CC BY
7
https://doi.org/10.35754/0234-5730-2023-68-2-202-218 [M]
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КАЧЕСТВА СКРИНИНГА ДОНОРСКОЙ КРОВИ НА НАЛИЧИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Мисько О. Н.1*, Тихомиров Д. С.1, Солдатова Т. А.1, Агуралиева Р. М.2, Кудинова Е. В.3, Македонская О. Г.4, Воробьева К. В.5, Бочкова Г. Д.6, Зубарева Л. М.7, Салимов Э. Л.8, Моор Ю. В.9, Абакаров Р. Р.1, Гуляева А. А.1, Туполева Т. А.1, Гапонова Т. В.1, П
1 ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 125167 Москва, Россия
2 ГБУ РД «Республиканская станция переливания крови», 367008, Республика Дагестан, Махачкала, Россия ГБУЗ «Самарская областная клиническая станция переливания крови», 443068, Самара, Россия ГБУЗ Республики Мордовия «Мордовская республиканская станция переливания крови», 430030, Республика Мордовия, Саранск, Россия
5 ГБУЗ «Станция переливания крови Министерства здравоохранения Краснодарского края», 350051, Краснодар, Россия
6 ГУЗ «Станция переливания крови Ростовской области», 34 4 037, Ростов-на-Дону, Россия
7 ОГБУЗ «Смоленский центр крови», 214014, Смоленск, Россия
8 ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), «Межклиническая иммунологическая лаборатория ЦЛДС ЛГК КЦ», 119435, Москва, Россия
9
ГБУЗ НСО «Новосибирский клинический центр крови», 630054, Новосибирск, Россия
BY 4.0
Введение. Переливания компонентов донорской крови незаменимы при оказании медицинской помощи при большом количестве состояний и заболеваний. Поэтому вопрос повышения качества и безопасности трансфузий актуален для здравоохранения.
Цель — оценить качество скрининга донорской крови на рибонуклеиновые кислоты (РНК) вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса гепатита С (ВГС), дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) вируса гепатита В (ВГВ) в медицинских организациях.
Методы: полимеразная цепная реакция, иммунохемилюминесцентный и иммуноферментный анализ, описательная статистика.
Результаты. Проведено исследование оценки качества молекулярного скрининга донорской крови в медицинских организациях, который проводили в два этапа. Для каждого этапа были созданы и переданы участникам панели контрольных образцов, содержавших и не содержавших нуклеиновые кислоты ВГВ, ВГС и ВИЧ. На первом этапе панель содержала 40 образцов. Участниками было выполнено 13 отдельных серий исследований (520 тестов), на втором этапе было выполнено 8 отдельных серий исследований (80 тестов). Количество панелей определялось имевшимся у каждого участника оборудованием. Участниками, использовавшими систему приборов для проведения скрининга донорской крови и ее продуктов методом генамплификации нуклеиновых кислот с помощью автоматизированной станции для скрининга донорской крови на наличие вирусов <^obas s 201», было получено достоверно большее число корректных результатов (255 из 330 образцов; р < 0,001), чем участниками, использовавшими другие лабораторные комплексы и реагенты («АмплиСенс» — 86 из 140, «Procleix Panther» — 29 из 40, «Вектор-Бест» — 16 из 40). Всего участникам исследования было предоставлено 355 образцов, содержащих ДНК ВГВ; 121 образец, содержащий РНК ВГС; и 82 образца, содержащих РНК ВИЧ. ДНК ВГВ была выявлена в 191 (53,8 %) из 355 образцов, РНК ВГС — в 119 (98,3 %) из 121 образца, РНК ВИЧ — в 76 (92,7 %) из 82 образцов.
Заключение. Доля несоответствий в результатах увеличивалась в зависимости от уменьшения концентрации определяемого маркера. Участники исследования, использовавшие закрытые системы, представили лучшие итоги работы — ими было получено наименьшее количество несоответствий. Наибольшее число некорректных результатов получено при определении ДНК ВГВ, что связано с ее меньшей концентрацией. Все образцы крови доноров с низкой
концентрацией ДНК ВГВ, на основе которых были созданы контрольные панели, содержали антитела к ядерному антигену ВГВ (аnti-HBc), что свидетельствует о наличии латентной формы инфекции у этих доноров. Включение а^^НВс в рутинное исследование донорской крови представляется целесообразным.
Ключевые слова: донорство крови, контроль качества, вирусная безопасность крови Конфликт интересов: авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Финансирование: исследование не имело спонсорской поддержки.
Для цитирования: Мисько О.Н., Тихомиров Д.С., Солдатова Т.А., Агуралиева Р.М., Кудинова Е.В., Македонская О.Г., Воробьева К.В., Бочкова Г.Д., Зубарева Л.М., Салимов Э.Л., Моор Ю.В., Абакаров Р.Р., Гуляева А.А., Туполева Т.А., Гапонова Т.В., Паровичникова Е.Н. Сравнительное исследование качества скрининга донорской крови на наличие молекулярных маркеров вирусных инфекций. Гематология и трансфузиология. 2023; 68(2):202-218. https://doi.org/10.35754/0234-5730-2022-68-2-202-218
I COMPARATIVE STUDY OF THE QUALITY OF SCREENING OF DONATED BLOOD FOR THE PRESENCE OFMOLECULAR MARKERS OF VIRAL INFECTIONS
Misko O. N.1*, Tikhomirov D. S.1, Soldatova T. A.1, Aguralieva R. M.2, Kudinova E. V.3, Makedonskaya O. G.4, Vorobyova K. V.5, Bochkova G. D.6, Zubareva L. M.7, Salimov E. L.8, Moor Ju. V.9, Abakarov R. R.1, Gulyaeva A. A.1, Tupoleva T. A.1, Gaponova T. V.1, Parovichnikova E. N.1
1 National Medical Research Center for Hematology, 12516/, Moscow, Russian Federation
2 Republican Blood Transfusion Station, 367008, Republic of Dagestan, Makhachkala, Russian Federation
3 Samara Regional Blood Transfusion Station, 443068, Samara, Russian Federation
4 Mordovian Republican Blood Transfusion Station, 430030, Republic of Mordovia, Saransk, Russian Federation
5 Blood Transfusion Station of the Ministry of Health of the Krasnodar Territory, 350051, Krasnodar, Russian Federation
6 Blood Transfusion Station in the Rostov Region, 34403/ Rostov-on-Don, Russian Federation
7 Smolensk Blood Center, 214014, Smolensk, Russian Federation
8 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Interclinical Immunological Laboratory, 119435, Moscow, Russian Federation
9 Novosibirsk Blood Center, 630054, Novosibirsk, Russian Federation
ABSTRACT
Introduction. Transfusions of donor blood components are indispensable in providing medical care for a large number of conditions and diseases. Therefore, the issue of improving the quality and safety of transfusions is relevant for healthcare worldwide.
Aim — to assess the quality of donor blood screening for HIV, HBV and HCV by PCR in several Russian blood banks. Methods: PCR, CLIA and ELISA.
Results. A study was conducted to assess the quality of molecular screening of donated blood in medical organizations, which was carried out in two stages. Two different kits of control samples for each project stage were created and delivered to the project participants (blood banks). Each kit contained samples with or without HBV DNA / HIV RNA / HCV RNA. The first stage's kit contained 40 samples, the second one — 10 samples. Thus, project participants performed 13 series of test runs
(520 tests) on the first stage and 8 series of runs (80 tests) on the second one. The number kits copies sent to one participant was determined by the participant's laboratory equipment.
