиртовом извлечении из плодов J. communis L. процентное распределение флавоноидов составило следующие результаты, как это представлено на рисунке 6.
Г лииоэады
■RfcejHjrinii-fi,
2.3%
Гяиноэвдс4* скутелляр<ч*и,1,
Рисунок 6. Процентное распределение флавоноидов J. communis L.
в 70% этанольном извлечении Figure 6. Percentage distribution offlavonoids J. communis L.
in 70% ethanol-extraction
В 70% этанольном извлечении наибольший удельный вес флавоноидов приходился на бифлавоноиды (57%).
СЕРИЯ Медицина и фармация
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА
Н
'ЛУЧИ Ы И РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Общее процентное распределение флавоноидов в 40% этанольном извлечении из плодов J. communis L. показано на рисунке 7.
Бифодыдоады,.
57Я
Рисунок 7. Процентное распределение флавоноидов в плодах J. communis L.
в 40% этанольном извлечении
Figure 7. Percentage distribution offlavonoids J. communis L. in 40% ethanol-extraction
Данные, представленные на рисунке 7, свидетельствуют о наилучшей экстрагирующей способности 40% этанола в отношении бифлавоноидов и гликозидов скутелляреина, но малопригодной для извлечения гликозидов апигенина.
На основании полученных результатов об экстрагирующей способности спиртов различной крепости для извлечения флавоноидов можно сделать следующий вывод. Выход разных групп флавоноидов в спирты различной концентрации оказался неравномерным. Более разбавленный спирт этиловый 40% кон-
центрации лучше извлекает гликозиды ску-телляреина, поскольку агликон скутелляреин по сравнению с другими флавоноидами J. communis L. более насыщен гидроксильными группами, а, следовательно, полярнее. Гликозиды апигенина лучше переходят в более крепкий 95% спирт, так как агликон апигенин включает меньше гидроксильных групп. Экстрагируе-мость бифлавоноидов при уменьшении крепости спирта возрастает. Более равномерно все группы флавоноидов J. communis L. экстрагируются спиртом этиловым 70% концентрации (рисунок 8).
■ ЕлЗл JSC iHJh-JU рЕ’лЬкфЛгЩНС-КуГ'^Л-ЯртАЫ гаГлНН01ЧЙ*| Jjlttll-iptjhj
Рисунок 8. Степень извлечения групп флавоноидов плодов J. communis L.
спиртами различной крепости
Figure 8. The recovery group offlavonoids fruits J. communis L. alcohols ofvarying strength
СЕРИЯ Медицина и фармация
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА
Н
'ЛУЧИ Ы И РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
Однако следует заметить, что суммарный как наименее эффективным растворителем
выход флавоноидов оказался наиболее был 40% спирт этиловый (рисунок 9).
высоким при экстракции 95% спиртом, тогда
115ПБ
Конщнлрация елнрти этилового
Рисунок 9. Суммарный выход флавоноидов при экстракции плодов J. communis L.
спиртами различной крепости
Figure 9. The total yield offlavonoids in the extraction offruit J. communis L. alcohols
of varying strength
На приведённом рисунке видно, что выход флавоноидов при извлечении 95%-ным спиртом в 1,5 раза выше, чем спиртом этиловым 40% концентрации.
Выводы:
1. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращённо-фаз-ном варианте изучен химический состав плодов J. communis L. Установлено, что плоды содержат около 19 компонентов флавоноид-ной структуры, причём доминирующими являются гликозиды апигенина, скутелляреина и бифлавоноиды. В небольшом количестве встречаются гликозиды кверцетина и люте-олина. Разнообразие компонентов в каждой группе оказалось следующим: 4 бифлавоно-ида, 3 гликозида скутелляреина, 2 гликозида кверцетина, 2 гликозида лютеолина и 8 гли-козидов апигенина.
2. Сравнивая экстрагирующую способность спиртов разной концентрации, оказалось, что спирт этиловый 95% - наиболее полно извлекает гликозиды апигенина. Спирт этиловый 40% концентрации, лучше извлекает гликозиды скутелляреина. Бифлавоно-иды лучше переходят в разбавленный спирт. Равномерный выход всех групп флавоноидов наблюдается при экстракции спиртом этиловым 70% концентрации.
3. Наибольший суммарный выход фла-воноидов наблюдается при экстракции 95% спиртом этиловым. Учитывая всё вышеизложенное можно утверждать, что наиболее подходящим экстрагентом для флавоноидов плодов J. communis L. является спирт этиловый 95%.
СЕРИЯ Медицина и фармация
130
Корниенко И.В., Новиков О.О., Писарев Д.И., Малютина А.Ю.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ПЛОДОВ JUNIPERUS COMMUNIS L.______________
Н
:аучныи РЕЗУЛЬТАТ
Сетевой научно-практический журнал
ЛИТЕРАТУРА:
1. Изучение флавоноидного состава шишкоягод можжевельника длиннохвойного / Писарев Д.И., Новиков О.О., Новикова М.Ю., Жилякова Е.Т. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 150, № 12. С. 657-660.
2. Костюченко О.И. 6-оксифлавоны в растительном мире // Растительные ресурсы.
1977. Т. 13, № 2. С. 403-417.
3. Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений: распространение, физико-химические свойства, методы исследования. Алма-Ата: Наука.
1978. 220 с.
4. Писарев Д.И. Обзор современного состояния исследований в области систематики, химии и фармакологии рода Juniperus L // Современные проблемы фитодизайна: материалы международной научно-практической конференции (Белгород, 28-31 мая 2007 г.). Белгород: Изд-во БелГУ. 2007. С. 296-304.
5. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: рук. для врачей. М.: Мед. ин-форм. агентство. 2000. 976с.
6. European Pharmacopoeia [Text]: 2 vol. -8th ed. European Directorate for Quality of Medicines and Health care. Strasbourg : Council of Europe. cop. 2014.
REFERENCES:
1. Study of flavonoid composition shishkoya-gody juniper dlinnohvoynogo / Pisarev D.I., Novikov O.O., Novikova M.J., Zhilyakova E.T.. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. T. 150, № 12. 2010: P. 657-660.
2. Kostyuchenko O.I. 6-oksiflavony in the plant world. Plant Resources. T.13, №2. 1977: P.
403-417.
3. Klyshev L.K., Bandyukova V.A., Alyukina
L.S. Flavonoids plants: distribution, physico-chemical properties, methods of research. Alma-Ata: Science, 1978. 220 p.
4. Pisarev D.I. Overview of the current state of research in the field of taxonomy, chemistry and pharmacology of genus Juniperus L. Modern problems of phyto: Proceedings of the International scientific and practical conference (Belgorod, 28-31 May 2007). Belgorod: Publishing house BSU. 2007. P. 296-304.
5. Sokolov S.I. Phytotherapy and phytopharmacology: a guide for doctors. M.: Med. Inf. Agency, 2000. 976 p.
6. European Pharmacopoeia [Text]: 2 vol. -8th ed. European Directorate for Quality of Medicines and Health care. Strasbourg: Council of Europe. cop. 2014.
СЕРИЯ Медицина и фармация
