Сравнительный анализ экспрессии провоспалительных и толерогенных факторов в мезентериальных гемальных и лимфатических узлах человека Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК 611.428: 611.068: 571.27

Потоцкая О.Ю.1, Лапсарь А.С.2, Камышный А.М.3

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И ТОЛЕРОГЕННЫХ ФАКТОРОВ В МЕЗЕНТЕРИАЛЬНЫХ ГЕМАЛЬНЫХ И ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛАХ ЧЕЛОВЕКА

1 ГЗ «Днепропетровская медицинская академия МЗ Украины», 49044, Днепропетровск, Украина;

2 КУ «Запорожское областное патологоанатомическое бюро» ЗОС, 69000, Запорожье, Украина;

3 Запорожский государственный медицинский университет, 69035, Запорожье, Украина

Мезентериальная группа лимфатических узлов человека известна своим активным участием в индукции иммунологической толерантности и содержит единичные гемальные узлы. Отличительной особенностью этих узлов является циркуляция крови в системе синусов, хотя функциональное значение этой особенности остается не выясненным. В нашем исследовании проведено сравнение экспрессии генов толерогенных факторов FOXP3, TGF-в, IL-10 и факторов транскрипции провоспалительных («колитогенных») форм Т-хелперов - RORC (Th17-клеток), TBX21 (Th^-клеток) в мезентериальных гемальных и лимфатических узлах человека при помощи ПЦР в реальном времени. В результате обнаружено, что в гемальных узлах по сравнению с лимфатическими уровень относительного нормализованного количества мРНК генов толерогенных факторов снижен, а факторов транскрипции провоспалительных форм Т-хелперов повышен. В то же время в системе синусов гемальных узлов было выявлено большее количество нейтрофильных гранулоцитов по сравнению с показателями периферической крови, что может выступать косвенным подтверждением наличия Th^-клеток. Подытоживая полученные данные, можно заключить, что по сравнению с мезентериальными лимфатическими узлами гемальные узлы характеризуются сдвигом баланса толерогенных/провоспалительных факторов в сторону последних, что делает перспективным проведение дальнейших исследований мезентериальных ГУ при воспалительных заболеваниях кишечника и печени.

Ключевые слова: мезентеристьные лимфатические узлы человека; гемальные узлы; иммунологическая толерантность; Treg-клетки; П17-клетки; Thl-клетки; нейтрофильные гранулоциты; воспаление.

Для цитирования: Потоцкая О.Ю., Лапсарь А.С., Камышный А.М. Сравнительный анализ экспрессии провоспалительных и толерогенных факторов в мезентериальных гемальных и лимфатических узлах человека. Иммунология. 2018; 39(5-6): 294-298. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-5-6-294-298

Pototskaya O.Yu.1, Lapsar A.S. 2, Kamyshny A.M. 3

COMPARATIVE ANALYSIS OF PROINFLAMMATORY AND TOLEROGENIC FACTORS EXPRESSION IN HUMAN MESENTERIC HEMAL AND LYMPH NODES

^Dnipropetrovsk medical Academy of the Ministry of health of Ukraine», 49044, Dnepropetrovsk, Ukraine;

2 « Zaporozhye regional pathoanatomical Bureau» ZOS, 69000, Zaporozhye, Ukraine;

3 Zaporozhye state medical University, 69035, Zaporozhye, Ukraine

The mesenteric group of human lymph nodes is known for its active participation in the induction of immunological tolerance and contains single hemal nodes. A distinctive feature of these nodes is blood circulation in the sinus system, although the functional value of this feature remains unclear. In our study, we compared the expression of genes of tolerant factors FOXP3, TGF-p, IL-10 and transcription factors of proinflammatory («colitogenic») forms of T-helpers - RORC (Th17-cells), TBX21 (Th1-cells) in human mesenteric hemal and lymph nodes using real-time PCR. As a result, it was found that the level of the relative normalized number of mRNA genes of tolerant factors is reduced in the hemal nodes compared to lymph nodes, and the transcription factors of proinflammatory forms of T-helpers are increased. At the same time, a greater number of neutrophilic granulocytes were detected in the sinus system of the hemal nodes compared to the peripheral blood, which may be an indirect confirmation of the presence of Th17 cells. Summing up the data obtained, it can be concluded that compared with mesenteric lymph nodes, the hemal nodes are characterized by a shift in the balance of tolerant/proinflammatory factors towards the latter, which makes it promising to conduct further studies of mesenteric GU in inflammatory bowel and liver diseases.