Participants who used the Cobas performed 330 tests, of which 255 were incorrect. Participants using the Procleix performed 40 tests, and 29 tests gave a false result. 140 samples were tested by AmpliSens, and results in 86 cases were incorrect. One participant used Vector-Best test kits and performed 40 tests, 16 of which returned incorrect.
In total, 355 samples containing HBV DNA, 121 samples containing HCV RNA, and 82 samples containing HIV RNA were provided to project participants. HBV DNA was detected in 191 (53.8 %) of 355 samples, HCV RNA was detected in 119 (98.3 %) of 121 samples, and HIV RNA was detected in 76 (92.7 %) of 82 samples.
Conclusion. The proportion of inconsistencies in the results increased depending on the decrease in the concentration of the marker being determined. Participants demonstrated the best performance results if they were using branded equipment. Such participants received the least inconsistencies. The biggest issue concerned HBV DNA detection due to a lower viremia of this pathogen. All samples with low HBV DNA levels contained anti-HBc, which indicates potential latent HBV. Therefore, it is appropriate to include anti-HBc in the routine screening of donated blood.
Keywords: blood donor, quality control, viral safety of blood Conflict of interest: the authors declare no conflict of interest. Financial disclosure: the study had no sponsorship.
For citation: Misko O.N., Tikhomirov D.S., Soldatova T.A., Aguralieva R.M., Kudinova E.V., Makedonskaya O.G., Vorobyova K.V., Bochkova G.D., Zuba-reva L.M., Salimov E.L., Moor Ju.V., Abakarov R.R., Gulyaeva A.A., Tupoleva T.A., Gaponova T.V., Parovichnikova E.N. Comparative study of the quality of screening of donated blood for the presence of molecular markers of viral infections. Gematologiya i transfuziologiya. 2023; 68(2): 202-218. https://doi. org/10.35754/0234-5730-2022-68-2-202-218
Введение
Переливания компонентов донорской крови незаменимы при оказании медицинской помощи при большом количестве состояний и заболеваний. Поэтому вопрос повышения качества и безопасности трансфузий актуален для здравоохранения. Несмотря на достижения современных медицинских и лабораторных методов, любая трансфузия компонентов донорской крови не может считаться абсолютно безопасной, поскольку всегда существует вероятность переноса инфекционных агентов, не выявленных на этапе обследования донора [1].
Введение систем мультиплексного скрининга на наличие нуклеиновых кислот (НК) с применением высокоавтоматизированных и высокопроизводительных платформ в формате мини-пулов или индивидуально снизило риск трансфузионной передачи таких патогенов, как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус гепатита В (ВГВ) и вирус гепатита С (ВГС) в США до 1 случая инфицирования на 10 млн донаций [2]. Результаты скрининга образцов донорской крови в Германии соответствуют результатам исследований в других европейских странах и США и демонстрируют сравнительно небольшое число случаев выявления молекулярных маркеров ВГВ, ВГС и ВИЧ. Согласно опубликованным данным, скрининг образцов донорской крови на основе анализа нуклеиновых кислот (nucleic acid testing, NAT) проводится в формате мини-пулов. На 1 млн донаций повторных доноров в 5,98 случая обнаруживаются маркеры ВИЧ-инфекции, в 5,32 — ВГС и в 9,86 — ВГВ [3].
В условиях напряженной эпидемиологической ситуации с ВИЧ-инфекцией в РФ (табл. 1) выявление инфи-
цированных лиц из числа доноров крови необходимо для предупреждения риска передачи возбудителя транс-фузионным путем. Патогенные микроорганизмы подвержены фенотипическим и генотипическим изменениям, возникающим в результате естественного течения инфекции, что не является исключением для вирусов с парентеральным путем передачи. При этом в вирусах, содержащих рибонуклеиновые кислоты (РНК), ВИЧ и ВГС, подобные изменения происходят с достаточно высокой скоростью из-за особенностей репродуктивного цикла. РНК-полимераза, участвующая в вирусной репликации (в случае ВИЧ — дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК)-зависимая, в случае ВГС — РНК-зависимая), чаще, чем ДНК-полимераза, совершает ошибки при синтезе новой цепи вирусной РНК [4]. ВИЧ-1 отличается чрезвычайно высоким уровнем мутаций, частота составляет 10-4—10-5 мутаций на нуклеотид за один цикл репликации [5], скорость замены нуклеотидов существенно выше, чем у других вирусов. Помимо точечных мутаций у ВИЧ может произойти рекомбинация при обратной транскрипции, поскольку ВИЧ обладает диплоидным геномом. Скорость этого процесса в 10—15 раз выше, чем скорость точечных мутаций [5]. Благодаря этому может происходить накопление мутаций, которые могут быть ассоциированы с удлинением инкубационного периода, в течение которого виремия может длительное время находиться в пределах, ниже аналитической чувствительности современных диагностических тест-систем. Однако даже при низком содержании вируса в донорской крови риск передачи инфекции при трансфузии не исключен.
Таблица 1. Заболеваемость населения социально значимыми болезнями, согласно данным Федеральной службы государственной статистики [8]
Table 1. Morbidity of the population with socially significant diseases according to National Statistics Service [8]
Заболевания Годы / Years
Diseases 2000 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018 2019 2020
Всего, тыс. чел. / Total, thousand peopl e
ОВГВ / aVHB 62,0 12,4 10,1 7,5 5,7 3,8 3,2 2,4 2 1,9 1,9 1,6 1,4 1,3 1 0,8 0,5
ОВГС / aVHC 30,8 6,4 5,9 5,1 4,0 3,2 3,0 2,6 2,2 2,1 2,2 2,1 1,8 1,8 1,6 1,5 1
СПИД / AIDS 78,6 234,8 237,2 267,5 301,3 332,9 422,3 422,3 438,4 463,3 522,3 581,6 658,1 693,1 712,5 74774 842
Примечание. ОВГВ — острый вирусный гепатит В; ОВГС — острый вирусный гепатит С; СПИД — болезнь, вызванная вирусом иммунодефицита человека.
Note. aVHB — acute viral hepatitis B; aVHC — acute viral hepatitis C; AIDS — disease caused by the human immunodeficiency virus.
Несмотря на ежегодное снижение заболеваемости острыми вирусными гепатитами В и С (табл. 1), отмечается увеличение количества латентных форм вирусного гепатита, при которых концентрация вируса в крови может находиться на низком уровне и не определяться даже высокочувствительными тест-системами, что затрудняет полноценное выявление инфицированных доноров [6, 7].
Наличие «негативного окна» и мутантных форм вирусов, «ускользающих» при проведении стандартных исследований, осложняет выявление первичного инфицирования донора на ранних сроках и определяет риск инфицирования реципиента.
В последние годы особое внимание уделяется вопросам повышения качества рекрутирования доноров и организации заготовки компонентов крови преимущественно от безвозмездных повторных доноров, поскольку данные подходы показали свою эффективность в повышении безопасности трансфузий. Однако только указанные меры не могут гарантировать абсолютную инфекционную безопасность реципиента при проведении гемокомпонентной терапии, поскольку нельзя исключить вероятность первичного инфицирования и/или наличия латентных форм инфекции даже в этой группе доноров [9, 10].