Keywords: human mesenteric lymph nodes, hemal nodes, immunological tolerance, Treg cells, Th17 cells, Th1 cells, neutrophilic granulocytes, inflammation. For citation: Pototskaya O.Yu., Lapsar A.S., Kamyshny A.M. Comparative analysis ofproinflammatory and tolerogenic factors expression in human mesenteric hemal and lymph nodes. Immunologiya. 2018; 39(5-6): 294-298. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-5-6-294-298

For correspondence: Pototskaya Olga Yur 'evna, Ph.D., lecturer of histology department of SE "Dnepropetrovsk medical academy of Health Ministry of Ukraine", E-mail: [email protected] Information about authors:

Pototskaya O.Yu, https://orcid.org/0000-0002-6799-7621 Lapsar H.S., https://orcid.org/0000-0003-1709-603X Kamyshnyi A.M., https://orcid.org/0000-0003-3141-4436

conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Acknowledgments. The study had no sponsorship.

Received 09.02.18

--Accepted 16.03.18

Для корреспонденции: Потоцкая Ольга Юрьевна, канд. мед. наук, доцент кафедры гистологии ДЗ «ДМА МЗУ», e-mail: [email protected].

Введение

Мезентериальная группа лимфатических узлов отличается повышенной способностью к индукции иммунологической толерантности, так как ежедневно через неё проходит большое количество антигенов, поступающих с пищей, ком-менсальной микрофлорой и в результате распада собственных клеток эпителия кишечника [1]. Именно брыжеечным лимфоузлам принадлежит ведущая роль в развитии феномена оральной толерантности [2], который состоит в снижении иммунной реактивности по отношению к пищевым антигенам, что широко используется в современных разработках профилактических методов аутоиммунных заболеваний [3]. Наряду с обычными лимфатическими узлами (ЛУ) в брыжейке кишечника также присутствуют гемальные узлы (ГУ), в синусах которых в смеси с лимфой циркулирует кровь. Описанию строения подобных узлов у животных посвящено множество работ [4-8], в то время как у человека они остаются практически не охарактеризованными, а их функция до сих пор не выяснена.

Основной особенностью строения гемальных узлов является впадение кровеносных сосудов (как правило, вен) в субкапсулярный синус, что приводит к целенаправленному забросу крови в систему пазух узла [9]. Некоторые авторы подразумевают полное отсутствие в таких узлах афферентных лимфатических сосудов [10-11], в то время как в других наблюдениях дополнительный приток лимфы наблюдался во всех образцах [9]. Оказываясь в контакте с представителями системы мононуклеарных фагоцитов, клетки красной крови подвергаются эритрофагоцитозу, что приводит к их элиминации и очищению лимфы по ходу ее движения от суб-капсулярного до воротного синуса [12]. Непосредственным свидетельством массового эритрофагоцитоза является наличие крупных макрофагов, переполненных липофусцином [9], которые в литературе получили название «клетки морской синевы». Некоторые авторы предполагают, что фагоцитирование эритроцитов в гемальных узлах приводит к индукции толерантности к собственным антигенам и таким образом предотвращает развитие аутоиммунной анемии [13]. В экспериментах на мышах было продемонстрировано, что внутривенная инфузия эритроцитов, искусственно наполненных чужеродным антигеном, приводит к снижению уровня гуморального ответа на этот антиген в сравнении с инъекцией свободной формы антигена [14]. В то же время значение ге-мальных узлов в выработке иммунологической толерантности остается практически не изученным.

Цель исследования - сравнить активность экспрессии генов толерогенных факторов (РОХР3, TGF-в, ^-10) и факторов транскрипции провоспалительных №17- и ТЦ-лимфоцитов (RORC, ТВХ21, соответственно), в лимфатических и гемальных узлах мезентериальной группы.

Материал и методы

Материалом для исследования послужили мезентериаль-ные гемальные и лимфатические узлы умерших вследствие соматических заболеваний (инфаркт миокарда, расслоение и разрыв аорты) людей. Для обеспечения однородности выборки в исследовании использовали ГУ с венозными афферентными сосудами, в то время как артериальные ГУ были исключены из наблюдения. Для полимеразной цепной реакции в реальном времени использовали 10 образцов гемальных узлов, полученные от разных пациентов; для сравнения уровня экспрессии выбранных генов использовались мезентериальные лимфатические узлы тех же пациентов. Материал, полученный во время аутопсии, фиксировали в нейтральном забуференном формалине, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. Для изучения гистологического строения гемальных узлов на светооптическом уровне срезы толщиной 5-7 мкм окра-

ORIGINAL ARTICLE

шивали гематоксилином-эозином в соответствии с общепринятой методикой.

Иммуногистохимические методы исследования

Срезы 7 мкм толщиной помещались на адгезивные стекла. После депарафинизации и регидратации проводили демаскировку антигена путем автоклавирования срезов в фосфатном буфере рН = 6,0 на протяжении 10 мин при температуре 90 °С. Для дальнейшей обработки срезов использовалась система визуализации LSAB2 System, HRP (биотинилиро-ванные антитела и пероксидазный комплекс, Dako, Дания) и DAB хромоген. Блокирование эндогенной пероксидазы осуществляли 3 % раствором перекиси водорода (пероксидазный блок из набора). Инкубацию с первичными антителами производили на протяжении 30-60 мин при комнатной температуре, согласно протоколу фирмы производителя. Были использованы первичные антитела mouse anti-human CD68 (1/100); rabbit anti-human Myeloperoxidase (1/100); все антитела производства Thermo Fisher Scientific (США). Согласно протоколу, после промывания срезов от неконъюгирован-ных антител Biotinylated Link, Streptavidin-HRP и Substrate-Chromogen Solution были последовательно использованы. До покрытия срезов стеклом их дополнительно докрашивали гематоксилином Майера. Анализ экспрессии маркёров проводили по коричневому цвету.

Подсчёт процентного содержания МПО+-клеток в синусах ГУ производили на увеличении х400 с учётом рекомендаций Автандилова [15].

Полимеразная цепная реакция в реальном времени

Срезы ГУ толщиной 15 мкм депарафинизировали в ксилоле и регидратировали в спиртах нисходящих концентраций. Выделение тотальной РНК проводили с помощью набора Trizol RNA Prep 100 («Изоген Lab., LTD», Россия). Для получения кДНК путём обратной транскрипции использовали набор ОТ-1 фирмы «Синтол». Реакционная смесь общим объёмом 25 мкл содержала 1 мкл Random-6 праймера, 2 мкл тотальной РНК, 11 мкл деионизированной Н2О, очищенной от нуклеаз, 10 мкл реакционной смеси и 1 мкл ревертазы MMLV-RT. Для определения уровней кДНК использовали набор Maxima SYBR Green/ROX qPCR MasterMix (2x) (Thermo Scientific, США) и амплификатор CFX96™ Real-Time PCR Detection Systems (Bio-Rad, США). Специфические пары праймеров для анализа исследуемого и референтного генов были подобраны с помощью программного обеспечения PrimerBlast (www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast) и изготовлены фирмой Thermo Scientific, США (табл. 1). После начальной денатурации в течение 10 мин при 95 °C амплификация состояла из 50 циклов и проводилась при следующих условиях: денатурация - 95 °С, 15 сек, отжиг - 58-64 °С, 30 сек., элонгация - 72 °С, 30 сек. Регистрация интенсивности флуоресценции проводилась в конце каждого цикла амплификации по каналу SybrGreen. В качестве референтного гена для определения относительного значения изменения уровня экспрессии исследуемых факторов был использован ген actin, beta (ACTB). Относительное нормализованное количество кДНК определяли методом ДД0. Статистический анализ данных ПЦР выполняли при помощи программного обеспечения CFX Manager ™ (Bio-Rad, США). Подобраны оптимальные условия ОТ-ПЦР для достижения линейной зависимости между числом циклов и количеством продуктов ПЦР. В эксперимент были включены негативные контроли: без добавления кДНК матрицы в реакцию ПЦР, без добавления мРНК матрицы в синтезе кДНК, без добавления фермента в синтезе кДНК. Все реакции амплификации проводили на индивидуальных образцах в трёх повторах.

Использованные праймеры отражены в таблице.

Статистический анализ

Статистическую обработку результатов проводили при помощи программного обеспечения «Statistica» (версия 6.1; серийный номер AGAR 909 Е 415822 FА). Полученные дан-

Иммунология. 2018; 39(5-6)

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-5-6-294-298 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

24 Г

TGF-R

Рис.1. Относительное нормализованное количество мРНК генов FOXP3 (а), IL-10 (б), TGF-в (в), TBX21 (г), RORC (д) в клетках мезентериальных ГУ по отношению к ЛУ (группа сравнения).