Согласно Приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 28.10.2020 № 1166 н [11], моле-кулярно-биологические исследования образцов донорской крови проводят для идентификации НК ВИЧ, ВГВ и ВГС, допускается проведение исследования в формате мультиплексного анализа, в единичных постановках — индивидуально или в мини-пуле не более, чем из 6 образцов. Для проведения исследования в мини-пуле рекомендуется применять наборы реагентов с чувствительностью в расчете на одну донацию не ниже: ВИЧ — 10 000 МЕ/ мл, ВГС — 5000 МЕ/мл, ВГВ — 100 МЕ/мл. В случае доказанного посттрансфузионного инфицирования реципиента осуществляют уточнение возможности применения наборов реагентов для обследования доноров, которыми были исследованы соответствующие образцы донорской крови.
Поскольку из одной единицы цельной крови получают свежезамороженную плазму и эритроциты (две
трансфузионные среды), то компоненты крови от одного своевременно не выявленного инфицированного донора могут стать источником инфекции для двух и более реципиентов. Таким образом, применение особых требований к качеству лабораторного скрининга донорской крови актуально. Одним из инструментов оценки качества лабораторного исследования является проведение сравнительного анализа результатов лабораторного скрининга образцов крови доноров медицинских организаций службы крови.
Всемирной организацией здравоохранения в 2020 г. начат четырехлетний проект [12], результатом которого должно стать ускорение доступа к безопасной крови и ее продуктам, улучшение методов лечения на основе применения компонентов донорской крови, что также подтверждает актуальность вопросов качества лабораторного скрининга. Одной из ключевых целей проекта является обеспечение эффективного эпидемиологического надзора, гемонадзора и фармаконадзора с опорой на системы сбора комплексных и надежных данных.
Цель настоящей работы — оценить качество скрининга донорской крови на РНК ВИЧ, ДНК ВГВ и РНК ВГС в медицинских организациях.
Материалы и методы
Национальным гематологическим обществом (НГО) на базе ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России был разработан протокол проведения многоцентрового клинического исследования «Оценка качества скрининга донорской крови на наличие молекулярных маркеров гемотрансмиссивных инфекций». Он был одобрен локальным этическим комитетом 30.01.2020. Согласно данному протоколу, предполагалось создание панели контрольных образцов плазмы крови доноров, содержащих и не содержащих вирусные НК, предназначенных для скрининга в организациях службы крови Российской Федерации. Для выполнения исследования были разработаны проекты следующих документов: проект электронных форм ввода данных в информационную систему, типовой договор о сотрудничестве с учреждениями службы крови, который был заключен между НГО и каждым
участником исследования, акт передачи образцов донорской крови.
В исследовании участвовали 9 организаций службы крови: ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, ГБУ РД «Республиканская станция переливания крови», ГБУЗ «Самарская областная клиническая станция переливания крови», ГБУЗ Республики Мордовия «Мордовская республиканская станция переливания крови», ГБУЗ «Станция переливания крови Министерства здравоохранения Краснодарского края», ГУЗ «Станция переливания крови Ростовской области», ОГБУЗ «Смоленский центр крови», «Межклиническая иммунологическая лаборатория ЦЛДС ЛГК КЦ» ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), ГБУЗ НСО «Новосибирский клинический центр крови».
Исследование было осуществлено в два этапа. На первом этапе участникам было предложено протестировать панель из 40 закодированных образцов объемом 1,5 мл, содержавших или не содержавших НК, из которых 10 образцов содержали цельную плазму крови доноров; 10 образцов имитировали мини-пул из 3 образцов, 10 образцов имитировали мини-пул из 6 образцов, и 10 образцов имитировали мини-пул из 10 образцов. После проведения первого этапа исследования, помимо результатов исследования образцов контрольной панели, от медицинских организаций-участников были собраны критические замечания и пожелания. Таким образом, второй этап работы носил уточняющий характер. На втором этапе участникам исследования предлагалась для тестирования панель из 10 закодированных образцов объемом 2 мл, содержавших или не содержавших НК, из которых 5 образцов состояли из цельной плазмы крови доноров; 4 образца были разбавлены отрицательной плазмой донорской крови до минимального определяемого
содержания маркера, 1 образец имитировал микст-инфекцию и содержал НК всех трех определяемых вирусов в минимальной концентрации.
Панели контрольных образцов создавали из плазмы крови доноров, содержавшей вирусные НК, отрицательной по результатам серологического скрининга на стандартные инфекционные маркеры (антитела и антиген ВИЧ, поверхностный антиген ВГВ, антитела к ВГС). Плазма крови для создания панели контрольных образцов была собрана участниками исследования и передана в ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России. Переданные образцы были повторно протестированы в ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России для качественной и количественной оценки, и создания панелей. Образцы, содержавшие ДНК ВГВ, были дополнительно протестированы на наличие антител против поверхностного антигена ВГВ (anti-HВэ) и ядерного антигена ВГВ (anti-HBc). Количественное определение ДНК ВГВ в образцах, содержавших данную НК в низкой концентрации, было выполнено в отделе лабораторной диагностики НИИ «Скорой помощи им. Н.В. Склифосовского» на автоматизированной системе «Cobas 6800», использующей реагенты в кассете для количественного определения ДНК ВГВ с заявленной аналитической чувствительностью 3 МЕ/мл. Характеристика образцов плазмы донорской крови, собранной участниками исследования, на основе которых создавались панели контрольных образцов, представлена в таблице 2.
Для NAT-тестирования использовали наборы реагентов «АмплиСенс ВИЧ-Монитор-FRT», «АмплиСенс НСУ-Монитор-FL», «АмплиСенс НВУ-Монитор-FL», для серологических исследований применялись наборы реагентов «ВектоHBsAg-антитела», «ВектоHBcAg-%М», «ВектоHBcAg-антитела», «ВектоHBe-IgG».
Было создано 15 комплектов панелей контрольных образцов. Все комплекты были заморожены при тем-
Таблица 2. Характеристика образцов плазмы донорской крови, на основе которых создавались панели контрольных образцов Table 2. Characteristics of donor's plasma samples used for control samples creation
Образец Sample НК, обнаруженная в крови донора NА detected in the donor's blood Концентрация НК, МЕ/мл NA concentration, IU/mL Маркеры ВГВ HBV markers
1 ВГВ / HBV < 10 anti-HBs 13 МЕ/л / 13 IU/mL, anti-HBc(+)
2 ВИЧ / HIV 1,05 * 104 Не обнаружены / Not detected
3 ВГВ / HBV < 3 anti-HBs(-), anti-HBc(+)
4 ВГВ / HBV 2,9 * 106 anti-HBs, anti-HBs(-), anti-HBc(+)
5 ВГВ / HBV < 3 anti-HBs, anti-HBs(-), anti-HBc(+)
6 ВГВ / HBV < 3 anti-HBs(-), anti-HBc(+)
7 НК не обнаружена (отрицательная плазма) NА not detected (Negative sample) Не измеряли Not measured Не обнаружены Not detected
8 ВГВ / HBV < 10 anti-HBs(-), anti-HBc(+)
9 ВГС / HCV 6,36 * 105 Не обнаружены / Not detected
10 ВГВ / HBV 96,8 anti-HBs(-), aHBc(+)
пературе —20 °С. Необходимое количество панелей в зависимости от количества используемых методов исследования было отправлено участникам исследования для выполнения скрининга на молекулярные маркеры гемотрансмиссивных инфекций в режиме рутинных лабораторных исследований. Во время транспортировки обеспечивалось соблюдение требований «холодовой цепи».
При выполнении исследования было разработано и размещено на сайте НГО программное обеспечение под названием «Многоцентровое исследование. Оценка качества скрининга донорской крови на наличие молекулярных маркеров гемотрансмиссивных инфекций», позволявшее участникам исследования регистрироваться и загружать результаты исследования панелей контрольных образцов. На основании данных, предоставленных участниками исследования, был сформирован отчет, содержавший: список участников исследования (медицинских организаций службы крови); перечень реагентов и медицинского оборудования, применяемых ими для молекулярной диагностики; количество панелей контрольных образцов, отправленных участникам; полученные результаты тестирования. Участниками исследования были использованы следующие сочетания наборов реагентов и приборов:
1. «АмплиСенс HCV/HBV/HIV-FL», «АмплиСенс МАГНО-сорб», станция Neon-100 (Xiril), Qiagen Rotor Gene O;
60
2. «Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0», модульная система «Cobas s 201»;
3. «Procleix Ultrio Elite Assay», система Procleix Panther Grifols;
4. «Вектор-Бест» РеалБест ВГВ/ВГС/ВИЧ ПЦР;
5. «Реагенты в кассете MPX для выявления НК ВИЧ, вируса гепатита В и вируса гепатита С в плазме и сыворотке крови человека на системе Cobas 6800», автоматизированная система «Cobas 6800».
Согласно инструкциям к использованным наборам реагентов, аналитическая чувствительность соответствует требованиям приказа Минздрава России № 1166 н [11] и приведена на рис. 1.
Корректным результатом считали результат исследования, совпадавший по наличию или отсутствию инфекционного маркера, заложенного организаторами исследования. В случае несовпадения результатов исследования, полученных участником и организатором, полученный результат считали «некорректным».
Статистический анализ. Для статистических расчетов критериев Пирсона (х2) или точного критерия Фишера использовали пакет программ EPI5 версии 5.0. Доверительный интервал статистически значимых различий составлял 5 % (р = 0,05).
Результаты
На первом этапе исследования участниками были выполнены 13 отдельных постановок (520 тестов), с по-
50 50,3
л
м
£ хЕ
U \
0
1 — льн ty,
и Ф
<С
Roche Cobas s201 v.3
Roche Cobas 6800 Procleix Panther
Тест-системы, использованные участниками исследования
Tests used by study participants
Рисунок 1. Аналитическая чувствительность используемых диагностических наборов реагентов, МЕ/мл Figure 1. Analytical sensitivity of used diagnostic reagent kits, IU/mL
мощью наборов реагентов, имевшихся в наличии в организациях службы крови. Результаты тестирования представлены в таблице 3.
Анализатор «Cobas s 201» и реагенты «TaqScreen MPX Test, v2.0» использовали 7 из 9 участников исследования. Результаты 4 образцов не учитывались в анализе, т. к. в связи с ошибкой аспирации при работе прибора исследование не было выполнено (табл. 3). Количество некорректных результатов составляло от 8 до 13 из 40, при этом их количество увеличивалось с увеличением размера пула, то есть с увеличением разведения исходного положительного образца. Все несоответствия были связаны с детекцией ДНК ВГВ (рис. 2). Во всех образцах, содержавших ДНК ВГВ, присутствовали anti-HBc.
Участник № 9 использовал «Реагенты в кассете MPX для выявления НК ВИЧ, вируса гепатита В и вируса гепатита С в плазме и сыворотке крови человека» на системе «Cobas 6800». Некорректных результатов было зарегистрировано 8 из 40, из них 7 были обусловлены ложноотрицательными результатами выявления ДНК ВГВ и 1 — ложноположительным обнаружением
РНК ВИЧ.
Участник № 1 при использовании системы «Procleix Panther» с набором реагентов «Procleix Ultrio Elite Assay» получил 11 некорректных результатов при исследовании 40 контрольных образцов.
Три участника использовали в работе реагенты «АмплиСенс HCV/HBV/HIV-FL». Был получен 1 невалидный результат (ингибирование обратной транскрипции и/или амплификации внутреннего контрольного образца, добавляемого на этапе выделения НК), который не учитывали в анализе. Количество некорректных результатов составило от 14 до 19 из 40, причем количество несоответствий зависело от кон-
центрации определяемого маркера (НК) в образцах (рис. 3). Наибольшие затруднения вызвала детекция ДНК ВГВ, а в 1 случае был зафиксирован ложнополо-жительный результат по РНК ВИЧ.
При использовании диагностикума «РеалБест ВГВ/ ВГС/ВИЧ ПЦР» участником № 2 некорректных результатов получено 24 из 40, и все они были связаны с детекцией ДНК ВГВ.
Анализ результатов, полученных на первом этапе исследования, показал, что наибольшую сложность в идентификации составили образцы, содержавшие ДНК ВГВ, особенно в низких концентрациях, и при разведениях, имитирующих мини-пулы (разведение нативного образца негативным по инфекционным маркерам образцом крови донора 1:3, 1:6 и 1:10). Несоответствий при определении РНК ВГС, даже в образцах, разведенных в 10 раз, не выявлено.
Учитывая результаты, полученные на первом этапе исследования, для выполнения второго этапа исследования была составлена панель из 10 образцов. Образцы, содержавшие РНК ВГС, учитывая отсутствие несоответствий в определении образцов, разведенных в 10 раз на предыдущем этапе, были разведены в 10 000 и 20 000 раз. Образцы, содержавшие РНК ВИЧ, были представлены в контрольной панели без разведения и разведены в 10 раз, что соответствовало пределу аналитической чувствительности, заявленной в инструкциях к наборам реагентов, применяемых участниками исследования. Характеристика образцов, входивших в панель контрольных образцов второго этапа исследования, представлена в таблице 4.
Каждому участнику исследования на втором этапе был предоставлен один комплект контрольной панели; таким образом, было выполнено 7 отдельных серий
35 32 32 31
30 28 28 28 27
< УШШ
Участник 1 Участник 2 Участник 3 Участник 4 Участник 5 Участник 6 Участник 7
Participant 1 Participant 2 Participant 3 Participant 4 Participant 5 Participant 6 Participant 7
Участники / Participants
■ Количество некорректных результатов / number of incorrect results
■ Количество корректных результатов / number of correct results
Рисунок 2. Число корректных и некорректных результатов, полученных участниками, использовавшими «Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0» Figure 2. The number of correct and incorrect results obtained by participants using "Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0"
Таблица 3. Результаты тестирования образцов контрольной панели первого этапа исследования Table 3. The results of testing samples of the control panel of the first stage of the study
Номер образца Sample number
Вирус, HK которого содержится в образце, И разведение Virus added to sample and dilution
Номер участника / Number of Participant
Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0
Procleix Ultrio Elite Assay
АмплиСенс HCV/HBV/ HIV-FL
РеалБест HBV/ HCV/ HIV PCR
Roche Cobas
Roche Cobas
Roche Cobas
АмплиСенс
Roche Cobas
Roche Cobas
Roche Cobas
Ч-UkJUJ ^ULÍUJ U^\//UQ\/ / ^UUUS V-UUUi VwUUUi
TaqScreen TaqScreen TaqScreen H^V/ TaqScreen TaqScreen TaqScreen MPX v2.0 MPX v2.0 MPX v2.0 V MPXv2.0 MPXv2.0 MPXv2.0
Ампли Roche
Сенс HCV/ Cobas
HBV/HIV- 6800
FL MPX
1 ВГВ HBV ВГВ HBV Пол. Pos. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ и ВИЧ HBV & HIV
2 ВИЧ HIV ВИЧ HIV Пол. Pos.. ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV
3 ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
4 ВГВ HBV ВГВ HBV Пол. Pos. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
5 ВГВ HBV ВГВ HBV Пол. Pos. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
6 ВГВ HBV ВГВ HBV Пол. Pos. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV
7 Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg.