Нормализация по методу AACt с геном ACTB, c - группа сравнения; 1-10 - номера по порядку образцов, исследованных гемальных узлов, полученных от разных пациентов.

ные представляли в виде средних арифметических значений ± стандартная ошибка среднего. Для определения достоверности отличий между группами рассчитывали /-критерий Стьюдента. Критический уровень значимости (р) при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05.

результаты и их обсуждение

Поскольку функция мезентериальных ГУ человека остается практически не выясненной, в то время как участие ЛУ той же группы в индукции оральной толерантности доказана [2], мы провели сравнение этих узлов по активности экспрессии генов, принимающих участие в индукции толерантности и воспалительных реакциях.

В развитии оральной толерантности активное участие принимают Foxp3+Treg-клетки, которые дифференцируются из наивных CD4+Т-лимфоцитов под воздействием толерогенных дендритных клеток в мезентериальных ЛУ [16., 17]. Потеря функции гена FOXP3, которая наблюдается при синдроме 1РЕХ (иммунная дисрегуляция, полиэндокринопатия, энтеропатия, Х-сцепленный), приводит к множественным нарушениям в организме человека, но наиболее часто поражается кишечник, что подчёркивает роль Foxp3+Treg-клетки в установлении и поддержании толерантности в пищеварительной системе [18]. В проведённом нами исследовании было выявлено достоверно более низкое содержание мРНК гена FOXP3 во всех 10 исследованных образцах мезентери-альных ГУ человека по сравнению с ЛУ той же группой (рис.

1, а). Минимальный уровень относительного нормализованного количества мРНК гена FOXP3 наблюдался в образце ГУ № 3 (8 % от значений группы сравнения), а максимальный - в образце № 8 (92 % от значений группы сравнения).

Противовоспалительный цитокин ГЬ-10, который способствует дифференцировке наивных CD4+Т-лимфоцитов в Т^-клетки, также активно участвует в развитии феномена толерантности [19]. По данным литературы, пероральный приём протеинов миелиновой оболочки совместно с ГЬ-10 в эксперименте снижает остроту аутоиммунного энцефалита [20], а нокаут гена II-10 приводит к индукции аутоиммунного воспаления в стенке кишечника в результате потери толерантности к антигенам комменсальной микрофлоры [21]. В 9 из 10 исследуемых нами ГУ нормализованное количество мРНК гена II-10 было снижено по сравнению с ЛУ на 45-92 % (р < 0,05) (рис. 1, б). В то же время в образце ГУ № 7 относительное нормализованное количество мРНК гена II-10 в 3,72 раза достоверно превышало значение группы сравнения (см. рис. 1, б).

Существенная роль TGF-P в индукции оральной толерантности была также продемонстрирована в серии экспериментов по моделированию аутоиммунного энцефаломиелита [22, 23] и дополнительно подтверждается развитием фатальной аутоиммунной болезни у TGF-P нокаутных мышей уже в первые недели после рождения [24]. В 9 из 10 исследованных нами образцов ГУ нормализованное количество мРНК гена TGF-в было снижено на 50-98 % по сравнению с мезентери-

ORIGINAL ARTICLE

специфические праймеры, использованные в ОТ-ПЦр в режиме реального времени

Ген Нуклеотидная последовательность праймера тпл, °С Длина продукта ПЦР, п. н. Экзонный стык

ГОХРЗ Б = TCTGCACCTTCCCAAATCCC И= AAAGGGTGCTGTCCTTCCTG 59,96 59,89 48 730/731

ТВХ21 (ТЬеО Б = CCGTGACTGCCTACCAGAAT И = TTCAGCTGAGTAATCTCGGCA 59,46 59,18 40 1138/1139

КОКС (КОКу^ Б = AAGAAGACCCACACCTCACAA И= AGACGACTTGTCCCCACAGA 59,16 60,47 63 178/179

К-10 Б = TACGGCGCTGTCATCGATTT И= AGGCATTCTTCACCTGCTCC 60,18 60,03 69 437/438

ТОГ-Р Б = AGCAGGGATAACACACTGCAA И= AGTGAACCCGTTGATGTCCA 59,93 59,24 42 1551/1552

actin, beta (АСТВ) Б = CCTTTGCCGATCCGCCG 61,30 59 78/79

И = GATATCATCATCCATGGTGAGCTGG 61,15

альными ЛУ (р<0,05) (см. рис. 1, в). В то же время, в образце ГУ № 10 исследуемый параметр в 1,18 раза был достоверно выше значений группы сравнения (см. рис. 1, в).

Развитие воспалительных заболеваний кишечника, в частности болезни Крона, ассоциировано с усилением активности ТЬ^ и ТЬ17-клеток в мезентериальных ЛУ [25]. В экспериментах на мышах было продемонстрировано, что ТЬ17-клетки могут индуцировать развитие колита, а также дополнительно стимулировать иммунный ответ по ТЬ^типу [26]. При развитии бактериальной инфекции кишечника ТЬ17-клетки могут трансформироваться в ТЬ^клетки через промежуточную стадию RORyT+/T-bet+, для которой характерна одновременная секреция ГЬ-17Л и [27]. В свою очередь, ингибирование ТЦ/ТЬ^-ассоциированного иммунного ответа облегчает течение экспериментального колита у лабораторных животных [28].

Ключевым фактором транскрипции, коммутирующим Т-хелперы в направлении ТЬ-линии, является T-bet [29]; в 9 из 10 исследованных нами образцов мезентериальных ГУ относительное нормализованное количество мРНК гена этого протеина (TBX21) достоверно превышало значения группы сравнения в 1,33-11,36 раза (рис. 1, г). В то же время, в образце ГУ № 6 нормализованное количество мРНК гена TBX21 было снижено по сравнению с ЛУ на 79 % (р < 0,05) (см. рис. 1, г). При этом следует учитывать, что в том же образце отмечалось наиболее низкое нормализованное количество мРНК гена ТОГ-@ (на 98 % ниже группы ЛУ; р < 0,05), а нормализованное количество мРНК генов II-10 и FOXP3 было соответственно на 66 и 65 % ниже, чем в ЛУ Следует также добавить, что в образце ГУ № 7, в котором отмечалось превышение нормализованного уровня мРНК гена II-10 в 3,72 раза относительно ЛУ (р < 0,05) (см. рис. 1, б), было зафиксировано наибольшее количество мРНК гена ТВХ21 (в 11,36 раза больше значений группы сравнения, р < 0,05) (см. рис. 1, г).

В процессе дифференцировки ТЬ17-клеток ключевая роль принадлежит фактору транскрипции RORyT [30]. Относительное нормализованное количество мРНК соответствующего гена (RORC) во всех исследуемых образцах ГУ существенно превышало значения группы ЛУ: в 3,67-63,96 раза (р < 0,05; рис. 1, д). В образце № 10, где нормализованное количество мРНК гена ТОГ-@ в 1,18 раз превышало показания группы сравнения (р < 0,05) (см. рис. 1, в), отмечалось наибольшее количество мРНК RORC - в 63,96 раз по сравнению с ЛУ (р < 0,05) (см. рис. 1, д).

Известно, что ТЬ17-клетки продуцируют хемоаттрактант СХСЬ8, рекрутирующий нейтрофильные гранулоциты; в свою очередь нейтрофилы продуцируют факторы хемотаксиса ТЬ17-клеток: ССЬ2, ССЬ20 [31]. Принимая во внимание более высокие уровни экспрессии факторов транскрипции ТЬ17-клеток в ГУ по сравнению с ЛУ, нами произведён ана-

лиз срезов ГУ на наличие нейтрофильных гранулоцитов, которые выявлялись по характерной форме ядра (рис. 2, а). В то же время идентификация некоторых лейкоцитов была затруднена за счёт большого количества тёмных гранул, предположительно фагосом, заполняющих собой всю цитоплазму клеток (рис. 2, б, см обложку). Для более точного количественного анализа срезы обработали антителами к миелопе-роксидазе - одним из ключевых ферментов нейтрофилов; в результате подсчёта выявлено, что 59,6 ± 4,0 % лейкоцитов, содержащихся в синусах ГУ, окрашивались положительно (рис. 2, в, см обложку). При этом следует заметить, что соотношение лейкоцитов и эритроцитов в системе синусов ГУ существенно варьировало между образцами и в пределах каждого образца, но было не менее 1:10, что приблизительно в 100 раз выше по сравнению с периферической кровью. Более высокое содержание нейтрофилов в синусах ГУ по сравнению с периферической кровью может выступать косвенным подтверждением повышенной активности ТЬ17-клеток.