8 ВГВ HBV ВГВ HBV Пол. Pos. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
9 ВГС HCV ВГС HCV Пол. Pos. ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV
10 ВГВ HBV ВГВ HBV Пол. Pos. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
11 ВГВ 1:3 HBV 1:3 Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
12 ВИЧ 1:3 HIV 1:3 ВИЧ HIV Пол. Pos. ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV
13 ВГВ 1:3 HBV 1:3 ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV
14 ВГС 1:3 HCV 1:3 ВГС HCV Пол. Pos. ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV
15 ВГВ 1:3 HBV 1:3 ВГВ HBV Пол. Pos. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ, ВИЧ HBV & HIV ВГВ HBV
16 ВГВ 1:3 HBV 1:3 Отр. Neg. Пол. Pos. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg.
17 Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg.
18 ВГВ 1:3 HBV 1:3 ВГВ HBV Пол. Pos. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV
vo
D
Ь-CD
s
I
(D
*
c;
О 4
О
a с
О Roche Cobas 6800 MPX oa X £E « oa X ¡L 1- (D О 2 ¡É oa X oa X oa X ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 oa X oa X oa X cû X ¡L ¡Ä 1- (D О 2 c^ X 1- <D О 2 ii ¡i 1- <D O 2
00 , >> fx^ i о < и 1 oa X ta > E: °э oa X ta > Е- °a oa X ¿ ¡Ä 1- <U О 2 oa X ta > E- S oa X ¿ ¡Ä 1- <u O 2 ¿ ¡Ä 1- <u O 2 1- <U O 2 oa X ¿ ¡i 1- <U O 2 ta > c^ X ¿ ¡Ä 1- <u О 2 c^ X 1- Ш O 2 ¿ ¡i 1- <u O 2
к lo 9 J S¡0CN и _û О oow X с* и i^Q- ^ oa X ta > ¡¡j CQ oa X ¡L 1- Ш О 2 ¡L ¡ä 1- <u О 2 oa X ¡L 1- <u O 2 ¡L ¡Ä 1- <u O 2 ¡L ¡Ä 1- <u O 2 ¡L 1- Ш O 2 oa X Oí > I 1- <u O 2 ¡L ¡ä 1- <u О 2 c^ X ¡L 1- Ш O 2 ¡L ¡i 1- <u O 2
6 S 9 J и и oow X с* U I^Q- oa X £E « oa X oa X ¡L ¡Ä 1- (D О 2 oa X £E SS oa X ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 oa X oa X c^ X £E SS c^ X il ¡L ró 1- <D O 2 c^ X 1- <D O 2 ¡L ¡i 1- <D O 2
ю S 9 ¡3£CN u-ûu ^ оою X ^ oa X £E « oa X £E SS oa X ¡L ¡ä 1- (D О 2 oa X ¡L 1- <D O 2 ¡L ró 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ró 1- <D O 2 oa X c^ X £E SS cû X il ¡L ¡Ä 1- <D O 2 cû X ¡L 1- <D O 2 ¡L ¡i 1- <D O 2
C>X < X oa X ta > E: °э oa X ¿ ¡i 1- <U о H ¿ ¡Ä 1- <u О 2 oa X 1- Ш O 2 ¿ ¡Ä 1- <u O 2 ¿ ¡Ä 1- <u O 2 1- Ш O 2 oa X ta > ™ ™ c^ X CÛ > c^ X il ¿ ¡Ä 1- <u O 2 c^ X ¿ ró 1- Ш O 2 ¿ ¡i 1- <u O 2
"t S 9 J ë£CN u -û u ^ OOW X (J l^Q. oa X ta > ¡¡j CQ oa X SS oa X il ¡L ¡Ä 1- <u О 2 oa X ¡L ró 1- Ш O 2 ¡L ¡Ä 1- <u O 2 ¡L ró 1- <u O 2 £ щ oa X oa X ta > ¡^ CQ C^ X ta > ™ CQ с^ X il ¡L ¡Ä 1- <u O 2 c^ X 1- Ш O 2 ¡L ¡i 1- <u O 2
го S 9 J u -û u ^ OOW X с* и I^Q- ^ oa X £E « oa X £E SS oa X ¡É ¡L ró 1- <D O 2 oa X CÛ -k I ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L 1- <D O 2 oa X c^ X 1- <D O 2 il ¡L ¡Ä 1- <D O 2 c^ X c^ X ¡L ¡i 1- <D O 2
CN S 9 _2 S^CN о -û <J OOW X oa X £E « oa X ¡L 1- (D О 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 oa X oa X ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L 1- <D O 2 oa X c^ X 1- <D O 2 il c^ X c^ X c^ X ¡L ¡i 1- <D O 2
S o¿ (0 \\U CcûU > <0 T Q. -1- ^ oa X ¡L ró 1- (D О 2 ¡L 1- (D О 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 oa X ¡L 1- <D O 2 ¡L ró 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 1- <D O 2 oa X ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L 1- <D O 2 il ¡L ¡Ä 1- <D O 2 cû X ii ró 1- <D O 2 ¡L ¡i 1- <D O 2
1 ^ c>x < X oa X ¡L ró 1- <u о 2 ¡L 1- <u о il ¡L ¡Ä 1- <u O 2 oa X ¡L 1- Ш O 2 ¡L ¡Ä 1- <u O 2 ¡L ¡Ä 1- <u O 2 CÛ -k i oa X ¡L ¡Ä 1- <u O 2 1- <u O 2 il ¡L ¡Ä 1- <u O 2 c^ X 1- Ш O 2 ¡L ¡i 1- <u O 2
(0 ^ U J^ « P J S С CL J 8 C. CL 1- (D О 2 II ¡L ¡Ä 1- <D O 2 í ° C. CL J E5 С CL ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ró 1- <D O 2 1- <D O 2 J ^ С CL J ^ С CL ¡L 1- <D O 2 II ¡L ¡Ä 1- <D O 2 J ^ С CL ¡L 1- <D O 2 ¡L ¡i 1- <D O 2
S 9 _2 S^CN u-ûu ^ OOW X oa X CQ I ¡L 1- (D О 2 ¡L ró 1- <D O 2 oa X ¡L ró 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L ¡Ä 1- <D O 2 ¡L 1- <D O 2 CÛ . I c^ X c^ X il ¡L ¡Ä 1- <D O 2 cû X 1- <D O 2 ¡L ¡i 1- <D O 2
которого к - S T3 1 5 " S'a -S ° О ^15 ^ ^ ïû E S ° о .i 8 ^ S ' î * ° 00 y S oa X Е- °э oa X "9. Е- S oa X ю E- S oa X ЧЭ oa X E- S oa X E- S oa X ¿ ¡Ä 1- <u O 2 E- S oa X ЧЭ S3 oa X "9. oa X O CD üj i-c^ X о T о il O C3 c^ X ¡ÜB c^ X O CD c^ X О СЭ ™ ™ c^ X
Номер образца Sample number о СЧ сч СЧ СЧ со СЧ СЧ in СЧ >o СЧ к СЧ 00 СЧ t> СЧ o со oo СЧ oo oo oo ■Ч- oo in oo oo
Продолжение табл. 3 Table 3. Continuation
Вирус, HK Номер участника / N um ber of Participant
которого 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Номер образца Sample number содержится в образце, И разведение Virus added to sample and dilution Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 Procleix Ultrio Elite Assay АмплиСенс HCV/HBV/ HIV-FL РеалБест HBV/ HCV/ HIV PCR Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 АмплиСенс HCV/HBV/ HIV-FL Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 Roche Cobas TaqScreen MPX v2.0 Ампли Сенс HCV/ HBV/HIV-FL Roche Cobas 6800 MPX
37 Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg.