Ранее нами было проведено сравнительное морфологическое исследование гемальных и гемолимфатических узлов человека разной локализации, в ходе которого были предложены критерии классификации этих лимфоидных образований

[32]. Примечательно, что по сравнению с мезентериальными гемальными узлами (которые выступают объектом исследования в данной работе) в синусах панкреато-лиенальных гемолимфатических узлов не отмечено наличие нейтрофиль-ных гранулоцитов, в то время как в гемальных артериальных узлах присутствовали лишь единичные нейтрофилы. Скорее всего разный уровень содержания этих клеток обусловлен отличиями в системе афферентных сосудов соответствующих узлов, а также разным уровнем хемоаттрактантов, продуцируемых клетками стромы и паренхимы.

Согласованная эволюция Treg/Th17 клеток позволила позвоночным животным приспособиться к «сожительству» с большим количеством комменсальных микроорганизмов

[33]; нарушение баланса между этими видами Т-клеток может лежать в основе развития воспалительных заболеваний кишечника [34]. Выявленное в нашем исследовании увеличение экспрессии факторов транскрипции ТЬ1- и ТЬ17-клеток и снижение экспрессии фактора транскрипции Treg-клеток, а также толерогенных цитокинов (ГОБ-р, ГЬ-10) в мезентери-альных ГУ свидетельствует о смещении баланса в сторону так называемых «колитогенных» форм хелперов. Следует отметить, что даже в тех единичных образцах ГУ, в которых зафиксировано повышение экспрессии толерогенных факторов (ТОГ-@, Л-10) по сравнению с ЛУ, наблюдалось значительно большее повышение экспрессии факторов транскрипции про-воспалительных форм хелперов (RORС или ТВХ21). И наоборот, в единственном образце ГУ, в котором отмечалось снижение экспрессии ТВХ21 по сравнению с ЛУ, наблюдалось

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

ещё большее снижение экспрессии TGF-ft. Подобные результаты свидетельствуют о преобладании провоспалительных факторов над толерогенными, что делает перспективным проведение дальнейших исследований мезентериальных ГУ при воспалительных заболеваниях кишечника и печени.

Заключение

Мезентериальные гемальные узлы человека характеризуются более высоким уровнем экспрессии факторов транскрипции Th1- и ТЬ17-клеток (RORC, TBX21) и сниженной экспрессией генов FOXP3, TGF-ft, IL-10 по сравнению с лимфатическими узлами той же локализации, что свидетельствует о смещении баланса толерогенных и провоспалительных факторов в сторону последних.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ЛИТЕрАТУрА (пп. 1-8, 10-14, 16-31, 33, 34 см. в references)

9. Потоцкая О.Ю., Лапсарь А.С. Особенности строения и клеточного состава панкреатолиенальных гемолимфоузлов человека. Morpholo-gia. 2016; 10 (1): 77-86. 15. Автандилов Г. Г. Введение в количественную патологическую

морфологию. М.: Медицина, 1990. 32. Потоцкая О.Ю., Лапсарь А.С. Разновидности атипичных лимфатических узлов человека, выделенные на основании сравнительного морфологического анализа. Morphologia. 2016; 10 (2): 45-52.

references

1. Huang F.P., Platt N., Wykes M., Major J.R., Powell T.J., Jenkins C.D., MacPherson G.G. A discrete subpopulation of dendritic cells transports apoptotic intestinal epithelial cells to T cell areas of mesenteric lymph nodes. The Journal of experimental medicine. 2000; 191 (3): 435-44. doi: 10.1084/jem.191.3.435

2. Spahn T.W., Weiner H.L., Rennert P.D., LUgering N., Fontana A., Dom-schke W., Kucharzik T. Mesenteric lymph nodes are critical for the induction of high-dose oral tolerance in the absence of Peyer's patches. Eur. J. Immunol. 2002; 32 (4): 1109-13. doi: 10.1002/1521-4141-(200204)32:4<1109::AID-IMMU1109>3.0.C0;2-K

3. Kamyshny A., Putilin D., Kamyshna V. Reduced deaf1 mRNA expression during STZ-induced diabetes mellitus inhibits Foxp3+ regulatory T-cells differentiations in rat's pancreatic lymph nodes. Mediterranean Journal of Biosciences. 2015; 1 (1): 20-6.

4. Thorp B.H., Seneque S., Staute K., Kimpton W.G. Characterization and distribution of lymphocyte subsets in sheep hemal nodes. Dev. Comp. Immunol. 1991; 15 (4): 393-400. doi: 10.1016/0145-305X(91)90031-S

5. Sakita K., Fujino M., Koshikawa T., Ohmiya N., Ohbayashi M., Asai J. Structure and function of the hemolymph node in rats. Nagoya J. Med. Sci. 1997; 60 (3-4): 129-37.

6. Yoon Y.S., Lee J. S., Shin J.W. Age-related morphological studies on hemal node and hemolymph node in Korean native goat. Korean Journal of Veterinary Research. 1999; 39 (5): 865-77.

7. Zidan M., Pabst R. Histological, histochemical and immunohistochemi-cal study of the haemal nodes of the dromedary camel. Anat. Histol. Em-bryol. 2004; 33 (5): 284-9. doi: 10.1111/j.1439-0264.2004.00550.x

8. Zidan M., Pabst R. Histology of hemal nodes of the water buffalo (Bos bubalus). Cell Tissue Res. 2010; 340 (3): 491-6.

9. Pototska O.Yu., Lapsar H.S. Peculiarities of human pancreatolienal hemolymph node structure and cellular composition. Morphologiya. 2016; 10 (1): 77-86. (in Russian)

10. Akaydin Bozkurt Y, Kabak M. Morphology of haemal nodes in the roe deer (Capreolus capreolus). Anat. Histol. Embryol. 2010; 39 (5): 456-61. doi: 10.1111/j.1439-0264.2010.01016.x

11. Zhang W., Nasu T., Hosaka Y.Z., Yasuda M. Comparative studies on the distribution and population of immunocompetent cells in bovine hemal node, lymph node and spleen. J. Vet. Med. Sci. 2012; 74 (4): 405-11. doi: 10.1292/jvms.11-0405

12. Nopajaroonsri C., Luk S.C., Simon G.T. The structure of the hemolymph node - a light, transmission, and scanning electron microscopic study. J. Ultrastruct. Res. 1974; 48 (3): 325-341.

13. Castenholz H.E., Castenholz A. Fluorescence microscopic studies on hemal lymph nodes in rats: a new immunobiological concept. Lymphology 1996; 29 (4): 141-50.

14. Cremel M., Guerin N., Horand F., Banz A., Godfrin Y. Red blood cells

as innovative antigen carrier to induce specific immune tolerance. Int. J. Pharm. 2013; 443 (1-2): 39-49. doi: 10.1016/j.ijpharm.2012.12.044

15. Avtandilov G.G. Introduction to quantitative pathological morphology. [Vvedenie v kolichestvennuiu patologicheskuiu morfologiiu]. Moscow: Meditsina; 1990. (in Russian)

16. Fukaya T., Takagi H., Sato Y., Sato K., Eizumi K., Taya H., Shin T., Chen L., Dong C., Azuma M., Yagita H., Malissen B., Sato K. Crucial roles of B7-H1 and B7-DC expressed on mesenteric lymph node dendritic cells in the generation of antigen-specific CD4+Foxp3+ regulatory T cells in the establishment of oral tolerance. Blood. 2010; 116 (13): 2266-76. doi: 10.1182/blood-2009-10-250472

17. Hadis U., Wahl B., Schulz O., Hardtke-Wolenski M., Schippers A., Wagner N., Müller W., Sparwasser T., Förster R., Pabst O. Intestinal tolerance requires gut homing and expansion of FoxP3+ regulatory T cells in the lamina propria. Immunity. 2011; 34 (2): 237-46. doi: 10.1016/j. immuni.2011.01.016

18. Gambineri E., Torgerson T.R., Ochs H.D. Immune dysregulation, polyen-docrinopathy, enteropathy, and X-linked inheritance (IPEX), a syndrome of systemic autoimmunity caused by mutations of FOXP3, a critical regulator of T-cell homeostasis. Current opinion in rheumatology. 2003; 15(4): 430-5.