38 ВГВ 1:10 HBV 1:10 ВГВ HBV Пол. Pos. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg.
39 ВГС 1:10 HCV 1:10 ВГС HCV Пол. Pos. ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV ВГС HCV
40 ВГВ 1:10 HBV 1:10 ВГВ HBV Пол. Pos. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV Отр. Neg. ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. ВГВ HBV
Примечание. ВГВ — вирус гепатита В; ВГС — вирус гепатита С; ВИЧ — вирус иммунодефицита человека, Отр. — отрицательный результат; Пол. — положительный результат; HB — невалидный результат; * — результаты, несоответствующие заложенным в панель.
f'lote. HBV — hepatitis В virus; HCV — hepatitis С virus; HIV — human immunodeficiency virus; M eg. — negative result; Pos. — positive result; IR — invalid result; * — results that do riot correspond to those included in the panel.
e b
30
25
2o
Z 15
и
T
lo
Участник 1 Participant 1
Участник 5 Participant 5
Участник 8 Participant 8
■ Количество некорректных результатов / number of incorrectresults
■ Количество корректных результатов / number of correct results
Рисунок 3. Число корректных и некорректных результатов, полученных участниками, использовавшими «АмплиСенс HCV/HBV/HIV-FL» Figure 3. The number of correct and incorrect results obtained by participants using "HCV/HBV/HIV-FL AmpliSense"
Таблица 4. Характеристика образцов контрольной панели второго этапа исследования Table 4. Characteristics of the samples of the control panel of the second phase of study
5
o
№ образца контрольной панели Control panel sample number Вирусная НК, содержащаяся в образце (разведение) Virus added to sample (dilution) Конечная концентрация НК в образце, ME/мл Final concentration of NA in the sample, IU/mL
1 ДНК ВГВ / HBV DNA < 10
2 Отсутствует / Absent 0
3 РНК ВИЧ / HIV RNA 487
4 ДНК ВГВ / HBV DNA < 10
5 РНК ВГС (1:20 000) / HBC RNA (1:20 000) 189
6 Отсутствует / Absent -
7 ДНК ВГВ + РНК ВИЧ + РНК ВГС (разведение РНК ВГС 1:10 000) HBV DNA+ HIV RNA+ HBC RNA (dilution HBC RNA 1:10 000) ВГВ < 10, ВИЧ < 75, ВГС 348 HBV DNA < 1О, HIV RNA < 75, HBC RNA 348
8 РНК ВИЧ (1:10) / HIV RNA (1:10) < 75
9 РНК ВГС (1:10 000) / HBC RNA (1:10 000) 6,36 x 105
10 РНК ВИЧ (1:10) / HIV RNA (1:10) < 75
исследований (70 тестов) в формате рутинных постановок, результаты которых представлены в таблице 5.
При анализе результатов 6 участников, использовавших комплекс приборов и реагентов «СоЬаэ s 201» и <^obas 6800», были корректными для всех 10 образцов. Результаты двух участников, использовавших тест-систему «АмплиСенс», выявили некорректное определение 3 образцов:
- участником, применявшим ручное выделение НК с последующей амплификацией в приборе «Rotor Gene О» (Oiagen), в образце, содержавшем НК ВГВ, ВИЧ и ВГС, была определена только РНК ВГС; 2 образца, содержавшие РНК ВИЧ (цельный и в разведении 1:10), были определены как отрицательные.
- участником, использовавшим выделение НК на роботизированной станции «Neon-100» (XIRIL) с последующей амплификацией в приборе «Rotor Gene О» (Oiagen), в образце, имитировавшем микст-инфекцию, была определена только ДНК ВГВ, а 2 образца, содержавших РНК ВИЧ (цельный и в разведении 1:10), были определены как отрицательные.
Суммарно участниками, использовавшими приборы и реагенты «СоЪаэ», было получено достоверно большее количество корректных результатов (255 из 330 образцов, р < 0,001), чем участниками, использовавшими другие лабораторные комплексы и реагенты («АмплиСенс» — 86 из 140, «Procleix Panther» — 29 из 40, «Вектор-Бест» — 16 из 40) (рис. 4).
Суммируя результаты, полученные на двух этапах выполнения исследования, установлено, что участниками на первом и втором этапах было предоставлено в общей сложности 355 образцов, содержавших ДНК ВГВ; 121 образец, содержавший РНК ВГС; и 82 образца, содержавших РНК ВИЧ. ДНК ВГВ была выявлена в 191 (53,8 %) из 355 образцов, РНК ВГС — в 119 (98,3 %) из 121 образца, РНК ВИЧ — в 76 (92,7 %) из 82 образцов (рис. 5).
Обсуждение
Показано, что при определении НК вирусов с парентеральным путем передачи доля несоответствий в результатах, полученных медицинскими организациями-участниками исследования, увеличивалась
прямо пропорционально увеличению разведения маркера, входящего в состав, то есть уменьшению его концентрации. Для 170 образцов, имитировавших исследование в индивидуальной постановке, получено 11,7 % результатов, не соответствовавших составу образцов панели. Для 137 контрольных образцов , имитировавших исследование в мини- пулах из 3 образцов, доля несоответствий составила 24,1 %. Для 134 контрольных образцов, имитировавших исследование в мини-пулах из 6 образцов, некорректно было определено 40,2 % образцов. Для 138 контрольных образцов, содержащих вирусные НК, разведенные в 10 раз, имитировавших исследование в мини-пулах из 10 образцов, было получено 42,0 % несоответствий.
Таблица 5. Сравнение результатов обнаружения вирусных нуклеиновых кислот в образцах контрольной панели на втором этапе исследования
Table 5. Comparison of the results of the detection of viral nucleic acids in the samples of the control panel at the second stage of the study
Номер участника / Participar t number
1 í А Э л n О <ц íi £ 2 1 8 1 2 3 л 5 б 7 9
Набор реагентов Reagent kit Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 Амплисенс HCV-HBV-HIV-FL Амплисенс HCV-HBV-HIV-FL Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 Cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 Cobas 6800
So U i t б ol о £ nt Z ó Вирусная НК, содержащаяся в образце (разведение) Virus added to sample (dilution) Результаты, полученные участниками Results obtained by the participants
1 ДНК ВГВ HBV DNA ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
2 Отсутствует Absent Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg.
3 РНК ВИЧ HIV RNA ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV
4 ДНК ВГВ HBV DNA ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV ВГВ HBV
5 РНК ВГС HBC RNA (1:20 000) ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC
6 Отсутствует Absent Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg. Отр. Neg.