19. Battaglia M., Gianfrani C., Gregori S., Roncarolo M.G. IL-10-producing T regulatory type 1 cells and oral tolerance. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004; 1029: 142-53. doi: 10.1196/annals.1309.031

20. Slavin A.J., Maron R., Weiner H.L. Mucosal administration of IL-10 enhances oral tolerance in autoimmune encephalomyelitis and diabetes. Int Immunol. 2001; 13 (6): 825-33. doi: 10.1093/intimm/13.6.825

Sydora B.C., Tavernini M.M., Wessler A., Jewell L.D., Fedorak R.N. Lack of interleukin-10 leads to intestinal inflammation, independent of the time at which luminal microbial colonization occurs. Inflammatory bowel diseases. 2003; 9(2): 87-97. doi: 10.1097/00054725-200303000-00002

21. Khoury S.J., Hancock W.W., Weiner H.L. Oral tolerance to myelin basic protein and natural recovery from experimental autoimmune encephalo-myelitis are associated with downregulation of inflammatory cytokines and differential upregulation of transforming growth factor ß, interleukin 4 and prostaglandin E expression in the brain. J. Exp. Med. 1992; 176: 1355. doi: 10.1084/jem.176.5.1355

22. Miller A., Lider O., Robers A. B., Sporn M., Weiner H. L. Suppressor T cells generated by oral tolerization to myelin basic proteins suppress both in vitro and in vivo responses by the release of transforming growth factor ß after antigen-specific triggering. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992; 89: 421.

23. Diebold R.J., Eis M.J., Yin M., Ormsby I., Boivin G.P., Darrow B.J., Saf-fitz J.E., Doetschman T. Early-onset multifocal inflammation in the transforming growth factor beta 1-null mouse is lymphocyte mediated. Proceedings of the National Academy of Sciences. 1995; 92(26):12215-9.

24. Sakuraba A., Sato T., Kamada N., Kitazume M., Sugita A., Hibi T. Th1/ Th17 immune response is induced by mesenteric lymph node dendritic cells in Crohn's disease. Gastroenterology. 2009; 137 (5): 1736-45. doi: 10.1053/j.gastro.2009.07.049

25. Feng T., Qin H., Wang L., Benveniste E.N., Elson C.O., Cong Y. Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production. J. Immunol. 2011; 186 (11): 6313-8. doi: 10.4049/jimmunol.1001454

26. Morrison P. J., Bending D., Fouser L.A., Wright J.F., Stockinger B., Cooke A., Kullberg M.C. Th17-cell plasticity in Helicobacter hepaticus-induced intestinal inflammation. Mucosal immunology. 2013; 6(6): 1143-56. doi: 10.1038/mi.2013.11

27. Tao F., Qian C., Guo W., Luo Q., Xu Q., Sun Y. Inhibition of Th1/Th17 responses via suppression of STAT1 and STAT3 activation contributes to the amelioration of murine experimental colitis by a natural flavonoid glucoside icariin. Biochem. Pharmacol. 2013; 85 (6): 798-807. doi: 10.1016/j.bcp.2012.12.002

28. Szabo S.J., Kim S.T., Costa G.L., Zhang X., Fathman C.G., Glimcher L.H. A novel transcription factor, T-bet, directs Th1 lineage commitment. Cell. 2000; 100(6): 655-69. doi: 10.1016/S0092-8674(00)80702-3

29. Ivanov I.I., McKenzie B.S., Zhou L., Tadokoro C.E., Lepelley A., Lafaille J.J., Cua D.J., Littman D.R. The orphan nuclear receptor RORyt directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+ T helper cells. Cell. 2006; 126 (6): 1121-33. doi: 10.1016/j.cell.2006.07.035

30. Pelletier M., Maggi L., Micheletti A., Lazzeri E., Tamassia N., Costantini C. et al. Evidence for a cross-talk between human neutrophils and Th17 cells. Blood. 2010; 115(2): 335-43. doi: 10.1182/blood-2009-04-216085

31. Pototska O.Yu., Lapsar H.S. Subtypes of human atypical lymph nodes, defined based on comparative morphological analysis. Morphologiya. 2016; 10 (2): 45-52. (in Russian)

32. Weaver C.T., Hatton R.D. Interplay between the TH17 and TReg cell lineages: a (co-) evolutionary perspective. Nat. Rev. Immunol. 2009; 9(12): 883-9.

33. Gong Y., Lin Y., Zhao N., He X., Lu A., Wei W., Jiang M. The Th17/ Treg Immune Imbalance in Ulcerative Colitis Disease in a Chinese Han Population. Mediators of inflammation. 2016: 7089137. doi: 10.1155/2016/7089137

Поступила 09.02.18 Принята к печати 16.03.18