7 ДНК ВГВ + РНК ВИЧ + РНК ВГС HBV DNA + HIV RNA +HBCRNA (1:10 000) ВГВ+/ ВИЧ+/ ВГС HBV/HIV/ HBC ВГВ+/ ВИЧ+/ ВГС HBV/HIV/ HBC ВГВ+/ ВИЧ+/ ВГС HBV/HIV/ HBC ВГВ HBV ВГС HBC ВГВ+/ ВИЧ+/ ВГС HBV/HIV/ HBC ВГВ+/ ВИЧ+/ВГС HBV/HIV/ HBC ВГВ+/ВИЧ+/ ВГС HBV/HIV/ HBC
S РНК ВИЧ HIV RNA (1:10) ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV Отр. Neg. Отр. Neg. ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV
9 РНК ВГС HBC RNA (1:10 000) ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC ВГС HBC
1О РНК ВИЧ HIV RNA (1:10) ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV Отр. Neg. Отр. Neg. ВИЧ HIV ВИЧ HIV ВИЧ HIV
"I Г
Ампли Сенс Вектор- Бест Roche Cobas s201 Roche Cobas Procleix Panther
v.2.0 6800
Тест-системы/iesf systems
I % корректных результатов / % of correct results
Рисунок 4. Доля корректных результатов, полученных при использовании различных тест-систем Figure 4. The proportion of correct results obtained using various test systems
и
X Ф
£ и ® ^
£P О
100
80
60
40
20
ВГВ
ВГС
ВИЧ
Вирусные нуклеиновые кислоты / Viral nucleic acids
Рисунок 5. Доля обнаружения вирусных нуклеиновых кислот в образцах контрольных панелей суммарно на двух этапах выполнения исследования Figure 5. The proportion of detection of viral nucleic acids in the samples of control panels in total at two stages of the project
Медицинские организации-участники исследования, использовавшие закрытые системы, предназначенные для исследования крови доноров на наличие молекулярных маркеров гемотрансмиссивных инфекций, представили лучшие итоги работы, поскольку получили наименьшее число несоответствий. Полученные результаты совпадают с данными исследования, проводимого отечественными авторами среди доноров крови в Республике Дагестан в 2017—2019 гг., в котором выполнялось сравнение различных методов МАТ-скрининга маркеров инфекций. На примере частоты выявления НК ВГВ, было установлено, что чувствительность диагностикума «СоЬаэ э 201» выше, чем
«Вектор-Бест» в 9,7 раза (р < 0,002) [13]. Показано, что наибольшее число некорректных результатов получено при определении ДНК ВГВ, что, очевидно, связано с ее меньшей концентрацией. Такая характеристика, вероятно, обусловлена особенностью жизненного цикла ВГВ. Все образцы крови доноров с низкой концентрацией ДНК ВГВ, на основе которых были созданы контрольные панели, содержали апЬ-НВс, что свидетельствует о наличии латентной формы инфекции у этих доноров. Следовательно, тестирование на апЬ-НВс целесообразно в качестве не дополнительного иммунологического, а рутинного исследования образцов донорской крови.
0
Литература
1. Белобородов В.А., Кельчевская Е.А. Переливание крови и ее компонентов. Иркутск: ФГБОУ ВО ИГМУ Минздрава России; 2020.
2. Busch M.P., Bloch E.M., Kleinman S. Prevention of transfusion-transmitted infections. Blood. 2019; 133(17): 1854-64. DOI: 10.1182/blood-2018-11 -833996.
3. Fiedler S.A., Oberle D., Chudy M., et al. Effectiveness of blood donor screening by HIV, HCV, HBV-NAT assays, as well as HbsAg and anti-HBc immunoassays in Germany (2008-2015). Vox Sang. 2019; 114(5): 443-50. DOI: 10.1111/ vox.12770.
4. Knipe D.M., Howley P.M. (eds). Fields Virology. Sixth edition; Chapter 47. Ret-roviridae. Philadelphia: Lippincott Williams Wilkins; 2013; Vol. 2: 1424-73.
5. Гайнова И.А., Бажан С.И., Лихошвай В.А. и др. Возможности математического моделирования при исследовании инфекции ВИЧ-1. Российский иммунологический журнал. 2015; 9(4): 379-99.
6. Туполева Т.А. Латентная форма инфекции, вызванная вирусом гепатита B. Гематология и трансфузиология. 2018; 63(2): 166-73. DOI: 10.25837/ HAT.2018.68.2.007.
7 Ярославцева Н.Г., Тихомиров Д.С., Николаева Л.И., Дедова А.В. Низкие концентрации РНК вируса гепатита С при серологически слабовыраженной инфекции. Вопросы вирусологии. 2019; 64(1): 30-5. DOI: 10.18821/05074088-2019-64-1-30-35.
8. Федеральная служба государственной статистики. Здравоохранение. URL: https://rosstat.gov.ru/folder/13721/
9. Вальчугова Л.М., Вальчугова Ю.С., Ямпольская Т.Д. Актуальность применения молекулярно-биологических методов (ПЦР) для выявления ДНК вируса гепатита B в серонегативной донорской крови при параллельном ИФА-скрининге на HbsAg. Евразийский Союз Ученых. 2019; 3(60): 4-6. DOI: 10.31618/ESU.2413-9335.2019.5.60.4-6.
10. Еремеева Ж.Г., Фазылов В.Х. Выявление оккультного гепатита В при тестировании донорской крови. Вестник Российского государственного медицинского университета. 2017; 1: 66-9.
11. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 28.10.2020 № 1166н «Об утверждении порядка прохождения донорами медицинского обследования и перечня медицинских противопоказаний (временных и постоянных) для сдачи крови и (или) ее компонентов и сроков отвода, которому подлежит лицо при наличии временных медицинских показаний, от донорства крови и (или) ее компонентов». URL: https://base.garant.ru/74961670/
12. Наличие, безопасность и качество продуктов крови. Доклад Генерального директора на 75-й сессии Всемирной Ассамблеи здравоохранения. ВОЗ, 12 апреля, 2022. URL: https://apps.who.int/gb/ebwha/pdf_files/ WHA75/A75_40-ru.pdf.
13. Танкаева Х.С., Илуева А.К., Жибурт Е.Б. Гемотрансмиссивные инфекции у доноров крови и пациентов в Республике Дагестан. Трансфузиология. 2020; 21(1): 50-6.
Информация об авторах
Мисько Ольга Николаевна*, биолог отделения инфекционной безопасности трансфузий, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4728-2610
References
1. Beloborodov V.A., Kelchevskaya Ye.A. Transfusion of blood and its components. Irkutsk; 2020. (In Russian).
2. Busch M.P., Bloch E.M., Kleinman S. Prevention of transfusion-transmitted infections. Blood. 2019; 133(17): 1854-64. DOI: 10.1182/blood-2018-11-833996.
3. Fiedler S.A., Oberle D., Chudy M., et al. Effectiveness of blood donor screening by HIV, HCV, HBV-NAT assays, as well as HbsAg and anti-HBc immunoassays in Germany (2008-2015). Vox Sang. 2019; 114(5): 443-50. DOI: 10.1111/ vox.12770.
4. Knipe D.M., Howley P.M. (eds). Fields Virology. Sixth edition; Chapter 47 Ret-roviridae. Philadelphia: Lippincott Williams Wilkins; 2013; Vol. 2: 1424-73.
5. Gaynova I.A., Bazhan S.I., Likhoshvay V.A., et al. Mathematical modeling possibilities in HIV-1 infection study. Rossijskiy immunologitcheskiy zurnal. 2015; 9(4): 379-99. (In Russian).
6. Tupoleva T.A. Occult form of infection caused by the hepatitis B virus. Gematologiya I transfuziologiya. 2018; 63(2): 166-73. DOI: 10.25837/ HAT.2018.68.2.007 (In Russian).
7. Yaroslavtseva N.G., Tikhomirov D.S., Nikolayeva L.I., Dedova A.V. Low concentrations of hepatitis C virus RNA in serologically mild infection. Voprosy viru-sologii. 2019; 64(1): 30-5. DOI: 10.18821/0507-4088-2019-64-1-30-35. (In Russian).
8. Federal State Statistics Service. Healthcare. URL: https://rosstat.gov.ru/fold-er/13721 / (In Russian).
9. Valchugova L.M., Valchugova Y.S., Yampolskaya T.D. The relevance of the use of molecular biological methods (PCR) for the detection of hepatitis B virus DNA in seronegative donor blood during parallel ELISA screening for hBsAg. Eurasian Union of Scientists. 2019; 3(60): 4-6. DOI: 10.31618/ESU.2413-9335.2019.5.60.4-6. (In Russian).
10. Eremeyeva Zh.G., Fazylov V.Kh. Detection of occult hepatitis B during donors' blood screening. Vestnik Rossiyskogo gosudarstvennogo meditsinskogo univer-siteta. 2017; 1: 66-9. (In Russian).
11. Ministry of Health of the Russian Federation Directive N 1166n "Approval of procedure of medical examination blood donor, a list of medical contraindications (temporary and permanent) for blood donation, the withdrawal from blood donation period"". URL: https://base.garant.ru/74961670/ (In Russian).
12. Availability, safety and quality of blood products. Report of the Director-General to the 75lh World Health Assembly. WHO, April 12, 2022. URL: https://apps. who.int/gb/ebwha/pdf_files/WHA75/A75_40-ru.pdf. (In Russian).
13. Tankayeva Kh.S., Iluyeva A.K., Zhiburt E.B. Blood-borne infection in blood donors and recipients in Dagestan. Transfuziologiya. 2020; 21(1): 50-6. (In Russian).
Information about the authors
Olga N. Misko*, Biologist, Department of Infection Safety of Transfusions, National Medical Research Center for Hematology, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4728-2610
Тихомиров Дмитрий Сергеевич, кандидат биологических наук, заведующий лабораторией вирусологии, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2553-6579
Солдатова Татьяна Андреевна, врач клинической лабораторной диагностики отделения инфекционной безопасности трансфузий, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6320-4241
Агуралиева Раисат Магомедовна, врач клинической лабораторной диагностики, отдел лабораторной диагностики, ГБУ РД «Республиканская станция переливания крови», e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-5119-2191
Кудинова Елена Владимировна, кандидат медицинских наук, заместитель директора по медицинской части, ГБУЗ «Самарская областная клиническая станция переливания крови», e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2961-202X
Македонская Ольга Геннадьевна, кандидат медицинских наук, главный внештатный специалист-трансфузиолог Министерства здравоохранения Республики Мордовия, главный врач, ГБУЗ Республики Мордовия «Мордовская республиканская станция переливания крови», e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-5372-3937
Воробьева Ксения Владимировна, заведующая микробиологической лабораторией, ГБУЗ «Станция переливания крови Министерства здравоохранения Краснодарского края», e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4639-4530
Бочкова Галина Дмитриевна, врач клинико-диагностической лаборатории, лаборатории иммунологических и молекулярно-биологических исследований отдела лабораторной диагностики, ГУЗ «Станция переливания крови Ростовской области», e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0621-626X
Зубарева Людмила Михайловна, заведующая отделом контроля безопасности донорской крови и ее компонентов, ОГБУЗ «Смоленский центр крови»,
e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8761-7852
Dmitry S. Tikhomirov, Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Virology, National Medical Research Center for Hematology, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2553-6579
Tatiana A. Soldatova, Clinical Laboratory Diagnostics Physician, Department of Infection Safety of Transfusions, National Medical Research Center for Hematology,
e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6320-4241
Raisat M. Aguralieva, Clinical Laboratory Diagnostics Physician, Republican Blood Transfusion Station, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-5119-2191
Elena V. Kudinova, Cand. Sci. (Med.), Deputy CEO, Samara Regional Blood Transfusion Station, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2961-202X
Olga G. Makedonskaya, Cand. Sci. (Med.), Chief Transfusiology Specialist of the Ministry of Health of Republic of Mordovia, CEO, Mordovian Republican Blood Transfusion Station, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-5372-3937
Kseniya V. Vorobyova, Head of the Microbiological Laboratory, Blood Transfusion Station of the Ministry of Health of the Krasnodar Territory, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4639-4530
Galina D. Bochkova, Physician of Clinical Diagnostic Laboratory, Laboratory of Immunological and Molecular Biological Research, Department of Laboratory Diagnostics, Blood Transfusion Station in the Rostov Region, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0621 -626X
Lyudmila M. Zubareva, Head of the Department of Safety Control of Donated Blood and Its Components, Smolensk Blood Center, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8761-7852
Салимов Эмин Львович, доктор медицинских наук, заведующий отделением переливания крови, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3329-5434
Моор Юлия Владимировна, кандидат медицинских наук, главный внештатный специалист-трансфузиолог Министерства здравоохранения Новосибирской области, главный врач, ГБУЗ НСО «Новосибирский клинический центр крови», e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4923-0435
Абакаров Руслан Рамазанович, биолог отделения инфекционной безопасности трансфузий, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0650-2779
Гуляева Анна Андреевна, врач-бактериолог отделения инфекционной безопасности трансфузий, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0888-6147
Туполева Татьяна Алексеевна, доктор медицинских наук, заведующий отделением инфекционной безопасности трансфузий, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-4668-9379
Гапонова Татьяна Владимировна, кандидат медицинских наук, первый заместитель генерального директора, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9684-5045
Паровичникова Елена Николаевна, доктор медицинских наук, профессор, генеральный директор, ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации,
e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-6177-3566
* Автор, ответственный за переписку
Поступила: 21.06.2022 Принята в печать: 20.03.2023
Emin L. Salimov, Dr. Sci. (Med.), Head of the Blood Transfusion Department, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3329-5434
Julia V. Moor, Cand. Sci. (Med.), Chief Transfusiologist of the Ministry of Health of the Novosibirsk region, Chief Physician, Novosibirsk Blood Center, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4923-0435
Ruslan R. Abakarov, Biologist in the Department of Infection Safety of Transfusions, National Medical Research Center for Hematology, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0650-2779
Anna A. Gulyaeva, Bacteriologist, Department of Infection Safety of Transfusions, National Medical Research Center for Hematology, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0888-6147
Tatiana A. Tupoleva, Dr. Sci. (Med.), Head of the Department of Infection Safety of Transfusions, National Medical Research Center for Hematology, e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0003-4668-9379
Tatiana V. Gaponova, Cand. Sci. (Med.), Deputy CEO, National Medical Research Center for Hematology, e-mail: [email protected] ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9684-5045
Elena N. Parovichnikova, Dr. Sci. (Med.), CEO, National Medical Research
Center for Hematology,
e-mail: [email protected]
ORCID: https://orcid.org/0000-0001-6177-3566
* Corresponding author
Received 21.06.2022 Accepted 20.03.2023
